本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及牡荊素及其藥學(xué)上可接受的鹽在制備利尿藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

山楂葉(crataeguspinnatifida)屬薔薇科植物，味酸，性平，歸肝經(jīng)，主要功效為活血化瘀，理氣通脈，用于氣滯血瘀、胸悶憋氣、心悸健忘、眩暈耳鳴，是中藥活血化瘀藥中重要的藥物之一?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明山楂葉具有強(qiáng)心、降壓、抗心絞痛及降血脂等作用。目前對山楂葉研究最多、最廣泛和最深入的是在心血管效應(yīng)方面，在臨床上能用于治療冠心病、心絞痛、高脂血癥、心律失常等。

山楂葉的化學(xué)研究表明，山楂葉中主要的活性成分為黃酮類物質(zhì)。山楂葉中的主要黃酮有牡荊素、山柰酚、槲皮素、牡荊素鼠李糖甙和牡荊素葡萄糖甙等近20種。公開號為cn102219782a、cn1683386a的中國專利中公開了牡荊素的提取方法；另外，牡荊素也可通過商業(yè)途徑從sigma-aldrich等處購買獲得，其純度均符合藥用標(biāo)準(zhǔn)。本發(fā)明應(yīng)用的牡荊素純度以≥98％最佳。牡荊素(vitexin，apigenin-8-c-β-d-glucopyranoside，分子式:c21h20o10；分子量：432.40，cas號：3681-93-4)是一種黃酮類化合物，存在于多種藥物植物中。研究發(fā)現(xiàn)，牡荊素具有抗氧化、心肌保護(hù)、抗腫瘤等活性，毒性極低。但現(xiàn)有技術(shù)中并未報(bào)道牡荊素在治療利尿中的應(yīng)用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種牡荊素及其藥學(xué)上可用的鹽在制備利尿藥物中的應(yīng)用，牡荊素對于利尿方面的治療效果較好，作用速度快，毒副作用低。術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”指自藥學(xué)上可接受的無毒堿或酸制得的鹽。相應(yīng)的鹽可方便地自藥學(xué)上可接受的無毒堿(包括無機(jī)堿和有機(jī)堿)制備。自這類無機(jī)堿得到的鹽包括鋁、銨、鈣、銅(高價(jià)和低價(jià))、鐵、亞鐵、鋰、鎂、錳(高價(jià)和低價(jià))、鉀、鈉、鋅等鹽。特別優(yōu)選的是銨、鈣、鎂、鉀和鈉鹽。自藥學(xué)上可接受的有機(jī)無毒堿得到的鹽包括伯、仲和叔胺以及環(huán)胺和取代胺(如天然存在的及合成的取代胺)的鹽。自其可形成鹽的其他藥學(xué)上可接受的有機(jī)無毒堿包括離子交換樹脂如精氨酸、甜菜堿、咖啡因、膽堿、n’,n’-二芐基乙二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、n-乙基嗎啉、n-乙基哌啶、葡糖胺、氨基葡萄糖、組氨酸、哈胺、異丙胺、賴氨酸、甲基葡糖胺、嗎啉、哌嗪、哌啶、多胺樹脂、普魯卡因、嘌呤、可可堿、三乙胺、三甲胺、三丙胺、緩血酸胺等。其相應(yīng)的鹽可方便地自藥學(xué)上可接受的無毒酸(包括無機(jī)酸和有機(jī)酸)制備。這類酸包括例如乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、乙烷磺酸、富馬酸、葡糖酸、谷氨酸、氫溴酸、氫氯酸、羥乙磺酸、乳酸、馬來酸、蘋果酸、扁桃酸、甲烷磺酸、粘酸、硝酸、雙羥萘酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、對甲苯磺酸等。

在一種實(shí)施方式中，所述藥物的劑型為注射劑。所述藥物的劑型還可以是片劑、膠囊劑、醑劑、散劑、顆粒劑、糖漿劑、溶液劑、酊劑、氣霧劑、粉霧劑或栓劑。

在一種實(shí)施方式中，所述牡荊素及其藥學(xué)上可用的鹽劑量為每1kg受試者為0.02-4mg·kg^-1，優(yōu)選地為0.1-4mg·kg-1，更優(yōu)選地為0.1-0.5mg·kg-1。對于任何具體的受試者，具體的劑量水平和劑量頻率可變化并且取決于多種因素，包括受試者的物種、年齡、體重、一般健康、性別和飲食、給藥模式和時(shí)間、排泄速率、藥物聯(lián)用和具體病況的嚴(yán)重性。用于治療的優(yōu)選的受試者包括動(dòng)物，最優(yōu)選哺乳動(dòng)物物種，例如人類，和家養(yǎng)動(dòng)物，例如狗、貓、馬等。

