本發(fā)明屬于生物醫(yī)用材料技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種ph/近紅外光響應(yīng)性氣泡脂質(zhì)體及其制備方法。
背景技術(shù)：
光熱治療是一種非侵入性的腫瘤治療方法，通過光熱試劑產(chǎn)生的高溫直接殺死腫瘤細胞。將近紅外光熱療聯(lián)合化療，可顯著提高化療藥物的細胞毒作用，已成為高效低毒腫瘤治療的研究熱點。
環(huán)境響應(yīng)性脂質(zhì)體不僅具有脂質(zhì)體被動靶向、緩釋、提高藥物穩(wěn)定性及減少藥物毒性等優(yōu)點，還可以利用其對腫瘤組織、細胞特有的環(huán)境或外加刺激的響應(yīng)控制藥物釋放。nh4hco3脂質(zhì)體在局部加熱的條件下，可促進nh4hco3分解，產(chǎn)生co2氣體，使脂質(zhì)體膜通透性增加，達到快速釋放藥物的目的。
本發(fā)明結(jié)合腫瘤微環(huán)境ph敏感（ph6.5）的聚合物psd、光熱試劑的光熱效應(yīng)與nh4hco3脂質(zhì)體的特點，構(gòu)建ph/近紅外光響應(yīng)性氣泡脂質(zhì)體，在實現(xiàn)光熱療與化療協(xié)同作用的同時，實現(xiàn)藥物在腫瘤組織的快速釋放，提高療效。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種ph/近紅外光響應(yīng)性氣泡脂質(zhì)體，該脂質(zhì)體在腫瘤組織微環(huán)境可促進腫瘤細胞對脂質(zhì)體的攝取，在近紅外光照射下可促發(fā)抗腫瘤藥物在腫瘤細胞的快速釋放。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
一種ph/近紅外光響應(yīng)性氣泡脂質(zhì)體，所述脂質(zhì)體磷脂層包含膽固醇（chol）、二棕櫚酰磷脂酰膽堿（dppc）、1,2-二硬脂酸-3-磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000（dspe-peg2000）、(2,3-二油?；?丙基)-三甲胺（dotap）和疏水性光熱劑，內(nèi)水相包含nh4hco3和親水性抗腫瘤藥物，并通過靜電吸附將ph敏感性聚合物聚磺胺二甲氧嘧啶（psd）修飾于脂質(zhì)體表面。
所述dppc、chol、dspe-peg2000、dotap和光熱劑的摩爾比為12:8:1:(1~10):(0.2~1)，脂質(zhì)體磷脂與抗腫瘤藥物的質(zhì)量比為20:1~2:1，脂質(zhì)體磷脂與psd的質(zhì)量比為1:0.2~1:5，其中脂質(zhì)體磷脂為dppc和dspe-peg2000。
所述光熱劑為cypate、ir780、au中的任意一種。
所述的抗腫瘤藥物為阿霉素、表阿霉素、柔紅霉素、5-氟尿嘧啶中的任意一種。
所述的ph/近紅外光響應(yīng)性氣泡脂質(zhì)體的制備方法包括以下步驟：
（1）將脂類混合物（dppc、chol、dspe-peg2000、dotap）和光熱劑溶解于氯仿和甲醇的混合溶液中；
（2）通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)法除去混合溶液，得到膜狀材料，經(jīng)nh4hco3溶液（1~5m）洗脫后，利用細胞破碎儀超聲，超聲功率為50~400w，超聲時間為3~20min；
（3）上述溶液用含2~10mmnacl的5~15wt%蔗糖溶液透析后，再加入抗腫瘤藥物，室溫下孵育12~48h，蒸餾水透析6~24h；
（4）加入psd，室溫攪拌8min~8h，即得ph/近紅外光響應(yīng)性氣泡脂質(zhì)體。
本發(fā)明的優(yōu)點在于：制備的ph/近紅外光響應(yīng)性氣泡脂質(zhì)體，在腫瘤組織微環(huán)境發(fā)生電荷翻轉(zhuǎn)，可顯著增強腫瘤細胞對脂質(zhì)體的攝??；在近紅外光照射下，光熱試劑產(chǎn)生的高溫不僅直接殺死腫瘤細胞，而且可以促進nh4hco3分解產(chǎn)生co2氣體，在實現(xiàn)光熱療與化療協(xié)同作用的同時，實現(xiàn)藥物在腫瘤組織的快速釋放，提高療效。
