本發(fā)明涉及中醫(yī)藥制備
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體而言，涉及一種雷公藤作藥引的藥酒及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎是一種以累及周圍關(guān)節(jié)為主的慢性、多系統(tǒng)性、炎癥性自身免疫病。其臨床表現(xiàn)主要為對稱性、持續(xù)性關(guān)節(jié)腫脹和疼痛，常伴有晨僵。病理表現(xiàn)為關(guān)節(jié)滑膜的慢性炎癥、血管翳形成，并出現(xiàn)關(guān)節(jié)和軟骨的破壞。全球有1％的人受此病困擾，導(dǎo)致嚴(yán)重功能障礙、永久性殘疾，且死亡率有上升趨勢。目前國際上治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的常用藥物有非甾體抗炎藥、改善病情抗風(fēng)濕藥、生物制劑、糖皮質(zhì)激素。以上藥物雖然療效明確，但其不良反應(yīng)較多，如胃腸道癥狀、肝腎功能損害以及可能增加的心血管和感染等不良事件。中醫(yī)藥治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎最為突出的單味中藥當(dāng)推雷公藤。雷公藤是衛(wèi)矛科植物雷公藤的根、葉及花，藥性苦、辛、寒，有大毒，主要功效為祛風(fēng)濕、活血通絡(luò)、消腫止痛。雷公藤及其相關(guān)制劑作為治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的有效藥物，在臨床上已經(jīng)被廣泛應(yīng)用。但雷公藤具有一定的毒性，有效治療量與最小中毒量比較接近。治療劑量范圍內(nèi)發(fā)生不良反應(yīng)較多，對消化、泌尿、生殖、心血管、骨髓及血液等系統(tǒng)均有明確的損害。近年來對于關(guān)于雷公藤及其制劑在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎治療的文獻(xiàn)報道中，主要是分別針對雷公藤的炮制減毒工藝、制劑劑型改良、復(fù)方中藥配伍、聯(lián)合西藥和針灸配合等方面展開，但未從根本上解決臨床用雷公藤治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的毒副作用。有鑒于此，特提出本發(fā)明。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的第一目的在于提供一種雷公藤作藥引的中藥制劑，以解決現(xiàn)有雷公藤在治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎毒副作用大的問題，所述的雷公藤作藥引的中藥制劑，具有有效率高、不良反應(yīng)率低、毒性弱等優(yōu)點。本發(fā)明的第二目的在于提供一種所述的雷公藤作藥引的中藥制劑的制備方法，該方法用陳皮和雷公藤的提取液溶化復(fù)方中藥制劑，然后加入飲用白酒，制成酒劑，具有方便、簡單、易于操作等優(yōu)點，適合批量生產(chǎn)和廣泛應(yīng)用。本發(fā)明的第三目的在于提供一種所述的雷公藤作藥引的中藥制劑在制備治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，尤其是中醫(yī)辨證為風(fēng)濕熱痹型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的藥物中的應(yīng)用為了實現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術(shù)方案：一種雷公藤作藥引的中藥制劑，按照重量份數(shù)計，包括由300～400份雷公藤和100～200份陳皮制成的藥引液和復(fù)方中藥制劑