本發(fā)明提供了一種用于皮膚填充的組合物及其制備方法，具體來說，涉及一種改進的聚乳酸微球植入劑的組合物及其制劑和制備方法，屬于生物醫(yī)藥
技術(shù)領域：
。
背景技術(shù)：
：聚乳酸(polylactide，PLA)及其共聚物是一類高分子聚合材料，具有良好的生物相容性和生物可降解性，所有產(chǎn)物均無毒無害，不會造成重要器官聚集。已被美國食品藥品管理局(FDA)批準認可PLA制劑的美容用途，用于改善法令紋(笑紋)等皺紋，多數(shù)為凍干粉針劑，使用時用無菌注射用水復溶成混懸液。一方面，因其為注射劑，臨床上使用產(chǎn)生的不良反應是導致患者停止治療的主要原因，因此降低注射后不良反應成為聚乳酸藥物美容治療中亟待優(yōu)化的問題。另一方面，聚乳酸微球制劑的成球穩(wěn)定性一直是工業(yè)生產(chǎn)的難點，如何在工業(yè)生產(chǎn)中穩(wěn)定保持微球的高度圓整是微球制劑亟待解決的另一重要課題。市售品是賽諾菲(Sanofi)公司生產(chǎn)銷售的一種左旋聚乳酸微粒填充制劑，起初被批準用于治療HIV病人的面部脂肪缺失，后被FDA批準用于美容產(chǎn)業(yè)。該品種已通過臨床96周數(shù)據(jù)證明了聚乳酸填充制劑的安全有效性，但因其為微粒制劑(參見圖2)，仍存在圓整度差的缺陷，具體不足如下：1)堵針可能性高：注射本品時需使用26G針頭一次性注射器緩慢注射，堵針會導致皮下注射不均勻，進而造成血腫、水腫或注射后鼓包等不良反應。據(jù)市售品臨床數(shù)據(jù)顯示，最多臨床不良反應為血腫(28％)；2)非長效：因其為微粒制劑，顆粒形狀不規(guī)則，表面暴露端羧基多，降解較快；3)復溶慢：在復溶時，各顆粒水分散性程度不一，同等時間內(nèi)混懸不均勻，有大量顆粒粘壁，需較長的混懸時間才可保證其完全混懸均勻，而較長的混懸時間將大大提高制劑染菌可能性。專利申請CN101041088A提供了一種注射型聚酯類微載體與纖維蛋白凝膠復合支架的制備方法，主要用于軟骨損傷修復，但該發(fā)明并未對聚酯類微載體的粒徑及圓整度進行研究；專利申請CN103408784A和專利申請CN105749359A提供了一種多孔微球的制備方法，其主要用于緩釋微球載藥技術(shù)，多孔微球降解快，不適用于長效注射填充劑；專利申請CN104258470A介紹了一種注射用聚乳酸微球和交聯(lián)透明質(zhì)酸混合凝膠及其制備方法，該專利產(chǎn)品中，聚乳酸微球保存在含水凝膠環(huán)境中，因聚乳酸微球在水環(huán)境下穩(wěn)定性差，可能發(fā)生微球黏連等問題，該混合凝膠存在穩(wěn)定性差、有效期短等缺點。針對現(xiàn)有技術(shù)中的聚乳酸制劑存在的缺陷，有必要設計開發(fā)一種能夠克服上述不良反應的聚乳酸微球制劑，適用于注射植入劑面部填充，高度圓整，無需載藥，且特定粒徑分布均勻，具有更好的臨床效果。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種用于皮膚填充的左旋聚乳酸組合物，高度圓整，無需載藥，適用于注射植入劑式面部填充。本發(fā)明的另一個目的在于提供一種用于皮膚填充的左旋聚乳酸制劑，無需載藥，球狀，適用于注射植入劑式面部填充。本發(fā)明的另一個目的在于提供一種制備上述制劑的制備方法。為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所涉及的一種用于皮膚填充的組合物，由左旋聚乳酸、卵磷脂、助懸劑、賦形劑組成，按重量百分比左旋聚乳酸20～50份，卵磷脂3～5份，助懸劑10～30份，賦形劑20～50份，其中，卵磷脂作為表面活性劑促進了球形膠束的形成，大大提高了成球穩(wěn)定性，縮短固化時間，進而提高微球圓整度，降低成本。