本發(fā)明屬于中藥，具體涉及一種治療糖尿病及其并發(fā)癥的藥物組合物與其制備工藝及制劑。
背景技術：
：糖尿病是一組由于胰島素活性重度缺乏及升糖激素不適當升高，導致血糖過高，而引起糖、脂肪和蛋白質(zhì)代謝紊亂，以致機體水、電解質(zhì)和酸堿平衡失調(diào)等多病因引起的以慢性高血糖為特征的終身性代謝性疾病。長期血糖增高，大血管、微血管受損并危及心、腦、腎、周圍神經(jīng)、眼睛、足等，據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計，糖尿病并發(fā)癥高達100多種，是目前已知并發(fā)癥最多的一種疾病。糖尿病死亡者有一半以上是心腦血管所致，10％是腎病變所致。因糖尿病截肢的患者是非糖尿病的10～20倍。臨床數(shù)據(jù)顯示，糖尿病發(fā)病后10年左右，將有30％～40％的患者至少會發(fā)生一種并發(fā)癥，且并發(fā)癥一旦產(chǎn)生，藥物治療很難逆轉，因此強調(diào)盡早預防糖尿病并發(fā)癥。目前治療糖尿病西藥較多，如磺脲類藥物、雙胍類降糖藥、α葡萄糖苷酶抑制劑、胰島素增敏劑、格列奈類胰島素促分泌劑及胰島素等，降糖西藥在降低血糖方面具有較好的效果，西藥降血糖藥不能治療糖尿病并發(fā)癥，且副作用大，其中典型共同的副作用為低血糖。α-糖苷酶抑制劑、雙胍類及胰島素增敏劑單獨使用一般不會引起低血糖，但與其他藥物連用時仍可能發(fā)生?；颊哂锌赡軙霈F(xiàn)強烈空腹感、出冷汗、全身無力、心悸、手腳發(fā)抖、眼睛發(fā)花、頭疼、發(fā)呆等現(xiàn)象，嚴重時會發(fā)生昏迷。應口服碳水化合物或含葡萄糖飲料，嚴重時應立即注射葡萄糖。治療糖尿病必須采取中、西醫(yī)并重的方法。西醫(yī)的特點是療效強而明確，尤其是降糖作用，中醫(yī)中藥可以明顯改善病人臨床癥狀，如有的患者血糖控制已很好，尿糖已陰性，卻仍感到口干又不欲飲，疲乏無力，西醫(yī)不好解釋這種現(xiàn)象，也沒什么特殊的方法治療。而中醫(yī)則認為降糖西藥解決了“標”的問題，沒有改變腎陰虛的“本”，主張用補腎、養(yǎng)陰、清熱、利濕等方法治本。如用六味地黃丸類藥物，確實能取得良好的效果。中醫(yī)、中藥的另一大優(yōu)勢就是治療并發(fā)癥，對糖尿病的慢性并發(fā)癥(如輕中度腎臟或眼底病變、糖尿病神經(jīng)病變等)，中醫(yī)則可通過辨證論治，采取全身綜合性治療，達到滿意的療效。部分中藥還有輔助降糖作用。病情較輕的2型糖尿病病人，可以在飲食治療和體育鍛煉的基礎上，單純服用中藥治療；對于病情重一些的糖尿病病人，可在西藥的基礎上加用中藥治療，既可以達到迅速降糖的目的，又可綜合調(diào)理病人的全身的功能狀態(tài)。目前治療糖尿病及其并發(fā)癥的產(chǎn)品五黃養(yǎng)陰顆粒主要成分為黃連、紅芪、姜黃、地黃、黃芩，均是利用西南地區(qū)地道藥材制成，也是貴州、重慶當?shù)厣贁?shù)民族尤其是苗族常用的苗藥。黃連苗語為Wabgeleencnaemx(音譯為王連莖)、紅芪苗語為Douthxaok(音譯為豆淆)、姜黃苗語為Vohhad(音譯為窩哈)、地黃苗語為Hfeexdab(音譯為肥嗒)、黃芩苗語為Hgeilghab(音譯為額嘎)，通過將黃連、姜黃乙醇提取，藥渣同紅芪、地黃水提，黃芩單獨醇提的方法制備而得，該工藝簡單，對提取物雜質(zhì)多，有效成分少，對于長期服藥糖尿病人而言，長期服藥依從性差。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明提供了一種治療糖尿病及其并發(fā)癥的藥物組合物與其制備工藝及制劑。本發(fā)明是由以下技術方案實現(xiàn)的：本發(fā)明所述的一種治療糖尿病及其并發(fā)癥的藥物組合物，按照重量組分計算，由苗藥原料黃連(苗語：王連莖)220～330份，紅芪(苗語：豆淆)、地黃(苗語：肥嗒)、姜黃(苗語：窩哈)各660～990份，黃芩(苗語：額嘎)440～660份及輔料制成，其活性成分為：黃連和姜黃提取物，紅芪和地黃提取物，黃芩提取物。優(yōu)選地，本發(fā)明一種治療糖尿病及其并發(fā)癥的藥物組合物，按照重量組分計算，由苗藥原料黃連(苗語：王連莖)277份，紅芪(苗語：豆淆)、地黃(苗語：肥嗒)、姜黃(苗語：窩哈)各833份，黃芩(苗語：額嘎)555份制成。