本發(fā)明涉及一種黃酮提取物、其制備方法及應(yīng)用，尤其是一種異戊烯基類黃酮提取物、其制備方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

傳統(tǒng)中醫(yī)理論認(rèn)為桑白皮具有瀉肺平喘，利水消腫的功效，主治肺熱咳喘、水腫脹滿尿少、面目肌膚浮腫等。藥理實(shí)驗(yàn)證實(shí)桑白皮具有降血糖、降血壓、抗病毒、利尿等作用。古代本草如《名醫(yī)別錄》、《大明本草》均記載其治消渴，單用即有效。其主要活性成分是黃酮類、多糖和生物堿類化合物。桑白皮黃酮類化學(xué)成分結(jié)構(gòu)中均連有異戊烯基，具有降血壓、降血糖、抗hiv活性、抗菌、抗癌等作用。

目前，桑白皮黃酮提取物中，異戊烯基類黃酮提取物的含量較低，還不能達(dá)到使用要求。有用聚酰胺來純化桑白皮黃酮的報(bào)道，但聚酰胺的死吸附嚴(yán)重、不易洗脫，黃酮的損失很大，并且用聚酰胺純化后的異戊烯基類黃酮含量為33.5％，也是遠(yuǎn)遠(yuǎn)達(dá)不到藥品注冊(cè)管理辦法規(guī)定的有效部位含量占提取物的50％以上的規(guī)定。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

基于此，本發(fā)明的目的在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足之處而提供一種異戊烯基類黃酮提取物的制備方法。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案為：一種異戊烯基類黃酮提取物的制備方法，所述方法包括如下步驟：

(1)將干燥的桑白皮藥材粉碎，采用乙醇溶液浸泡3.5～4小時(shí)后，在60～90℃下，回流提取兩次，每次1.5～2小時(shí)，合并提取液，其中，每次回流提取中桑白皮藥材與乙醇溶液的質(zhì)量體積比為(1:6～1:10)g/ml；

或?qū)⒁掖既芤涸?5～50℃下浸泡桑白皮藥材12～24小時(shí)后，恒溫恒速進(jìn)行滲漉，收集滲漉液，得到提取液，其中，桑白皮藥材與乙醇溶液的質(zhì)量體積比為(1:4～1:8)g/ml；

其中，桑白皮藥材中，桑根酮c、桑根酮d、桑辛素的質(zhì)量百分含量均大于0.1％，或桑根酮c、桑根酮d、桑辛素的質(zhì)量百分含量之和不小于0.35％，乙醇溶液中乙醇的體積分?jǐn)?shù)為60～80％；

(2)將步驟(1)所得提取液過濾、減壓濃縮至生藥濃度為0.11～0.13g/ml，乙醇的體積分?jǐn)?shù)為30～45％，得到濃縮液；

(3)使用大孔吸附樹脂對(duì)濃縮液進(jìn)行吸附，隨后以4bv～8bv的水進(jìn)行洗脫，洗脫速度為1.5bv/h，再以6bv～8bv的體積分?jǐn)?shù)為70％～90％的乙醇溶液以1～2bv/h的流速進(jìn)行洗脫，收集洗脫液；

(4)將洗脫液減壓濃縮、干燥，得到所述異戊烯基類黃酮提取物。

優(yōu)選地，所述步驟(1)中，按照桑白皮藥材與乙醇溶液的質(zhì)量體積比為1:10g/ml的比例，加入體積分?jǐn)?shù)為80％的乙醇溶液，對(duì)桑白皮藥材進(jìn)行回流提取1.5小時(shí)；再按照桑白皮藥材與乙醇溶液的質(zhì)量體積比為1:8g/ml的比例，加入體積分?jǐn)?shù)為80％的乙醇溶液，對(duì)桑白皮藥材進(jìn)行回流提取1.5小時(shí)，合并兩次提取液。按照上述步驟(1)對(duì)桑白皮藥材進(jìn)行提取，提取的效率高，平均萃取得率高于85.32％。

優(yōu)選地，所述步驟(1)中，將體積分?jǐn)?shù)為80％的乙醇溶液在50℃下浸泡桑白皮藥材12小時(shí)后，用體積分?jǐn)?shù)為80％的乙醇溶液在溫度為50℃、流速為0.5倍體積/小時(shí)進(jìn)行滲漉，收集滲漉液，其中浸泡過程中，桑白皮藥材與乙醇溶液的質(zhì)量體積比為1:4g/ml，滲漉過程中，桑白皮藥材與乙醇溶液的質(zhì)量體積比為1:8g/ml。