本發(fā)明中所述組合物，所述左旋聚乳酸相對分子量為10～15W，官能團為醛基，其特性粘度為0.7～1.5dL/g。本發(fā)明中所述組合物，所述賦形劑為乳糖、蔗糖和甘露醇中的一種或多種。本發(fā)明中所述組合物，所述助懸劑為羧甲基纖維素鈉或海藻酸鈉中的一種或多種。本發(fā)明中所述的一種左旋聚乳酸制劑，是平均粒徑為20～75微米的微球狀體，且表面平滑圓整，含有上述的左旋聚乳酸組合物。所述左旋聚乳酸制劑最好為凍干粉針制劑。所述左旋聚乳酸制劑，使用前，用注射用水復溶，復溶時間為30～50s。本發(fā)明所述左旋聚乳酸制劑的制備方法包括以下步驟：1)將20～50份左旋聚乳酸和3～5份卵磷脂溶于有機溶劑作為油相O，2％(w/v)聚乙烯醇溶液和適量有機溶劑的水溶液作為水相W，其中水相W的粘度范圍為15.3～20.7mPa·s(水)，將這兩相以一定比例混合，用一定轉(zhuǎn)速均質(zhì)體系形成O/W乳液；2)將步驟1)所得O/W乳液通過室溫攪拌揮發(fā)去除有機溶劑，再將所得微球離心、洗滌；3)將步驟2)所得的微球懸浮于含有20～50份凍干賦形劑和10～30份助懸劑的水溶液中，所述水溶液的粘度范圍為270～320mPa·s(水)，經(jīng)過冷凍干燥，得到聚乳酸微球制劑。本發(fā)明中，所述的制備方法，步驟1)均質(zhì)過程中均質(zhì)時間為100～300s，均質(zhì)轉(zhuǎn)速為2000～4000rpm，水相W與油相O比例為W:O＝3:1～10:1。本發(fā)明中，所述的制備方法，步驟1)中水相和油相中均含有有機溶劑，其有機溶劑為二氯甲烷、乙酸乙酯或四氫呋喃中的一種或多種。本發(fā)明所述的左旋聚乳酸制劑具有如下有益效果：1)圓整度高：本發(fā)明所述組合物中加入卵磷脂，其具有親水端和疏水端，在O/W乳液中能快速形成球形膠束，結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，在聚乳酸固化前，可避免均質(zhì)攪拌等物理性操作對其球形產(chǎn)生形變影響，也可一定程度縮短固化時間，進而降低成本。另一方面，卵磷脂為細胞膜的重要組成部分，可被人體吸收，無毒無害。該發(fā)明很好的解決了因圓整度引起的堵針及注射后鼓包等不良反應。且本品注射時使用28G針頭，相比市售品使用的26G針頭，又大大降低了注射的不適感及不良反應發(fā)生概率。2)藥效長：市售品為微粒制劑(詳見圖2)，外端暴露端羧基多，水解性能好，而本發(fā)明為微球制劑，表明致密，同等粒徑條件下，降解慢于微粒制劑(市售品)，可達到長效勻速釋放，維持2～3年的藥效。3)染菌風險低：本發(fā)明為微球制劑，表面光滑致密，水分散性好，復溶時只需30～50s即可混懸均勻，大大降低了因放置時間過長而引起的染菌風險。下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步描述，但本發(fā)明不限制于實施例中，凡依照本發(fā)明公開內(nèi)容所做的本領域等同替換，均屬于本發(fā)明的保護范圍。附圖說明圖1為實施例4制備的聚乳酸微球的電鏡圖；圖2為國外市售品產(chǎn)品電鏡圖；圖3為市售品和本發(fā)明產(chǎn)品的粒徑對比圖；實施例及對照例制備方法步驟1)依照表1和表2各處方量及工藝參數(shù)將相對分子量10～15W特性粘度為0.7～1.5dL/g的聚乳酸和卵磷脂溶于有機溶劑作為油相O，2％(w/v)聚乙烯醇和有機溶劑的水溶液作為水相W，其中水相W的粘度范圍為15.3～20.7mPa·s(水)，將這兩相以一定比例混合，用一定轉(zhuǎn)速均質(zhì)一定時間形成O/W乳液；步驟2)將步驟1)所得O/W乳液通過室溫攪拌揮發(fā)去除有機溶劑，再將所得微球離心、洗滌；步驟3)將步驟2)所得的微球懸浮于含有凍干賦形劑和助懸劑的水溶液中，其中助懸劑粘度范圍為270～320mPa·s(水)，經(jīng)過冷凍干燥后，得到聚乳酸微球制劑。