；所述復(fù)方中藥制劑，包括按照重量份數(shù)計的如下組份：知母70～90份，石膏20～40份，桂枝90～110份，甘草50～70份，青風(fēng)藤90～110份，連翹10～30份，黃柏10～30份，海桐皮90～110份，姜黃50～70份，威靈仙70～90份，地黃190～210份，防己50～70份，丹皮20～40份，赤芍20～40份，薏苡仁70～90份，梔子70～90份，滑石20～40份，玄參70～90份，麥冬50～70份，秦艽50～70份，蜈蚣10～20份，烏梢蛇3～6份，地龍10～30份，法半夏40～60份和桔梗30～40份。雷公藤，又叫黃藤、黃臘藤、菜蟲藥、紅藥、水莽草。味苦、辛，性涼，大毒。歸肝、腎經(jīng)。具有祛風(fēng)除濕、通絡(luò)止痛、消腫止痛、解毒殺蟲之功效。但是，雷公藤有大毒，會使患者產(chǎn)生腹部不適、惡心或者腹瀉等癥狀，因此對其在使用的過程中應(yīng)須謹(jǐn)慎。陳皮，味苦、辛，性溫。歸肺、脾經(jīng)。具有理氣健脾，燥濕化痰。與雷公藤同煮，可以有效降低雷公藤的毒性，并且將陳皮與雷公藤預(yù)先水提，有助于雷公藤中的有效成分析出，同時降低其毒性。知母，中藥名。是多年生草本植物，根狀莖。味苦，性寒。歸肺、胃、腎經(jīng)。具有清熱瀉火、滋陰潤燥的功效。其寒性針對熱病煩渴，肺熱燥咳，骨蒸潮熱，內(nèi)熱消渴，腸燥便秘有顯著療效。在本申請所提供的中藥制劑中有降熱的作用。石膏，味甘、辛，性大寒。同樣具有清熱瀉火，除煩止渴之功效。歸肺、胃經(jīng)。不僅可以對風(fēng)熱濕痹患者起到降熱的作用，其降胃熱的作用，還可以有效緩解雷公藤對腹部帶來的不適感，降低雷公藤的副作用。桂枝，樟科植物肉桂的干燥嫩枝。味辛、甘，性溫。歸肺、心、膀胱經(jīng)。具有發(fā)汗解表、散寒止痛、通陽化氣。甘草，味甘，性平。歸心、肺、脾、胃經(jīng)。具有補(bǔ)脾益氣，清熱解毒，的功效，此外還有調(diào)和諸藥，使各中藥藥效平衡的作用。另外，其清熱解毒的功效可以有效緩解雷公藤的毒性。青風(fēng)藤，味苦、辛，性平。歸肝、脾經(jīng)。具有祛風(fēng)濕，通經(jīng)絡(luò)，利小便功效。連翹，味苦，性平。入心、肝、膽經(jīng)。連翹與甘草搭配，可以有效降熱、利尿、排濕。黃柏，味苦，性寒。歸腎、膀胱經(jīng)。有清熱燥濕，瀉火除蒸，解毒療瘡的功效。黃柏苦寒沉降，清熱燥濕，瀉火解毒力強(qiáng)。海桐皮，味辛；苦；性平。歸肝；胃；腎經(jīng)。具有祛風(fēng)除濕、利水和中、活血解毒的功效，與雷公藤搭配，有效治療風(fēng)濕。姜黃，性味辛、苦，溫。歸脾、肝經(jīng)。具有破血行氣的功效。威靈仙，味辛、咸，性溫。歸膀胱經(jīng)。有祛風(fēng)濕、通經(jīng)活絡(luò)的作用。地黃，味甘，分為鮮地黃，干地黃和熟地黃。鮮地黃和干地黃均性寒，可以入藥。熟地黃，性微溫，適合風(fēng)寒痹癥者。防己，味辛、苦，性寒。歸膀胱、肺經(jīng)。具有祛風(fēng)止痛、利水消腫的功效。丹皮，丹皮，又名牡丹皮。為毛茛科植物牡丹干燥根皮。性寒，味苦；涼；微寒。歸心；肝；腎；肺經(jīng)。具有清熱涼血、活血散瘀的功效?？梢杂行е委燂L(fēng)濕熱痹。赤芍，為毛茛科植物赤芍或川赤芍的干燥根。味苦，性微寒。歸肝經(jīng)。清熱涼血，散瘀止痛。薏苡仁，別稱薏米。味甘、淡，性涼。歸脾、胃、肺經(jīng)。有利水滲透濕，健脾止瀉，除痹，排膿，解毒散結(jié)的作用。用于治療水腫、小便不利、脾虛泄瀉、濕痹拘攣、肺癰和腸癰。梔子，是茜草科植物梔子的果實。性味苦，寒。歸心、肺、三焦經(jīng)。具有清熱、瀉火、涼血的功效?；?，甘、淡，寒。歸膀胱、肺、胃經(jīng)。具有利尿通淋、清熱解暑、祛濕斂瘡的功效。玄參，味甘、苦、咸，性微寒，有清熱涼血，滋陰降火，解毒散結(jié)的功效。麥冬，味甘、微苦，性微寒，歸胃、肺、心經(jīng)，有養(yǎng)陰潤肺、益胃生津、清心除煩的功效，用于肺燥干咳、陰虛癆嗽、喉痹咽痛、津傷口渴、內(nèi)熱消渴、心煩失眠、腸燥便秘等癥。