本發(fā)明涉及有機(jī)合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其用途。
背景技術(shù)：
腎纖維化(包括腎間質(zhì)纖維化和腎小球硬化)是各種原因引起的腎臟損害最后階段的主要病理基礎(chǔ)，腎纖維化發(fā)生機(jī)制較為復(fù)雜，與多種因素有關(guān)，其中主要與細(xì)胞外基質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞的增殖和活化，血管活性物質(zhì)、細(xì)胞因子以及細(xì)胞外基質(zhì)轉(zhuǎn)換失衡有關(guān)，腎間質(zhì)纖維化幾乎是所以原發(fā)或繼發(fā)腎臟疾病進(jìn)展到終末期腎衰竭的共同途徑。急需研發(fā)高效低毒的抗腎纖維化藥物。
腎纖維化的治療目前已有的藥物存在毒性大、安全性低的問題，從天然產(chǎn)物中尋找化合物或先導(dǎo)化合物并進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾獲得其衍生物，從而得到高效低毒的潛在藥物有重要價(jià)值。
本發(fā)明涉及的化合物I是一個(gè)2011年發(fā)表(Meng Shao et al.,2010.Psiguadials A and B,Two Novel Meroterpenoids with Unusual Skeletons from the Leaves of Psidium guajava.Organic Letters 12(2010)5040–5043)的化合物，我們對(duì)化合物I進(jìn)行了結(jié)構(gòu)修飾，獲得了兩個(gè)新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化合物III和化合物IV制備了組合物并對(duì)該組合物抗腎纖維化活性進(jìn)行了評(píng)價(jià)，其具有抗腎纖維化活性。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明公開了一個(gè)新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物中化合物III和化合物IV的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為90％和10％。
本發(fā)明公開的組合物可以制成藥學(xué)上可接受的鹽或藥學(xué)上可接受的載體。
藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的組合物具有較好的抗腎纖維化作用。本發(fā)明的藥學(xué)上可接受的鹽具有同樣的藥效。
以下通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受具體實(shí)施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1化合物Psiguadial A的制備
化合物Psiguadial A(I)的制備方法參照Meng Shao等人發(fā)表的文獻(xiàn)(Meng Shao et al.,2010.Psiguadials A and B,Two Novel Meroterpenoids with Unusual Skeletons from the Leaves of Psidium guajava.Organic Letters 12(2010)5040–5043)的方法。
實(shí)施例2Psiguadial A的O-溴乙基衍生物(II)的合成
將化合物I(474mg，1.00mmol)溶于20mL苯，向溶液中加入四丁基溴化銨(TBAB)(0.16g)，1,2-二溴乙烷(7.520g，40.00mmol)和12mL的50％氫氧化鈉溶液?；旌衔镌?5攝氏度攪拌8h。8h之后將反應(yīng)液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取兩次，合并有機(jī)相溶液。然后對(duì)有機(jī)相溶液依次用水和飽和食鹽水洗滌3次，再用無水硫酸鈉干燥，最后減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動(dòng)相為：石油醚/丙酮＝100:0.5，v/v)，收集棕色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的棕色粉末(502mg，73％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.44(s,2H),7.24(s,2H),7.20(d,J＝10.0Hz,3H),4.31(s,4H),3.89(s,1H),3.74(s,4H),2.30(s,1H),2.12(s,1H),2.02(s,1H),1.92(s,1H),1.79(s,1H),1.73(s,1H),1.51(d,J＝19.8Hz,3H),0.99(s,3H),0.95(d,J＝4.7Hz,7H),0.85(s,3H),0.53(s,1H),0.43(s,1H).
13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ188.69(s),170.54(s),165.42(s),163.38(s),142.72(s),129.71(s),127.96(s),127.08(s),118.00(s),116.82(s),114.82(s),72.73(s),40.19(s),34.75(s),34.32(s),31.75(s),30.93(s),28.09(s),26.43(s),24.48(s),23.74(s),21.18(s),20.77(s),19.99(s),14.39(s).
