本發(fā)明屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
。涉及一種肺部靶向的藥物組合物，尤其涉及一種肺部靶向的用于輸送sirna的陽離子脂質(zhì)體。
背景技術(shù)：
：在我國肺癌、肺結(jié)核等肺部疾病發(fā)病率較高且呈快速遞增發(fā)展趨勢，肺部感染也是非常常見并且嚴(yán)重的并發(fā)癥。為了治療這些疾病，國家已經(jīng)投入了大量的人力、物力和財力，并在藥物治療領(lǐng)域取得了一系列重要進(jìn)展，但現(xiàn)有的治療藥物在體內(nèi)分布大多不具有目標(biāo)選擇性，造成了用藥量大、周期長并會產(chǎn)生嚴(yán)重的毒副反應(yīng)與耐藥性。因此，開發(fā)肺部靶向的給藥系統(tǒng)是解決這些問題的關(guān)鍵。脂質(zhì)體(liposome)又稱為囊泡(vesicle)，是類脂分子在水相中的自組裝體。它含有一個或多個類脂雙層膜(bilayer)，在每個雙層膜結(jié)構(gòu)中，類脂分子中的疏水部分通過疏水相互作用結(jié)合在一起，親水部分指向環(huán)境中的水相。脂質(zhì)體最初是由英國學(xué)者bangham將磷脂分散在水中進(jìn)行電鏡觀察時發(fā)現(xiàn)的。由于脂質(zhì)體具有與細(xì)胞膜相似的結(jié)構(gòu)，因此早期的脂質(zhì)體多用于細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)與功能的研究。gregoriadsi等于1971年首次將脂質(zhì)體用于生物活性物質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)。用于制備脂質(zhì)體的類脂分子包括天然類脂及合成類脂。天然類脂中應(yīng)用較多的是天然磷脂，如卵磷脂，腦磷脂等；合成類脂主要是用于基因轉(zhuǎn)移的類脂分子，如dotma，dope，dmrie等。由天然卵磷脂和合成類脂的分子結(jié)構(gòu)可以看出，類脂分子中除了dc-chol以外，分子結(jié)構(gòu)有一個共同的特點(diǎn)，即都是由兩條疏水尾鏈和一個親水性的頭部組成的，大部分類脂是通過甘油骨架的鏈接部分通過酯鍵、酰胺鍵、醚鍵等將親水部分和疏水部分鏈接起來。rna干擾(rnainterference，rnai)是一種由雙鏈rna小分子片段(smallinterferingrnas，sirna)引起與其同源mrna的特異性基因沉默現(xiàn)象。因rnai具有特異、高效和持久等特點(diǎn)，其研究和應(yīng)用現(xiàn)已成為分子生物學(xué)研究中的熱點(diǎn)，同時該技術(shù)也為相關(guān)臨床疾病的基因干預(yù)治療開辟了一條新途徑。sirna是一個相對較大的分子，帶有強(qiáng)的負(fù)電荷，親水性高，不能夠直接穿過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞。所以，為了用于治療肺部疾病，產(chǎn)業(yè)中迫切需要一種高效、低毒、高肺部靶向的sirna傳遞系統(tǒng)。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的一方面在于提供一種藥物組合物，其包括活性物質(zhì)、陽離子磷脂、聚乙二醇修飾的磷脂以及肺部靶向物質(zhì)。在一些實(shí)施方式中，本申請的藥物組合物進(jìn)一步包括膽固醇。活性物質(zhì)本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)實(shí)際需要選擇適合的活性物質(zhì)。在一些實(shí)施方式中，所述活性物質(zhì)用于緩解、治療或預(yù)防肺部疾病或病癥。緩解、治療或預(yù)防肺部疾病或病癥的活性物質(zhì)可以是在各國家或地區(qū)的藥品管理部門已經(jīng)批準(zhǔn)的用于治療或預(yù)防肺部疾病或病癥的藥品，例如中國食品藥品監(jiān)督管理局、美國食品藥品監(jiān)督管理局、日本藥品與醫(yī)療器械管理局或者歐洲藥品管理局批準(zhǔn)的那些。本發(fā)明使用的術(shù)語“肺部疾病或病癥”包括已知的或者將來知曉的與肺部相關(guān)或者發(fā)生在肺部的疾病或病癥。在一些實(shí)施方式中，所述肺部疾病或病癥是肺部感染、結(jié)核病或肺癌。在一些實(shí)施方式中，所述活性物質(zhì)是生物分子、化學(xué)分子或其組合物。在一些實(shí)施方式中，所述活性物質(zhì)是單鏈或雙鏈核酸。在一些實(shí)施方式中，所述核酸的長度在5-200bp、5-150bp、5-120bp、5-100bp、5-80bp、5-60bp、5-50bp、5-40bp、10-40bp、15-40bp、15-30bp、或20-30bp。在一些實(shí)施方式中，所述活性物質(zhì)是sirna。