優(yōu)選地，所述步驟(2)中，將提取液過濾的步驟為：先將提取液沉淀1小時(shí)以上，然后將提取液用300目濾板循環(huán)過濾。這樣可以進(jìn)一步保證過濾效果和速度，盡可能的減少黃酮的損失。

此外，由于原料粉碎粒度較小，萃取液中的粘稠物容易將濾布堵塞，因此過濾一段時(shí)間速度變慢后應(yīng)將濾布拆下清洗，重新過濾。

優(yōu)選地，所述步驟(2)中，減壓濃縮過程的濃縮溫度不大于70℃，真空度不小于0.07mpa。本發(fā)明所述步驟(2)中之所以嚴(yán)格控制濃縮條件及濃縮程度，是因?yàn)辄S酮產(chǎn)品極性較小，在水中的溶解度較低，在濃縮工序若濃縮的倍數(shù)較高黃酮產(chǎn)品就會(huì)析出，若濃縮的倍數(shù)較低，又不利于后續(xù)提取工藝的進(jìn)行。

優(yōu)選地，所述步驟(2)中，開始濃縮時(shí)回收的酒精度數(shù)較高，最后回收的度數(shù)較低，回收的度數(shù)高的酒精應(yīng)單獨(dú)收集。

優(yōu)選地，所述步驟(3)中，濃縮液的生藥濃度為0.125g/ml；對(duì)濃縮液進(jìn)行吸附時(shí)，先以6bv的水進(jìn)行洗脫，再以6bv的體積分?jǐn)?shù)為80％的乙醇溶液進(jìn)行洗脫。

優(yōu)選地，所述步驟(3)在吸附前，還包括將大孔吸附樹脂欲準(zhǔn)備的步驟：

2.1750kg(1.2立方)樹脂裝柱，柱徑高比約1:5-8(直徑為48cm的樹脂柱，大約高度為2.4m，柱體積為434l，需3根柱)，可串聯(lián)；

樹脂再生步驟如下：

(1)將樹脂中原有的水排凈，再用2bv的一次水洗柱，最后將洗柱水排凈?？刂?.5小時(shí)。

(2)配制4％的naoh水溶液1200升，完全浸泡樹脂，浸泡過程中需一直從底部通氣活動(dòng)樹脂，浸泡時(shí)間為2小時(shí)。浸泡完成后控柱，將堿水排凈，再用4％的naoh水溶液1200升浸泡一遍，浸泡完成后控柱，將堿水排凈，用一次水將樹脂沖至中性。

(3)配制4％的hcl水溶液1200升，完全浸泡樹脂，浸泡過程中需一直從底部通氣活動(dòng)樹脂，浸泡時(shí)間為2小時(shí)，浸泡完成后排凈酸水，之后用一次水將樹脂洗至中性。根據(jù)情況可進(jìn)行反洗。

(4)吸附前必須保證樹脂下柱水為中性。

值得注意的是，步驟(3)中的大孔吸附樹脂可為本領(lǐng)域技術(shù)人員所普遍常用的大孔吸附樹脂，比如購買于西安藍(lán)曉科技新材料股份有限公司的lsa-10型號(hào)大孔吸附樹脂。

優(yōu)選地，所述步驟(4)中，將解析液減壓濃縮，得到相對(duì)密度為1.15～1.20、含固量為20～25％的濃縮液。

此外，所述步驟(4)中，由于濃縮液在脫味后會(huì)析出有效成分，產(chǎn)品較粘稠，不適宜使用噴霧干燥，而優(yōu)選使用真空干燥箱進(jìn)行真空干燥，干燥過程中要求溫度≤70℃，干燥烘干要進(jìn)行充分，以減少異戊烯基類黃酮損失。