本發(fā)明所述的一種治療糖尿病及其并發(fā)癥的藥物組合物，制備方法為：(1)分別將黃連、紅芪、地黃、姜黃、黃芩在干燥后粉碎成粗粉；(2)黃連和姜黃送入超臨界萃取釜中，以二氧化碳萃取流體，在溫度保持30～45℃、壓力為20～45MPa條件下萃取3～5小時，進行第一次分離，得到揮發(fā)油和首次粗提物；藥渣繼續(xù)進入分離釜進行二次提取，加入無水乙醇夾帶劑，在溫度45～60℃、壓力15～30MPa，萃取3～5小時，得萃取物和二次粗提物；混合首次粗提物和二次粗提物，濃縮至原體積的1/2，用無機陶瓷膜進行過濾，過濾速度為8～12L/h,收集濾液，濃縮至相對密度在60℃時為1.10～1.15，真空干燥，粉碎，合并上述揮發(fā)油、萃取物和提取物，混勻，即得黃連和姜黃提取物；(3)黃芩用4-8倍量40％-70％乙醇回流提取2-4次，每次0.5-2小時，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至原體積的1/2，用無機陶瓷膜進行過濾，過濾速度為8～12L/h,收集濾液，濃縮至相對密度在60℃時為1.10～1.15，真空干燥，粉碎，得黃芩提取物；(4)紅芪和地黃水煎煮，加入5～10倍量的水，提取2～4次，每次2～4小時，合并提取液，濾過，得水提液和藥渣；藥渣用4-8倍量40％-70％乙醇回流提取2-4次，每次0.5-2小時，合并提取液，濾過，得醇提液；與上述水提液混合，濃縮至原體積的1/2，用無機陶瓷膜進行過濾，過濾速度為8～12L/h,收集濾液，濃縮至相對密度在60℃時為1.10～1.15，真空干燥，粉碎，即得紅芪和地黃提取物；(5)將步驟(2)至(4)所得提取物混合，即得藥物組合物。優(yōu)選地，一種治療糖尿病及其并發(fā)癥的藥物組合物，制備方法為：(1)分別將黃連、紅芪、地黃、姜黃、黃芩在干燥后粉碎成粗粉；(2)黃連和姜黃送入超臨界萃取釜中，以二氧化碳萃取流體，在溫度保持35℃、壓力為30MPa條件下萃取4小時，進行第一次分離，得到揮發(fā)油和首次粗提物；藥渣繼續(xù)進入分離釜進行二次提取，加入無水乙醇夾帶劑，在溫度50℃、壓力25MPa，萃取4小時，得萃取物和二次粗提物；混合首次粗提物和二次粗提物，濃縮至原體積的1/2，用無機陶瓷膜進行過濾，過濾速度為10L/h,收集濾液，濃縮至相對密度在60℃時為1.10～1.15，真空干燥，粉碎，合并上述揮發(fā)油、萃取物，混勻，即得黃連和姜黃提取物；(3)黃芩用6倍量60％乙醇回流提取3次，每次1小時，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至原體積的1/2，用無機陶瓷膜進行過濾，過濾速度為10L/h,收集濾液，濃縮至相對密度在60℃時為1.10～1.15，真空干燥，粉碎，得黃芩提取物；(4)紅芪和地黃水煎煮，加入7倍量的水，提取3次，每次3小時，合并提取液，濾過，得水提液和藥渣；藥渣用6倍量60％乙醇回流提取3次，每次1小時，合并提取液，濾過，得醇提液；與上述水提液混合，濃縮至原體積的1/2，用無機陶瓷膜進行過濾，過濾速度為10L/h,收集濾液，濃縮至相對密度在60℃時為1.10～1.15，真空干燥，粉碎，即得紅芪和地黃提取物；(5)將步驟(2)至(4)所得提取物混合，即得藥物組合物。本發(fā)明提供的一種治療糖尿病及其并發(fā)癥的組合物為按照上述的制備方法制得的治療糖尿病及其并發(fā)癥的藥物組合物。本發(fā)明還提供了一種治療糖尿病及其并發(fā)癥的藥物制劑，它含有上述制備方法而得的的藥物組合物作藥物的藥效組分的制劑。本發(fā)明所述的藥物制劑，它是片、膠囊、顆粒、丸劑、口服液、注射劑。本發(fā)明所述的治療糖尿病及其并發(fā)癥的藥物制劑的方法，在所述的步驟基礎上，將制得的藥物組合物減壓干燥得干膏，粉碎，然后添加藥學上可接受的輔料制成劑型。本發(fā)明提供了上述的治療糖尿病及其并發(fā)癥的膠囊的方法，在上述的步驟基礎上，將制得的藥物組合物減壓干燥得干膏，粉碎，過100目篩，混勻，再過100目篩，用80％乙醇制成軟材，過14目篩，制粒，于60℃左右干燥，整粒，裝膠囊。本發(fā)明提供了上述的治療糖尿病及其并發(fā)癥的片劑的方法，在上述的步驟基礎上，將制得的藥物組合物減壓干燥得干膏，粉碎，充分混勻，干燥，粉碎，混勻，制粒，用16目篩整粒，加藥物提取物0.5-2％重量的硬脂酸鎂為潤滑劑，加藥物提取物5-20％重量的微晶纖維素、可壓性淀粉充分混勻，壓制成片，包薄膜衣，即得片劑。本發(fā)明提供了上述的治療糖尿病及其并發(fā)癥的顆粒的方法，在上述的步驟基礎上，將制得的藥物組合物減壓干燥得干膏，粉碎，混勻，再加入糊精，粉碎，混勻，制粒，干燥，整粒，包裝即得。本發(fā)明提供了上述的治療糖尿病及其并發(fā)癥的滴丸的方法，在上述的步驟基礎上，將制得的藥物組合物減壓干燥得干膏，粉碎，混勻，加入熔融狀態(tài)的聚乙二醇M6000中，攪拌，使其分散均勻，保溫備用；將混合均勻的熔融基質(zhì)至于保溫裝置滴丸機中并保持基質(zhì)于攪拌狀態(tài)，開機滴注，用液體石蠟或硅油做滴丸成型的冷卻劑，將制成的滴丸從冷卻劑中取出，用少量無水乙醇進行快速清洗后置于攤盤中于30～40℃條件下鼓風干燥，揀丸，上光，包裝即得。