在一些實(shí)施方式中，所述活性物質(zhì)是需要肺部靶向的sirna，例如，治療或預(yù)防肺部疾病的sirna。在一些實(shí)施方式中，本申請的sirna是用于緩解、治療或預(yù)防肺部疾病的sirna，其特異性靶向與肺部疾病相關(guān)的mrna，通過特異性降解mrna從而緩解、治療或預(yù)防肺部疾病。通過本領(lǐng)域的技術(shù)手段，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以發(fā)現(xiàn)與緩解、治療或預(yù)防肺部疾病相關(guān)的mrna，并且設(shè)計與之相對應(yīng)的sirna。在一些實(shí)施方式中，所述活性物質(zhì)是抑制肺泡ii型上皮細(xì)胞分泌肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白a(pulmonarysurfactantassociatedprotein，spa)的sirna。在一些實(shí)施方式中，所述活性物質(zhì)是具有如seqidno：1和2所示的sirna、具有如seqidno：3和4所示的sirna或具有如seqidno：5和6所示的sirna。陽離子脂質(zhì)如發(fā)明使用的術(shù)語“陽離子脂質(zhì)”是指在選擇的ph下(例如，生理ph)攜帶任意數(shù)目的凈正電荷的脂質(zhì)。在文獻(xiàn)中描述過多種陽離子脂質(zhì)，其中許多均為市售。本發(fā)明的陽離子脂質(zhì)包括二油酰丙基氯化三甲銨(“dotma”)、5-羧基精胺基甘氨酸雙十八烷基酰胺(“dogs”)、1，2-二油酰氧基-3-二甲基氨基-丙烷(“dodma”)、1，2-二亞油基氧基-n，n-二甲基-3-氨基丙烷(“dlindma”)、1，2-二亞油?；趸?n，n-二甲基-3-氨基丙烷(“dlendma”)、n-二油烯基-n，n-二甲基氯化銨(“dodac”)、雙十烷基二甲基溴化銨(“ddab”)、2，3-二油基氧基-n-[2(精胺-氨甲酰基)乙基]-n，n-二甲基-1-丙銨(“dospa”)、1，2-二油酰基-3-二甲基銨-丙烷(“dodap”)、二油酰三甲基銨丙烷(“dotap”)、1，2-二硬脂?；趸?n，n-二甲基-3-氨基丙烷(“dsdma”)、n-(1，2-雙肉豆蔻基氧基丙-3-基)-n，n-二甲基-n-羥基乙基溴化銨(“dmrie”)、3-二甲基氨基-2-(膽甾-5-烯-3-β-氧基丁烷-4-氧基)-1-(順式，順式-9，12-十八二烯氧基)丙烷(“clindma”)、2-[5′-(膽甾-5-烯-3-β-氧基)-3′-氧雜戊氧基)-3-二甲基-1-(順式，順式-9′，1-2′-十八二烯氧基)丙烷(“cplindma”)、1，2-n，n′-二亞油基氨甲酰基-3-二甲基氨基丙烷(“dlincarbdap”)、1，2-二亞麻酰基氨甲?；?3-二甲基氨基丙烷(“dlincdap”)、n，n-二甲基-3，4-二油基氧基芐胺(“dmoba”)、1，2-n，n′-二油基氨甲?；?3-二甲基氨基丙烷(“docarbdap”)、2，3-二亞麻?；趸?n，n-二甲基丙胺(“dlindap”)、2，2-二亞油基-4-二甲基氨基甲基-[1，3]-二氧戊烷(“dlin-k-dma”)、2，2-二亞油基-4-二甲基氨基乙基-[1，3]-二氧戊烷(“dlin-k-xtc2-dma”)、2-(2，2-二((9z，12z)-十八-9，12-二烯-1-基)-1，3-二氧戊環(huán)-4-基)-n，n-二甲基乙胺(“dlin-kc2-dma”)、二甲氨基乙基氨甲?；?膽固醇(“dc-chol”)、1，4-雙(3-n-油烯基氨基-丙基)哌嗪或其混合物。在一些實(shí)施方式中，所述陽離子脂質(zhì)選自雙十烷基二甲基溴化銨(“ddab”)、二油酰三甲基銨丙烷(“dotap”)、1，2-二油酰氧基-3-二甲基氨基-丙烷(“dodma”)、二油酰丙基氯化三甲銨(“dotma”)、二甲氨基乙基氨甲?；?膽固醇(“dc-chol”)中的一種或多種。在一些實(shí)施方式中，所述陽離子脂質(zhì)是二油酰基陽離子脂質(zhì)。在一些實(shí)施方式中，所述陽離子脂質(zhì)是dotap或dotma。聚乙二醇修飾的磷脂如發(fā)明使用的術(shù)語“聚乙二醇修飾的磷脂”是指被聚乙二醇(“peg”)共價修飾的磷脂。在文獻(xiàn)中描述過多種聚乙二醇修飾的磷脂，其中許多均為市售。在一些實(shí)施方式中，所述聚乙二醇修飾的磷脂是被聚乙二醇共價修飾的長度為c6-c20的烷基鏈的脂質(zhì)。在一些實(shí)施方式中，所述聚乙二醇修飾的磷脂選自聚乙二醇修飾的二棕櫚酸磷脂酰膽堿(dppc)、2-油酰-1-棕櫚錫甘油-3-磷酸膽堿(popc)、二硬脂酰磷脂酰膽堿(dspc)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(dspe)和二油酰磷脂酰膽堿(dopc)中的一種或多種。