同時(shí)，本發(fā)明還提供一種由上述制備方法制備得到的異戊烯基類黃酮提取物，所述提取物中，異戊烯基類黃酮提取物的質(zhì)量百分含量大于50％。

優(yōu)選地，上述提取物中，桑根酮c的質(zhì)量百分含量大于6.4％，桑根酮d的質(zhì)量百分含量大于3.4％。

此外，本發(fā)明還提供一種上述異戊烯基類黃酮提取物在治療非酒精性脂肪肝或減肥中的應(yīng)用。

相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的有益效果為：

用本發(fā)明制備方法制備得到的異戊烯基類黃酮提取物，其異戊烯基類黃酮轉(zhuǎn)移率大于90％，純化物中異戊烯基類黃酮提取物的含量大于50％，且重現(xiàn)性好，樹脂可重復(fù)使用，工藝操作簡便，制備量大，產(chǎn)品純度高，而且低污染。

附圖說明

圖1為實(shí)施例1所制備得到的異戊烯基類黃酮提取物樣品的液相圖；

圖2為本發(fā)明所述異戊烯基類黃酮提取物在治療非酒精性脂肪肝方面的效果圖；

圖3為本發(fā)明所述異戊烯基類黃酮提取物在減肥方面的效果圖；

圖4為本發(fā)明所述異戊烯基類黃酮提取物對(duì)葡萄糖耐受性的效果圖；

圖5為本發(fā)明所述異戊烯基類黃酮提取物在降糖方面的效果圖；

圖6為本發(fā)明所述異戊烯基類黃酮提取物在降脂方面的效果圖。

具體實(shí)施方式

為更好的說明本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)，下面將結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。

實(shí)施例1

本發(fā)明所述異戊烯基類黃酮提取物的制備方法的一種實(shí)施例，本實(shí)施例所述制備方法包括如下步驟：

(1)將干燥的桑白皮藥材粉碎，采用體積分?jǐn)?shù)為80％的乙醇溶液對(duì)桑白皮藥材常溫浸泡4小時(shí)后，按照桑白皮藥材與乙醇溶液的質(zhì)量體積比為1:10g/ml的比例，加入體積分?jǐn)?shù)為80％的乙醇溶液，在90℃對(duì)桑白皮藥材進(jìn)行回流提取1.5小時(shí)；再按照桑白皮藥材與乙醇溶液的質(zhì)量體積比為1:8g/ml的比例，加入體積分?jǐn)?shù)為80％的乙醇溶液，對(duì)桑白皮藥材進(jìn)行回流提取1.5小時(shí)，合并兩次提取液；其中，桑白皮藥材中，桑根酮c、桑根酮d、桑辛素的質(zhì)量百分含量均大于0.1％，或桑根酮c、桑根酮d、桑辛素的質(zhì)量百分含量之和不小于0.35％；

(2)先將步驟(1)所得提取液沉淀1小時(shí)，然后將提取液用300目濾板循環(huán)過濾，然后抽濾，將抽濾液70℃減壓濃縮至生藥濃度為0.13g/ml，乙醇的體積分?jǐn)?shù)為45％，得到濃縮液；

(3)將購買于西安藍(lán)曉科技新材料股份有限公司的lsa-10型號(hào)大孔吸附樹脂進(jìn)行預(yù)處理再生后，以1bv/h的上樣速度，對(duì)濃縮液進(jìn)行吸附，隨后以8bv的水進(jìn)行洗脫，再以6bv的體積分?jǐn)?shù)為90％的乙醇溶液以1bv/h的流速進(jìn)行洗脫，洗脫至無黃酮為止，收集洗脫液；

(4)將洗脫液60℃減壓濃縮，得到相對(duì)密度為1.17、含固量為23％的濃縮液，在真空干燥箱于70℃進(jìn)行充分干燥，得到所述異戊烯基類黃酮提取物。

實(shí)施例2

本發(fā)明所述異戊烯基類黃酮提取物的制備方法的一種實(shí)施例，本實(shí)施例所述制備方法包括如下步驟：

(1)將干燥的桑白皮藥材粉碎，將體積分?jǐn)?shù)為80％的乙醇溶液在50℃下浸泡桑白皮藥材12小時(shí)后，用體積分?jǐn)?shù)為80％的乙醇溶液在溫度為50℃、流速為0.5倍體積/小時(shí)進(jìn)行滲漉，收集滲漉液，其中浸泡過程中，桑白皮藥材與乙醇溶液的質(zhì)量體積比為1:4g/ml，滲漉過程中，桑白皮藥材與乙醇溶液的質(zhì)量體積比為1:8g/ml；其中，桑白皮藥材中，桑根酮c、桑根酮d、桑辛素的質(zhì)量百分含量均大于0.1％，或桑根酮c、桑根酮d、桑辛素的質(zhì)量百分含量之和不小于0.35％；

