本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，主要涉及一種黃連堿注射液及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：黃連堿是一類從中草藥黃連、延胡索等植物中提取分離的季胺型異喹啉類生物堿，具有選擇性抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖、抗病毒和抗腫瘤等多種生物學(xué)功能。雖然近年來人們對黃連堿的藥理作用尤其抗腫瘤活性進(jìn)行了廣泛研究，例如對乳腺癌、肝癌、骨肉瘤等均有顯著抑制作用，但有關(guān)黃連堿對肺癌的影響尚未見報(bào)道。另外，由于黃連堿藥物本身極略微溶于水，其給藥方式受限、體內(nèi)吸收且真正發(fā)揮作用的較少，便大大阻礙了其原本應(yīng)有的較為廣闊的應(yīng)用前景，因此設(shè)計(jì)一種黃連堿的注射劑型應(yīng)用于皮下注射、靜脈注射、腹腔注射顯得尤為重要。因此，現(xiàn)有技術(shù)還有待于改進(jìn)和發(fā)展。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：鑒于上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種黃連堿注射液及其制備方法和應(yīng)用，旨在提供一種能夠提高療效且降低不良反應(yīng)黃連堿注射液，可用于皮下注射、靜脈注射、腹腔注射等，解決黃連堿因水溶性問題導(dǎo)致給藥方式受限、體內(nèi)吸收且真正發(fā)揮作用的較少的問題。本發(fā)明的技術(shù)方案如下：一種黃連堿注射液，其中，所述黃連堿注射液的原料包括增溶劑、穩(wěn)定劑、等滲調(diào)節(jié)劑；所述增溶劑采用HP-β-CD。所述的黃連堿注射液，其中，所述HP-β-CD與黃連堿的摩爾比為1：1。所述的黃連堿注射液，其中，所述穩(wěn)定劑采用煙酰胺，所述煙酰胺的濃度為1.25~2.5%。所述的黃連堿注射液，其中，所述等滲調(diào)節(jié)劑采用葡萄糖，葡萄糖的濃度為5%。所述的黃連堿注射液，其中，所述黃連堿注射液的原料還包括pH調(diào)節(jié)劑，用于調(diào)節(jié)pH值至4~6。所述的黃連堿注射液，其中，每1000mL所述黃連堿注射液可以包括以下組分：黃連堿5~8g；HP-β-CD30~35g；穩(wěn)定劑12.5~25g；等滲調(diào)節(jié)劑50g；注射用水加至1000mL。所述的黃連堿注射液，其中，每1000mL所述黃連堿注射液可以包括以下組分：黃連堿6.5g；HP-β-CD31.3g；穩(wěn)定劑12.5g；等滲調(diào)節(jié)劑50g；注射用水加至1000mL。一種如上所述的黃連堿注射液的制備方法，其中，包括以下步驟：在50℃條件下，將HP-β-CD溶解于注射用水中，加入黃連堿、穩(wěn)定劑、等滲調(diào)節(jié)劑；再通過pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH值至4~6。所述的黃連堿注射液的制備方法，其中，包括以下步驟：將HP-β-CD加入到處方量80%的注射用水中，放于水浴上加熱至50℃，待其溶解；再將黃連堿緩慢加入到HP-β-CD水溶液中，充分?jǐn)嚢?；再加入穩(wěn)定劑和等滲調(diào)節(jié)劑，繼續(xù)于50℃環(huán)境下攪拌；加入剩余20%處方量的注射用水，完全溶解后冷卻至室溫，用1mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH至4~6，調(diào)整體積至1000mL，過濾、灌封，滅菌。一種如上所述的黃連堿注射液的應(yīng)用，其中，將所述黃連堿注射液用作抗肺癌藥物。有益效果：本發(fā)明提供一種黃連堿注射液，能夠提高療效且降低不良反應(yīng)，運(yùn)用羥丙基-β-環(huán)糊精（HP-β-CD）作為包合材料，以增加難溶性藥物黃連堿的溶解度，使黃連堿的溶解度得到100%。而且，HP-β-CD的使用能夠提高藥物生物利用度，降低藥物刺激性及毒副作用，掩蓋藥物不良?xì)馕兜取１景l(fā)明中還提供所述的黃連堿注射液在抗肺癌中的應(yīng)用。