在一種實(shí)施方式中，提供一種用于利尿的藥物組合物，所述的組合物含有：含有作為活性成分的0.01-99％重量份的牡荊素及其可藥用鹽；和重量份為余量的藥學(xué)上可接受的載體。本發(fā)明的藥物組合物包含與一種或多種藥學(xué)上可接受的載體一起配制的治療有效量的本發(fā)明化合物。本文所用的術(shù)語“藥學(xué)上可接受的載體”意味著任何類型的無毒惰性固體、半固體或液體填充劑、稀釋劑、包封材料或配制助劑。可用作藥學(xué)上可接受的載體物質(zhì)的一些實(shí)例為：糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，例如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉；纖維素及其衍生物，例如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素和醋酸纖維素；黃蓍膠粉；麥芽；明膠；滑石；賦形劑例如可可油和栓劑蠟；油例如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油和大豆油；二醇例如丙二醇；酯例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；瓊脂；緩沖劑例如氫氧化鎂和氫氧化鋁；海藻酸；無熱原水；等滲鹽水；林格氏溶液；乙醇和磷酸鹽緩沖溶液，以及其它無毒的可相容性潤滑劑例如月桂基硫酸鈉和硬脂酸鎂，以及著色劑、釋放劑、包衣劑、甜味劑、矯味劑和芳香劑，根據(jù)配制人員的判斷，防腐劑和抗氧化劑也可存在于組合物中。本發(fā)明藥物組合物可經(jīng)口服、經(jīng)直腸、腸胃外、腦池內(nèi)、陰道內(nèi)、腹膜內(nèi)、局部(例如通過粉末、軟膏或滴劑)、經(jīng)頰或以口服或鼻用噴霧形式向人類及其它動(dòng)物給藥。

本發(fā)明的化合物具有多個(gè)不對稱中心。除非另外說明，否則本發(fā)明化合物的所有手性(對映異構(gòu)和非對映異構(gòu))和外消旋形式包括在本發(fā)明內(nèi)。烯烴的許多幾何異構(gòu)體等也可存在于化合物中，并且所有這些穩(wěn)定的異構(gòu)體包括在本發(fā)明內(nèi)。描述了本發(fā)明化合物的順式和反式幾何異構(gòu)體，并且可作為異構(gòu)體的混合物或作為單獨(dú)的異構(gòu)形式分離。本發(fā)明的化合物可采用光學(xué)活性或外消旋形式分離。在本領(lǐng)域眾所周知如何制備光學(xué)活性形式，例如通過拆分外消旋形式或通過由光學(xué)活性原料合成。預(yù)期結(jié)構(gòu)的所有手性(對映異構(gòu)和非對映異構(gòu))和外消旋形式和所有幾何異構(gòu)形式，除非具體說明具體的立體化學(xué)或異構(gòu)體形式。

本發(fā)明提供的牡荊素制備利尿藥物中的應(yīng)用，能夠提供一種利尿的有效藥物，對利尿方面效果較好，作用速度快，毒副作用低，實(shí)現(xiàn)了對牡荊素更好的應(yīng)用。

具體實(shí)施方式

為了使本領(lǐng)域技術(shù)領(lǐng)域人員更好地理解本申請中的技術(shù)方案，下面將結(jié)合下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本申請一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。基于本申請中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其它實(shí)施例，都應(yīng)當(dāng)屬于本申請保護(hù)的范圍。

實(shí)施例1牡荊素注射劑的制備

a、稱取牡荊素30g、甘露醇180g原料均勻混合，加600ml注射用水，攪拌均勻，再加0.1mol/l的氫氧化鈉溶液1500ml，攪拌溶解，再用1mol/l的鹽酸溶液調(diào)至ph為8.5，加注射用水至3000ml，加0.05％的針用活性炭，攪拌10min，微孔鈦過濾器減壓粗濾，脫炭，檢查含量、ph合格后，再經(jīng)0.22μm微孔濾膜終端過濾后，分裝于10ml西林瓶中，每瓶裝3ml，低溫冷凍干燥。

b、預(yù)凍：把分裝好的藥品放入凍干箱內(nèi)隔板上預(yù)凍開始至+25℃～-40℃，2小時(shí)；-40℃，3小時(shí)。

c、升華干燥：將冷凝器溫度下降至-45℃以下，啟動(dòng)真空泵，待真空度達(dá)到一定數(shù)值后，緩緩打開蝶閥，當(dāng)干燥箱內(nèi)的真空度達(dá)13.33pa(0.1mmhg)以下關(guān)閉冷凍機(jī)，通過隔板下的加熱系統(tǒng)緩緩加熱，使凍結(jié)產(chǎn)品的溫度逐漸升高至-20℃，再由-20℃逐漸升高至25℃。整個(gè)升華干燥過程約26小時(shí)。

d、再干燥：在25℃下干燥5小時(shí)，干燥失重符合規(guī)定，在無菌條件下加蓋膠塞，軋蓋，包裝，檢驗(yàn)，入庫，得到注射用干粉。

實(shí)施例2牡荊素注射劑對大鼠的利尿作用

方法：把大鼠分為對照組和給藥組，每組6只大鼠。各大鼠按0.5ml/100g的生理鹽水腹腔注射，并輕壓下腹部使膀胱排空。然后給藥組將上述實(shí)施例1制備的干粉用生理鹽水配成1mg/ml的牡荊素溶液，然后大鼠以0.1ml/1kg的劑量腹腔注射牡荊素溶液，對照組給予等容量的生理鹽水。立即將大鼠放入代謝籠內(nèi)，60分鐘后收集各組動(dòng)物的尿量共3次，每次60分鐘。將兩組大鼠相應(yīng)時(shí)間內(nèi)尿量的均值進(jìn)行組間比較，作統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

