本發(fā)明涉及一種生物支架制備技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種具有藥物釋放功能的3D打印生物支架及其制備方法。

背景技術(shù)：

植入性的醫(yī)用生物支架具有結(jié)構(gòu)仿生、組織塑性等優(yōu)點(diǎn)，基于3D打印技術(shù)的生物支架在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。目前植入性的生物支架主要起結(jié)構(gòu)仿生作用。植入性的支架不僅僅需要具有結(jié)構(gòu)重建的作用，還需要優(yōu)良的生物相容性，從而提高支架和組織的界面結(jié)合力。

目前，這些生物支架的材料主要是金屬、高分子等。而3D打印主要集中在結(jié)構(gòu)的設(shè)計(jì)，從而滿(mǎn)足3D結(jié)構(gòu)具有的特殊功能，然而對(duì)于體內(nèi)植入修復(fù)組織類(lèi)的3D支架，除了結(jié)構(gòu)要滿(mǎn)足需求，還需要促進(jìn)組織重建和再生功能。而現(xiàn)有的3D打印支架只是結(jié)構(gòu)的滿(mǎn)足，很難滿(mǎn)足促進(jìn)再生的生物功能需求。藥物具有治療疾病和促進(jìn)再生功能，但是基于3D打印技術(shù)的生物支架，由于其制備過(guò)程的影響，很難實(shí)現(xiàn)支架內(nèi)的藥物控釋?zhuān)貏e是活性大分子、活性因子等藥物的釋放?，F(xiàn)有技術(shù)主要通過(guò)支架表面涂覆藥物實(shí)現(xiàn)支架的藥物釋放功能，但很難實(shí)現(xiàn)在支架內(nèi)部裝載藥物，且難于實(shí)現(xiàn)藥物緩釋?zhuān)y于實(shí)現(xiàn)蛋白類(lèi)、水溶性類(lèi)等藥物的裝載，特別是蛋白類(lèi)藥物的活性維持，難于實(shí)現(xiàn)多種藥物聯(lián)合作用。

脂質(zhì)體是一種裝載藥物的載藥雙分子層，人們可以將水溶性、脂溶性大分子，蛋白，活性因子等裝載到脂質(zhì)體內(nèi)。此外，通過(guò)在脂質(zhì)體雙分子層進(jìn)行基團(tuán)修復(fù)，可以實(shí)現(xiàn)脂質(zhì)體表面帶上特殊的基團(tuán)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的目的是提供一種具有藥物釋放功能的3D打印生物支架及其制備方法，通過(guò)對(duì)3D技術(shù)打印的生物支架表面進(jìn)行化學(xué)修飾，并在脂質(zhì)體雙分子層表面接枝上特殊的基團(tuán)，然后將二者表面的基團(tuán)交聯(lián)，從而可以將負(fù)載藥物的納米脂質(zhì)體結(jié)合到3D打印支架表面，制備出具有藥物釋放功能的3D打印生物支架。

本發(fā)明的一種具有藥物釋放功能的3D打印生物支架的制備方法，包括以下步驟：

(1)提供表面修飾有活性基團(tuán)的3D打印生物支架；

(2)提供表面修飾有活性基團(tuán)的載藥脂質(zhì)體溶液；

(3)在4-40℃下，將步驟(1)的3D打印生物支架浸入步驟(2)得到的載藥脂質(zhì)體溶液中，使二者表面修飾的活性基團(tuán)發(fā)生反應(yīng)，得到具有藥物釋放功能的3D打印生物支架。

進(jìn)一步地，在步驟(1)中，活性基團(tuán)為巰基、羧基、氨基、鄰苯二酚基團(tuán)和鄰苯二醌基團(tuán)中的一種或幾種。

進(jìn)一步地，在步驟(1)中，采用3D打印技術(shù)得到生物支架。

進(jìn)一步地，在步驟(1)中，生物支架的材質(zhì)為左旋聚乳酸(PLLA)、聚谷氨酸(PGA)、聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)或聚己內(nèi)酯(PCL)。