附圖說明圖1為本發(fā)明中黃連堿原料藥、PM、包合物三者之間的溶出曲線示意圖。圖2為本發(fā)明中黃連堿與HP-β-CD的相溶解曲線示意圖。圖3A為本發(fā)明中黃連堿對照品的HPLC色譜圖。圖3B為黃連堿完全配方注射液于第一天的HPLC色譜圖。圖3C為黃連堿完全配方注射液于第50天的HPLC色譜圖。圖4為實(shí)施例1中不同濃度黃連堿對人肺癌A549細(xì)胞存活情況的影響。圖5為實(shí)施例1100μM黃連堿在不同作用時(shí)間對A549細(xì)胞存活情況的影響。圖6為實(shí)施例2中不同濃度黃連堿對人肺癌A549細(xì)胞凋亡情況的影響。圖7為實(shí)施例2中100μM黃連堿在不同作用時(shí)間對A549細(xì)胞凋亡情況的影響。圖8為實(shí)施例2中不同濃度黃連堿對凋亡相關(guān)蛋白C-PARP、C-Caspase-3表達(dá)的影響。圖9為實(shí)施例3中不同濃度黃連堿對人肺癌A549細(xì)胞、人正常胚肺細(xì)胞WI38以及人正常肝細(xì)胞LO2細(xì)胞的存活率比較圖。圖10為實(shí)施例4中用本發(fā)明藥物注射液作用于肺癌細(xì)胞A549裸鼠移植模型的體重比較圖。圖11為實(shí)施例4中給藥（生理鹽水組、黃連堿注射液組）5周過程中腫瘤體積大小變化圖。圖12為實(shí)施例4中給藥（生理鹽水組、黃連堿注射液組）5周后腫瘤實(shí)物比較圖。具體實(shí)施方式本發(fā)明提供一種黃連堿注射液及其制備方法和應(yīng)用，為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及效果更加清楚、明確，以下對本發(fā)明進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。本發(fā)明中提供一種黃連堿的注射劑型，并將其應(yīng)用于肺癌細(xì)胞，通過阻止肺癌細(xì)胞增殖及促進(jìn)肺癌細(xì)胞凋亡，最終達(dá)到殺滅肺癌細(xì)胞的目的。本發(fā)明方案中運(yùn)用羥丙基-β-環(huán)糊精（HP-β-CD）作為包合材料，以增加難溶性藥物黃連堿的溶解度。HP-β-CD是β-環(huán)糊精（β-CD）的衍生物，相比較β-CD而言，HP-β-CD具有更高的水溶性、安全性和更低的腎毒性，且HP-β-CD有較大的空穴結(jié)構(gòu)，可使其依據(jù)范德華力將疏水性藥物容納在內(nèi)，從而形成分子囊，大大增加難溶性藥物的溶解度。另外HP-β-CD的使用能夠提高藥物生物利用度，降低藥物刺激性及毒副作用，掩蓋藥物不良?xì)馕兜?。故本發(fā)明的第一目是，提供一種能夠提高療效且降低不良反應(yīng)的黃連堿注射溶液，第二目的是提供該黃連堿注射液在有效抗肺癌中的應(yīng)用。本發(fā)明中運(yùn)用HP-β-CD作為包合材料制備黃連堿-HP-β-CD包合物，以提高其溶解度。其中，黃連堿結(jié)構(gòu)式如式1所示。式1具體地，所述黃連堿注射液由主藥和輔料組合制成，主藥是黃連堿，輔料包括增溶劑、穩(wěn)定劑、等滲調(diào)節(jié)劑。所述增溶劑采用HP-β-CD，所述穩(wěn)定劑采用煙酰胺，所述等滲調(diào)節(jié)劑采用葡萄糖。進(jìn)一步地，所述黃連堿注射液，包括黃連堿、HP-β-CD、煙酰胺和葡萄糖；所述HP-β-CD與黃連堿的摩爾比為1：1，所述煙酰胺的濃度為1.25~2.5%，葡萄糖的濃度為5%。對HP-β-CD作為增溶劑的選擇原因請參見上文所述。另外，本發(fā)明中采用HP-β-CD與黃連堿按摩爾比值為1:1情況下進(jìn)行包合，因此種比例下的包合率及溶解度均較高。本發(fā)明所選擇的煙酰胺是一種水溶性維生素，對組織無刺激性、過敏性，被公認(rèn)為是安全的藥物助溶劑或穩(wěn)定劑，濃度在1.25~2.5%為宜，煙酰胺能夠顯著提高黃連堿注射液的穩(wěn)定性；本注射劑中5%的葡萄糖溶液與血漿具有相同滲透壓，為等滲溶液。具體地，每1000mL所述黃連堿注射液可以包括以下組分：黃連堿5~8g；HP-β-CD30~35g；煙酰胺12.5~25g；葡萄糖50g；注射用水加至1000mL。