緩解腹部帶來的不適。蜈蚣，辛，溫。歸肝經(jīng)。具有息風(fēng)鎮(zhèn)痙，通絡(luò)止痛，攻毒散結(jié)的功效。烏梢蛇，味甘，性平。入肺、脾、肝經(jīng)。具有祛風(fēng)濕，通經(jīng)絡(luò)，止痙。地龍，具有利尿、鎮(zhèn)痛、平喘、降壓、解熱、抗驚厥等作用，還可以通經(jīng)活絡(luò)、活血化瘀、預(yù)防治療心腦血管疾病作用。法半夏，辛、溫。歸脾、胃、肺經(jīng)。法半夏是植物半夏的炮制加工品，法半夏別名制半夏、制法夏、制地文、制地八豆，法半夏有燥濕化痰的功效。桔梗，味苦、辛，性平。歸肺經(jīng)。具有開宣肺氣、祛痰排膿的功效。秦艽，味辛、苦，性平。歸胃、肝、膽經(jīng)。有祛風(fēng)濕，清濕熱，止痹痛，退虛熱的作用。本申請所提供的中藥制劑，采用雷公藤作為藥引，為了減弱雷公藤的毒性，采用陳皮與雷公藤進(jìn)行水提得到水提液，以降低毒性。在復(fù)合中藥制劑中，采用傳統(tǒng)治療風(fēng)濕病的中藥，如青風(fēng)藤、海桐皮、威靈仙、丹皮、蜈蚣和烏鞘蛇等，再輔以寒性藥物，祛熱除濕，在既定份數(shù)內(nèi)，對風(fēng)熱濕痹型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，療效顯著。另外，搭配健脾開胃的中藥，歸經(jīng)胃、肝、腎、肺，在多方面養(yǎng)胃、排熱、利尿，從而降低雷公藤作用過程中的毒性，達(dá)到全面治療風(fēng)濕病的功效。其中，黃柏、梔子、甘草在本申請所提供的搭配范圍內(nèi)，具有很好的排濕、排毒、去熱的功效。優(yōu)選的，所述的雷公藤作藥引的中藥制劑，按照重量份數(shù)計，包括320～380份雷公藤和150～200份陳皮制成的藥引液和復(fù)方中藥制劑；所述復(fù)方中藥制劑，包括按照重量份數(shù)計的如下組份：知母75～85份，石膏25～35份，桂枝95～105份，甘草55～65份，青風(fēng)藤95～105份，連翹15～25份，黃柏15～25份，海桐皮95～105份，姜黃55～65份，威靈仙75～85份，地黃195～205份，防己55～65份，丹皮25～35份，赤芍25～35份，薏苡仁75～85份，梔子75～85份，滑石25～35份，玄參75～85份，麥冬55～65份，秦艽55～65份，蜈蚣10～15份，烏梢蛇3～6份，地龍15～25份，法半夏45～55份和桔梗32～38份?？梢詫χ兴幹苿┑慕M份進(jìn)行優(yōu)選。優(yōu)選的，所述雷公藤為雷公藤的地下部分帶皮的根。地下部分的根，帶黃色根皮者，其皮含多種化學(xué)成分，作用力強(qiáng)，為治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎有效藥物。優(yōu)選的，所述藥引液的制備方法包括以下步驟：將雷公藤和陳皮加入雷公藤質(zhì)量10～12倍的水中浸泡，先用武火加熱至沸騰，再改為文火煎煮，得到相當(dāng)于所述雷公藤質(zhì)量2～4倍的藥引液。優(yōu)選的，所述武火的溫度大于180℃，所述文火的溫度為80～120℃。優(yōu)選的，所述浸泡的時間為2～3小時，所述文火煎煮的時間為2～3小時。對雷公藤和陳皮采用水提的方法進(jìn)行提取，作為藥引液，可以有效減弱雷公藤的毒性。優(yōu)選的，還包括飲用白酒，所述飲用白酒與所述藥引液的體積比為(0.8～1.0)：1。優(yōu)選的，所述飲用白酒的度數(shù)為40～50度。在中藥制劑中加入飲用白酒，制備成藥酒，可以對中藥中的有效成分進(jìn)行萃取，對中藥中的有效成分進(jìn)行更好的吸收。如上所述的雷公藤作藥引的中藥制劑的制備方法，包括以下步驟：將復(fù)方中藥制劑加入藥引液中，加熱使之溶化，降溫后，加入飲用白酒，混勻后得到該雷公藤作藥引的中藥酒劑；更優(yōu)選的，所述復(fù)方中藥制劑選用免煎中藥。