進(jìn)一步地，在步驟(2)中，活性基團(tuán)為巰基、羧基、氨基、馬來(lái)酰亞胺基團(tuán)中的一種或幾種。

進(jìn)一步地，在步驟(2)中，載藥脂質(zhì)體中負(fù)載的藥物為脂溶性藥物或水溶性藥物。

進(jìn)一步地，水溶性藥物為水溶性小分子、水溶性大分子、蛋白類(lèi)、細(xì)胞因子類(lèi)和抗體中的一種或幾種。

進(jìn)一步地，在步驟(2)中，負(fù)載的藥物為紫杉醇、阿霉素、布洛芬、吉西他濱、青霉素鈉、順鉑、凝血酶、胰島素、輔酶Q10、BMP-2和抗體中的一種或幾種。

進(jìn)一步地，在步驟(2)中，載藥脂質(zhì)體溶液的制備方法包括以下步驟：

將磷脂類(lèi)、膽固醇類(lèi)和磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇衍生物與藥物在有機(jī)溶劑中混勻，然后除掉有機(jī)溶劑，再用磷酸鹽緩沖溶液(PBS)進(jìn)行水化，處理后得到載藥脂質(zhì)體溶液。

進(jìn)一步地，當(dāng)所載藥物為脂溶性藥物時(shí)，將磷脂類(lèi)、膽固醇類(lèi)和磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇衍生物與脂溶性藥物溶于有機(jī)溶劑，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除盡有機(jī)溶劑，真空干燥過(guò)夜，后用磷酸鹽緩沖溶液進(jìn)行水化，處理后得到載藥脂質(zhì)體溶液。

進(jìn)一步地，當(dāng)所載藥物為水溶性小分子藥物時(shí)，將磷脂類(lèi)、膽固醇類(lèi)和磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇衍生物溶于有機(jī)溶劑，再向其中加入藥物水溶液，超聲1-10min得到均勻乳液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)形成膠狀物，后用磷酸鹽緩沖溶液進(jìn)行再水化，處理后得到載藥脂質(zhì)體溶液。

進(jìn)一步地，當(dāng)所載藥物為水溶性大分子、蛋白類(lèi)、細(xì)胞因子或抗體時(shí)，將磷脂類(lèi)、膽固醇類(lèi)和磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇衍生物溶于有機(jī)溶劑，得到混合溶液，然后將藥物溶于磷酸鹽緩沖溶液中，邊攪拌邊將混合溶液緩慢加入其中，除掉有機(jī)溶劑后得到載藥脂質(zhì)體溶液。

進(jìn)一步地，磷脂類(lèi)為二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、二硬脂?；蚜字?DSPC)、二油酰基卵磷脂(DOPC)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(DSPE)、大豆磷脂或蛋黃卵磷脂；膽固醇類(lèi)為膽固醇或硫酸膽固醇。

進(jìn)一步地，有機(jī)溶劑為氯仿、乙醇或乙醚。

進(jìn)一步地，磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇衍生物的分子式如下：

其中，R₁為羧基、氨基、馬來(lái)酰亞胺基或巰基。當(dāng)R₁為羧基時(shí)，以下簡(jiǎn)稱(chēng)為DSPE-PEG-COOH(磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-羧基)。當(dāng)R₁為氨基時(shí)，以下簡(jiǎn)稱(chēng)為DSPE-PEG-NH₂(磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基)。當(dāng)R₁為馬來(lái)酰亞胺基時(shí)，以下簡(jiǎn)稱(chēng)為DSPE-PEG-MAL(磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-馬來(lái)酰亞胺)。當(dāng)R₁為巰基時(shí)，以下簡(jiǎn)稱(chēng)為DSPE-PEG-SH(磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-硫醇)。

進(jìn)一步地，磷脂類(lèi)、膽固醇類(lèi)和磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇衍生物的摩爾比為55-96:10-50:2-10。