在一些實(shí)施方式中，所述聚乙二醇修飾的磷脂是聚乙二醇修飾的烷基鏈的乙醇胺類磷脂。在一些實(shí)施方式中，所述聚乙二醇修飾的磷脂是peg-dspe。在一些實(shí)施方式中，所述聚乙二醇的分子量高于100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1200、1500、1700或1900。在一些實(shí)施方式中，所述聚乙二醇的分子量低于20000、15000、13000、10000、8000、7000、5000、4000、3000、2500或2200。在一些實(shí)施方式中，所述聚乙二醇的分子量為100-20000、200-15000、300-13000、400-10000、500-8000、600-7000、700-5000、800-4000、900-3000、1000-2500、1200-2200、1500-2200、1700-2200或1900-2200。肺部靶向物質(zhì)本發(fā)明的肺部靶向物質(zhì)可以是任何能夠增加藥物組合物在肺部分布的物質(zhì)，例如抗體、配體、受體、小分子物質(zhì)等。在一些實(shí)施方式中，所述肺部靶向物質(zhì)選自油酸、亞油酸、膽固醇油酸酯、膽固醇亞油酸酯中的一種或多種。在一些實(shí)施方式中，所述肺部靶向物質(zhì)是油酸或亞油酸。在一些實(shí)施方式中，所述肺部靶向物質(zhì)作為藥物組合物的一個組分混合入藥物組合物中，但并不與藥物組合物中的任何其它成分(例如，活性物質(zhì)、陽離子磷脂或聚乙二醇修飾的磷脂)共價連接。本發(fā)明中的油酸是一種單不飽和omega-9脂肪酸，分子式為ch3(ch2)7ch＝ch(ch2)7cooh。本發(fā)明中的亞油酸是一種脂肪酸，化學(xué)名為順，順-9，12-十八(碳)二烯酸，分子式為ch3(ch2)4ch＝chch2ch＝ch(ch2)7cooh。不希望受理論的束縛，發(fā)明人意想不到的發(fā)現(xiàn)通過向藥物組合物中加入肺部靶向物質(zhì)(例如，油酸或亞油酸)能夠大幅改善藥物組合物施用后在肺部的分布，從而提高了治療或預(yù)防肺部疾病的效力，有效降低了所需的給藥量。藥物組合物在一些實(shí)施方式中，本申請的藥物組合物以脂質(zhì)納米顆粒的形式存在。在一些實(shí)施方式中，本申請的藥物組合物以脂質(zhì)體的形式存在。在一些實(shí)施方式中，本申請的藥物組合物以陽離子脂質(zhì)體的形式存在。在一些實(shí)施方式中，本申請的藥物組合物用于全身給藥。在一些實(shí)施方式中，本申請的藥物組合物用于靜脈內(nèi)給藥。在一些實(shí)施方式中，本申請的藥物組合物包括作為活性物質(zhì)的sirna、作為陽離子脂質(zhì)的dotap或dotma、聚乙二醇修飾的磷脂的peg-dspe、作為肺靶向物質(zhì)的油酸或亞油酸以及膽固醇。在一些實(shí)施方式中，所述活性物質(zhì)與陽離子脂質(zhì)的質(zhì)量比例是0.001∶1～1∶1。在一些實(shí)施方式中，所述活性物質(zhì)與陽離子脂質(zhì)的質(zhì)量比例是0.002∶1～1∶1、0.003∶1～1∶1、0.004∶1～1∶1、0.005∶1～1∶1、0.01∶1～1∶1、0.02∶1～1∶1、0.03∶1～1∶1、0.04∶1～1∶1、0.05∶1～1∶1、0.06∶1～1∶1、0.07∶1～1∶1、0.08∶1～1∶1、0.09∶1～1∶1、0.1∶1～1∶1、0.002∶1～0.8∶1、0.002∶1～0.5∶1、0.002∶1～0.4∶1、0.002∶1～0.3∶1、0.002∶1～0.2∶1、0.002∶1～0.15∶1、0.002∶1～0.12∶1或0.002∶1～0.1∶1。在一些實(shí)施方式中，述活性物質(zhì)與陽離子脂質(zhì)的質(zhì)量比例是0.05∶1～0.2∶1。在一些實(shí)施方式中，聚乙二醇修飾的磷脂與陽離子脂質(zhì)的摩爾比為0.01∶1～1∶1。在一些實(shí)施方式中，聚乙二醇修飾的磷脂與陽離子脂質(zhì)的摩爾比為0.01∶1～0.9∶1、0.01∶1～0.8∶1、0.01∶1～0.7∶1、0.01∶1～0.6∶1、0.01∶1～0.5∶1、0.01∶1～0.4∶1、0.01∶1～0.3∶1、0.01∶1～0.2∶1、0.01∶1～0.1∶1、0.01∶1～0.08∶1、0.01∶1～0.06∶1、0.01∶1～0.05∶1、0.02∶1～0.05∶1、0.03∶1～0.05∶1、0.04∶1～0.05∶1、0.02∶1～0.08∶1、0.02∶1～0.1∶1、0.02∶1～0.2∶1、0.02∶1～0.3∶1、0.02∶1～0.4∶1或0.02∶1～0.5∶1。在一些實(shí)施方式中，聚乙二醇修飾的磷脂與陽離子脂質(zhì)的摩爾比為0.02∶1～0.08∶1。在一些實(shí)施方式中，肺部靶向物質(zhì)與陽離子脂質(zhì)的摩爾比為0.2∶1～5∶1。