本發(fā)明提供了上述的治療糖尿病及其并發(fā)癥的注射液的方法，在上述的步驟基礎上，將制得的藥物組合物減壓干燥得干膏，粉碎，混勻，過80目篩，加入注射用水溶解,灌封，于115℃下熱壓滅菌2次以上，每次30分鐘，即得。本發(fā)明提供了上述的治療糖尿病及其并發(fā)癥的口服液的方法，在上述的步驟基礎上，將制得的藥物組合物減壓干燥得干膏，加入矯味劑環(huán)己基氨基磺酸鈉、檸檬酸鈉、海藻酸鈉中一種或多種的混合物，保鮮劑苯甲酸、甘草酸、迷迭香酸中一種或多種的混合物，和干膏同等重量的蔗糖混合均勻，得到混合物，加入混合物重量15～35倍的水，混合均勻，煮沸，最后采用240目濾布過濾即得口服液。本發(fā)明的有益效果為，在現(xiàn)有技術基礎上，通過改進工藝技術，采用超臨界二氧化碳方法提取揮發(fā)油，有效提取黃連、姜黃中揮發(fā)油成分，利用無機陶瓷膜過濾技術，純化提取物，降低雜質(zhì)含量，紅芪和地黃采用醇提和水提相結合工藝，充分提取有效成分，與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明克服了有效成分浸出率低，且溶出雜質(zhì)多的缺點，提高了藥品質(zhì)量和療效；與原制劑相比，本發(fā)明制劑治療糖尿病及其并發(fā)癥療效比較明顯，制劑安全，劑型多樣化，便于醫(yī)療需要。具體實施方式實施例1處方：黃連220g，紅芪、地黃、姜黃各660g，黃芩440g制備方法：(1)分別將黃連、紅芪、地黃、姜黃、黃芩在干燥后粉碎成粗粉；(2)黃連和姜黃送入超臨界萃取釜中，以二氧化碳萃取流體，在溫度保持30℃、壓力為20MPa條件下萃取3小時，進行第一次分離，得到揮發(fā)油和首次粗提物；藥渣繼續(xù)進入分離釜進行二次提取，加入無水乙醇夾帶劑，在溫度45℃、壓力15MPa，萃取3小時，得萃取物和二次粗提物；混合首次粗提物和二次粗提物，濃縮至原體積的1/2，用無機陶瓷膜進行過濾，過濾速度為8L/h,收集濾液，濃縮至相對密度在60℃時為1.10～1.15，真空干燥，粉碎，合并上述揮發(fā)油、萃取物和提取物，混勻，即得黃連和姜黃提取物；(3)黃芩用4倍量40％乙醇回流提取2次，每次0.5小時，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至原體積的1/2，用無機陶瓷膜進行過濾，過濾速度為8L/h,收集濾液，濃縮至相對密度在60℃時為1.10～1.15，真空干燥，粉碎，得黃芩提取物；(4)紅芪和地黃水煎煮，加入5倍量的水，提取2次，每次2小時，合并提取液，濾過，得水提液和藥渣；藥渣用4倍量40％％乙醇回流提取2次，每次0.5小時，合并提取液，濾過，得醇提液；與上述水提液混合，濃縮至原體積的1/2，用無機陶瓷膜進行過濾，過濾速度為8L/h,收集濾液，濃縮至相對密度在60℃時為1.10～1.15，真空干燥，粉碎，即得紅芪和地黃提取物；(5)將步驟(2)至(4)所得提取物混合，即得藥物組合物。實施例2處方：黃連277g，紅芪、地黃、姜黃各833g，黃芩555g制備方法：(1)分別將黃連、紅芪、地黃、姜黃、黃芩在干燥后粉碎成粗粉；(2)黃連和姜黃送入超臨界萃取釜中，以二氧化碳萃取流體，在溫度保持35℃、壓力為30MPa條件下萃取4小時，進行第一次分離，得到揮發(fā)油和首次粗提物；藥渣繼續(xù)進入分離釜進行二次提取，加入無水乙醇夾帶劑，在溫度50℃、壓力25MPa，萃取4小時，得萃取物和二次粗提物；混合首次粗提物和二次粗提物，濃縮至原體積的1/2，用無機陶瓷膜進行過濾，過濾速度為10L/h,收集濾液，濃縮至相對密度在60℃時為1.10～1.15，真空干燥，粉碎，合并上述揮發(fā)油、萃取物，混勻，即得黃連和姜黃提取物；(3)黃芩用6倍量60％乙醇回流提取3次，每次1小時，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至原體積的1/2，用無機陶瓷膜進行過濾，過濾速度為10L/h,收集濾液，濃縮至相對密度在60℃時為1.10～1.15，真空干燥，粉碎，得黃芩提取物；(4)紅芪和地黃水煎煮，加入7倍量的水，提取3次，每次3小時，合并提取液，濾過，得水提液和藥渣；藥渣用6倍量60％乙醇回流提取3次，每次1小時，合并提取液，濾過，得醇提液；與上述水提液混合，濃縮至原體積的1/2，用無機陶瓷膜進行過濾，過濾速度為10L/h,收集濾液，濃縮至相對密度在60℃時為1.10～1.15，真空干燥，粉碎，即得紅芪和地黃提取物；(5)將步驟(2)至(4)所得提取物混合，即得藥物組合物。