(2)先將步驟(1)所得提取液沉淀1.5小時(shí)，然后將提取液用300目濾板循環(huán)過濾，然后抽濾，將抽濾液60℃減壓濃縮至生藥濃度為0.11g/ml，乙醇的體積分?jǐn)?shù)為40％，得到濃縮液；

(3)將購買于西安藍(lán)曉科技新材料股份有限公司的lsa-10型號(hào)大孔吸附樹脂進(jìn)行預(yù)處理再生后，以1bv/h的上樣速度，對(duì)濃縮液進(jìn)行吸附，隨后以4bv的水進(jìn)行洗脫，再以8bv的體積分?jǐn)?shù)為70％的乙醇溶液以1.5bv/h的流速進(jìn)行洗脫，洗脫至無黃酮為止，收集洗脫液；

(4)將洗脫液60℃減壓濃縮，得到相對(duì)密度為1.20、含固量為25％的濃縮液，在真空干燥箱于70℃進(jìn)行充分干燥，得到所述異戊烯基類黃酮提取物。

實(shí)施例3

本發(fā)明所述異戊烯基類黃酮提取物的制備方法的一種實(shí)施例，本實(shí)施例所述制備方法包括如下步驟：

(1)將干燥的桑白皮藥材粉碎，先按照桑白皮藥材與乙醇溶液的質(zhì)量體積比為1:8g/ml的比例，加入體積分?jǐn)?shù)為60％的乙醇溶液，對(duì)桑白皮藥材常溫浸泡3.5小時(shí)后60℃進(jìn)行回流提取2小時(shí)；再按照桑白皮藥材與乙醇溶液的質(zhì)量體積比為1:6g/ml的比例，加入體積分?jǐn)?shù)為60％的乙醇溶液，對(duì)桑白皮藥材進(jìn)行回流提取1.5小時(shí)，合并兩次提取液，其中，桑白皮藥材中，桑根酮c、桑根酮d、桑辛素的質(zhì)量百分含量均大于0.1％，或桑根酮c、桑根酮d、桑辛素的質(zhì)量百分含量之和不小于0.35％；

(2)先將步驟(1)所得提取液沉淀1小時(shí)，然后將提取液用300目濾板循環(huán)過濾，然后抽濾，將抽濾液70℃減壓濃縮至生藥濃度為0.125g/ml，乙醇的體積分?jǐn)?shù)為30％，得到濃縮液；

(3)將購買于西安藍(lán)曉科技新材料股份有限公司的lsa-10型號(hào)大孔吸附樹脂進(jìn)行預(yù)處理再生后，以1bv/h的上樣速度，對(duì)濃縮液進(jìn)行吸附，隨后以6bv的水進(jìn)行洗脫，再以6bv的體積分?jǐn)?shù)為80％的乙醇溶液以1.5bv/h的流速進(jìn)行洗脫，洗脫至無黃酮為止，收集洗脫液；

(4)將洗脫液60℃減壓濃縮，得到相對(duì)密度為1.15、含固量為20％的濃縮液，在真空干燥箱于70℃進(jìn)行充分干燥，得到所述異戊烯基類黃酮提取物。

實(shí)施例4

本發(fā)明所述異戊烯基類黃酮提取物的制備方法的一種實(shí)施例，本實(shí)施例所述制備方法包括如下步驟：

(1)將干燥的桑白皮藥材粉碎，將體積分?jǐn)?shù)為60％的乙醇溶液在45℃下浸泡桑白皮藥材24小時(shí)后，用體積分?jǐn)?shù)為80％的乙醇溶液在溫度為45℃、流速為0.5倍體積/小時(shí)進(jìn)行滲漉，收集滲漉液，其中浸泡過程中，桑白皮藥材與乙醇溶液的質(zhì)量體積比為1:4g/ml，滲漉過程中，桑白皮藥材與乙醇溶液的質(zhì)量體積比為1:6g/ml；其中，桑白皮藥材中，桑根酮c、桑根酮d、桑辛素的質(zhì)量百分含量均大于0.1％，或桑根酮c、桑根酮d、桑辛素的質(zhì)量百分含量之和不小于0.35％；