進(jìn)一步地，對(duì)水化后的溶液進(jìn)行過(guò)膜整形處理，通過(guò)0.22-0.8μm的微孔濾膜后得到載藥脂質(zhì)體溶液。

本發(fā)明還提供了一種采用上述方法所制備的具有藥物釋放功能的3D打印生物支架。

借由上述方案，本發(fā)明至少具有以下優(yōu)點(diǎn)：

本發(fā)明通過(guò)等離子體、多巴胺、堿處理等方法的處理，使3D打印生物支架表面修飾特定的活性基團(tuán)，例如氨基、羧基、羥基、巰基等，從而將3D打印生物支架表面功能化；制備載藥的脂質(zhì)體，在制備過(guò)程中，將脂質(zhì)體帶上特定基團(tuán)，例如羧基、氨基、巰基等基團(tuán)，從而有利于脂質(zhì)體和支架上的基團(tuán)發(fā)生化學(xué)結(jié)合作用；采用本發(fā)明的方法制備出支架表面接枝載藥脂質(zhì)體的給藥體系，通過(guò)脂質(zhì)體實(shí)現(xiàn)不同藥物的裝載，例如脂溶性藥物或水溶性藥物；本發(fā)明制備的生物支架同時(shí)具有結(jié)構(gòu)仿生性、組織相容性和疾病治療功能，從而使支架由常規(guī)功能走向治療功能。

上述說(shuō)明僅是本發(fā)明技術(shù)方案的概述，為了能夠更清楚了解本發(fā)明的技術(shù)手段，并可依照說(shuō)明書(shū)的內(nèi)容予以實(shí)施，以下以本發(fā)明的較佳實(shí)施例并配合附圖詳細(xì)說(shuō)明如后。

附圖說(shuō)明

圖1是本發(fā)明實(shí)施例1中生物支架的制備過(guò)程示意圖；

圖2是本發(fā)明實(shí)施例3中生物支架的制備過(guò)程示意圖；

圖3是本發(fā)明實(shí)施例4中生物支架的制備過(guò)程示意圖；

圖4是本發(fā)明實(shí)施例5中生物支架的制備過(guò)程示意圖；

圖5是本發(fā)明實(shí)施例6中生物支架的制備過(guò)程示意圖；

圖6是本發(fā)明實(shí)施例6中未負(fù)載藥物的3D打印生物支架側(cè)面的SEM圖；

圖7是本發(fā)明實(shí)施例6中負(fù)載藥物后的3D打印生物支架正面的SEM圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖和實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式作進(jìn)一步詳細(xì)描述。以下實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明，但不用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。

實(shí)施例1

將1g PLLA和0.13g的KH550(氨基丙基三乙氧基硅烷)混合后，進(jìn)行3D打印，得到表面氨基化的3D打印支架。

按照摩爾比96:19:4:20，稱(chēng)取二棕櫚酰磷脂酰膽堿、膽固醇、DSPE-PEG-COOH(磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-羧基)和紫杉醇，用30mL氯仿將其溶解后轉(zhuǎn)移至茄形瓶中。旋蒸掉溶劑后得到脂質(zhì)薄膜，真空干燥過(guò)夜。向茄形瓶中加入20mL的PBS水化得到脂質(zhì)體粗乳。用超聲探頭對(duì)脂質(zhì)體粗乳進(jìn)行處理，超聲時(shí)間為3min，超聲功率為40％，工作2s停1s。將超聲后的脂質(zhì)體溶液依次通過(guò)0.8μm、0.45μm、0.22μm的微孔濾膜，得到表面修飾有羧基的脂質(zhì)體溶液。

將上述制備的表面氨基化的3D打印支架浸入表面修飾有羧基的脂質(zhì)體溶液中，于4℃下浸泡2h，氨基與羧基發(fā)生反應(yīng)形成酰胺鍵，從而將脂質(zhì)體成功嫁接于3D打印支架的表面。

圖1為本實(shí)施例具有藥物釋放功能的3D打印生物支架的制備過(guò)程示意圖，其中圖1中的(1)代表表面氨基化的3D打印支架，圖1中的(2)代表表面修飾有羧基的脂質(zhì)體溶液；圖1中的(3)代表具有藥物釋放功能的3D打印生物支架。

實(shí)施例2

將洗凈干燥的3D打印支架(材質(zhì)為PLLA)浸泡在6wt％己二胺/正丙醇溶液中于60℃振蕩一定時(shí)間后，用乙醇和去離子水反復(fù)清洗并真空干燥可得到氨基官能團(tuán)化的3D打印支架。