處方表1各實施例及對照例1處方工藝對比表依照實施例4的處方按以下工藝制備其余對照例：表2各對照例處方工藝對比表工藝參數(shù)對照例2對照例3對照例4對照例5對照例6對照例7水相W：油相O1:115:13:13:13:13:1均質(zhì)速率/rpm400040004000400010005000均質(zhì)時間/s20020050400200200以下通過實驗數(shù)據(jù)進一步說明本發(fā)明積極效果：1、產(chǎn)率測試方法：以聚乳酸原料m0為基準，按上述實施例的處方及制備方法制備微球制劑，測得制劑內(nèi)的聚乳酸重量m，按下列公式計算產(chǎn)率W：W＝m÷m0x100％。各實施例與對照例結(jié)果見表3～42、通針性能測試原理：相同時間內(nèi)通過同一針頭混懸液的量越多，通針性能越好。方法：取上述實施例及對照例，加入相同量注射用水經(jīng)相同時間相同方法復溶成混懸液，用同一注射器及同一針頭，用同等的恒定壓力在相同時間內(nèi)推注射器，后記錄出液體積。計算實施例體積與對照例體積的比值，用此比值來衡量其通針性能，比值越大，其通針性能越好。測試結(jié)果見表3～43、復溶時間測試方法：用一次性注射器吸取5ml注射用水，分別推入上述實施例與對照例中，置于搖床上，室溫下以100轉(zhuǎn)/分的速率進行復溶，待無明顯可見顆粒，且分散均勻后，記錄時間，此時間即為復溶時間。測試結(jié)果見表3～44、粒徑范圍測試方法：將上述實施例與對照例加入注射用水制備成混懸液，采用馬爾文MS3000激光粒度測定儀在同一測試條件下，同一遮光度范圍內(nèi)進行測定。從測試結(jié)果計算出在35～60微米間的比率，用此比率反映其特定粒徑收率，比率越高，收率越高。測試結(jié)果見表3～4和圖3表3實施例1～4的結(jié)果對比表4對照例1～7的結(jié)果對比結(jié)論根據(jù)表3～4所示結(jié)果，可得出以下結(jié)論：1)產(chǎn)率：由表3～4可知，各組分比例在本發(fā)明保護范圍內(nèi)時，產(chǎn)率均可達到85％以上，若不添加卵磷脂(對照例1)或改變工藝參數(shù)(對照例2～7)均會對成球性等造成影響，進而影響產(chǎn)率；2)通針性能：由表3實施例1～4與市售品對比可知，實施例的通針性能遠遠優(yōu)于微粒制劑(市售品)，進一步證明微球制劑的優(yōu)勢，微球表面光滑致密，在流動性和水溶性方面，都比顆粒制劑有很大的優(yōu)勢。由表3～4可知，對照例在改變處方或工藝參數(shù)的情況下，雖對產(chǎn)率、粒徑等都有影響，但其仍為微球制劑，在通針性方面仍然優(yōu)于顆粒制劑(市售品)，其中對照例1不加卵磷脂可明顯看出成球性能有所下降，通針性能隨之下降；3)復溶時間：由表3可知，市售品為微粒制劑，形狀不規(guī)則，水分散性不均一，復溶時間長，微球制劑水分散性好，其復溶時間更快；4)粒徑分布：a)隨著水相和油相比例的不同，粒徑大小有些許不同，當油相比例增大后，乳液的粘度大，均質(zhì)后，乳液越難被破碎，乳液粒徑較大；當水相比例過大時，表面活性劑增多，需要更大的液滴表面積使其吸附，微球粒徑較??