(2)先將步驟(1)所得提取液沉淀1小時(shí)，然后將提取液用300目濾板循環(huán)過濾，然后抽濾，將抽濾液60℃減壓濃縮至生藥濃度為0.125g/ml，乙醇的體積分?jǐn)?shù)為30％，得到濃縮液；

(3)將購買于西安藍(lán)曉科技新材料股份有限公司的lsa-10型號(hào)大孔吸附樹脂進(jìn)行預(yù)處理再生后，以1bv/h的上樣速度，對(duì)濃縮液進(jìn)行吸附，隨后以4bv的水進(jìn)行洗脫，再以8bv的體積分?jǐn)?shù)為70％的乙醇溶液以2bv/h的流速進(jìn)行洗脫，洗脫至無黃酮為止，收集洗脫液；

(4)將洗脫液60℃減壓濃縮，得到相對(duì)密度為1.19、含固量為24％的濃縮液，在真空干燥箱于70℃進(jìn)行充分干燥，得到所述異戊烯基類黃酮提取物。

實(shí)施例5

本實(shí)施例對(duì)實(shí)施例1～4所制備得到的黃酮提取物中的異戊烯基類黃酮含量進(jìn)行液相測(cè)定，使用儀器為waters公司2695高效液相色譜儀，waters公司2487λ雙吸收檢測(cè)器，色譜條件為：色譜柱：dikmatechonlogies(迪馬diamonsilc185μ，200×4.6mm)；流動(dòng)相：乙腈—0.1％乙酸水；檢測(cè)波長：283nm；進(jìn)樣量：10μl；檢測(cè)波長：270nm；柱溫：30℃；流速：1.0ml/min；具體測(cè)定過程中流動(dòng)相含量如表1所示，測(cè)定結(jié)果如圖1所示(以實(shí)施例1中所制備得到的異戊烯基類黃酮的測(cè)量為例)，分析結(jié)果如表2所示：

表1流動(dòng)相含量

(本液相條件到50分鐘就可以結(jié)束了，延長到65分鐘是為了連續(xù)進(jìn)樣)

表2液相色譜分析結(jié)果

從表2的分析結(jié)果可以看出，實(shí)施例1中所得異戊烯基類黃酮提取物中diels-alder化合物主要成分為1～4號(hào)峰，總含量為45.74％，異戊烯基黃酮類主要為5號(hào)峰，含量為11.45％，總的來說，異戊烯基類黃酮的總含量為57.19％，大于50％；對(duì)實(shí)施例2～4所制備得到的黃酮提取物中的異戊烯基類黃酮含量按照同樣的方法進(jìn)行了液相測(cè)定，測(cè)定結(jié)果和實(shí)施例1中的結(jié)果相似，總的來說，異戊烯基類黃酮的總含量均為50％以上，具體的研究過程與此不再詳述。

實(shí)施例6

本實(shí)施例對(duì)提取工藝中萃取溶劑料液比進(jìn)行考察優(yōu)化。

實(shí)驗(yàn)步驟：精密稱取桑白皮藥材粉末20g各3份，分別加入6、8、10倍量的80％的乙醇溶液，90℃提取1次，萃取時(shí)間1.5h。再分別加入6、8、10倍量的80％的乙醇溶液，90℃提取1次，萃取時(shí)間1.5h，合并兩次濾液，抽濾。按照實(shí)施例5中異戊烯基類黃酮的測(cè)定方法測(cè)定異戊烯基類黃酮含量，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)如下：

表3溶劑料液比優(yōu)化分析數(shù)據(jù)

由以上數(shù)據(jù)可以看出，隨著料液比的增大，異戊烯基類黃酮的萃取率增大，在第一次提取料液比為1：10，第二次提取料液比為1：8時(shí)，異戊烯基類黃酮含量最高，當(dāng)大于該比例時(shí)，又增加濃縮壓力，所以第一次提取料液比為1：10，第二次提取料液比為1：8。