按照摩爾比80:40:4:20，稱(chēng)取大豆磷脂、膽固醇硫酸鹽、DSPE-PEG-COOH(磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-羧基)和布洛芬，然后用30mL氯仿將其溶解后轉(zhuǎn)移至茄形瓶中。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除掉溶劑后得到脂質(zhì)薄膜，真空干燥過(guò)夜除盡有機(jī)殘留。向茄形瓶中加入20mL的PBS水化得到脂質(zhì)體粗乳。用超聲探頭對(duì)脂質(zhì)體粗乳進(jìn)行處理，超聲時(shí)間為3min，超聲功率為20％，工作1s停1s。將超聲后的脂質(zhì)體溶液依次通過(guò)0.45μm、0.22μm的微孔濾膜，得到表面修飾有羧基的脂質(zhì)體溶液。

將上述制備的表面氨基化的3D打印支架浸入表面修飾有羧基的脂質(zhì)體溶液中，于37℃下浸泡2h，氨基于羧基發(fā)生反應(yīng)形成酰胺鍵，從而將脂質(zhì)體成功嫁接于3D打印支架的表面。

實(shí)施例3

利用3D打印技術(shù)打印出PCL生物支架。對(duì)該支架進(jìn)行等離子處理，具體如下：將3D打印支架置于等離子裝置內(nèi)固定于電極之間，當(dāng)內(nèi)室壓達(dá)到10^-3Torr時(shí)，以0.2Torr注入氧氣以及氣態(tài)丙烯酸，并且施加射頻功率50W以及負(fù)極脈沖電壓維持30s，即得表面修飾有羧基的3D打印支架。

按照摩爾比90:30:3:15，稱(chēng)取蛋黃卵磷脂、膽固醇、DSPE-PEG-NH₂(磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基)和阿霉素，并將其溶解于2mL乙醇溶液中，得到脂質(zhì)乙醇溶液。量取20mL的PBS溶液置于燒杯中，在轉(zhuǎn)速為300rpm，溫度為40℃的條件下向燒杯中逐滴加入脂質(zhì)乙醇溶液。滴加完成后，繼續(xù)攪拌，當(dāng)燒杯中乙醇完全揮發(fā)掉后，即得表面修飾有氨基的脂質(zhì)體溶液。

將上述制備的表面羧基化的3D打印支架浸入表面修飾有氨基的脂質(zhì)體溶液中，于25℃下浸泡2h，氨基與羧基發(fā)生反應(yīng)形成酰胺鍵，從而將脂質(zhì)體成功嫁接于3D打印支架的表面。

圖2為本實(shí)施例具有藥物釋放功能的3D打印生物支架的制備過(guò)程示意圖，其中圖2中的(1)代表表面羧基化的3D打印支架，圖2中的(2)代表表面修飾有氨基的脂質(zhì)體溶液；圖2中的(3)代表具有藥物釋放功能的3D打印生物支架。

實(shí)施例4

將實(shí)施例1制備的表面氨基化的支架浸入500μL含800μg N-琥珀酰亞胺S-乙酰三乙酸(SATA)的二甲亞砜溶液中，45min后取出，然后用PBS反復(fù)清洗，再將其浸入500μL濃度為25mM pH為7.4的含羥胺17.4mg EDTA溶液中，浸泡2h即得表面巰基化的3D打印支架。

按照摩爾比80:40:4:20，稱(chēng)取DPPC(二棕櫚酰磷脂酰膽堿)、Chol(膽固醇)、DSPE-PEG-MAL(磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-馬來(lái)酰亞胺)和吉西他濱，用5mL乙醚將除吉西他濱外的物質(zhì)溶解。在300rpm/min的攪拌條件下緩緩加入1mL上述吉西他濱溶液，超聲3min得到均勻乳液。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后得到膠狀體，再加入20mL的PBS進(jìn)行再水化，水浴1h后得到脂質(zhì)體溶液。

將上述制備的表面巰基化的3D打印支架浸入表面修飾有馬來(lái)酰亞胺基的脂質(zhì)體溶液中，于4℃下浸泡2h，巰基與馬來(lái)酰亞胺基發(fā)生反應(yīng)形成硫醚鍵，從而將脂質(zhì)體成功嫁接于3D打印支架的表面。

圖3為本實(shí)施例具有藥物釋放功能的3D打印生物支架的制備過(guò)程示意圖，其中圖3中的(1)代表表面巰基化的3D打印支架，圖3中的(2)代表表面修飾有馬來(lái)酰亞胺基的脂質(zhì)體溶液；圖3中的(3)代表具有藥物釋放功能的3D打印生物支架。