如上所述的雷公藤作藥引的中藥制劑在制備治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中的應(yīng)用，尤其是中醫(yī)辨證為風(fēng)濕熱痹者的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的藥物中的應(yīng)用。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：(1)本申請所提供的雷公藤作藥引的中藥制劑，采用陳皮和雷公藤制備的提取液作為藥引，有效降低雷公藤的毒性，配合祛熱散濕的中藥，可以有效治療風(fēng)濕，并且中藥制劑中還含有健脾開胃、利尿的成分，與治療風(fēng)濕的中藥在份數(shù)上合理搭配，有效降低雷公藤的毒性和緩解對患者腹部造成的不適，起到增效減毒的作用。(2)本申請所提供的雷公藤作藥引的中藥制劑的制備方法，具有方便、簡單、易于操作等優(yōu)點，適合批量生產(chǎn)和廣泛應(yīng)用。具體實施方式下面將結(jié)合具體實施方式對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會理解，下列所描述的實施例是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例，僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限制本發(fā)明的范圍?；诒景l(fā)明中的實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。實施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。實施例1本實施例提供的雷公藤作藥引的中藥制劑，包括由300g雷公藤和100g陳皮制備的藥引液，和如下中藥組份：知母70g，石膏20g，桂枝90g，甘草50g，青風(fēng)藤90g，連翹10g，黃柏10g，海桐皮90g，姜黃50g，威靈仙70g，地黃190g，防己50g，丹皮20g，赤芍20g，薏苡仁70g，梔子70g，滑石20g，玄參70g，麥冬50g，秦艽50g，蜈蚣10g，烏梢蛇3g，地龍10g，法半夏40g和桔梗30g。其制備方法，包括以下步驟：(1)、將雷公藤和陳皮加入3000ml的水中浸泡2小時，先用武火加熱至沸騰，再改為文火煎煮2小時，得到800ml藥引液；(2)、將上述免煎的復(fù)方中藥制劑加入步驟(1)中的藥引液中，加熱使中藥融化，降至室溫后加入40度飲用白酒800ml，混勻后得到該雷公藤作藥引的中藥酒劑。實施例2本實施例提供的雷公藤作藥引的中藥制劑，包括由400g雷公藤和200g陳皮制備的藥引液，和如下中藥組份：知母90g，石膏40g，桂枝110g，甘草70g，青風(fēng)藤110g，連翹30g，黃柏30g，海桐皮110g，姜黃70g，威靈仙90g，地黃210g，防己70g，丹皮40g，赤芍40g，薏苡仁90g，梔子90g，滑石40g，玄參90g，麥冬70g，秦艽70g，蜈蚣20g，烏梢蛇6g，地龍30g，法半夏60g和桔梗40g。其制備方法，包括以下步驟：(1)、將雷公藤和陳皮加入4000ml的水中浸泡2小時，先用武火加熱至沸騰，再改為文火煎煮2小時，得到1200ml藥引液；(2)、將上述免煎的復(fù)方中藥制劑加入步驟(1)中的藥引液中，加熱使中藥融化，降至室溫后加入50度飲用白酒1000ml，混勻后得到該雷公藤作藥引的中藥酒劑。實施例3本實施例提供的雷公藤作藥引的中藥制劑，包括由320g雷公藤和150g陳皮制備的藥引液，和如下中藥組份：知母75g，石膏25g，桂枝95g，甘草55g，青風(fēng)藤95g，連翹15g，黃柏15g，海桐皮95g，姜黃55g，威靈仙75g，地黃195g，防己55g，丹皮25g，赤芍25g，薏苡仁75g，梔子75g，滑石25g，玄參75g，麥冬55g，秦艽55g，蜈蚣10g，烏梢蛇3g，地龍15g，法半夏45g和桔梗32g。