本發(fā)明涉及抗糖尿病糖脂代謝紊亂中藥開發(fā)，具體設(shè)計王不留行黃酮苷在制備抗糖尿病糖脂代謝紊亂藥物中的應(yīng)用，屬中藥藥物開發(fā)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

糖尿病是是常見的代謝性疾病之一，也是影響人類健康的非傳染性慢性疾病之一。糖尿病的病理特征主要是由于胰島功能受損，或者靶細(xì)胞對胰島素的敏感性下降引起機體自身糖脂代謝紊亂，臨床上根據(jù)病因常將糖尿病分為1型糖尿病和2型糖尿病。2014年國際糖尿病聯(lián)盟調(diào)查結(jié)果表明全世界約有3.87億糖尿病患者，預(yù)計2035年糖尿病患病人數(shù)將達(dá)到6億。中華醫(yī)學(xué)會糖尿病學(xué)分會2012年調(diào)查顯示我國成人糖尿病患病人數(shù)達(dá)到9240萬，并且發(fā)病人數(shù)逐年攀升，2型糖尿病的發(fā)病率超過90％，我國可能已經(jīng)是世界上糖尿病患病人數(shù)最多的國家。無論發(fā)展中國家還是發(fā)達(dá)國家，糖尿病患者的數(shù)量都明顯增加。隨著超重和肥胖青少年人數(shù)的不斷增多，2型糖尿病可能會發(fā)生于青春前期的兒童。糖尿病引發(fā)的心、腦、腎、血管、神經(jīng)系統(tǒng)、眼底病變等并發(fā)癥，致殘率被致死率較高，糖尿病其并發(fā)癥給患者、家庭以及社會帶來沉重經(jīng)濟(jì)和精神負(fù)擔(dān)，糖尿病以及其他慢性非傳染性心血管疾病的預(yù)防和治療將成為21世紀(jì)醫(yī)療衛(wèi)生事業(yè)的主要挑戰(zhàn)。

王不留行為石竹科植物麥藍(lán)菜Vaccaria Segetalis(Neck.)Garcke的干燥成熟種子，是一種常見的中藥，具有活血通經(jīng)、下乳消腫等功效。王不留行主要含有刺桐堿、三萜皂苷、黃酮苷、類脂、環(huán)肽、脂肪酸和單糖等成分，過去實驗室研究發(fā)現(xiàn)王不留行黃酮苷具有促進(jìn)血管新生，加快開放性創(chuàng)傷的愈合速度，對抗高糖和氧化應(yīng)激的引起的內(nèi)皮細(xì)胞損傷，提示王不留行黃酮苷可能具有心血管保護(hù)作用，尤其是目前尚未有報道王不留行黃酮苷在制備抗糖尿病藥物中的作用。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的是為現(xiàn)有的抗糖尿病藥物制備技術(shù)領(lǐng)域提供一種新的途徑，提供王不留行黃酮苷在抗糖尿病藥物中的作用，因此本研究提供的技術(shù)方法是將王不留行黃酮苷應(yīng)用于制備治療糖尿病的藥物。

本發(fā)明的有益效果是：王不留行黃酮苷改善糖尿病的血糖和血脂，將王不留行黃酮苷應(yīng)用到抗糖尿病相關(guān)藥物的開發(fā)中，以制備更好的抗糖尿病的新思路，不僅拓展了抗糖尿病藥物的選擇，也為我國抗糖尿病中藥的篩選提供的新的策略。

附圖說明

圖1：王不留行黃酮苷對糖尿病小鼠血糖的影響。

圖2：王不留行黃酮苷對糖尿病小鼠血清甘油三酯(TG)、總膽固醇(T-CHO)，低密度脂蛋白(LDL)的影響。

圖3：王不留行黃酮苷對糖尿病小鼠肝臟病理的影響。

實施例1 2型糖尿病模型小鼠的制備

糖尿病模型小鼠制作方法：參考國內(nèi)外權(quán)威期刊，我們采用鏈脲霉菌(STZ)聯(lián)合高脂飲食(HFD)誘導(dǎo)2型糖尿病模型，將6周齡的C57BL/6J小鼠禁食4小時后一次性腹腔注射小劑量STZ(120mg/kg)，正常對照組注射溶媒作為對照。3周后，糖尿病模型組開始給予高脂飲食(21.8kJ/g,脂肪含量60％)直至實驗完成，對照組始終給予正常飲食(14.7kJ/g,脂肪含量13％)。