實施例3處方：黃連330g，紅芪、地黃、姜黃各990g，黃芩660g制備方法：(1)分別將黃連、紅芪、地黃、姜黃、黃芩在干燥后粉碎成粗粉；(2)黃連和姜黃送入超臨界萃取釜中，以二氧化碳萃取流體，在溫度保持45℃、壓力為45MPa條件下萃取5小時，進行第一次分離，得到揮發(fā)油和首次粗提物；藥渣繼續(xù)進入分離釜進行二次提取，加入無水乙醇夾帶劑，在溫度60℃、壓力30MPa，萃取5小時，得萃取物和二次粗提物；混合首次粗提物和二次粗提物，濃縮至原體積的1/2，用無機陶瓷膜進行過濾，過濾速度為12L/h,收集濾液，濃縮至相對密度在60℃時為1.10～1.15，真空干燥，粉碎，合并上述揮發(fā)油、萃取物和提取物，混勻，即得黃連和姜黃提取物；(3)黃芩用4-8倍量70％乙醇回流提取4次，每次2小時，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至原體積的1/2，用無機陶瓷膜進行過濾，過濾速度為12L/h,收集濾液，濃縮至相對密度在60℃時為1.10～1.15，真空干燥，粉碎，得黃芩提取物；(4)紅芪和地黃水煎煮，加入10倍量的水，提取4次，每次4小時，合并提取液，濾過，得水提液和藥渣；藥渣用8倍量70％乙醇回流提取4次，每次2小時，合并提取液，濾過，得醇提液；與上述水提液混合，濃縮至原體積的1/2，用無機陶瓷膜進行過濾，過濾速度為12L/h,收集濾液，濃縮至相對密度在60℃時為1.10～1.15，真空干燥，粉碎，即得紅芪和地黃提取物；(5)將步驟(2)至(4)所得提取物混合，即得藥物組合物。實施例4處方：黃連220g，紅芪、地黃、姜黃各990g，黃芩440g制備方法：(1)分別將黃連、紅芪、地黃、姜黃、黃芩在干燥后粉碎成粗粉；(2)黃連和姜黃送入超臨界萃取釜中，以二氧化碳萃取流體，在溫度保持30℃、壓力為45MPa條件下萃取5小時，進行第一次分離，得到揮發(fā)油和首次粗提物；藥渣繼續(xù)進入分離釜進行二次提取，加入無水乙醇夾帶劑，在溫度45℃、壓力30MPa，萃取3小時，得萃取物和二次粗提物；混合首次粗提物和二次粗提物，濃縮至原體積的1/2，用無機陶瓷膜進行過濾，過濾速度為12L/h,收集濾液，濃縮至相對密度在60℃時為1.10～1.15，真空干燥，粉碎，合并上述揮發(fā)油、萃取物和提取物，混勻，即得黃連和姜黃提取物；(3)黃芩用4-8倍量70％乙醇回流提取2次，每次0.5小時，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至原體積的1/2，用無機陶瓷膜進行過濾，過濾速度為12L/h,收集濾液，濃縮至相對密度在60℃時為1.10～1.15，真空干燥，粉碎，得黃芩提取物；(4)紅芪和地黃水煎煮，加入5倍量的水，提取2次，每次4小時，合并提取液，濾過，得水提液和藥渣；藥渣用8倍量70％乙醇回流提取4次，每次2小時，合并提取液，濾過，得醇提液；與上述水提液混合，濃縮至原體積的1/2，用無機陶瓷膜進行過濾，過濾速度為12L/h,收集濾液，濃縮至相對密度在60℃時為1.10～1.15，真空干燥，粉碎，即得紅芪和地黃提取物；(5)將步驟(2)至(4)所得提取物混合，即得藥物組合物。實施例5處方：黃連330g，紅芪、地黃、姜黃各660g，黃芩660g制備方法：(1)分別將黃連、紅芪、地黃、姜黃、黃芩在干燥后粉碎成粗粉；(2)黃連和姜黃送入超臨界萃取釜中，以二氧化碳萃取流體，在溫度保持45℃、壓力為20MPa條件下萃取3小時，進行第一次分離，得到揮發(fā)油和首次粗提物；藥渣繼續(xù)進入分離釜進行二次提取，加入無水乙醇夾帶劑，在溫度60℃、壓力15MPa，萃取4小時，得萃取物和二次粗提物；混合首次粗提物和二次粗提物，濃縮至原體積的1/2，用無機陶瓷膜進行過濾，過濾速度為9L/h,收集濾液，濃縮至相對密度在60℃時為1.10～1.15，真空干燥，粉碎，合并上述揮發(fā)油、萃取物和提取物，混勻，即得黃連和姜黃提取物；(3)黃芩用4-8倍量50％乙醇回流提取3次，每次1小時，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至原體積的1/2，用無機陶瓷膜進行過濾，過濾速度為10L/h,收集濾液，濃縮至相對密度在60℃時為1.10～1.15，真空干燥，粉碎，得黃芩提取物；(4)紅芪和地黃水煎煮，加入6倍量的水，提取3次，每次34小時，合并提取液，濾過，得水提液和藥渣；藥渣用7倍量60％乙醇回流提取4次，每次1.5小時，合并提取液，濾過，得醇提液；與上述水提液混合，濃縮至原體積的1/2，用無機陶瓷膜進行過濾，過濾速度為9L/h,收集濾液，濃縮至相對密度在60℃時為1.10～1.15，真空干燥，粉碎，即得紅芪和地黃提取物；(5)將步驟(2)至(4)所得提取物混合，即得藥物組合物。實施例6膠囊的制備方法:按實施例1基礎上，將制得的藥物組合物減壓干燥得干膏，粉碎，過100目篩，混勻，再過100目篩，用80％乙醇制成軟材，過14目篩，制粒，于60℃左右干燥，整粒，裝膠囊得膠囊劑。