其制備方法，包括以下步驟：(1)、將雷公藤和陳皮加入3500ml的水中浸泡3小時，先用武火加熱至沸騰，再改為文火煎煮3小時，得到1000ml藥引液；(2)、將上述免煎的復(fù)方中藥制劑加入步驟(1)中的藥引液中，加熱使中藥融化，降至室溫后加入50度飲用白酒800ml，混勻后得到該雷公藤作藥引的中藥酒劑。實施例4本實施例提供的雷公藤作藥引的中藥制劑，包括由380g雷公藤和200g陳皮制備的藥引液，和如下中藥組份：知母85g，石膏35g，桂枝105g，甘草65g，青風(fēng)藤105g，連翹25g，黃柏25g，海桐皮105g，姜黃65g，威靈仙85g，地黃205g，防己65g，丹皮35g，赤芍35g，薏苡仁85g，梔子85g，滑石35g，玄參85g，麥冬65g，秦艽65g，蜈蚣15g，烏梢蛇6g，地龍25g，法半夏55g和桔梗38g。其制備方法，包括以下步驟：(1)、將雷公藤和陳皮加入4000ml的水中浸泡3小時，先用武火加熱至沸騰，再改為文火煎煮2小時，得到1100ml藥引液；(2)、將上述免煎的復(fù)方中藥制劑加入步驟(1)中的藥引液中，加熱使中藥融化，降至室溫后加入50度飲用白酒1000ml，混勻后得到該雷公藤作藥引的中藥酒劑。實施例5本實施例提供的雷公藤作藥引的中藥制劑，包括由350g雷公藤和150g陳皮制備的藥引液，和如下中藥組份：知母80g，石膏30g，桂枝100g，甘草60g，青風(fēng)藤100g，連翹20g，黃柏20g，海桐皮100g，姜黃60g，威靈仙80g，地黃200g，防己60g，丹皮30g，赤芍30g，薏苡仁80g，梔子80g，滑石30g，玄參80g，麥冬60g，秦艽60g，蜈蚣12g，烏梢蛇4g，地龍20g，法半夏50g和桔梗35g。其制備方法，包括以下步驟：(1)、將雷公藤和陳皮加入4000ml的水中浸泡2～3小時，先用武火加熱至沸騰，再改為文火煎煮2～3小時，得到1000ml藥引液；(2)、將上述免煎的復(fù)方中藥制劑加入步驟(1)中的藥引液中，加熱使中藥融化，降至室溫后加入50度飲用白酒1000ml，混勻后得到該雷公藤作藥引的中藥酒劑。對比例1對比例1為實施例5步驟(1)中所提供的藥引液。對比例2對比例2與實施例5基本相同，只是在煎煮藥引液時，只加入350g雷公藤而不加入陳皮。對比例3對比例3與實施例5基本相同，只是復(fù)方中藥制劑中，去除開胃健脾的中藥：甘草、青風(fēng)藤、姜黃、薏苡仁、法半夏。對比例4對比例4與實施例5基本相同，只是復(fù)方中藥制劑中，去除祛熱除濕的中藥：知母、石膏、桂枝、黃柏、地黃、防己、丹皮、赤芍、梔子、滑石、玄參和麥冬。實驗例1雷公藤作藥引的中藥制劑對Ⅱ型膠原誘導(dǎo)大鼠類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的影響(一)實驗對象Wistar大白鼠，體重(180±20)g，湖北省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心，合格證號SCXK(鄂)200320005。(二)實驗藥物本申請所實施例1-5所提供的雷公藤作藥引的中藥制劑，以及對比例1-4所提供的中藥。(三)實驗方法大鼠CIA模型的建立，將酸性CⅡ溶解于0.1mol/L乙酸(含量2mg/mL)，實驗前將CⅡ溶解加至冷的不完全弗氏佐劑中(1mg/mL)，于每只大鼠左后足跖皮內(nèi)注射0.25mL致炎。取Wistar大鼠110只，雌雄各半，隨機(jī)分為11組，即正常對照組、模型對照組，實施例1-5給藥組和對比例1-4給藥組(劑量1mg/kg)。正常對照組注射等量生理鹽水作致炎物質(zhì)。致炎當(dāng)日ig給藥，qd，連續(xù)28d。分別于致炎前，致炎后第14、16、18、20、24、28天用毛細(xì)管放大測量法測右后足體積，以致炎前體積為基礎(chǔ)值，求出腫脹增長百分率[(給藥后值-給藥前值)/給藥前值]×100。