實施例2實驗分組及王不留行黃酮苷干預(yù)

將6周齡的C57BL/6J小鼠隨機分三組：

(1)正常小鼠-生理鹽水組：為正常對照組，始終給予正常飲食和飲水，5周后給予生理鹽水皮下灌注4周作為王不留行黃酮苷(Vaccarin)的對照；

(2)糖尿病-生理鹽水組采用鏈脲霉菌(STZ)聯(lián)合高脂飲食(HFD)方法引起糖尿病，5周后給予生理鹽水(saline)腹腔注射4周作為王不留行黃酮苷(Vaccarin)的對照；

(3)糖尿病-黃酮苷低劑量組(1mg/kg)：采用鏈脲霉菌(STZ)聯(lián)合高脂飲食(HFD)誘導(dǎo)2型糖尿病模型，5周后給予王不留行黃酮苷(Vaccarin)腹腔注射4周。

(4)糖尿病-黃酮苷低劑量組(10mg/kg)：采用鏈脲霉菌(STZ)聯(lián)合高脂飲食(HFD)誘導(dǎo)2型糖尿病模型，5周后給予王不留行黃酮苷(Vaccarin)腹腔注射4周。

實施例3空腹血糖測定

測量空腹血糖需將小鼠禁食過夜，第二天用血糖儀經(jīng)尾靜脈采血測定。

實施例4血清脂質(zhì)代謝指標(biāo)測定

采用生化分析試劑盒測定血清甘油三酯(TG)、總膽固醇(TCH)和低密度脂蛋白(LDL)。

實施例5肝臟蘇木素伊紅(HE)染色

戊巴比妥鈉麻醉小鼠，打開胸腔、暴露心臟，經(jīng)左心室插管至升主動脈，夾壁腹主動脈，左心耳剪開一小出口，快速灌注0.01M PBS(37℃)沖洗至流出液清亮后再灌注預(yù)冷(4℃)的4％多聚甲醛固定(先快后慢，在大鼠肢體伸展后減慢速度)。取出肝臟，置于4℃的4％多聚甲醛后固定24h，脫水，石蠟包埋，切片，進(jìn)行常規(guī)蘇木素伊紅(HE)染色。

實驗結(jié)果如附圖1至3中所示：

(1)王不留行黃酮苷(Vaccarin)腹腔注射干預(yù)后對空腹血糖水平的影響：

與對照組(Control)相比，模型組(STZ/HFD)C57BL/6小鼠血糖顯著升高，而給予不同劑量的王不留行黃酮苷組顯著降低血糖升高，詳見圖1。

數(shù)據(jù)均以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，每組樣本為7，P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)差異，***與Control組相比，P<0.001；_$$$與STZ/HFD組相比，P<0.001。Control，對照組；STZ/HFD，高血糖模型組；STZ/HFD-Vaccarin1，給予王不留行黃酮苷的劑量為1mg/kg；STZ/HFD-Vaccarin1，給予王不留行黃酮苷的劑量為10mg/kg。

(2)王不留行黃酮苷(Vaccarin)腹腔注射干預(yù)后對血清脂質(zhì)代謝指標(biāo)的影響：

與對照組(Control)相比，模型組(STZ/HFD)C57BL/6小鼠的TG、TCH、LDL-C顯著升高，而給予不同劑量的王不留行黃酮苷組顯著降低上述代謝指標(biāo)的水平，詳見圖2。

數(shù)據(jù)均以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，每組樣本為7，P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)差異，***與Control組相比，P<0.001；_$$與STZ/HFD組相比，P<0.01；_$$$與STZ/HFD組相比，P<0.001。Control，對照組；STZ/HFD，高血糖模型組；STZ/HFD-Vaccarin1，給予王不留行黃酮苷的劑量為1mg/kg；STZ/HFD-Vaccarin1，給予王不留行黃酮苷的劑量為10mg/kg。

(3)王不留行黃酮苷(Vaccarin)腹腔注射干預(yù)后對肝臟病理病變的影響：

與對照組(Control)相比，模型組(STZ/HFD)C57BL/6小鼠肝細(xì)胞排列紊亂，肝細(xì)胞體積增大，密度不均，偶見脂肪變性，而給予不同劑量的王不留行黃酮苷組上述改變均有不同程度的減輕，詳見圖3。