HRMS(ESI)m/z[M+H]+calcd for C34H41Br2O5:689.1300；found 689.1303.
實(shí)施例3Psiguadial A的O-(咪唑基)乙基衍生物(III)的合成
將化合物II(344mg，0.5mmol)溶于25mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無水碳酸鉀(690mg，5.0mmol)，碘化鉀(168mg，1.0mmol)和咪唑(3480mg，40mmol)，混合物加熱回流2h。反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液倒入25mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取2次，合并有機(jī)相。依次用水和飽和食鹽水洗滌合并之后的有機(jī)相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動(dòng)相為：石油醚/丙酮＝100:0.4，v/v)，收集黃色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物III的黃色粉末(235.0mg,71％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.38(s,2H),7.80(s,2H),7.17(s,2H),7.11(d,J＝10.0Hz,3H),7.07(s,2H),6.66(s,2H),4.47(s,4H),4.37(s,4H),3.91(s,1H),2.03(s,1H),1.86–1.77(m,3H),1.64(s,1H),1.60(s,1H),1.35(d,J＝4.6Hz,3H),1.15(s,1H),0.89(s,3H),0.87–0.64(m,9H),0.43(s,1H),0.17(s,1H).
13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ188.52(s),170.35(s),165.17(s),163.13(s),142.49(s),139.47(s),129.44(s),128.51(s),127.70(s),126.82(s),119.14(s),117.75(s),116.59(s),114.54(s),69.29(s),43.78(s),39.96(s),34.50(s),34.09(s),30.66(s),27.84(s),26.18(s),24.25(s),23.46(s),20.92(s),20.51(s),19.76(s),14.20(s).
HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C40H47N4O5:663.3546；found:663.3541。
實(shí)施例4Psiguadial A的O-(二羥乙胺)乙基衍生物(IV)的合成
將化合物II(344mg，0.5mmol)溶于18mL乙腈，加入無水碳酸鉀(0.345g，2.5mmol)，碘化鉀(0.084g，0.5mmol)和二乙醇胺(2.103g，20mmol)，混合物加熱回流2h。反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液倒入冷水中，用二氯甲烷萃取2次，合并有機(jī)相，依次用水和飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑。產(chǎn)物用硅膠柱層析純化(石油醚/丙酮100:0.7，v/v)，得到化合物IV的淡棕色固體(0.254g,69％)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.45(s,2H),7.27(t,J＝15.0Hz,2H),7.21(t,J＝15.0Hz,2H),7.21(s,1H),4.04(s,4H),3.97(s,1H),3.39(s,8H),2.68(s,4H),2.54(s,8H),2.16(s,1H),2.01(s,1H),1.98–1.90(m,3H),1.68(s,1H),1.62(s,1H),1.45(s,2H),1.40(s,1H),1.12(s,4H),1.00(s,3H),0.93(s,6H),0.89(s,3H),0.52(s,1H),0.27(s,1H).
13C NMR(125MHz,DMSO-d6)δ188.43(s),170.26(s),165.08(s),163.04(s),142.40(s),129.34(s),127.61(s),126.73(s),117.67(s),116.49(s),114.46(s),69.16(s),58.86(s),56.40(s),53.85(s),39.84(s),34.42(s),33.99(s),30.58(s),27.74(s),26.10(s),24.15(s),23.38(s),20.82(s),20.43(s),19.66(s),14.02(s).
HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C42H61N2O9:737.4377；found:737.4374。
實(shí)施例5組合物對(duì)單側(cè)輸尿管結(jié)扎大鼠腎間質(zhì)纖維化的影響
1.1材料
貝那普利，北京諾華制藥有限公司生產(chǎn)；羥脯氨酸(HYP)試劑盒，南京建成生物公司；纖維連結(jié)蛋白(FN)試劑盒購(gòu)自上海生物制品所。
組合物的制備：將研磨之后過200目網(wǎng)的90mg化合物III的粉末和研磨之后過200目網(wǎng)的10mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用渦輪攪拌儀混合即得到100mg組合物，使用時(shí)用水溶解這100mg的組合物即得到組合物的溶液。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：普通級(jí)Wistar大鼠，雄性，體重150-200g，SD大鼠。
1.2試驗(yàn)方法與結(jié)果
大鼠60只，隨機(jī)分6組，即假手術(shù)組、模型組、苯那普利灌胃10mg/kg組、組合物灌胃10mg/kg組、化合物III灌胃10mg/kg組、化合物IV灌胃10mg/kg組，動(dòng)物喂養(yǎng)1周，各大鼠以10％水合氯醛3.0mL/kg腹腔注射麻醉后，將大鼠右側(cè)臥位固定與手術(shù)臺(tái)上，剪毛后用碘酒、75％酒精消毒手術(shù)區(qū)，行左側(cè)腹切口，逐層切開皮膚、肌肉及腹壁各層，暴露并分離左側(cè)輸尿管，假手術(shù)組僅切開腹腔并游離左側(cè)輸尿管，但不結(jié)扎和剪斷，其他各組大鼠用4-0絲線結(jié)扎兩道，上一道結(jié)扎點(diǎn)位于左腎下極水平，然后在兩道結(jié)扎點(diǎn)剪斷輸尿管，逐層縫合，術(shù)后10天10％水合氯醛麻醉后處死各組動(dòng)物，取血，按纖維連結(jié)蛋白測(cè)定說明測(cè)定說明纖維聯(lián)接蛋白(FN)。生理鹽水反復(fù)灌洗后留取左側(cè)腎臟，腎組織經(jīng)4％的多聚甲醛緩沖液固定。切取適量腎組織，按羥脯氨酸試劑盒測(cè)定說明測(cè)定羥脯氨酸。
常規(guī)病理學(xué)檢①肉眼觀察：假手術(shù)組腎臟顏色鮮紅，表明光滑，包膜光澤，無粘連。模型對(duì)照組腎臟體積增大，顏色蒼白，表明呈顆粒狀，類似人體大白腎，少數(shù)區(qū)域腎包膜粘連。②光鏡檢查：假手術(shù)組腎單位結(jié)果清晰，腎小球囊無擴(kuò)張或炎細(xì)胞浸潤(rùn)。模型對(duì)照組大片腎小管壞死，腎間質(zhì)纖維細(xì)胞增生，腎小管擴(kuò)張，內(nèi)有大量棕黃色遮光物質(zhì)或壞死脫落的上皮細(xì)胞，腎小球數(shù)目減少，部分腎小球纖維化并與包曼氏囊壁粘連，囊腔消失。組合物給藥組病變與模型對(duì)照組類似，但均有不同程度的形態(tài)學(xué)改善，與模型對(duì)照組比較有明顯差異。而化合物III給藥組和化合物IV給藥組與模型對(duì)照組無顯著性差異。
表1組合物對(duì)單側(cè)輸尿管結(jié)扎大鼠腎間質(zhì)纖維化的影響
*p<0.05，與模型組相比較
對(duì)各組FN、HYP進(jìn)行T檢驗(yàn)。結(jié)果見表1，組合物灌胃10mg/kg顯著降低FN、HYP水平(與模型對(duì)照組比較，P<0.05)；而化合物III和化合物IV灌胃10mg/kg未能顯著降低FN、HYP水平。
結(jié)論：組合物能夠顯著降低腎間質(zhì)纖維化FN、HYP水平的升高，抑制腎間質(zhì)纖維化，可以用來制備抗腎纖維化藥物?；衔颕II和化合物IV不能夠顯著降低腎間質(zhì)纖維化FN、HYP水平的升高，不能抑制腎間質(zhì)纖維化，不可以用來制備抗腎纖維化藥物。
實(shí)施例6本發(fā)明所涉及組合物片劑的制備
取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機(jī)制成100片。
實(shí)施例7本發(fā)明所涉及組合物膠囊的制備
取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100粒。