大鼠致炎后第28天處死，無菌常規(guī)制備脾淋巴細(xì)胞懸液，臺盼藍(lán)染液進(jìn)行活細(xì)胞計算大于95，調(diào)整細(xì)胞濃度至終濃度為1×106/mL，用含體積分?jǐn)?shù)為10的RPMI-1640培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞，按每孔100μL接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，給予100μLConA(5μg/mL)或LPS(5μg/mL)分別刺激T、B淋巴細(xì)胞，另設(shè)不給予ConA和LPS刺激的自身空白對照孔，每個樣品每實驗點設(shè)3復(fù)孔。37℃、5CO2培養(yǎng)44h；每孔加入20μLMIT(5mg/mL)，繼續(xù)培養(yǎng)至48h，終止培養(yǎng)，吸棄培養(yǎng)液，每孔加入200μLDMSO終止反應(yīng)，振蕩搖勻。酶標(biāo)儀檢測(570/630nm)A值。大鼠處死后，迅速在右足踝關(guān)節(jié)上方0.5cm處摘取腫脹足爪?？v向切開，放入5mL冷生理鹽水中，于4℃浸泡過夜，離心取上清，過濾除菌，-20℃，保存待測NO、PGE2的含量。取足下跖部位的組織，用10％中性緩沖福爾馬林及時固定，石蠟包埋，切片，貼片(載玻片預(yù)先用多聚賴氨酸浸泡，撈片后60℃加熱60min，以使切片緊密貼附)，常規(guī)脫蠟至水，0.1mol/LPBS(pH＝7.4)浸泡5min。微波修復(fù)抗原，然后滴加封閉液，甩去多余液體。滴加50稀釋的NF-кβ/p65羊IgG單克隆抗體和MMP-9小鼠IgG單克隆抗體，陰性對照以PBS代替一抗，于4℃孵育過夜。0.1mol/LPBS洗滌3次，每次5分鐘。結(jié)果判斷：以胞漿出現(xiàn)淡黃色細(xì)顆粒狀著色為陽性細(xì)胞，光學(xué)顯微鏡下觀察，每組隨機(jī)計數(shù)500個細(xì)胞，計算陽性表達(dá)率，同時觀察染色強(qiáng)度，按染色強(qiáng)度著色淡黃為弱陽性(+)，棕黃為陽性(++)，棕褐色為強(qiáng)陽性(+++)，無著色為陰性(-)。實驗結(jié)果以x±s表示，用t-test進(jìn)行組間顯著性檢驗，數(shù)據(jù)分析采用spss10.0軟件。藥物對CⅡ誘導(dǎo)大鼠足腫脹的抑制作用實驗結(jié)果如表1所示。對CIA大鼠脾T、B淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的影響實驗結(jié)果如表2所示。對CIA大鼠脾細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α、IL-6含量的影響如表3所示。對CIA大鼠關(guān)節(jié)浸液內(nèi)NO、PGE2含量的影響如表4所示。對CIA大鼠組爪組織中NF-кβ/p65蛋白陽性表達(dá)率和MMP-9蛋白陽性表達(dá)率的影響如表5所示。表1對CⅡ誘導(dǎo)大鼠足腫脹的抑制作用(x±s,n＝10)與模型組比較:*P<0.05,**P<0.01；與正常組比較△△P<0.01(表2、3、4同)實驗結(jié)果表明，模型組大鼠于致炎后14d左右出現(xiàn)繼發(fā)足腫脹，致炎20d左右腫脹度達(dá)峰值。與模型組比較，本申請所供的雷公藤作藥引的中藥制劑表現(xiàn)出抑制足腫脹的作用，表明該中藥制劑能顯著抑制CIA大鼠的繼發(fā)病變。并且，實施例組的效果優(yōu)于對比例組。表2對CIA大鼠脾T、B淋巴細(xì)胞增殖活性的影響(x±s,n＝10)實驗結(jié)果表明，與正常組相比，模型組大鼠ConA、LPS誘導(dǎo)的脾T、B淋巴細(xì)胞增殖活性明顯升高(P<0.01)；與模型組比較本申請所供的雷公藤作藥引的中藥制劑抑制CIA大鼠ConA誘導(dǎo)的T淋巴細(xì)胞的增殖活性(P<0.01)，和對LPS誘導(dǎo)的B淋巴細(xì)胞增殖活性(P<0.01)。