結(jié)果：牡荊素注射劑組大鼠用藥后不同時(shí)間的尿量都比對照組多。特別是用藥后121～180min的尿量與對照組比較有顯著性差異，具體結(jié)果見表1。

表1牡荊素注射劑對大鼠的利尿作用(n＝6)

由表1可知，牡荊素對大鼠具有明顯的利尿作用，在用藥后的三個(gè)時(shí)間段(0-60min,61-120min；121-180min)的尿量與對照組明顯多，牡荊素注射劑組的尿量是對照組尿量的1.7-3.6倍，并且在三個(gè)時(shí)間段中隨著時(shí)間的推移，效果逐漸減弱。

實(shí)施例3牡荊素注射劑對小鼠的利尿作用

方法：將20只小鼠隨機(jī)分為對照組和用藥組，每組10只，禁食不禁水24小時(shí)。實(shí)驗(yàn)前輕壓小鼠下腹，排盡余尿，給藥后1小時(shí)，分別將各鼠置入小鼠集尿裝置內(nèi)。實(shí)驗(yàn)前每只小鼠腹腔注射1ml的生理鹽水作為水負(fù)荷。給藥組將上述實(shí)施例1制備的干粉用生理鹽水配成5mg/ml的牡荊素溶液，然后小鼠以0.1ml/kg的劑量腹腔注射牡荊素溶液，對照組給同途徑、同容量生理鹽水。濾紙預(yù)先精密稱重后鋪放在細(xì)網(wǎng)底上面，燒杯底層放入100ml清水以減少尿液揮發(fā)。實(shí)驗(yàn)中每小時(shí)換濾紙一次，共觀察4小時(shí)。用稱重法記錄濾紙?jiān)鲋刈鳛槟蛄?，具體結(jié)果見表2。

表2牡荊素注射劑對小鼠的利尿作用(n＝10)

與對照組比：**p＜0.01

由表2可知，牡荊素對小鼠的利尿作用的影響均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，牡荊素注射劑組小鼠用藥后不同時(shí)間的尿量都比生理鹽水組多，尤其以第1-2小時(shí)作用最顯著；隨著時(shí)間的延長，效果逐漸減弱。

實(shí)施例4牡荊素注射劑對家兔的利尿作用

方法：家兔背位固定在兔解剖臺上，耳緣靜脈注入5％葡萄糖鹽水10ml/kg。取導(dǎo)尿管1條經(jīng)尿道插入膀胱內(nèi)約7～10cm。并壓迫下腹部空膀胱內(nèi)尿液。收集并測量5～10分鐘內(nèi)尿量9次(集尿期適當(dāng)轉(zhuǎn)動(dòng)導(dǎo)尿管)。給藥組將上述實(shí)施例1制備的干粉用生理鹽水配成4mg/ml的牡荊素溶液，然后家兔以1ml/1kg的劑量腹腔注射牡荊素溶液，對照組給同途徑、同容量生理鹽水。30分鐘后開始收集尿液，每30分鐘收集1次，連續(xù)4次。用兩組家兔相應(yīng)時(shí)間內(nèi)的尿量結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，結(jié)果見表3。

表3牡荊素注射劑對家兔尿量的影響(n＝6)

注：**p＜0.01

由表3可以看出，牡荊素對家兔的利尿作用的影響均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，牡荊素注射劑組小鼠用藥后不同時(shí)間的尿量都比生理鹽水組多，隨著時(shí)間的延長，效果逐漸減弱。

應(yīng)該理解到披露的本發(fā)明不僅僅限于描述的特定的方法、方案和物質(zhì)，因?yàn)檫@些均可變化。還應(yīng)理解這里所用的術(shù)語僅僅是為了描述特定的實(shí)施方式方案的目的，而不是意欲限制本發(fā)明的范圍，本發(fā)明的范圍僅受限于所附的權(quán)利要求。

本領(lǐng)域的技術(shù)人員還將認(rèn)識到，或者能夠確認(rèn)使用不超過常規(guī)實(shí)驗(yàn)，在本文中所述的本發(fā)明的具體的實(shí)施方案的許多等價(jià)物。這些等價(jià)物也包含在所附的權(quán)利要求中。