實施例7片劑的制備方法:在實施例2步驟基礎上，將制得的藥物組合物減壓干燥得干膏，粉碎，充分混勻，干燥，粉碎，混勻，制粒，用16目篩整粒，加藥物提取物1％重量的硬脂酸鎂為潤滑劑，加藥物提取物10％重量的微晶纖維素、可壓性淀粉充分混勻，壓制成片，包薄膜衣，即得片劑。實施例8顆粒的制備方法:在實施例3步驟基礎上，將制得的藥物組合物減壓干燥得干膏，粉碎，混勻，再加入糊精，粉碎，混勻，制粒，干燥，整粒，包裝即得。實施例9滴丸的制備方法:在實施例4步驟基礎上，將制得的藥物組合物減壓干燥得干膏，粉碎，混勻，加入熔融狀態(tài)的聚乙二醇M6000中，攪拌，使其分散均勻，保溫備用；將混合均勻的熔融基質(zhì)至于保溫裝置滴丸機中并保持基質(zhì)于攪拌狀態(tài)，開機滴注，用液體石蠟或硅油做滴丸成型的冷卻劑，將制成的滴丸從冷卻劑中取出，用少量無水乙醇進行快速清洗后置于攤盤中于30℃條件下鼓風干燥，揀丸，上光，包裝即得。實施例10注射液的制備方法:在實施例5步驟基礎上，將制得的藥物組合物減壓干燥得干膏，粉碎，混勻，過80目篩，加入注射用水溶解,灌封，于115℃下熱壓滅菌2次以上，每次30分鐘，即得。實施例11口服液的制備方法:在實施例2步驟基礎上，將制得的藥物組合物減壓干燥得干膏，加入矯味劑環(huán)己基氨基磺酸鈉、檸檬酸鈉、海藻酸鈉中一種或多種的混合物，保鮮劑苯甲酸、甘草酸、迷迭香酸中一種或多種的混合物，和干膏同等重量的蔗糖混合均勻，得到混合物，加入混合物重量15倍的水，混合均勻，煮沸，最后采用240目濾布過濾即得口服液。發(fā)明人對本發(fā)明藥物進行了藥理實驗研究，具體如下：1.實驗材料1.1儀器：拜安易AscensiaBrio血糖檢測儀及血糖試紙，德國拜耳(臺灣公司制造)，自動生化分析儀(日本希思美康)，DKZ-2型電熱恒溫振蕩水槽(上海精宏實驗設備有限公)，LDZ5-2型全自動離心機(北京醫(yī)用離心機廠)1.2試劑和藥物：鏈脲佐菌素(STZ)為美國SIGMA產(chǎn)品，由上海美季生物科技有限公司分裝，型號Sigma0130，臨用時用0.1mmol/lPH4.4檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液配成2％的STZ溶液；膽固醇(CHOL)，批號060815，由上海藍季科技發(fā)展公司分裝；膽酸鈉，批號：060915，意大利制造，上海藍季科技發(fā)展公司分裝；葡萄糖注射液，規(guī)格20ml：10g，批號200604182，由江蘇方強制藥廠生產(chǎn)；膽固醇(TCHO)、甘油三脂(TG)試劑盒，由上海容盛生物技術有限公司提供。受試藥物：實施例1-5制得的組合物，對照藥：五黃養(yǎng)陰顆粒，由重慶東田藥業(yè)有限公司提供1.3實驗動物及飼料Wistar大鼠，普通級，全雄，體重180±20g，由上海斯萊克實驗動物責任有限公司提供，生產(chǎn)許可證：SCXK(滬)2003-0003；南京中醫(yī)藥大學，實驗動物使用許可證：SCXK(蘇)2002-0053。普通鼠飼料，由南京中醫(yī)藥大學動物中心提供。高脂鼠飼料：55％基礎飼料，20％蔗糖，10％豬油，10％雞蛋，4％麻油，1％膽固醇，0.2％膽酸鈉構成。2.實驗方法2.1動物模型制備：參照文獻，以小劑量鏈脲佐菌素(STZ)加高糖-高脂飼料喂養(yǎng)，建立類似臨床2型糖尿病患者特征的，具有高體重、高血脂、糖耐量異常(糖尿病)特點的大鼠動物模型。將大鼠適應性喂養(yǎng)一周后，改用高糖-高脂飼料喂養(yǎng)4周，在大鼠體重為350g左右時，按30mg/kg的劑量一次性腹腔注射STZ(用0.1mmol/L檸檬酸鈉-檸檬酸緩沖液配成2％的溶液，PH4.5)，并同時喂以高糖-高脂飼料。2周后，大鼠禁食8小時后，按2g/kg體重灌服20％D-葡萄糖溶液，做口服糖耐量試驗。60和120min血糖分別大于7.0mmol/l和11.0mmol/l的大鼠，作為糖尿病造模成功大鼠。2.2分組給藥：將造模成功大鼠隨機分成5組：①模型組：給予蒸餾水10ml/kg；(2)陽性對照組：給予五黃養(yǎng)陰顆粒1.25g/kg；(3)實施例I組：實施例1：20g/kg；(4)實施例II組：實施例2：10g/kg；(5)實施例III組：實施例3：5g/kg。同期另設一組正常組：蒸餾水10ml/kg。各組以10ml/kg的容積按上述劑量每日灌胃給藥1次，連續(xù)給藥4周。2.3觀察指標(1)空腹血糖及糖耐量：食10小時后，眼眶取血，用葡萄糖氧化酶法測定，每隔7天測定一次，嚴格按照試劑盒上說明操作。(2)尿微量白蛋白測定：取大鼠24小時尿液，4℃儲存，測定方法按照試劑盒說明書進行。(3)飲水、尿量的測定：采用代謝籠法測定14小時尿量。(4)體重變化。(5)隨機血糖測定：(6)血清CHO、TG、HDL-C、NEFA(7)MDA、SOD；(8)血液流變的變化；(9)主動脈組織病理學的變化：在給藥第60天終止用藥，處死模型大鼠，取主動脈、心臟制作組織病理切片，常規(guī)HE染色，進行電鏡觀察、照相。