實(shí)施例5

將3D打印支架(材質(zhì)為PGA)浸入在2mg/mL的多巴胺溶液中(以Tris-HCL為溶劑)，在氧氣的氧化的作用下，多巴胺發(fā)生自聚合反應(yīng)，在3D打印支架表面生成聚多巴胺薄層，室溫反應(yīng)16小時(shí)后可得到表面修飾有PDA涂層的3D打印支架，在該3D打印支架表面的多巴胺的聚合產(chǎn)物中，含有大量的鄰苯二酚基團(tuán)、氨基、亞氨基及巰基等官能團(tuán)。

按照摩爾比90:30:4.8:10，稱(chēng)取DPPC(二棕櫚酰磷脂酰膽堿)、Chol(膽固醇)、DSPE-PEG-SH(磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-硫醇)和凝血酶，用乙醚將除了凝血酶之外的物質(zhì)其溶解。在攪拌條件下緩緩加入1mL凝血酶溶液，超聲5min得到均勻乳液。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到膠狀體，再加入30mL的PBS進(jìn)行再水化，水浴30min后得到脂質(zhì)體溶液。

將上述表面PDA修飾的3D打印支架浸入脂質(zhì)體溶液中，在堿性環(huán)境下，多巴胺聚合產(chǎn)物中的鄰苯二酚基團(tuán)被氧化成鄰苯二醌基團(tuán)，在4℃下浸泡2h，鄰苯二醌基團(tuán)與巰基反應(yīng)，即可形成硫醚鍵將脂質(zhì)體成功嫁接于3D打印支架的表面。

圖4為本實(shí)施例具有藥物釋放功能的3D打印生物支架的制備過(guò)程示意圖，其中圖4中的(1)代表經(jīng)過(guò)堿處理的表面附有聚多巴胺3D打印支架，圖4中的(2)代表表面修飾有巰基的脂質(zhì)體溶液；圖4中的(3)代表具有藥物釋放功能的3D打印生物支架。

實(shí)施例6

按照摩爾比80:40:4:15，稱(chēng)取DPPC(二棕櫚酰磷脂酰膽堿)、Chol(膽固醇)、DSPE-PEG-NH₂(磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基)和胰島素，用2mL的乙醇將其溶解。在攪拌條件下(300rpm/min，37℃)緩緩加入到20mL的PBS中，持續(xù)攪拌，待乙醇被揮盡后得到脂質(zhì)體溶液。

將實(shí)施例5制備的表面PDA修飾的3D打印支架浸入上述脂質(zhì)體溶液中，在堿性環(huán)境下，多巴胺聚合產(chǎn)物中的鄰苯二酚基團(tuán)被氧化成鄰苯二醌基團(tuán)，在4℃下浸泡持續(xù)2h，鄰苯二醌基團(tuán)與氨基發(fā)生反應(yīng)，即可將脂質(zhì)體成功嫁接于3D打印支架的表面。

圖5為本實(shí)施例具有藥物釋放功能的3D打印生物支架的制備過(guò)程示意圖，其中圖5中的(1)代表經(jīng)過(guò)堿處理的表面附有聚多巴胺3D打印支架，圖5中的(2)代表表面修飾有氨基的脂質(zhì)體溶液；圖5中的(3)代表具有藥物釋放功能的3D打印生物支架。

圖6為本實(shí)施例中未負(fù)載藥物的3D打印生物支架側(cè)面的SEM圖；圖7為本實(shí)施例中負(fù)載藥物的3D打印生物支架正面的SEM圖。從圖中可以看出脂質(zhì)體的表面嫁接對(duì)于生物支架的外部形貌沒(méi)有明顯影響。

實(shí)施例7

采用PCL和PGA混合溶液，利用3D打印技術(shù)打印出生物支架。對(duì)該支架進(jìn)行等離子處理，具體如下：將3D打印支架置于等離子裝置內(nèi)固定于電極之間，當(dāng)內(nèi)室壓達(dá)到10^-3Torr時(shí)，以0.2Torr注入氧氣以及氣態(tài)丙烯酸，并且施加射頻功率50W以及負(fù)極脈沖電壓維持30s，即得表面修飾有羧基的3D打印支架。