實(shí)施例7

本實(shí)施例對(duì)提取工藝中萃取時(shí)間進(jìn)行考察優(yōu)化。

實(shí)驗(yàn)步驟：精密稱取桑白皮藥材10g各3份，加入10倍量和8倍量的80％乙醇溶液萃取2次，溫度90℃，第一次萃取時(shí)間分別為2h、2h、1.5h，第二次萃取時(shí)間2h、1.5h、1h，合并兩次濾液，按照實(shí)施例5中異戊烯基類黃酮的測(cè)定方法，測(cè)定異戊烯基類黃酮含量，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)如下：

表4萃取時(shí)間優(yōu)化分析數(shù)據(jù)

由以上數(shù)據(jù)可以看出，在第一次提取時(shí)間為1.5小時(shí)，第二次提取時(shí)間為1.5小時(shí)時(shí)，提取液中異戊烯基類黃酮含量最大。

實(shí)施例8

本實(shí)施例對(duì)提取工藝中乙醇溶液的體積分?jǐn)?shù)進(jìn)行考察優(yōu)化。

實(shí)驗(yàn)步驟：精密稱取桑白皮藥材10g各4份，加入10倍量和8倍量的體積分?jǐn)?shù)分別為60％、70％、80％的乙醇溶液，90℃提取2次，每次1.5h，合并兩次濾液，按照藥材含量測(cè)定項(xiàng)方法測(cè)定異戊烯基類黃酮含量，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)如下：

表5乙醇溶液的體積分?jǐn)?shù)優(yōu)化分析數(shù)據(jù)

由以上數(shù)據(jù)可以看出，在乙醇溶液體積分?jǐn)?shù)為80％時(shí)，萃取液中異戊烯基類黃酮含量最大，所以提取異戊烯基類黃酮的乙醇溶液的最佳體積分?jǐn)?shù)為80％。

實(shí)施例9

本實(shí)施例對(duì)提取工藝中樹脂上柱吸附最佳生藥濃度進(jìn)行考察優(yōu)化。

實(shí)驗(yàn)步驟：精密稱取桑白皮藥材100g三份，加入10倍量和8倍量的80％乙醇溶液萃取2次，溫度90℃，萃取時(shí)間均為1.5h，使用300目濾布過濾，合并兩次濾液，抽濾，混勻，量取體積，按照藥材含量測(cè)定項(xiàng)方法測(cè)定異戊烯基類黃酮含量，之后濃縮至生藥濃度分別為0.13g/ml、0.125g/ml、0.111g/ml，使用大孔吸附樹脂進(jìn)行吸附，使用8bv水洗，后使用6bv80％的乙醇溶液進(jìn)行解析，量取解析液體積，檢測(cè)其中異戊烯基類黃酮含量，計(jì)算得率。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)如下：

表6樹脂上柱吸附最佳生藥濃度優(yōu)化分析數(shù)據(jù)

由以上數(shù)據(jù)可知，當(dāng)上柱吸附液濃度為0.125g/ml時(shí)，樹脂富集效果最好。

實(shí)施例10

本實(shí)施例對(duì)提取工藝中樹脂最佳水洗量進(jìn)行考察優(yōu)化。

實(shí)驗(yàn)步驟：精密稱取桑白皮藥材100g，加入10倍量和8倍量的80％乙醇溶液萃取2次，溫度90℃，萃取時(shí)間均為1.5h，使用300目濾布過濾，合并兩次濾液，抽濾，混勻，量取體積，按照藥材含量測(cè)定項(xiàng)方法測(cè)定異戊烯基類黃酮含量，之后濃縮至生藥濃度分別為0.125g/ml，使用大孔吸附樹脂進(jìn)行吸附，使用8bv水洗，過程中沒隔1bv使用molish反應(yīng)檢測(cè)一遍下柱水中是否有糖存在。

實(shí)驗(yàn)結(jié)論：經(jīng)過過程中每隔1bv檢測(cè)是否有糖存在，得出在使用4bv水洗時(shí)，可將糖洗完，為保證將糖全部洗去確定水洗柱體積為6bv。