并且，實施例組的效果優(yōu)于對比例組。表3對CIA大鼠脾細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α、IL-6含量的影響組別劑量mg/kgIL-1β/pg/mLIL-6/pg/mLTNF-α/pg/mL正常組-69.34±11.08142.99±12.3162.14±21.73模型組-158.30±23.60△△245.90±18.24△△126.78±23.45△△實施例1179.35±17.25**168.16±11.25**96.23±11.89**實施例2177.19±12.35**166.16±13.78**92.33±18.21**實施例3175.32±22.36**161.16±11.25**88.45±16.25**實施例4173.96±13.79**157.39±19.35**83.33±7.36**實施例5169.37±22.22**155.38±7.36**80.45±7.36**對比例1196.12±18.60**219.26±24.24**110.39±11.56**對比例2189.30±23.36**192.74±22.43**109.78±22.43**對比例3187.50±13.60**180.44±16.25**107.78±19.23**對比例4185.44±24.11**178.32±11.25**102.39±15.19**模型組大鼠脾細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α、IL-6含量均比正常組顯著升高(P<0.01)，本申請所供的雷公藤作藥引的中藥制劑組和對比例組各項指標(biāo)較模型組均顯著下降(P<0.05,P<0.01)，提示該中藥制劑能顯著抑制CIA大鼠脾細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α、IL-6的水平。并且，實施例組的效果優(yōu)于對比例組。表4對CIA大鼠關(guān)節(jié)浸液內(nèi)NO、PGE2含量的影響組別劑量mg/kgNO/μmol/mLPGE2/pg/mL正常組-20.32±6.789.76±5.59模型組-46.65±9.86△△30.58±11.35△△實施例1129.18±9.16**16.20±6.65**實施例2128.37±8.68**15.48±7.21**實施例3127.12±8.39**14.07±6.84**實施例4125.84±7.86**13.42±6.49**實施例5124.16±7.48**12.66±7.04**對比例1135.44±2.35**19.28±3.79**對比例2133.22±3.98**18.96±2.25**對比例3131.33±2.56**16.24±3.63**對比例4130.18±9.16**18.12±5.35**模型組大鼠關(guān)節(jié)浸液中NO、PGE2含量與正常組相比明顯增高(P<0.01)，本申請所供的雷公藤作藥引的中藥制劑組關(guān)節(jié)浸液內(nèi)NO、PGE2含量顯著低于模型組(P<0.01)。表明該中藥制劑顯著抑制CIA大鼠關(guān)節(jié)浸液內(nèi)NO、PGE2的水平。并且，實施例組的效果優(yōu)于對比例組。表5對CIA大鼠組爪組織中NF-кβ/p65蛋白陽性表達(dá)率和MMP-9蛋白陽性表達(dá)率的影響實驗結(jié)果表明，本申請所供的雷公藤作藥引的中藥制劑組可以明顯降低NF-кβ/p65蛋白和MMP-9蛋白陽性表達(dá)率(P<0.01)。表明該中藥制劑顯著降低兩種蛋白的陽性表達(dá)率。并且，實施例組的效果優(yōu)于對比例組。綜上，本申請所提供的雷公藤作藥引的中藥制劑，能對關(guān)節(jié)炎有顯著療效。通過對比例和實驗例組的對比，對比例1為不添加任何中藥的單純的雷公藤提取液，毒性大，效果差。而對比例2可以證明，陳皮的添加可以有效抑制雷公藤的毒性，提高藥效。