在一些實(shí)施方式中，肺部靶向物質(zhì)與陽離子脂質(zhì)的摩爾比為0.2∶1～5∶1、0.2∶1～4∶1、0.2∶1～3∶1、0.2∶1～2∶1、0.2∶1～1∶1、0.2∶1～0.9∶1、0.3∶1～1∶1、0.4∶1～1∶1、0.5∶1～1∶1、0.6∶1～1∶1、0.7∶1～1∶1或0.7∶1～0.9∶1。在一些實(shí)施方式中，肺部靶向物質(zhì)與陽離子脂質(zhì)的摩爾比為0.4∶1～1∶1。在一些實(shí)施方式中，肺部靶向物質(zhì)與聚乙二醇修飾的磷脂的摩爾比為0.01∶1～1∶1。在一些實(shí)施方式中，肺部靶向物質(zhì)與聚乙二醇修飾的磷脂的摩爾比為0.01∶1～0.9∶1、0.01∶1～0.8∶1、0.01∶1～0.7∶1、0.01∶1～0.6∶1、0.01∶1～0.5∶1、0.01∶1～0.4∶1、0.01∶1～0.3∶1、0.01∶1～0.2∶1、0.01∶1～0.1∶1、0.01∶1～0.08∶1、0.02∶1～0.08∶1、0.03∶1～0.08∶1、0.04∶1～0.08∶1、0.05∶1～0.08∶1、0.06∶1～0.08∶1、0.02∶1～0.1∶1、0.02∶1～0.2∶1、0.02∶1～0.3∶1、0.02∶1～0.4∶1或0.02∶1～0.5∶1。在一些實(shí)施方式中，肺部靶向物質(zhì)與陽離子脂質(zhì)的摩爾比為0.03∶1～0.08∶1。在一些實(shí)施方式中，膽固醇與陽離子脂質(zhì)的摩爾比為0.1∶1～5∶1。在一些實(shí)施方式中，膽固醇與陽離子脂質(zhì)的摩爾比為0.1∶1～5∶1、0.1∶1～4∶1、0.1∶1～3∶1、0.1∶1～2∶1、0.1∶1～1∶1、0.1∶1～0.9∶1、0.1∶1～0.8∶1、0.2∶1～0.8∶1、0.3∶1～0.8∶1、0.4∶1～0.8∶1、0.5∶1～0.8∶1或0.5∶1～0.7∶1。在一些實(shí)施方式中，膽固醇與陽離子脂質(zhì)的摩爾比是0.3∶1～1∶1。在一些實(shí)施方式中，本申請的藥物組合物包括：陽離子磷脂：1；活性物質(zhì)：0.001-1；聚乙二醇修飾的磷脂：0.01-1；肺部靶向物質(zhì)：0.1-5；以及膽固醇：0.2-5(上述數(shù)據(jù)代表各組分的摩爾比)。在一些實(shí)施方式中，本申請的藥物組合物包括：陽離子磷脂：1；活性物質(zhì)：0.1-0.5；聚乙二醇修飾的磷脂：0.02-0.5；肺部靶向物質(zhì)：0.4-2；以及膽固醇：0.3-1(上述數(shù)據(jù)代表各組分的摩爾比)。在一些實(shí)施方式中，本申請的藥物組合物的粒徑在10-500nm。在一些實(shí)施方式中，所述納米顆粒的粒徑在50-200nm。在一些實(shí)施方式中，所述納米顆粒的粒徑在10-400nm、10-300nm、10-250nm、20-200nm、30-200nm、40-200nm、50-200nm、60-200nm、70-200nm、80-200nm、90-200nm、100-200nm、110-200nm、120-200nm、130-200nm、140-200nm、150-200nm、160-200nm、50-300nm、80-250nm或100-200nm。在一些實(shí)施方式中，所述納米顆粒的粒徑在110-200nm。可以使用本領(lǐng)域常用的方法測量粒徑，例如掃描電鏡法、光散射法。在一些實(shí)施方式中，使用光散射法檢測粒徑。在一些實(shí)施方式中，使用激光動態(tài)散射儀檢測粒徑。本申請納米粒具有可接受的分散系數(shù)。在一些實(shí)施方式中，本申請納米粒的分散系數(shù)不大于0.3、0.2、0.19或0.18。本領(lǐng)域技術(shù)人員知曉，可以對本申請組合物進(jìn)行進(jìn)一步的修飾。在一些實(shí)施方式中，可以在本申請組合物的表面修飾靶向基團(tuán)(例如，抗體、配體、特定底物等)或者其他的高分子以進(jìn)一步改善申請組合物的靶向性或其他動力學(xué)參數(shù)，或者用于對本申請組合物進(jìn)行示蹤。本領(lǐng)域技術(shù)人員知曉，除了上述成分之外，所述藥物組合物還包括藥學(xué)上可接受的其他成分。在一些實(shí)施方式中，所述其他成分包括凍干保護(hù)劑，包括但不限于乳糖、甘露糖、右旋糖酐、蔗糖和甘氨酸。在一些實(shí)施方式中，所述其他成分包括溶液，包括但不限于氯化鈉溶液、葡萄糖溶液、pbs緩沖液、或乙醇溶液等。本申請所使用的術(shù)語“藥學(xué)上可接受的”是指這樣的化合物、原料、組合物和/或劑型，它們在合理醫(yī)學(xué)判斷的范圍內(nèi)，適用于與患者組織接觸而無過度毒性、刺激性、變態(tài)反應(yīng)或與合理的利益/風(fēng)險比不相稱的其他問題和并發(fā)癥，并有效用于既定用途。有益效果不希望受理論的束縛，本申請的藥物組合物具有如下一個或多個優(yōu)勢：1、全身給藥后具有優(yōu)異的肺部靶向；2、更均勻的粒徑分布；3、穩(wěn)定性更優(yōu)異；4、更深入的進(jìn)入腫瘤；5、更高的藥效。