主動脈剖開后鋪平，拍照，并用稱重法測量主動脈粥樣硬化斑塊面積。從冠狀動脈入口處及中、下部，分別橫截取心臟組織制片，評估冠狀動脈大、中、小分枝的動脈粥樣硬化病理指數(shù)和計算病變血管占總血管數(shù)的百分比，采用SAS統(tǒng)計軟件包在計算機上分析。3.實驗結果3.1對糖尿病高脂血癥大鼠空腹血糖及糖耐量的影響造模后，模型組大鼠空腹血糖升高，糖耐量出現(xiàn)明顯異常，與空白對照組相比有顯著性差異，說明造模成功。實驗結果表明本發(fā)明提供的實施例I組、II組與模型組相比能夠明顯降低大鼠空腹血糖及改善糖耐量，并呈現(xiàn)良好的量效關系，表明本發(fā)明提供的實施例具有很好的降血糖作用，可用于糖尿病的防治，具體實驗結果如表1所示。表1本發(fā)明對糖尿病高脂血癥大鼠血糖的影響(n＝10)注：與空白組相比，▲▲P＜0.01；與模型組比，**P＜0.01*P＜0.053.2本發(fā)明對糖尿病高脂血癥大鼠血清總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白膽固醇、血清游離脂肪酸的影響實驗結果表明，與模型組相比本發(fā)明提供的實施例組能有效降低高糖尿病高脂血癥大鼠血清CHO、NEFA、TG的含量以及提高HDL-C的含量；尤其是高劑量組具有顯著的降低高糖尿病高脂血癥大鼠血清總膽固醇和甘油三酯的含量，并能顯著提高糖尿病高脂血癥大鼠血清中高密度脂蛋白膽固醇的含量。說明本發(fā)明提供的實施例具有很好的降低血脂和膽固醇含量，具有很好的防治高脂血癥的作用，具體實驗結果如表2所示。表2本發(fā)明對糖尿病高脂血癥大鼠血清脂類和脂蛋白的影響(n＝10)注：與空白組相比，▲▲P＜0.01；與模型組比，**P＜0.01*P＜0.053.3本發(fā)明對糖尿病高脂血癥大鼠SOD、MDA的影響由實驗結果表明本發(fā)明提供的實施例高劑量給藥組能顯著降低糖尿病高脂血癥大鼠血MDA含量，并能提高SOD活力，與模型對照組相比，具顯著性差異，具體實驗結果如表3所示。表3本發(fā)明對糖尿病高脂血癥大鼠SOD、MDA的影響(n＝10)組別((g/kg))SOD(NU/ml)MDA(Nmol/ml)空白對照組170.7士20.27.0士12.0模型對照組127.9士f30.1▲▲13.5士7.1▲陽性對照組(1.25)134.2士24.110.2士4.5實施例I組(20)164.2士14.7**7.4士11.1*實施例II(10)132.1士15.510.2士12.9實施例II(5)126.6士22.813.1士2.1注：與空白組相比，▲▲P＜0.01▲P＜0.05；與模型組比，**P＜0.01*P＜0.053.4本發(fā)明對糖尿病高脂血癥大鼠尿量及尿微量白蛋白的影響實驗結果表明，模型組大鼠24小時尿量和尿微量白蛋白含量高于空白對照組，與空白對照組相比，有顯著性差異。實施例高、中劑量組24小時尿量低于模型組，與模型組相比，有顯著性差異。實施例各劑量組的大鼠尿微量白蛋白含量低于模型組，與模型組相比，有顯著性差異，且高劑量的實施例具有比陽性對照藥糖脈康更好的降低糖尿病高脂血癥大鼠尿量及尿微量白蛋白的作用，提示本發(fā)明提供的實施例具有改善腎臟功能作用。具體實驗結果如表4所示。表4本發(fā)明對糖尿病高脂血癥大鼠尿量及尿微量白蛋白的影響(n＝10)組別(g/kg)尿量(ml)尿微量白蛋白(ug/ml)空白對照組7.9士2.25.1士2.4模型對照組23.9士10.1▲▲17.6士5.1▲▲陽性對照組(1.25)21.2士4.115.2士5.1實施例I組(20)14.2士6.7**11.1士3.4**實施例II(10)15.1士5.5**12.5士5.5實施例II(5)18.6士5.814.8士5.2注：與空白組相比，▲▲P＜0.01與模型組比；**P＜0.013.5本發(fā)明對脂質(zhì)代謝紊亂大鼠肝組織血脂的影響模型組大鼠肝組織CHO、NEFA和TG含量均高于正常組，與模型組相比，有顯著性差異。實施例高、中劑量組肝組織CHO、NEFA和TG含量均低于模型組，與模型組相比，有顯著性差異。表明本發(fā)明提供的實施例能夠很好的調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝紊亂大鼠肝組織中血脂的作用，具體實驗結果如表5。表5本發(fā)明對脂質(zhì)代謝紊亂大鼠肝組織血脂的影響情況與正常組相比，▲▲P＜0.01▲P＜0.05；與模型對照組比，**P＜0.01*P＜0.053.6本發(fā)明對脂質(zhì)代謝紊亂大鼠血液流變學的影響大鼠經(jīng)長時間高脂飼料喂養(yǎng)后，全血比粘度升高，與正常組相比，有顯著性差異。