實(shí)施例11

本實(shí)施例對(duì)提取工藝中樹脂最佳洗脫液濃度進(jìn)行考察優(yōu)化。

實(shí)驗(yàn)步驟：精密稱取桑白皮藥材100g三份，加入10倍量和8倍量的80％乙醇溶液萃取2次，溫度90℃，萃取時(shí)間均為1.5h，使用300目濾布過濾，合并兩次濾液，抽濾，混勻，量取體積，按照藥材含量測(cè)定項(xiàng)方法測(cè)定異戊烯基類黃酮含量，之后濃縮至生藥濃度分別為0.125g/ml，使用大孔吸附樹脂進(jìn)行吸附，使用6bv水洗，后使用6bv70％、80％、90％的乙醇溶液進(jìn)行解析，量取解析液體積，檢測(cè)其中異戊烯基類黃酮含量，計(jì)算得率，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)如下：

表7樹脂最佳解析液濃度優(yōu)化分析數(shù)據(jù)

實(shí)驗(yàn)結(jié)論：由以上數(shù)據(jù)可知，當(dāng)解析液度數(shù)為80％時(shí)，異戊烯基類黃酮轉(zhuǎn)移率較高。

實(shí)施例12

本實(shí)施例對(duì)提取工藝中樹脂最佳洗脫量進(jìn)行考察優(yōu)化。

實(shí)驗(yàn)步驟：精密稱取桑白皮藥材100g三份，加入10倍量和8倍量的80％乙醇溶液萃取2次，溫度90℃，萃取時(shí)間分別為1.5h，使用300目濾布過濾，合并兩次濾液，抽濾，混勻，量取體積，按照藥材含量測(cè)定項(xiàng)方法測(cè)定異戊烯基類黃酮含量，之后濃縮至生藥濃度分別為0.125g/ml，使用大孔吸附樹脂進(jìn)行吸附，使用6bv水洗，后分別使用5bv、5.5bv、6bv80％的乙醇溶液進(jìn)行解析，量取解析液體積，檢測(cè)其中異戊烯基類黃酮含量，計(jì)算得率，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)如下：

表8樹脂最佳解析量優(yōu)化分析數(shù)據(jù)

實(shí)驗(yàn)結(jié)論：由以上數(shù)據(jù)可知，當(dāng)解析液體積為6bv時(shí)，異戊烯基類黃酮轉(zhuǎn)移率較高。

實(shí)施例13

本實(shí)施例以實(shí)施例1為例，研究分析本發(fā)明異戊烯基類黃酮提取物在治療非酒精性脂肪肝或減肥中的應(yīng)用效果，研究結(jié)果分別如圖2～6所示。

(一)本發(fā)明異戊烯基類黃酮提取物在治療非酒精性脂肪肝中的效果研究

具體實(shí)驗(yàn)過程為：80只sd雄性大鼠(體重為180-220g)適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為4組，每組20只，分別按照如下方法設(shè)置給藥組(治療)、給藥組(預(yù)防)、正常對(duì)照組、模型組，3個(gè)月后，摘下每組大鼠的肝臟，并測(cè)量其肝重，取平均值，每組大鼠的肝重情況如圖2所示，喂養(yǎng)過程中的高脂飼料按質(zhì)量百分含量由12％豬油、48％基礎(chǔ)飼料、15％糖、10％花生、10％蛋黃、5％鹽和0.03％豬膽鹽制成：

異戊烯基類黃酮提取物給藥組(治療)：治療性給藥，3個(gè)月(治療組是高脂喂養(yǎng)7周后再開始給藥)；

異戊烯基類黃酮提取物給藥組(預(yù)防)：預(yù)防性給藥，3個(gè)月(預(yù)防組是邊高脂飼料喂養(yǎng)邊給藥)；

正常對(duì)照組：sd雄性大鼠；

模型組：純高脂飼料喂養(yǎng)；

研究過程中發(fā)現(xiàn)，除肝的重量有顯著性差異外，各組大鼠的心、脾、肺、腎、骨骼肌、股骨、脛骨、棕白比等均無顯著性差異。從圖2可以看出，與模型組肝重量相比，異戊烯基類黃酮提取物給藥組，無論是預(yù)防組還是治療組都可以有效控制肝重，改善脂肪肝，尤其預(yù)防組效果更佳，幾乎和正常組大鼠相差無異。

(二)本發(fā)明異戊烯基類黃酮提取物在減肥中的效果研究

具體實(shí)驗(yàn)過程為：80只sd雄性大鼠(體重為180-220g)適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為4組，每組20只，分別按照如下方法設(shè)置給藥組(治療)、給藥組(預(yù)防)、正常對(duì)照組、模型組，定期測(cè)量每組大鼠的體重，取平均值，每組大鼠的體重隨時(shí)間變化曲線如圖3所示，喂養(yǎng)過程中的高脂飼料按質(zhì)量百分含量由12％豬油、48％基礎(chǔ)飼料、15％糖、10％花生、10％蛋黃、5％鹽和0.03％豬膽鹽制成：