制備方法本發(fā)明的另一方面在于提供一種制備本申請的藥物組合物的方法，其包括：(a)將陽離子磷脂、聚乙二醇修飾的磷脂以及肺部靶向物質(zhì)溶于有機(jī)溶劑中；(b)將活性物質(zhì)溶于水溶液中；(c)將步驟(a)獲得的有機(jī)溶劑與步驟(b)獲得的水溶液混合。在一些實(shí)施方式中，本申請的方法進(jìn)一步包括步驟(d)透析或超濾步驟(c)得到的混合物。在一些實(shí)施方式中，本申請的步驟(a)進(jìn)一步包括將不含活性物質(zhì)的水溶液注入到有機(jī)溶劑中的步驟。在一些實(shí)施方式中，步驟(a)中的有機(jī)溶劑是乙醇。在一些實(shí)施方式中，步驟(b)中的水溶劑是磷酸鹽緩沖液、檸檬酸緩沖液或含有depc的水溶液。在一些實(shí)施方式中，步驟(a)獲得的有機(jī)溶劑與步驟(b)獲得的水溶液的比例為1∶10～1∶1。在一些實(shí)施方式中，步驟(a)獲得的有機(jī)溶劑與步驟(b)獲得的水溶液的比例為1∶9～1∶1、1∶8～1∶1、1∶7～1∶1、1∶6～1∶1、1∶6～1∶2或1∶6～1∶3。在一些實(shí)施方式中，步驟(a)獲得的有機(jī)溶劑與步驟(b)獲得的水溶液的比例是1∶5～1∶3。制備本申請的藥物組合物的示例性方法包括：透析法：將陽離子磷脂、聚乙二醇修飾的磷脂以及肺部靶向物質(zhì)分別溶解于乙醇中，按比例混合得到脂質(zhì)混合物乙醇溶液。然后將含活性物質(zhì)的緩沖液注入脂質(zhì)混合溶液中，渦旋混合2秒；混合得到的液體室溫靜止放10分鐘，然后將混合溶液轉(zhuǎn)入到透析管中，在hepes緩沖溶液中透析1～2小時形成陽離子脂質(zhì)體。物理混合法：將陽離子磷脂、聚乙二醇修飾的磷脂以及肺部靶向物質(zhì)分別溶解于乙醇中，按比例混合得到脂質(zhì)混合物乙醇溶液。然后將空白緩沖液注入脂質(zhì)混合溶液中，混合均勻，得到空白脂質(zhì)體溶液。用移液槍將空白脂質(zhì)體溶液加入到含活性物質(zhì)的緩沖液中，輕輕吹打，混勻；混合得到的液體室溫靜止放20分鐘，得到陽離子脂質(zhì)體。超濾法：將陽離子磷脂、聚乙二醇修飾的磷脂以及肺部靶向物質(zhì)分別溶解于乙醇中，按比例混合得到脂質(zhì)混合物乙醇溶液。然后將含活性物質(zhì)的緩沖液注入脂質(zhì)混合溶液中，渦旋混合2秒；混合得到的液體室溫靜止放10分鐘，取出后置于超濾管中，離心超濾(4000轉(zhuǎn)/分鐘，15分鐘)，濃縮后得到陽離子脂質(zhì)體。肺靶向中的用途本發(fā)明的再一方面在于提供油酸或亞油酸在用于提高藥物的肺靶向中的用途或者在制備肺靶向組合物中的用途。在一些實(shí)施方式中，與不加入油酸或亞油酸的相同處方的組合物相比，肺靶向的效果提高至少1％、5％、10％、15％、20％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、150％、200％、300％、400％或500％。制藥用途、疾病治療方法和治療用途本發(fā)明的又一方面在于提供本申請的藥物組合物在制備藥物中的用途。本申請?jiān)僖环矫嫔婕氨旧暾埖乃幬锝M合物用于緩解、治療或預(yù)防疾病或病癥的用途。本申請另一方面涉及一種緩解、治療或預(yù)防疾病或病癥的方法，包括向需要其的客體使用有效量的本申請的藥物組合物。對某種疾病或癥狀的“緩解”、“治療”或“預(yù)防”包括預(yù)防或減輕某種狀況，降低某種狀況興起或發(fā)展的速度，減少發(fā)展出某種狀況的風(fēng)險，預(yù)防或延遲與某種狀況相關(guān)的癥狀發(fā)展，減少或終止與某種狀況相關(guān)的癥狀，產(chǎn)生某種狀況的完全或部分的逆轉(zhuǎn)，治愈某種狀況，或以上的組合。本申請中使用的術(shù)語“有效量”是指，可以實(shí)現(xiàn)客體的疾病或癥狀，或者可以預(yù)防性地抑制或防止疾病或癥狀發(fā)生的藥物的量。有效量可以是將客體的一種或多種疾病或癥狀緩解到一定程度的藥物的量；可以將那些跟疾病或癥狀成因相關(guān)的一種或多種生理或生物化學(xué)參數(shù)部分或完全恢復(fù)到正常的藥物的量；和/或可以降低疾病或癥狀發(fā)生的可能性的藥物的量。本申請中提供的組合物的有效劑量依賴于本領(lǐng)域公知的多種因素，例如體重、年齡、過往病史、目前正在接受的治療、對象的健康狀況和藥物相互作用的強(qiáng)度、過敏、超敏和副作用，以及給藥途徑和疾病發(fā)展的程度。本領(lǐng)域熟練人員(例如醫(yī)生或獸醫(yī))可根據(jù)這些或其它條件或要求相應(yīng)降低或升高劑量。