給與受試藥物后，實施例的高、中、低劑量組大鼠的全血比粘度均低于模型組，表明實施例具有很好的改善高脂血癥大鼠血液流變學的作用，從而可用于防治糖尿病合并的心血管性疾病，具體實驗結果如表6所示。表6本發(fā)明對實驗性脂質(zhì)紊亂大鼠血液流變學的影響注：與正常對照組比較▲▲P＜0.01，與模型組比較，**P＜0.01。通過以上實驗結果表明，本發(fā)明提供的實施例能有效糾正糖代謝紊亂，降低血糖和血脂，抗脂質(zhì)過氧化，改善血流變的作用；且通過觀察糖尿病高脂血癥大鼠主動脈病理組織形態(tài)學改變的影響，進一步提示本發(fā)明提供的實施例能改善脂代謝紊亂，阻止或延緩動脈粥樣硬化，防治糖尿病心血管病變的作用。實施例7臨床實驗研究1.資料與方法1.1臨床資料1.1.1一般資料全部采用江蘇省中醫(yī)院門診或病房患者。觀察48例，其中治療組28例，對照組20例。治療組男性17例，女性11例，平均年齡61.4±7.00歲，病程8.32±5.09年；對照組男性12例，女性8例，平均年齡60.1±9.43歲，病程7.20±5.07年。治療前，兩組患者在血糖，TC、TG、HDL-C、LDL-C等實驗室指標差異無顯著性意義，具有可比性。1.1.2診斷標準病例符合2型糖尿病及高脂血癥診斷標準。糖尿病診斷按照2005年《中國糖尿病指南》：糖尿病癥狀+任意時間血漿葡萄糖水平≥11.1mmol/l(200mg/dl)或空腹血漿葡萄糖(FPG)水平≥7.0mmol/l(126mg/dl)或OGTT試驗中，2小時PG水平≥11.1mmol/l(200mg/dl)；高脂血癥診斷及分類標準參照1997年全國血脂異常診斷和治療專題學術研討會制定的《血脂異常防治建議》標準：血漿膽固醇(TC)＞5.72mmol/L(220mg/dl)，血漿甘油三酯(TG)＞1.7mmol/L(150mg/dl)，血漿低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)＞3.64mmol/L(140mg/dl)，血漿高密度脂蛋白(HDL-C)＜0.9mmol/L(35mg/dl)。中醫(yī)證候標準：根據(jù)2002年國家藥品監(jiān)督管理局組織制定的《中藥新藥臨床研究指導原則》第十章第三節(jié)“中藥新藥治療糖尿病的臨床研究指導原則”及第二章第四節(jié)“中藥新藥治療高脂血癥的臨床研究指導原則”，結合臨床，擬定本病“肝腎陰虛，痰瘀壅阻證”標準。主癥：口渴多飲，形體肥胖，頭暈沉重，腰膝酸軟。次癥：小便頻數(shù)，肢麻沉重，胸悶胸痛，自汗盜汗。舌脈：舌質(zhì)淡黯有瘀斑苔白，或舌胖、苔滑膩或少津，脈沉弱或細弦澀。以上主癥必備3項，加次癥2項，參照舌脈即可確診。1.1.3納入標準(1)符合2型糖尿病診斷標準，中醫(yī)“肝腎陰虛，痰瘀壅阻證”辨證標準者。(2)年齡在30～70歲之間，性別不限。(3)僅有輕度微血管并發(fā)癥(尿白蛋白排泄率＜300mg/d，視網(wǎng)膜病變≤1期)。(4)確診2型糖尿病3個月以上。(5)入組時使用降糖藥物不超過2種，且未使用胰島素治療者。(6)知情同意，志愿受試，獲得知情同意書過程符合GCP規(guī)定者。1.1.4排除標準(1)1型糖尿病、肝臟疾病、妊娠、藥物等因素引起的血糖升高；(2)腎病綜合征、甲狀腺功能低下等其他引起高脂血癥的疾??；(3)年齡在30歲以下或70歲以上；(4)近1月內(nèi)或服藥期間有糖尿病酮癥、酮癥酸中毒等嚴重急性并發(fā)癥者；(5)合并有心腦血管、肝、腎、造血系統(tǒng)等嚴重原發(fā)性疾病、精神病患者；惡性腫瘤患者(除非已手術切除，5年以上無復發(fā))；(6)空腹血糖≥18mmol/L或(和)餐后2小時血糖≥23mmol/L者；(7)正在服用可能影響血糖、血壓、血脂等觀察指標的其他藥物者。(8)根據(jù)研究者的判斷、具有降低入組可能性或使入組復雜化的其他情況，工作環(huán)境經(jīng)常變動等易造成失訪的情況。(9)正在參加其他藥物臨床研究的患者。1.2治療方法兩組治療前2周停服一切調(diào)脂藥物，均采用基礎治療?；A治療參照亞洲-太平洋地區(qū)2型糖尿病政策組制訂的《2型糖尿病實用目標與治療》(第三版)，進行飲食控制和運動療法，基礎用藥二甲雙胍，500mg，3次/日。二甲雙胍由江蘇省中醫(yī)院西藥房提供，500mg，1日3次，生產(chǎn)廠家：江蘇昆山培力藥品有限公司，批號：0607052。治療組：在基礎治療上隨機加用本發(fā)明提供的實施例產(chǎn)品(片、顆粒、膠囊、口服液等)，用法：1日2次。療程4周。對照組：僅采用基礎治療(飲食、運動、二甲雙胍)，不加服中藥。療程4周。除試驗用藥外，觀察期間禁止使用其它治療本病的中藥和西藥及與本病治療相關的其他治療。1.3觀察指標1.3.1血糖：采用靜脈葡萄糖法測定。