其中，黃連堿的劑量是基于藥典及其他季胺型異喹啉類生物堿注射液的可用臨床劑量進(jìn)而進(jìn)行的估算劑量。本發(fā)明中還提供較優(yōu)選的實(shí)施例方案，每1000mL所述黃連堿注射液可以包括以下組分：黃連堿6.5g；HP-β-CD31.3g；煙酰胺12.5g；葡萄糖50g；注射用水加至1000mL。本發(fā)明中還提供所述黃連堿注射液的制備方法，是在50℃條件下，將HP-β-CD溶解于注射用水中，后加入黃連堿、煙酰胺、葡萄糖；再通過pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH值至4~6。具體地，包括以下步驟：在配置容器中，將HP-β-CD加入到處方量80%的注射用水中，放于水浴上加熱至50℃，待其溶解；再將黃連堿緩慢加入到HP-β-CD水溶液中，充分?jǐn)嚢?；再加入煙酰胺和葡萄糖，繼續(xù)于50℃環(huán)境下攪拌；加入剩余20%處方量的注射用水，完全溶解后冷卻至室溫，用1mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH至4~6，調(diào)整體積至1000mL，過濾、灌封，100℃流通蒸汽滅菌15min即得。關(guān)于50℃的選擇，是在發(fā)明人結(jié)合并對比30℃、40℃、50℃、60℃情況下HP-β-CD對黃連堿的包合率、以及相應(yīng)溶解度值情況下進(jìn)行的最優(yōu)選擇。以下通過相關(guān)檢測數(shù)據(jù)用于證明該黃連堿注射液中黃連堿與HP-β-CD是否形成包合、以及包合情況怎樣，現(xiàn)有技術(shù)中有多重檢測方法，例如熱分析法、圓二色譜法、溶出速度法、紫外分光光度法、紅外光譜法等，在本發(fā)明中，選擇了溶出速度法和紫外分光光度法進(jìn)行檢測。(1)溶出度考察：精密稱取黃連堿原料藥、黃連堿與HP-β-CD的物理混合物(簡稱為PM)及黃連堿-HP-β-CD包合物，按照溶出度測定法第二法(中國藥典，二部)，以1000mL水為溶出介質(zhì)，依法操作。分別在5、10、20、40、60min時(shí)取樣，每次5mL(需即時(shí)補(bǔ)充溶出介質(zhì)5mL)，過濾、定容、搖勻。以水為空白，在350nm波長處測定吸光度，根據(jù)回歸方程計(jì)算黃連堿含量和累積溶出度，溶出曲線如圖1所示。從圖1可以看出，采用本發(fā)明方法制備得到的黃連堿-HP-β-CD包合物（將HP-β-CD加入到處方量80%的注射用水中，放于水浴上加熱至50℃，待其溶解；再將黃連堿緩慢加入到HP-β-CD水溶液中，HP-β-CD與黃連堿按摩爾比值為1:1，充分?jǐn)嚢瑁?，其溶出度最好?2)紫外分光光度法考察包合率：黃連堿包合率的測定采用紫外分光光度法，稱取包合物質(zhì)量的1/10和20mL水置于燒瓶中，分別于30、40、50、60℃下攪拌包合1h，抽濾，進(jìn)行紫外分光光度法檢測。包合率/%=包合物中黃連堿的含量/原料黃連堿的質(zhì)量×100%從表1的數(shù)據(jù)可以看出，在50℃下HP-β-CD對黃連堿的包合率最佳，可達(dá)到88%。表1編號包合溫度/℃包合時(shí)間/h包合物中黃連堿含量/mg包合率/%1301h25.0469.232401h28.9580.043501h32.0688.644601h21.0258.12相溶解度實(shí)驗(yàn)證實(shí)黃連堿與HP-β-CD的包合物能夠顯著增加黃連堿本身的溶解性，且隨著HP-β-CD濃度的增加，黃連堿溶解增加：稱取適量HP-β-CD按照0,2,4,6,8,10,12mmol/L配制不同濃度溶液，加入過量黃連堿于上述溶液中，置25℃恒溫水浴振蕩24h后使溶解達(dá)到平衡，經(jīng)0.45μm微孔濾膜濾過后，稀釋至一定濃度，在λmax350nm波長下測吸光度，計(jì)算黃連堿含量。以HP-β-CD濃度為橫坐標(biāo)，黃連堿為縱坐標(biāo)繪制相溶解度圖（如圖2所示）。由于黃連堿溶解度隨HP-β-CD濃度的增加而呈線性增加，線性回歸方程為y=1.0393x-0.1929，R2=0.9906，根據(jù)相溶解曲線的不同可以分為多種不同的包合類型，本發(fā)明中相溶解度曲線為典型的AL型，說明二者可形成1:1的包合物從而增加黃連堿溶解度。穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：取本發(fā)明中的黃連堿完全配方注射液（較優(yōu)選的實(shí)施例方案）適量于室溫自然放置，分別在第1天和第50天HPLC法檢測黃連堿含量的變化。運(yùn)用LunaC18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相為已腈-水（1:1,1000mL含磷酸二氫鉀3.4g，十二烷基硫酸鈉1.7g），流速1.0mL/min，檢測波長為350nm，柱溫為室溫。檢測結(jié)果如圖3A~3C所示，圖3A為黃連堿對照品的HPLC色譜圖，圖3B為黃連堿完全配方注射液于第一天的HPLC色譜圖，圖3C圖為黃連堿完全配方注射液于第50天的HPLC色譜圖，結(jié)果顯示本發(fā)明的黃連堿注射液性質(zhì)穩(wěn)定。本發(fā)明中還提供所述黃連堿注射液的應(yīng)用，將所述黃連堿注射液用作抗肺癌的藥物。該黃連堿注射液的應(yīng)用是實(shí)現(xiàn)本發(fā)明第二發(fā)明目的。以下通過具體實(shí)施例用于證明該黃連堿注射液能有效用于抗肺癌，具體包括以下幾個(gè)部分：①培養(yǎng)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞A549，用CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測不同濃度黃連堿對A549細(xì)胞存活情況的影響，流式細(xì)胞術(shù)檢測黃連堿對肺癌細(xì)胞凋亡情況的影響。②培養(yǎng)人肺癌細(xì)胞A549、PC9細(xì)胞，人正常胚肺細(xì)胞WI38以及正常肝細(xì)胞LO2細(xì)胞，用CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測不同濃度黃連堿對A549細(xì)胞存活情況的影響。③建立裸鼠移植瘤模型，通過腹腔注射給予黃連堿注射液，按照每只裸鼠50mg/kg/day的劑量給藥。6周后測量腫瘤體積。實(shí)施例1：黃連堿可抑制腫瘤細(xì)胞的生長1．細(xì)胞培養(yǎng)人肺癌A549細(xì)胞培養(yǎng)在DMEM＋10％胎牛血清（FBS）完全培養(yǎng)基中進(jìn)行。細(xì)胞培養(yǎng)在溫度37℃、5％濃度的CO2及飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中。2．實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果將A549腫瘤細(xì)胞系狀態(tài)穩(wěn)定后，將細(xì)胞鋪于96孔板中，每孔5000個(gè)細(xì)胞，每孔含完全培養(yǎng)基90μL。人肺癌A549細(xì)胞按以下方式分組并處理：（1）對照組：完全培養(yǎng)基溶液10μL處理；（2）黃連堿組：用DMSO溶解配制成不同的濃度，每孔中加10μL，使培養(yǎng)基的終濃度為100、50、25、12.5、0μM（μmol/L）的黃連堿溶液，處理不同時(shí)間（0、6、9、12、24h）后，每孔中加入10μLCellCountingKit-8（CCK-8）試劑繼續(xù)放于37℃孵箱培養(yǎng)2小時(shí)。振蕩器上溶解10分鐘后，用酶標(biāo)儀在A450處檢測吸光度值，細(xì)胞存活率根據(jù)以下公式計(jì)算：細(xì)胞存活百分率＝（處理組吸光度－空白孔吸光度）÷（對照組吸光度－空白孔吸光度）×100%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖4、5。圖4中，縱坐標(biāo)表示細(xì)胞存活率，即處理組相對于對照組的細(xì)胞存活率。圖4橫坐標(biāo)為不同濃度的黃連堿，圖5橫坐標(biāo)為黃連堿50μM處理作用不同時(shí)間。從圖4中可見，隨著黃連堿藥物濃度的增加，肺癌細(xì)胞的生存率降低；同時(shí)隨著作用時(shí)間的增加，肺癌細(xì)胞的生存率也降低(圖5)。表明黃連堿對肺癌A549細(xì)胞的作用成濃度和時(shí)間梯度依賴性。