在某些實(shí)施方式中，本申請?zhí)峁┑慕M合物可在治療有效劑量約0.01mg/kg到約100g/kg之間給藥(例如，約0.01mg/kg、約0.5mg/kg、約1mg/kg、約2mg/kg、約5mg/kg、約10mg/kg、約15mg/kg、約20mg/kg、約25mg/kg、約30mg/kg、約35mg/kg、約40mg/kg、約45mg/kg、約50mg/kg、約55mg/kg、約60mg/kg、約65mg/kg、約70mg/kg、約75mg/kg、約80mg/kg、約85mg/kg、約90mg/kg、約95mg/kg、約100mg/kg、約200mg/kg、約500mg/kg、約1g/kg、約5g/kg、約10g/kg、約20g/kg、約50g/kg、約70g/kg、約90g/kg或約100g/kg)。某一特定劑量可分為多次間隔給藥，例如每天一次、每天兩次或更多、每月兩次或更多、每周一次、每兩周一次、每三周一次、每月一次或每兩月或更多月一次。在某些實(shí)施方式中，給藥劑量可隨治療進(jìn)程變化。例如，在某些實(shí)施方式中，初始給藥劑量可比后續(xù)給藥劑量高。在某些實(shí)施方式中，給藥劑量在治療進(jìn)程中根據(jù)給藥對象的反應(yīng)進(jìn)行調(diào)整。給藥方案可通過調(diào)整達(dá)到最優(yōu)反應(yīng)(例如，治療響應(yīng))。例如，可進(jìn)行單劑量給藥或在一段時間分多個分隔的劑量給藥。在一些實(shí)施方式中，本申請的客體是哺乳動物，例如大鼠、小鼠、兔、雞、豬等。在一些實(shí)施方式中，所述客體是非人哺乳動物。在一些實(shí)施方式中，所述客體是人。附圖說明圖1實(shí)施例1和實(shí)施例2制備的sirna陽離子脂質(zhì)體的粒徑分布圖。圖2實(shí)施例3-6制備的sirna陽離子脂質(zhì)體的粒徑分布圖。圖3根據(jù)實(shí)施例7測定得到的裸sirna，qh-10和qh-9的活體成像圖和小鼠組織熒光強(qiáng)度柱狀圖。圖4根據(jù)實(shí)施例7測定得到的qh-9、qh-9-2、qh-16、qh-17和qh-18的活體成像圖和小鼠組織熒光強(qiáng)度柱狀圖。圖5根據(jù)實(shí)施例8測定得到的細(xì)胞轉(zhuǎn)染效果熒光結(jié)果圖。圖6根據(jù)實(shí)施例9測定得到的熒光定量pcr擴(kuò)增曲線圖。具體實(shí)施方式下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。以下實(shí)施例將有助于本領(lǐng)域技術(shù)人員進(jìn)一步理解本發(fā)明，但不以任何形式限制本發(fā)明。實(shí)施例1：透析法制備sirna陽離子脂質(zhì)體(qh-9)稱取二油酰三甲基銨丙烷(dotap)11.03mg，亞油酸3.52mg，膽固醇3.66mg，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000(peg2000-dspe)1.79mg，溶于1.0ml無水乙醇中配成磷脂乙醇溶液(20mg/ml)。將sirna用depc水中配成濃度為10mg/ml的sirna溶液。實(shí)施例1-6中使用的sirna是調(diào)節(jié)vegf的sirna。準(zhǔn)備兩個2ml離心管，標(biāo)記為a管和b管。用移液槍向a管中加入45μl磷脂乙醇溶液，再加入105μl無水乙醇稀釋至合適濃度。b管中加入350μldepc水，再加入5μlsirna溶液(10mg/ml)得到355μl液體。用移液槍將b管中的sirna溶液加入到a管中，輕輕吹打10次，稍微渦旋混合2秒?；旌系玫降囊后w室溫靜止放10分鐘，然后將混合溶液轉(zhuǎn)入到15ml透析管中，在hepes緩沖溶液中透析1～2小時，隨后過0.22μm的濾膜除菌。所得到的脂質(zhì)體代號為qh-9。使用粒度電位儀(馬爾文納米粒度電位儀，zetasizernanozs)進(jìn)行檢測，陽離子脂質(zhì)體qh-9的平均粒徑在156.00±6.3nm范圍，分散系數(shù)為0.19，電位在35.97±2.2mv范圍，粒徑分布結(jié)果如圖1所示。實(shí)施例2：物理混合法制備sirna陽離子脂質(zhì)體(qh-9-2)稱取二油酰三甲基銨丙烷(dotap)11.03mg，亞油酸3.52mg，膽固醇3.66mg，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000(peg2000-dspe)1.79mg，溶于1.0ml無水乙醇中配成磷脂乙醇溶液(20mg/ml)。將sirna用depc水中配成濃度為3mg/ml的sirna溶液。準(zhǔn)備兩個2ml離心管，標(biāo)記為a管和b管。用移液槍向a管中加入2000μldepc水，再用注射針筒加入22.5μl磷脂乙醇溶液，混合均勻，得到空白脂質(zhì)體溶液。用移液槍向b管中加入10μlsirna溶液，再將a管中的空白脂質(zhì)體溶液加入到管b中，用移液槍反復(fù)吹打，得到的產(chǎn)物室溫靜止放20分鐘，隨后過0.22μm的濾膜除菌。所得到的脂質(zhì)體代號為qh-9-2。