1.3.2空腹胰島素(FIns)：采用化學發(fā)光免疫分析法。1.3.3評價胰島素敏感指數(shù)(ISI)：采用改良胰島素敏感性指數(shù)型公式計算，即ISI＝1/FINS·FPG。評價胰島素抵抗(HOMA-IR)和β細胞功能(HOMA-βcell)采用穩(wěn)態(tài)模式評估法公式：HOMA-IR＝FINS×FPG/22.5，HOMA-βcell＝20×FINS/(FPG-3.5)。1.3.4血總膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)：采用全自動生化分析儀。1.3.5治療前后糖化血清蛋白測定：采用全自動生化分析儀。1.4療效標準根據(jù)2002年國家藥品監(jiān)督管理局組織制定的《中藥新藥臨床研究指導原則》所制訂的療效標準判定。1.5統(tǒng)計學方法描述性統(tǒng)計：計數(shù)資料采用構成比或率表示，計量資料采用表示；統(tǒng)計推斷：統(tǒng)計方法有參數(shù)檢驗和非參數(shù)檢驗，具體方法有卡方檢驗、配對t檢驗和成組樣本的t檢驗等，統(tǒng)計軟件采用SPSS13.0。2治療結果2.1兩組治療前后中醫(yī)證候積分比較表7兩組治療前后中醫(yī)證候積分比較組別n治療前治療后實施例治療組2825.4士6.815.1士5.6Δ#對照組2024.4士5.320.1士4.6Δ注：與治療前比較ΔP＜0.01，治療后組間比較#P＜0.01。由表7可見，治療后，兩組證候積分較治療前均有顯著改變(P＜0.01)，療程結束后，實施例治療組證候積分明顯優(yōu)于對照組，有顯著性差異(P＜0.01)。2.2兩組治療前后血糖指標變化表8治療前后兩組血糖的指標變化(mmol/l)注：治療前后組內(nèi)比較#P＜0.01，組間比較※P＜0.01。由表8可見，治療前后兩組FBG、PBG(2h)血糖均有明顯改善(P＜0.01)，組間比較治療后，實施例治療組降糖療效優(yōu)于對照組，有顯著性差異(P＜0.01)。2.3兩組患者糖化血清蛋白變化情況表9兩組治療前后糖化血清蛋白比較組別n治療前治療后治療組28338.1士54.2183.4士64.9ΔΔ*對照組20321士47.6307士75.2Δ注：與治療前比較ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01；組間比較※P＜0.05。由表9可見，治療前后兩組糖化血清蛋白均有改善(P＜0.01)，組間比較治療后，實施例治療組降糖療效優(yōu)于對照組，有顯著性差異(P＜0.01)。2.4兩組治療前后血脂變化表10兩組治療前后血脂變化比較注：與治療前比較ΔP＜0.01，ΔΔP＜0.05；組間比較※P＜0.05。由表10可見，實施例治療組患者治療后TC、TG、LDL-C水平下降，與治療前比較有顯著性差異(P＜0.01)，HDL-C與治療前比較升高(P＜0.05)；對照組患者治療后TC水平下降，與治療前比較有顯著性差異(P＜0.01)，TG、LDL-C與治療前比較均下降(P＜0.05)、HDL-C改變未有明顯差異。組間比較，治療組TC和TG的改善均優(yōu)于對照組，有顯著性差異(P＜0.05)。2.5治療前后兩組空腹胰島素及胰島素抵抗相關指標的變化表11兩組治療前后胰島功能相關指標比較注：與治療前比較ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01；組間比較※P＜0.05。由表11可見，治療前后兩組各相關指數(shù)均有不同程度改善(P＜0.05～0.01)，其中實施例治療組ISI、Homa-IR、Homa-B的改善程度與治療前比較均有改善(P＜0.05～0.01)，與對照組比較有顯著差異(P＜0.05)2.6兩組療效比較表12兩組的療效比較組別n顯效有效無效總有效率治療組2810(35.7％)16(57.2％)2(7.1％)92.9％對照組204(20％)11(55％)5(25％)75％注：P＜0.05由表12可見，本發(fā)明提供的實施例治療組共28例，其中顯效10例，有效16例，無效2例，總有效率為92.9％；對照組共20例，其中顯效4例，有效11例，無效5例，總有效率為75％。實驗結果表明本發(fā)明提供的實施例具有更好的治療糖尿病的作用，兩組比較有顯著性差異(P＜0.05)。雖然，上文中已經(jīng)用一般性說明、具體實施方式及試驗，對本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎上，可以對之作出一些修改或改進，這對本領域技術人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎上所做的這些修改或改進，均屬于本發(fā)明要求保護的范圍。當前第1頁1 2 3