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一種臍帶血干細胞治療肌營養(yǎng)不良癥的方法與流程

文檔序號:12344475閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種臍帶血干細胞治療肌營養(yǎng)不良癥的方法,其特征在于,它包含以下步驟:

(S1)獲得HLA相合的臍帶血;

(S2)按照免疫磁珠法富集CD34+細胞;

(S3)非清髓處理后,將50%的CD34+細胞和所有CD34-細胞移植入病人體內;

(S4)剩余50%的CD34+細胞通過因子組合增加轉化效率,將臍帶血干細胞轉化成肌肉干細胞;

(S5)將中間干細胞移植給患者;

(S6)移植的肌肉干細胞分化成有功能的肌肉干細胞;

(S7)肌肉干細胞繁殖并分化成肌肉組織。

2.根據權利要求1所述的一種臍帶血干細胞治療肌營養(yǎng)不良癥的方法,其特征在于,所述的步驟(S1)-步驟(S2)中,HLA相合的臍帶血可以從臍血庫中獲取,若不能得到HLA相合臍帶血的情況下,6個位點有1到2個不匹配時依舊可以使用,解凍后的臍帶血將按照免疫磁珠法的標準純化富集CD34+細胞。

3.根據權利要求1所述的一種臍帶血干細胞治療肌營養(yǎng)不良癥的方法,其特征在于,所述的步驟(S3)中,非清髓預處理的標準是:氟達拉濱180mg/mm+二甲磺酸丁酯8-16mg/kg或ATG抗胸腺細胞球蛋白10-50mg/kg或者是2-3Gy劑量的非全身照射,移植后,給予病人標準護理。

4.根據權利要求1所述的一種臍帶血干細胞治療肌營養(yǎng)不良癥的方法,其特征在于,所述的步驟(S4)中的因子組合是OCT4+PAX7,PAX3和/或MyoD,這幾個基因同在一個2a肽表達載體上,在分化的早期階段,將單獨使用Oct4基因,而在分化后期,會用到多個基因;

基因瞬時表達載體:以EB病毒核抗原EBNA1為基礎的游離性載體,在轉染后的3周,只有1%的細胞可以檢測到這種載體;輔助非依賴型載體Ad5/35,轉染后的幾天,基因可以維持高水平的表達,每3-5天,重新進行轉染以維持基因的表達水平;

基因調控:把一個Tet-on調控原件整合到上述載體中以提高其安全性。

5.根據權利要求1所述的一種臍帶血干細胞治療肌營養(yǎng)不良癥的方法,其特征在于,所述的步驟(S5)中,為了增加中間干細胞的移植,對其轉染因子CXCR4和/或在缺氧條件下誘導CXCR4的表達;或者使用肌肉損傷的藥物以增加可用的干細胞龕。

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