使用粒度電位儀(馬爾文納米粒度電位儀，zetasizernanozs)進(jìn)行檢測，陽離子脂質(zhì)體qh-9-2的平均粒徑在192.1±0.13nm范圍，分散系數(shù)為0.13，電位在34.1±2.8mv范圍，粒徑分布結(jié)果如圖1所示。實(shí)施例3：其他處方的sirna陽離子脂質(zhì)體(qh-16)稱取二油酰三甲基銨丙烷(dotap)11.00mg，亞油酸3.26mg，膽固醇3.62mg，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000(peg2000-dspe)2.13mg，溶于1.0ml無水乙醇中配成磷脂乙醇溶液(20mg/ml)。將sirna用depc水中配成濃度為10mg/ml的sirna溶液。準(zhǔn)備兩個2ml離心管，標(biāo)記為a管和b管。用移液槍向a管中加入45μl磷脂乙醇溶液，再加入105μl無水乙醇稀釋至合適濃度。b管中加入5μlsirna溶液，隨后再加入300μldepc水稀釋至合適濃度。用移液槍將b管中的sirna溶液加入到a管中，輕輕吹打10次，稍微渦旋混合2秒?；旌系玫降囊后w室溫靜止放10分鐘，混合得到的液體室溫避光靜止放10分鐘，然后將混合溶液轉(zhuǎn)入到15ml透析管中，在hepes緩沖溶液中避光透析1～2小時，隨后過0.22μm的濾膜除菌。所得到的脂質(zhì)體代號為qh-16。使用粒度電位儀(馬爾文納米粒度電位儀，zetasizernanozs)進(jìn)行檢測，陽離子脂質(zhì)體qh-16的平均粒徑在144.63±8.4nm范圍，分散系數(shù)為0.14，電位在36.57±3.1mv范圍，粒徑分布結(jié)果如圖2所示。實(shí)施例4：其他處方的sirna陽離子脂質(zhì)體(qh-17)稱取二油酰三甲基銨丙烷(dotap)11.16mg，油酸3.15mg，膽固醇3.59mg，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000(peg2000-dspe)2.11mg，溶于1.0ml無水乙醇中配成磷脂乙醇溶液(20mg/ml)。將sirna用depc水中配成濃度為10mg/ml的sirna溶液。準(zhǔn)備兩個2ml離心管，標(biāo)記為a管和b管。用移液槍向a管中加入45μl磷脂乙醇溶液，再加入105μl無水乙醇稀釋至合適濃度。b管中加入5μlsirna溶液，隨后再加入350μldepc水稀釋至合適濃度。用移液槍將b管中的sirna溶液加入到a管中，輕輕吹打10次，稍微渦旋混合2秒?；旌系玫降囊后w室溫靜止放10分鐘，將混合溶液轉(zhuǎn)入到15ml透析管中，在hepes緩沖溶液中避光透析1～2小時，隨后過0.22μm的濾膜除菌。所得到的脂質(zhì)體代號為qh-17。使用粒度電位儀(馬爾文納米粒度電位儀，zetasizernanozs)進(jìn)行檢測，陽離子脂質(zhì)體qh-17的平均粒徑在181.83±4.1nm范圍，分散系數(shù)為0.15，電位為38.6±3.9mv。粒徑分布結(jié)果如圖2所示。實(shí)施例5：其他處方的sirna陽離子脂質(zhì)體(qh-18)稱取1，2-二油酰氧基-3-二甲基氨基-丙烷(dodma)11.97mg，膽固醇3.68mg，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(peg2000-dspe)20002.16mg，亞油酸3.2mg，溶于1.0ml無水乙醇中配成磷脂乙醇溶液(20mg/ml)。將sirna用depc水中配成濃度為10mg/ml的sirna溶液。準(zhǔn)備兩個2ml離心管，標(biāo)記為a管和b管。用移液槍向a管中加入45μl磷脂乙醇溶液，再加入105μl無水乙醇稀釋至合適濃度。b管中加入5μlsirna溶液，隨后再加入350μldepc水稀釋至合適濃度。用移液槍將b管中的sirna溶液加入到a管中，輕輕吹打10次，稍微渦旋混合2秒?；旌系玫降囊后w室溫靜止放10分鐘，混合得到的液體轉(zhuǎn)入到15ml透析管中，在hepes緩沖溶液中避光透析1～2小時，隨后過0.22μm的濾膜除菌。所得到的脂質(zhì)體代號為qh-18。使用粒度電位儀(馬爾文納米粒度電位儀，zetasizernanozs)進(jìn)行檢測，陽離子脂質(zhì)體qh-16的平均粒徑在138.2±5.4nm范圍，分散系數(shù)為0.16，電位在40.03±21mv范圍，粒徑分布結(jié)果如圖2所示。實(shí)施例6：不包括肺部靶向物質(zhì)的sirna陽離子脂質(zhì)體(qh-10)稱取二油酰三甲基銨丙烷(dotap)11.03mg，膽固醇3.52mg，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000(peg2000-dspe)3.67mg，溶于1.0ml無水乙醇中配成磷脂乙醇溶液(20mg/ml)。將sirna用depc水中配成濃度為10mg/ml的sirna溶液。