本發(fā)明采用ph敏感的聚磺胺二甲氧嘧啶包覆共載光熱劑與抗腫瘤藥物的陽離子脂質(zhì)體，其中光熱劑包載于脂質(zhì)體磷脂雙分子層間，抗腫瘤藥物和nh4hco3負載于脂質(zhì)體內(nèi)水相中，構(gòu)建的ph/近紅外光響應(yīng)性氣泡脂質(zhì)體具有光熱效應(yīng)、ph響應(yīng)性及近紅外光響應(yīng)性快速釋藥特性。
附圖說明
圖1是ph/近紅外光響應(yīng)性氣泡脂質(zhì)體在不同ph值的pbs中的電位圖。
具體實施方式
實施例1：一種ph/近紅外光響應(yīng)性氣泡脂質(zhì)體的制備方法
（1）將脂類混合物（chol15.465mg、dppc44mg、dspe-peg200013.75mg、dotap10.47mg）和cypate2.5mg溶解于30ml氯仿/甲醇（v:v=1:1）的混合溶液；
（2）通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀室溫下旋蒸3h，70rpm/s，得到膜狀材料，經(jīng)nh4hco3溶液（2.7m）洗脫后，利用細胞破碎儀超聲10min，超聲功率為300w；
（3）上述溶液用含5mmnacl的10wt%蔗糖溶液透析后，以阿霉素和磷脂的質(zhì)量比為0.1加入阿霉素，室溫下孵育24h，蒸餾水透析9h；
（4）以磷脂和psd的質(zhì)量比為1:0.3加入psd，室溫攪拌30min，即得ph/近紅外光響應(yīng)性氣泡脂質(zhì)體。
實施例2：一種ph/近紅外光響應(yīng)性氣泡脂質(zhì)體的制備方法
（1）將脂類混合物（chol15.465mg、dppc44mg、dspe-peg200013.75mg、dotap20.94mg）和cypate2.5mg溶解于30ml氯仿/甲醇（v:v=1:1）的混合溶液；
（2）通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀室溫下旋蒸3h，100rpm/s，得到膜狀材料，經(jīng)nh4hco3溶液（2.7m）洗脫后，利用細胞破碎儀超聲10min，超聲功率為300w；
（3）上述溶液用含5mmnacl的10wt%蔗糖溶液透析后，以阿霉素和磷脂的質(zhì)量比為0.1加入阿霉素，室溫下孵育24h，蒸餾水透析9h；
（4）以磷脂和psd的質(zhì)量比為1:2加入psd，室溫攪拌30min，即得ph/近紅外光響應(yīng)性氣泡脂質(zhì)體。
實施例3：一種ph/近紅外光響應(yīng)性氣泡脂質(zhì)體的電位測定
（1）采用ph=7.4和6.5的pbs溶液將實施例1制備的ph/近紅外光響應(yīng)性氣泡脂質(zhì)體稀釋至濃度為200μg/ml，用馬爾文激光粒度儀測定其zeta電位。
（2）實驗結(jié)果：由圖1可知，制備的ph/近紅外光響應(yīng)性氣泡脂質(zhì)體在ph7.4的pbs溶液中，zeta電位為負電荷；在ph6.5的pbs溶液中，zeta電位為正電荷，說明脂質(zhì)體具有ph敏感性。
實施例4：一種ph/近紅外光響應(yīng)性氣泡脂質(zhì)體的體外釋放實驗
（1）將2ml實施例1制備的脂質(zhì)體溶液加入8mlpbs（ph=6.5）溶液，用785nm近紅外光照射5min，37°c、100r/min條件釋放；分別于6、8、10、15、20、30min和1、2、4、8h時間點取出2ml釋放液，同時補充2ml的新鮮pbs溶液；取出的釋放液用熒光分光光度計于ex:480nm、em:585nm波長處檢測藥物釋放量，計算dox的累積釋放率。
（2）實驗結(jié)果：釋放8h時，未激光照射組的脂質(zhì)體中阿霉素的釋放量為16.7%，近紅外光照射組中阿霉素的釋放量明顯增加（72.5%），說明近紅外光照射后，光熱劑產(chǎn)生的高熱可促使氣泡脂質(zhì)體中的阿霉素快速釋放。
以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施方式，凡依本發(fā)明申請專利范圍所做的均等變化與修飾，皆應(yīng)屬本發(fā)明的涵蓋范圍。