異戊烯基類黃酮提取物給藥組(治療)：治療性給藥，3個(gè)月(治療組是高脂喂養(yǎng)7周后再開始給藥)；

異戊烯基類黃酮提取物給藥組(預(yù)防)：預(yù)防性給藥，3個(gè)月(預(yù)防組是邊高脂飼料喂養(yǎng)邊給藥)；

正常對(duì)照組：sd雄性大鼠；

模型組：純高脂飼料喂養(yǎng)；

從圖3可以看出，與模型組體重相比，有效部位(預(yù)防)給藥組能明顯控制體重的增長。異戊烯基類黃酮提取物給藥組，無論是預(yù)防組還是治療組都可以有效控制體重，尤其預(yù)防組效果更佳，幾乎和正常組大鼠相差無異，治療組則是給藥后，讓大鼠體重逐漸減輕。

(三)本發(fā)明異戊烯基類黃酮提取物在降糖中的效果研究

具體實(shí)驗(yàn)過程為：80只sd雄性大鼠(體重為180-220g)適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為4組，每組20只，分別按照如下方法設(shè)置給藥組(治療)、給藥組(預(yù)防)、正常對(duì)照組、模型組，定期測(cè)量每組大鼠的血糖值，取平均值，并對(duì)大鼠進(jìn)行口服葡萄糖耐量試驗(yàn)(ogtt)，每組大鼠的血糖值隨時(shí)間變化曲線如圖4～5所示，喂養(yǎng)過程中的高脂飼料按質(zhì)量百分含量由12％豬油、48％基礎(chǔ)飼料、15％糖、10％花生、10％蛋黃、5％鹽和0.03％豬膽鹽制成：

異戊烯基類黃酮提取物給藥組(治療)：治療性給藥，3個(gè)月(治療組是高脂喂養(yǎng)7周后再開始給藥)；

異戊烯基類黃酮提取物給藥組(預(yù)防)：預(yù)防性給藥，3個(gè)月(預(yù)防組是邊高脂飼料喂養(yǎng)邊給藥)；

正常對(duì)照組：sd雄性大鼠；

模型組：純高脂飼料喂養(yǎng)；

從圖4可以看出，桑白皮給藥組(治療)可以明顯提高對(duì)葡萄糖的耐受性；從圖5可以看出，與模型組相比，桑白皮給藥組有較明顯的降血糖的作用。

(四)本發(fā)明異戊烯基類黃酮提取物在降脂中的效果研究

具體實(shí)驗(yàn)過程為：80只sd雄性大鼠(體重為180-220g)適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為4組，每組20只，分別按照如下方法設(shè)置給藥組(治療)、給藥組(預(yù)防)、正常對(duì)照組、模型組，喂養(yǎng)3個(gè)月后摘除大鼠的腎周部分，并稱取腎周脂肪的重量，取平均值，每組大鼠的腎周脂肪重量隨時(shí)間變化曲線如圖6所示，喂養(yǎng)過程中的高脂飼料按質(zhì)量百分含量由12％豬油、48％基礎(chǔ)飼料、15％糖、10％花生、10％蛋黃、5％鹽和0.03％豬膽鹽制成：

異戊烯基類黃酮提取物給藥組(治療)：治療性給藥，3個(gè)月(治療組是高脂喂養(yǎng)7周后再開始給藥)；

異戊烯基類黃酮提取物給藥組(預(yù)防)：預(yù)防性給藥，3個(gè)月(預(yù)防組是邊高脂飼料喂養(yǎng)邊給藥)；

正常對(duì)照組：sd雄性大鼠；

模型組：純高脂飼料喂養(yǎng)；

從圖6可以看出，與模型組腎周脂肪量相比，異戊烯基類黃酮提取物給藥組，無論是預(yù)防組還是治療組都可以有效降低腎周脂肪，幾乎和正常組大鼠相差無異。

最后所應(yīng)當(dāng)說明的是，以上實(shí)施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限制，盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。