專利名稱：一種分離富集山豆根中具異戊烯基黃酮部位的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥有效成分分離技術(shù)領(lǐng)域，特指一種利用大孔吸附樹脂法富集純化山豆根中具異戊烯基黃酮部位的方法。
背景技術(shù)：
山豆根為豆科(Leguminosae)槐屬植物越南槐Sophora tonkinensis Gagnep.的干燥根及根莖，主產(chǎn)于廣西、貴州、云南、廣東、江西等地，其味苦、性寒，為清熱解毒、消腫利咽之要藥，主治火毒蘊(yùn)結(jié)、咽喉腫痛、齒齦腫痛等癥?，F(xiàn)代藥理研究表明山豆根具有抗病毒、抗肝損傷、抗腫瘤等作用，其含有的黃酮和生物堿兩大類成分主要為這些藥理活性的物質(zhì)基礎(chǔ)。經(jīng)檢索，現(xiàn)有專利中，CN1994364A的發(fā)明專利是通過調(diào)節(jié)溶液pH，使用二次大孔吸附樹脂柱色譜法，收集40%-60%乙醇洗脫液作為山豆根提取物；CN101347497A的發(fā)明專利是通過有機(jī)溶劑提取，硅膠柱層析結(jié)合制備液相色譜分離得到山豆根中的一些有效成分；CN101278969A的發(fā)明專利是使用聚苯乙烯型陽離子交換樹脂對(duì)山豆根水提物中非生物堿部位進(jìn)行制備。而采用大孔吸附樹脂分離富集山豆根的95%乙醇提取物，制備山豆根中具異戊烯基黃酮部位的研究尚未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種一步柱層析即可得到山豆根中具異戊烯基黃酮部位的分離富集方法，具有簡單、快速、成本較低的特點(diǎn)。為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:一種分離富集山豆根中具異戊烯基黃酮部位的方法，包括如下步驟:使山豆根的乙醇提取液通過大孔吸附樹脂進(jìn)行柱色譜分離，所述大孔吸附樹脂為大孔吸附樹脂DlOl或大孔吸附樹脂AB-8，依次用40%-50%乙醇、80%-95%乙醇洗脫，收集80%_95%乙醇洗脫液，濃縮至浸膏狀，干燥得到山豆根中具異戊烯基黃酮部位。本發(fā)明所述的山豆根的乙醇提取液是以山豆根藥材為原料，以乙醇為提取試劑，通過常規(guī)提取方法獲得，其中控制山豆根的乙醇提取液中的乙醇濃度為20%_40%。本發(fā)明具體推薦所述的山豆根的乙醇提取液通過如下方法獲得:將山豆根藥材粉碎，加入8 20倍的70%-95%乙醇(優(yōu)選為95%乙醇)，回流提取，提取液過濾，取濾液濃縮至乙醇濃度為20%-40%，即得山豆根的乙醇提取液。作為優(yōu)選，將山豆根藥材粉碎至4(Γ200目。作為優(yōu)選，回流提取2 3次，每次6(Γ90分鐘，以充分提取山豆根中的有效成分。作為優(yōu)選，柱色譜分離過程中，用40%_50%乙醇或80%_95%乙醇洗脫時(shí)，每個(gè)濃度沖洗8 10個(gè)保留體積。作為優(yōu)選，柱色譜分離過程中，先用50%乙醇洗脫，再用90%乙醇洗脫。

本發(fā)明具體推薦所述的分離富集山豆根中具異戊烯基黃酮部位的方法按照如下步驟進(jìn)行:
(I)將山豆根藥材粉碎，加入8^20倍的70%_95%乙醇，回流提取，過濾，取濾液濃縮至乙醇濃度為20%-40%，得到山豆根的乙醇提取液；(2)將山豆根的乙醇提取液通過大孔吸附樹脂，依序用40%_50%乙醇、80%_95%乙醇洗脫，每個(gè)濃度沖洗8 10個(gè)保留體積，收集80%-95%乙醇洗脫液；(3)將步驟(2)獲得的80%_95%乙醇洗脫液減壓濃縮至浸膏狀，經(jīng)真空干燥或冷凍干燥成干粉，即得山豆根中具異戊烯基黃酮部位。本發(fā)明進(jìn)一步推薦所述的分離富集山豆根中具異戊烯基黃酮部位的方法按照如下步驟進(jìn)行:(I)將山豆根藥材粉碎，加入8^20倍的95%乙醇，回流提取2 3次，每次6(Γ90分鐘，過濾，取濾液濃縮至乙醇濃度為20%-40%，得到山豆根的乙醇提取液；(2)將山豆根的乙醇提取液通過大孔吸附樹脂，依序用50%乙醇、90%乙醇洗脫，每個(gè)濃度沖洗8 10個(gè)保留體積，收集90%乙醇洗脫液；(3)將步驟(2)獲得的90%乙醇洗脫液減壓濃縮至浸膏狀，經(jīng)真空干燥或冷凍干燥成干粉，即得山豆根中具異戊烯基黃酮部位。本發(fā)明中的乙醇濃度均為體積濃度。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在:`
(I)本發(fā)明所述的方法采用高濃度乙醇提取，大孔吸附樹脂分離富集的工藝簡單，高效，過程簡便，目標(biāo)明確，適合工業(yè)生產(chǎn)； ( 2 )本發(fā)明整個(gè)工藝過程中，除使用乙醇外，未帶入其他外源物質(zhì)，并且在減壓濃縮過程中可除去；未使用其它任何毒性有機(jī)溶劑，安全、環(huán)保；(3)本發(fā)明所用樹脂均可再生并重復(fù)使用，有利于降低工藝的成本。