實(shí)施例2：黃連堿可通過促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡作用從而抑制腫瘤細(xì)胞存活1.細(xì)胞培養(yǎng)（見實(shí)施例1的步驟1）2．實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果將A549腫瘤細(xì)胞系狀態(tài)穩(wěn)定后，將細(xì)胞鋪于6孔板中，每孔100000個(gè)細(xì)胞，每孔含完全培養(yǎng)基2mL。按以下方式分組并處理：（1）對照組：完全培養(yǎng)基溶液10μL處理；（2）黃連堿組：用DMSO溶解配制成不同的濃度，每孔中加10μL，使培養(yǎng)基的終濃度為100、50、25、12.5、0μM（μmol/L）的黃連堿溶液，處理不同時(shí)間（0、6、9、12、24h）后，根據(jù)需要進(jìn)行不同操作：采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測不同濃度及不同作用時(shí)間后細(xì)胞的凋亡情況，收集細(xì)胞、PBS漂洗、加入AnnexinV-FITC及碘化丙啶避光孵育15min，流式細(xì)胞儀檢測；同時(shí)采用蛋白免疫印跡技術(shù)檢測不同濃度黃連堿作用后對細(xì)胞凋亡蛋白的影響，細(xì)胞刮收集細(xì)胞、裂解細(xì)胞、測蛋白濃度，將得到的已知蛋白濃度的樣品進(jìn)行電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉、一抗孵育、洗膜、二抗孵育、顯影、定影拍照。從圖6、圖7、圖8我們可以清楚的觀察到，隨著黃連堿作用濃度和作用時(shí)間的增加，細(xì)胞的凋亡數(shù)量增加，凋亡蛋白C-PARP、C-Caspase-3的表達(dá)量也顯著增加。這就從不同的手段進(jìn)一步驗(yàn)證黃連堿可隨濃度和時(shí)間依懶性增加凋亡蛋白的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，從而降低肺癌細(xì)胞A549的生存率。實(shí)施例3：黃連堿可選擇性抑制肺癌細(xì)胞的生長，對正常肝細(xì)胞及肺細(xì)胞作用小1.細(xì)胞培養(yǎng)見實(shí)施例1的步驟1，還包括肝正常細(xì)胞LO2及人胚肺細(xì)胞WI38的培養(yǎng)。2．實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果待A549腫瘤細(xì)胞、LO2人正常肝細(xì)胞、WI38人胚肺細(xì)胞系狀態(tài)穩(wěn)定后，將細(xì)胞鋪于6孔板中，每孔100000個(gè)細(xì)胞，每孔含完全培養(yǎng)基2mL。按以下方式分組并處理：（1）對照組：完全培養(yǎng)基溶液10μL處理；（2）黃連堿組：DMSO溶解，每孔中加10μL，使培養(yǎng)基的終濃度為100μM的黃連堿溶液，流式細(xì)胞處理技術(shù)檢測細(xì)胞的凋亡，結(jié)果見圖9。圖9結(jié)果可見，黃連堿能選擇性的促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡，對正常肝細(xì)胞及胚肺細(xì)胞的影響較小，提示我們黃連堿的毒副作用小。為證明這一驗(yàn)證結(jié)論是準(zhǔn)確而可靠的，驗(yàn)證時(shí)同時(shí)還對樣本進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)學(xué)的計(jì)算與分析。圖中“**”表示p＜0.01，“*”表示p≤0.05。其中“p”為統(tǒng)計(jì)學(xué)上可接受錯(cuò)誤的邊界符號，其值為p≤0.05。在計(jì)算出p＜0.01的情況下，即可認(rèn)定不同濃度組和不同時(shí)間組之間的差異出現(xiàn)錯(cuò)誤概率小，同時(shí)說明了這一驗(yàn)證結(jié)果是準(zhǔn)確而可靠的。為了更進(jìn)一步證明黃連堿對肺癌的作用，在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，通過裸鼠移植瘤模型實(shí)驗(yàn)證明黃連堿對肺癌的作用。