按照摩爾比55:10:2:15，稱(chēng)取DSPC、硫酸膽固醇、DSPE-PEG-NH₂(磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基)和青霉素鈉，先將DSPC、硫酸膽固醇、DSPE-PEG-NH₂溶解于2mL乙醇溶液中，得到脂質(zhì)乙醇溶液。再加入青霉素鈉的水溶液，然后超聲1-10min得到均勻乳液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)形成膠狀物。再加入磷酸鹽緩沖溶液進(jìn)行再水化，離心表面修飾有氨基的脂質(zhì)體溶液。

將上述制備的表面羧基化的3D打印支架浸入表面修飾有氨基的脂質(zhì)體溶液中，于25℃下浸泡2h，氨基與羧基發(fā)生反應(yīng)形成酰胺鍵，從而將脂質(zhì)體成功嫁接于3D打印支架的表面。

實(shí)施例8

按照摩爾比96:50:10:30，稱(chēng)取DPPC(二棕櫚酰磷脂酰膽堿)、Chol(膽固醇)、DSPE-PEG-NH₂(磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基)和輔酶Q10，用2mL的乙醇將其溶解。在攪拌條件下(300rpm/min，37℃)緩緩加入到20mL的PBS中，持續(xù)攪拌，待乙醇被揮盡后得到脂質(zhì)體溶液。

將實(shí)施例5制備的表面PDA修飾的3D打印支架浸入上述脂質(zhì)體溶液中，在堿性環(huán)境下，多巴胺聚合產(chǎn)物中的鄰苯二酚基團(tuán)被氧化成鄰苯二醌基團(tuán)，在4℃下浸泡持續(xù)2h，鄰苯二醌基團(tuán)與氨基發(fā)生反應(yīng)，即可將脂質(zhì)體成功嫁接于3D打印支架的表面。

實(shí)施例9

將洗凈干燥的3D打印支架(材質(zhì)為PLLA和PLGA)浸泡在6wt％己二胺/正丙醇溶液中于60℃振蕩一定時(shí)間后，用乙醇和去離子水反復(fù)清洗并真空干燥可得到氨基官能團(tuán)化的3D打印支架。

按照摩爾比70:30:10:20，稱(chēng)取DOPC、膽固醇、DSPE-PEG-COOH(磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-羧基)和順鉑，然后用30mL氯仿將其溶解后轉(zhuǎn)移至茄形瓶中。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除掉溶劑后得到脂質(zhì)薄膜，真空干燥過(guò)夜除盡有機(jī)殘留。向茄形瓶中加入20mL的PBS水化得到脂質(zhì)體粗乳。用超聲探頭對(duì)脂質(zhì)體粗乳進(jìn)行處理，超聲時(shí)間為3min，超聲功率為20％，工作1s停1s。將超聲后的脂質(zhì)體溶液依次通過(guò)0.45μm、0.22μm的微孔濾膜，得到表面修飾有羧基的脂質(zhì)體溶液。

將上述制備的表面氨基化的3D打印支架浸入表面修飾有羧基的脂質(zhì)體溶液中，于37℃下浸泡2h，氨基于羧基發(fā)生反應(yīng)形成酰胺鍵，從而將脂質(zhì)體成功嫁接于3D打印支架的表面。

實(shí)施例10

將1g PLLA和0.13g的KH550(氨基丙基三乙氧基硅烷)混合后，進(jìn)行3D打印，得到表面氨基化的3D打印支架。

按照摩爾比96:19:4:20，稱(chēng)取二棕櫚酰磷脂酰膽堿、膽固醇、DSPE-PEG-COOH(磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-羧基)和BMP-2，用2mL的乙醇將其溶解。在攪拌條件下(300rpm/min，37℃)緩緩加入到20mL的PBS中，持續(xù)攪拌，待乙醇被揮盡后得到脂質(zhì)體溶液。

將上述制備的表面氨基化的3D打印支架浸入表面修飾有羧基的脂質(zhì)體溶液中，于25℃下浸泡2h，氨基與羧基發(fā)生反應(yīng)形成酰胺鍵，從而將脂質(zhì)體成功嫁接于3D打印支架的表面。

以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，并不用于限制本發(fā)明，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明技術(shù)原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和變型，這些改進(jìn)和變型也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。