對比例3和對比例4分別證明了，所添加的健脾開胃和祛熱除濕的中藥均對藥效有促進(jìn)作用，并且添加的健脾開胃的中藥可以有效抑制雷公藤的毒性。實驗例2雷公藤作藥引的中藥制劑不良反應(yīng)測試(一)實驗動物SPF級KM小鼠，雌雄各半，體重18～22g，適齡，健康。購自山東大學(xué)實驗動物中心，動物許可證號：SCXK(魯)20090001。實驗動物配合飼料(鼠)，生產(chǎn)許可證號：SCXK(魯)20090014。(二)實驗方法取小鼠90只，雌雄各半，禁食不禁水12h，以濃度為1mg/kg將實施例1-5所提供的雷公藤作藥引的中藥制劑和對比例1-4所提供的中藥進(jìn)行連續(xù)灌胃3次，每八小時一次。每次都要觀察記錄藥后15min，30min，1h，2h，4h，8h的毒性反應(yīng)和死亡情況。實驗結(jié)果如表6所示。表6不良反應(yīng)記錄結(jié)果實驗結(jié)果表明，采用對比例1所提供的藥物喂藥后，小鼠死亡率高，首先發(fā)生時的時間幾種在藥后24-72h間，而對比例2-4比對比例1的死亡率有所降低，但是缺少恰當(dāng)?shù)闹兴幣浔?，影響了對雷公藤水提液的毒性緩釋作用，造成小鼠不良反?yīng)率和死亡率高。實驗例3雷公藤作藥引的中藥制劑對雄性小鼠生殖細(xì)胞毒性研究(一)實驗動物及染毒健康昆明種雄性小鼠66只，體重30～35g，隨機(jī)分為11組，將本申請實施例1-5所提供的雷公藤作藥引的中藥制劑以及對比例所提供的中藥制劑(劑量1mg/kg)。陰性對照組，灌服1mg/kg的生理鹽水，每日灌服，持續(xù)三周，每周按體重調(diào)整一次劑量。停藥后24h處死。陽性對照組，腹腔注射環(huán)磷酰胺100mg/kg，注射2d，第3d處死。(二)實驗方法(1)骨髓微核實驗頸椎脫臼法處死小鼠，迅速取后肢股骨，小牛血清清洗骨髓腔，推片。甲醇固定15min，Giensa染色10～15min，風(fēng)干。油鏡下每只小鼠計數(shù)1000個嗜多染紅細(xì)胞中含微核的嗜多染紅細(xì)胞，計算微核千分率。(2)精子畸形實驗觀察每只動物的300個精子，記錄畸變發(fā)生率。實驗結(jié)果如表7所示。表7骨髓微核實驗和精子畸形實驗結(jié)果實驗結(jié)果表明，微核率可以反應(yīng)致畸因素對細(xì)胞損傷程度和染色體的穩(wěn)定性。采用本申請實施例和對比例所提供的中藥制劑，對細(xì)胞有不同程度的誘變效應(yīng)。采用對比例1所提供的藥物喂藥后，小鼠細(xì)胞微核率高，而對比例2-4比對比例1的微核率有所降低，但是缺少恰當(dāng)?shù)闹兴幣浔龋绊懥藢坠偎嵋旱亩拘跃忈屪饔?，造成小鼠?xì)胞微核率和精子畸形率高。其中，對比例1為不添加任何中藥的單純的雷公藤提取液，毒性大，效果差。而對比例2可以證明，陳皮的添加可以有效抑制雷公藤的毒性，提高藥效。對比例3和對比例4分別證明了，所添加的健脾開胃和祛熱除濕的中藥均對藥效有促進(jìn)作用，并且添加的健脾開胃的中藥可以有效抑制雷公藤的毒性。盡管已用具體實施例來說明和描述了本發(fā)明，然而應(yīng)意識到，以上各實施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案，而非對其限制；本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解：在不背離本發(fā)明的精神和范圍的情況下，可以對前述各實施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對其中部分或者全部技術(shù)特征進(jìn)行等同替換；而這些修改或者替換，并不使相應(yīng)技術(shù)方案的本質(zhì)脫離本發(fā)明各實施例技術(shù)方案的范圍；因此，這意味著在所附權(quán)利要求中包括屬于本發(fā)明范圍內(nèi)的所有這些替換和修改。當(dāng)前第1頁1 2 3