實(shí)施例4：黃連堿可抑制裸鼠移植瘤模型腫瘤的生長在本實(shí)驗(yàn)過程中，通過向成功移植腫瘤的裸鼠腹腔注射我們本項(xiàng)目中第一項(xiàng)發(fā)明的黃連堿注射液，觀察黃連堿對腫瘤的抑制作用。劑量換算根據(jù)首先是根據(jù)中國醫(yī)科大學(xué)腫瘤研究所劉曉東等人《體外測試腫瘤化敏感性指標(biāo)的研究》換算出細(xì)胞與人臨床劑量的關(guān)系，得到100μM的體外黃連堿細(xì)胞作用濃度相當(dāng)于黃連堿人臨床劑量D=1.28mg/kg/day。其后根據(jù)美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）在《藥物臨床實(shí)驗(yàn)中健康成人受試對象安全給藥劑量的估算》（《EstimatingtheSafeStartingDoseinClinicalTrialsforTherapeuticsinAdultHealthyVolunteers》）中給出的，達(dá)到相同生物學(xué)效應(yīng)所需的人體與小鼠（即實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證中的裸鼠）的注射劑量換算比（1∶12.3）。再依此換算比，對照實(shí)施例2中所記載的劑量來換算出實(shí)驗(yàn)用裸鼠的用藥劑量，即D小鼠≈16mg/kg。1．裸鼠的選擇取6～8周齡無特異病原微生物（SPF）級裸鼠6只，體重范圍為20±2g，在晝夜交替、室溫（20～23）℃環(huán)境飼養(yǎng)，自由飲水、進(jìn)食。2．實(shí)驗(yàn)分組及給藥劑量（共2組）所有裸鼠隨機(jī)分為兩組后，每只右大腿外側(cè)接種1×107個(gè)用人肺癌A549細(xì)胞所制懸液0.2mL，待瘤體形成后開始按以下方式給藥。（1）對照組：與處理組體積相同的生理鹽水腹腔注射，1次/日；（2）黃連堿組：按裸鼠體重16mg/kg的劑量，腹腔注射黃連堿注射溶液，1次/日（配制1.6mg/ml黃連堿注射液，腹腔注射200μL/只/天）。3．測量與記錄（1）每7天后測量、記錄一次各組裸鼠的體重；（2）每7天后用游標(biāo)卡尺測量腫瘤的長度和寬度、記錄一次各組裸鼠腫瘤體部分的體積；腫瘤體積按照以下公式計(jì)算：腫瘤體積（mm3）＝腫瘤長度（mm）×腫瘤寬度的平方（mm2）/2體重記錄結(jié)果如圖10所示，縱坐標(biāo)表示各組裸鼠的平均體重；橫坐標(biāo)表示測量時(shí)間點(diǎn)；各種線條節(jié)點(diǎn)表示各處理組；各點(diǎn)的數(shù)值為各組平均體重。由圖10可見，黃連堿組裸鼠體重與對照組比較未見顯著差異。表明黃連堿對裸鼠的毒性小，不會(huì)影響裸鼠的正常生長，這與前面細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的結(jié)果一致。腫瘤體積記錄結(jié)果如圖11所示，縱坐標(biāo)表示各組裸鼠的腫瘤體積；橫坐標(biāo)表示測量時(shí)間點(diǎn)；各種線條節(jié)點(diǎn)表示各處理組；各點(diǎn)的數(shù)值為各組腫瘤體積的平均值。圖11中的“**”同樣表示p＜0.01，同樣可以認(rèn)定使用黃連堿組比對照組腫瘤體積減小出現(xiàn)錯(cuò)誤的可能性小，這一驗(yàn)證結(jié)果也是準(zhǔn)確而可靠。結(jié)果表明黃連堿可抑制腫瘤的生長。圖12為給藥5周后對裸鼠進(jìn)行安樂死并剝離腫瘤后的實(shí)物圖。該圖更為直觀地展示了黃連堿注射液對裸鼠移植瘤的顯著抑制情況，即黃連堿組與對照組相比，腫瘤體積均明顯減小。應(yīng)當(dāng)理解的是，本發(fā)明的應(yīng)用不限于上述的舉例，對本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說，可以根據(jù)上述說明加以改進(jìn)或變換，所有這些改進(jìn)和變換都應(yīng)屬于本發(fā)明所附權(quán)利要求的保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁1 2 3