；b)由表3～4可知，隨著均質(zhì)轉(zhuǎn)速的不斷增高，乳液受到的剪切力越大，越容易形成粒徑較小的顆粒，均質(zhì)時間越長，乳液更易被破碎成更小的液滴，形成的微球粒徑也越小；c)通過大量實驗證明，在特定粒徑范圍35～60微米之間的比例達到30％～50％時，此微球制劑有更好的臨床效果，由表3～4可知，粒徑由各組分比例和工藝參數(shù)共同影響，在本發(fā)明得出的最優(yōu)范圍內(nèi)，均可達到特定粒徑范圍內(nèi)的特定比例，具有臨床優(yōu)勢。5、體外降解測試方法本測試依據(jù)編號為YY/T0474-2004的行業(yè)標準進行測試。1)緩沖液的配制：所用緩沖液為磷酸鹽緩沖液，用無菌二次蒸餾水配置的磷酸二氫鉀和磷酸氫二鈉，用于制備該緩沖液的鹽應是分析純的且干燥至恒量a)1/15mol/L磷酸二氫鉀：每升水中溶解9.078g磷酸二氫鉀；b)1/15mol/L磷酸氫二鈉：每升水中溶解11.876g二水磷酸氫二鈉該緩沖液由18.2％溶液a)和81.8％溶液b)(體積分數(shù))混合而成。應每周測量不同容器中的pH值，需要時用0.1mol/L的NaOH溶液進行pH調(diào)節(jié)，使該緩沖液的pH值保持為7.4±0.2；2)樣品制備：取上述實施例4和市售品各6支(500mg/支)分別置于燒杯中，倒入注射用水復溶后超聲5min使其充分溶解，離心過濾，再對濾物進行真空干燥，稱取初始重量m0，分別置于密封玻璃錐形瓶中，用10ml緩沖液完全覆蓋樣品，其中緩沖液的體積(ml)與試驗樣品質(zhì)量(g)之比大于30:1，實際時間降解(各3支)用恒溫水浴維持樣品在(37±1)℃的生理溫度，加速降解(各3支)用恒溫水浴維持樣品在(70±1)℃的生理溫度。3)分離微球和溶液：真空抽濾使聚乳酸微球與降解溶液分離，并用分析水洗滌三次，收集濾渣備特性粘度、質(zhì)量損失及粒徑檢測使用，收集濾液備乳酸含量檢測使用。4)降解產(chǎn)物測量：使用離子色譜儀檢測步驟3)濾液中乳酸陰離子的含量(測三瓶濾液)，色譜柱為美國戴安公司AG22柱，淋洗液為NaHCO3溶液(6.0mmol/L)，流速為1ml/min，進樣體積為10μL，柱溫30℃，池溫35℃，電導檢測器檢測，測量初始乳酸陰離子含量a0，然后在固定時間測量乳酸陰離子含量a，根據(jù)下列公式計算降解百分比W：W＝(a/a0-1)x100％5)特性粘度測定：將步驟3)中分離得到的濾渣置于40℃真空干燥至恒重，后溶于氯仿，配制成濃度為0.1％的供試品，按GB/T1632(ISO1628-1)用微量烏氏粘度計測定其特性粘度(測三瓶濾渣)。測試結(jié)果見表5～8。表5體外實際時間降解百分比數(shù)據(jù)對比表表6體外加速降解百分比數(shù)據(jù)對比表表7實際時間降解前后理化性質(zhì)對比表表8加速降解前后理化性質(zhì)對比表因聚乳酸的降解是一個復雜的過程，高聚物先分解為單鏈，再分解為乳酸單體，故本發(fā)明用乳酸陰離子的數(shù)量來一定程度反映出聚乳酸的降解速率。由表5～6可看出，無論是加速降解還是實際時間降解，市售品顆粒的降解速率明顯快于本發(fā)明微球；由表7～8可看出，隨時聚乳酸的不斷降解，干燥質(zhì)量降低，分子量降低，隨之特性粘度和粒徑降低。因聚乳酸的降解主要可分為高聚物的吸水、酯鍵的水解斷裂、可溶性低聚物的擴散溶解三個過程，在吸水過程中，由于水的擴散比酯鍵的水解要快的多，因此，酯鍵的水解在開始階段是均勻的，隨著降解的繼續(xù)，端羧基的自催化作用愈發(fā)明顯，會進一步加大降解速率。此數(shù)據(jù)雖為體外測量，但可側(cè)面反映其材料效果，進而證明實心致密微球相比顆粒在藥效時間長上面的優(yōu)越性。當前第1頁1 2 3