圖1為山豆根中具異戊烯基黃酮對(duì)照品的HPLC圖譜；圖2為實(shí)施例1大孔吸附樹脂50%乙醇洗脫液的HPLC圖譜；圖3是實(shí)施例1中大孔吸附樹脂90%乙醇洗脫液的HPLC圖譜；圖4為實(shí)施例1中山豆根中具異戊烯基黃酮部位的HPLC圖譜。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于此:本發(fā)明制得的具異戊烯基黃酮部位的檢測(cè)采用高效液相色譜-示差折光檢測(cè)法和碘化鉍鉀顯色劑進(jìn)行檢測(cè)，色譜分析條件如下:儀器:高效液相色譜儀(Agilentl260四元液相色譜，安捷倫科技有限公司)色譜柱:Eclipse父013-(]18色譜柱(250\4.6 mm, 5 Mm, Agilent) ;Zorbax SB C18保護(hù)柱(12.5X4.6 mm, 5 Mm, Agilent)；流動(dòng)相:乙腈(A) -0.03%甲酸(B);流速:1.0mL.mirf1 ；檢測(cè)波長:280nm；
柱溫:40°C;進(jìn)樣量:20yL;洗脫梯度表
權(quán)利要求
1.一種分離富集山豆根中具異戊烯基黃酮部位的方法，其特征在于所述方法包括如下步驟:使山豆根的乙醇提取液通過大孔吸附樹脂進(jìn)行柱色譜分離，所述大孔吸附樹脂為大孔吸附樹脂DlOl或大孔吸附樹脂AB-8，依次用40%-50%乙醇、80%_95%乙醇洗脫，收集80%-95%乙醇洗脫液，濃縮至浸膏狀，干燥得到山豆根中具異戊烯基黃酮部位。
2.按權(quán)利要求1所述的分離富集山豆根中具異戊烯基黃酮部位的方法，其特征在于所述的山豆根的乙醇提取液通過如下方法獲得:將山豆根藥材粉碎,加入8^20倍的70%-95%乙醇，回流提取，提取液過濾，取濾液濃縮至乙醇濃度為20%-40%，即得山豆根的乙醇提取液。
3.按權(quán)利要求2所述的分離富集山豆根中具異戊烯基黃酮部位的方法，其特征在于:回流提取2 3次，每次6(Γ90分鐘。
4.按權(quán)利要求3所述的分離富集山豆根中具異戊烯基黃酮部位的方法，其特征在于山豆根藥材用95%乙醇提取。
5.按權(quán)利要求f4之一所述的分離富集山豆根中具異戊烯基黃酮部位的方法，其特征在于:用40%-50%乙醇或80%-95%乙醇洗脫時(shí)，每個(gè)濃度沖洗8 10個(gè)保留體積。
6.按權(quán)利要求f4之一所述的分離富集山豆根中具異戊烯基黃酮部位的方法，其特征在于:柱色譜分離過程中，先用50%乙醇洗脫，再用90%乙醇洗脫。
7.按權(quán)利要求1所述的分離富集山豆根中具異戊烯基黃酮部位的方法，其特征在于所述方法按照如下步驟進(jìn)行: (1)將山豆根藥材粉碎，加入8^20倍的70%-95%乙醇，回流提取，過濾，取濾液濃縮至乙醇濃度為20%-40%，得到山豆根的乙醇提取液； (2)將山豆根的乙醇提取液通過大孔吸附樹脂，依序用40%-50%乙醇、80%-95%乙醇洗脫，每個(gè)濃度沖洗8 10個(gè)保留體積，收集80%-95%乙醇洗脫液； (3)將步驟(2)獲得的80%-95%乙醇洗脫液減壓濃縮至浸膏狀，經(jīng)真空干燥或冷凍干燥成干粉，即得山豆根中具異戊烯基黃酮部位。
8.按權(quán)利要求1所述的分離富集山豆根中具異戊烯基黃酮部位的方法，其特征在于所述方法按照如下步驟進(jìn)行: (1)將山豆根藥材粉碎，加入8^20倍的95%乙醇，回流提取2 3次，每次6(Γ90分鐘，過濾，取濾液濃縮至乙醇濃度為20%-40%，得到山豆根的乙醇提取液； (2)將山豆根的乙醇提取液通過大孔吸附樹脂，依序用50%乙醇、90%乙醇洗脫，每個(gè)濃度沖洗8 10個(gè)保留體積，收集90%乙醇洗脫液； (3)將步驟(2)獲得的90%乙醇洗脫液減壓濃縮至浸膏狀，經(jīng)真空干燥或冷凍干燥成干粉，即得山豆根中具異戊烯基黃酮部位。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種分離富集山豆根中具異戊烯基黃酮部位的方法，所述方法包括如下步驟使山豆根的乙醇提取液通過大孔吸附樹脂進(jìn)行柱色譜分離，所述大孔吸附樹脂為大孔吸附樹脂D101或大孔吸附樹脂AB-8，依次用40%-50%乙醇、80%-95%乙醇洗脫，收集80%-95%乙醇洗脫液，濃縮至浸膏狀，干燥得到山豆根中具異戊烯基黃酮部位。本發(fā)明所述的方法采用高濃度乙醇提取，大孔吸附樹脂分離富集的工藝簡單，高效，過程簡便，目標(biāo)明確，適合工業(yè)生產(chǎn)。
文檔編號(hào)A61K36/489GK103083392SQ20121058023
公開日2013年5月8日 申請(qǐng)日期2012年12月27日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月27日
發(fā)明者顏繼忠, 李行諾, 陳垚 申請(qǐng)人:浙江工業(yè)大學(xué)