準(zhǔn)備兩個2ml離心管，標(biāo)記為a管和b管。用移液槍向a管中加入45μl磷脂乙醇溶液，再加入105μl無水乙醇稀釋至合適濃度。b管中加入5μlsirna溶液，隨后再加入350μldepc水稀釋至合適濃度。用移液槍將b管中的sirna溶液加入到a管中，輕輕吹打10次，稍微渦旋混合2秒?；旌系玫降囊后w室溫靜止放10分鐘，混合得到的液體轉(zhuǎn)入到15ml透析管中，在hepes緩沖溶液中避光透析1～2小時，隨后過0.22μm的濾膜除菌。所得到的脂質(zhì)體代號為qh-10。使用粒度電位儀(馬爾文納米粒度電位儀，zetasizernanozs)進(jìn)行檢測，陽離子脂質(zhì)體的平均粒徑在215.33±7.2m范圍，分散系數(shù)為0.23，電位為51.2±2.8mv，粒徑分布結(jié)果如圖2所示。實(shí)施例7：cy5-sirna陽離子脂質(zhì)體的活體成像實(shí)驗(yàn)將實(shí)施例1和6中的5μlsirna溶液(10mg/ml)用6μlcy5-sirna(10mg/ml)代替，制備cy5-sirna陽離子脂質(zhì)體。取健康的icr小鼠12只，分成3組，分別尾靜脈注射200μlcy5-sirna陽離子脂質(zhì)體qh-9，200μlcy5-sirna陽離子脂質(zhì)體qh-10以及200μl裸cy5-sirna(濃度60μg/ml)，在給藥后4小時即時摘取心、肝、脾、肺、腎、腦組織，進(jìn)行活體成像儀熒光拍照(日本島津公司，clairvivoopt)。熒光拍照的激發(fā)波長為658nm，曝光時間為1s。根據(jù)熒光強(qiáng)度確定體內(nèi)臟器的熒光分布情況，得到的小鼠組織活體成像照片和熒光強(qiáng)度數(shù)據(jù)做柱狀分布圖，如圖3所示。將實(shí)施例1和2-5中的5μlsirna溶液(10mg/ml)用6μlcy5-sirna(10mg/ml)代替，制備cy5-sirna陽離子脂質(zhì)體。取健康的icr小鼠15只，分成5組，分別尾靜脈注射200μlcy5-sirna陽離子脂質(zhì)體溶液，在給藥后4小時即時摘取心、肝、脾、肺、腎、腦組織，進(jìn)行活體成像儀熒光拍照(日本島津公司，clairvivoopt)。熒光拍照的激發(fā)波長為658nm，曝光時間為1s。根據(jù)熒光強(qiáng)度確定體內(nèi)臟器的熒光分布情況，得到的小鼠組織活體成像照片和熒光強(qiáng)度數(shù)據(jù)做柱狀分布圖，如圖4所示。實(shí)施例8：sirna體外轉(zhuǎn)染的驗(yàn)證為了驗(yàn)證陽離子脂質(zhì)體的sirna基因轉(zhuǎn)染效果，采用小鼠肺泡ii型上皮細(xì)胞以及熒光素標(biāo)記的sirna作為評價體系。細(xì)胞接種：轉(zhuǎn)染前一天接種細(xì)胞，每孔500μl培養(yǎng)基，不可加抗體，使細(xì)胞在轉(zhuǎn)染時密度在30-50％。使用實(shí)施例2的方法包裹sirna-fam，隨后將其加入到含0.5ml培養(yǎng)的細(xì)胞的培養(yǎng)孔中。輕輕晃動培養(yǎng)板，混勻。37℃培養(yǎng)18小時，用顯微鏡觀察熒光。細(xì)胞轉(zhuǎn)染效果熒光結(jié)果見圖5。實(shí)施例9：載sirna的陽離子脂質(zhì)體的基因沉默驗(yàn)證合成了三種sirna，比較其對肺泡ii型上皮細(xì)胞分泌spa的干擾情況。sirna1：序列(5’to3’)gcuucagacugcacucuacttguagagugcagucugaagcttsirna2：序列(5’to3’)ccaaugggcagucagucaattuugacugacugcccauuggttsirna3：序列(5’to3’)ccaucgcaagcauuacaaattuuuguaaugcuugcgauggtt細(xì)胞接種：轉(zhuǎn)染前一天接種小鼠肺泡ii型上皮細(xì)胞細(xì)胞，每孔500μl培養(yǎng)基，不可加抗體，使細(xì)胞在轉(zhuǎn)染時密度在30-50％。使用實(shí)施例2的方法包裹sirna-fam，隨后將其加入到含0.5ml培養(yǎng)的細(xì)胞的培養(yǎng)孔中。輕輕晃動培養(yǎng)板，混勻。37℃培養(yǎng)48小時，收集細(xì)胞檢測抑制效率。取收集的細(xì)胞提取rna，通過實(shí)時定量pcr的方法檢測spa基因的表達(dá)量，熒光定量pcr擴(kuò)增曲線如圖6。結(jié)果顯示，三條sirna通過陽離子脂質(zhì)包載都可以抑制spa基因的表達(dá)，其中sirna2抑制效率較高為55％(表1)。表1gapdhspaδctδδct2-δδct抑制效率空白組18.5524.626.07010sirna119.5226.597.071.000.5050％sirna219.0226.237.211.140.4555％sirna317.9524.926.970.900.5446％當(dāng)前第1頁12