本發(fā)明屬于藥劑學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種絲膠蛋白水凝膠的制備方法。

背景技術(shù)：

水凝膠（Hydrogel）是以水為分散介質(zhì)的凝膠，具有網(wǎng)狀交聯(lián)結(jié)構(gòu)的水溶性高分子中引入一部分疏水基團(tuán)和親水殘基，親水殘基與水分子結(jié)合，將水分子連接在網(wǎng)狀內(nèi)部，而疏水殘基遇水膨脹的交聯(lián)聚合物。是一種高分子網(wǎng)絡(luò)體系，性質(zhì)柔軟，能保持一定的形狀，能吸收大量的水。一類采用天然生物材料（如膠原、海藻酸鹽和殼聚糖等）制備得到的水凝膠，因?yàn)閾碛信c機(jī)體高度相似的理化特性和優(yōu)越的生物學(xué)性能，已被廣泛地應(yīng)用于生物醫(yī)藥和組織工程領(lǐng)域。

絲膠蛋白（SS）是一種生物相容性優(yōu)良的天然高分子材料。絲膠蛋白富含絲氨酸、天門冬氨酸、谷氨酸、蘇氨酸等極性氨基酸，約占絲膠蛋白氨基酸總量的70%，與人體皮膚角質(zhì)層中天然保濕因子的氨基酸組成及比例相似。由于絲膠蛋白具有良好的生物可降解性，促進(jìn)細(xì)胞粘附分化和傷口愈合等功能特性，是一種優(yōu)異的生物醫(yī)用材料。

長(zhǎng)期以來(lái)由于人們對(duì)絲膠蛋白認(rèn)識(shí)的不足和研究的局限性，導(dǎo)致絲膠在繅絲工業(yè)中被當(dāng)作廢物處理，浪費(fèi)了大量寶貴的天然資源。近年來(lái)人們發(fā)現(xiàn)絲膠蛋白具有保濕、抗菌、抗氧化、抗凝血以及促進(jìn)細(xì)胞粘附和增殖等生物特性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

解決的技術(shù)問(wèn)題：本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足而提供一種絲膠蛋白水凝膠的制備方法，所制成的絲膠蛋白水凝膠不僅具有多孔性、可降解性，還具有良好的生物相容性。

技術(shù)方案： 一種絲膠蛋白水凝膠的制備方法，包括以下步驟：

步驟1，取蠶繭破碎，清洗后晾干，得碎片；

步驟2，將碎片加至含有1-4wt.%復(fù)合酶的水溶液中，高壓均質(zhì)，得到酶解液；

步驟3，采用微濾膜對(duì)酶解液進(jìn)行過(guò)濾除雜，得到清液；

步驟4，將清液導(dǎo)入層析柱中進(jìn)行除雜，得到絲膠蛋白溶液；

步驟5，將所得絲膠蛋白溶液減壓濃縮至體積縮小為15-20%，加入0.5-1.2wt.%戊二醛、0.2-0.7wt.%檸檬酸，攪拌，靜置，即得。

進(jìn)一步地，步驟1中碎片大小在0.5-1cm。

進(jìn)一步地，步驟2中復(fù)合酶是中性蛋白酶和液體纖維素酶按重量比2：3組成的混合物。

進(jìn)一步地，步驟2中高壓均質(zhì)條件為0.8-1.2MPa、循環(huán)5次。

進(jìn)一步地，步驟4中層析柱是聚酰胺柱。

進(jìn)一步地，步驟5中還需要加入0.1-0.5wt.%海藻酸鈉。

有益效果：本發(fā)明采用復(fù)合酶結(jié)合高壓均質(zhì)的工藝提取絲膠蛋白，該工藝絲膠蛋白的提取效率可達(dá)90%，所制成的絲膠蛋白水凝膠不僅具有多孔性、可降解性，還具有良好的生物相容性。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

一種絲膠蛋白水凝膠的制備方法，包括以下步驟：

步驟1，取蠶繭破碎，清洗后晾干，得碎片；

步驟2，將碎片加至含有1wt.%復(fù)合酶的水溶液中，高壓均質(zhì)，得到酶解液；

步驟3，采用微濾膜對(duì)酶解液進(jìn)行過(guò)濾除雜，得到清液；

步驟4，將清液導(dǎo)入層析柱中進(jìn)行除雜，得到絲膠蛋白溶液；

步驟5，將所得絲膠蛋白溶液減壓濃縮至體積縮小為15%，加入0.5wt.%戊二醛、0.2wt.%檸檬酸，攪拌，靜置，即得。

其中，步驟1中碎片大小在0.5-1cm；步驟2中復(fù)合酶是中性蛋白酶和液體纖維素酶按重量比2：3組成的混合物，高壓均質(zhì)條件為0.8MPa、循環(huán)5次；步驟4中層析柱是聚酰胺柱。

實(shí)施例2

一種絲膠蛋白水凝膠的制備方法，包括以下步驟：

步驟1，取蠶繭破碎，清洗后晾干，得碎片；

步驟2，將碎片加至含有2wt.%復(fù)合酶的水溶液中，高壓均質(zhì)，得到酶解液；

步驟3，采用微濾膜對(duì)酶解液進(jìn)行過(guò)濾除雜，得到清液；

步驟4，將清液導(dǎo)入層析柱中進(jìn)行除雜，得到絲膠蛋白溶液；

步驟5，將所得絲膠蛋白溶液減壓濃縮至體積縮小為17%，加入0.6wt.%戊二醛、0.5wt.%檸檬酸，攪拌，靜置，即得。

其中，步驟1中碎片大小在0.5-1cm；步驟2中復(fù)合酶是中性蛋白酶和液體纖維素酶按重量比2：3組成的混合物，高壓均質(zhì)條件為0.9MPa、循環(huán)5次；步驟4中層析柱是聚酰胺柱。

實(shí)施例3

一種絲膠蛋白水凝膠的制備方法，包括以下步驟：

步驟1，取蠶繭破碎，清洗后晾干，得碎片；

步驟2，將碎片加至含有1wt.%復(fù)合酶的水溶液中，高壓均質(zhì)，得到酶解液；

步驟3，采用微濾膜對(duì)酶解液進(jìn)行過(guò)濾除雜，得到清液；

步驟4，將清液導(dǎo)入層析柱中進(jìn)行除雜，得到絲膠蛋白溶液；

步驟5，將所得絲膠蛋白溶液減壓濃縮至體積縮小為18%，加入0.6wt.%戊二醛、0.4wt.%檸檬酸，攪拌，靜置，即得。

其中，步驟1中碎片大小在0.5-1cm；步驟2中復(fù)合酶是中性蛋白酶和液體纖維素酶按重量比2：3組成的混合物，高壓均質(zhì)條件為1MPa、循環(huán)5次；步驟4中層析柱是聚酰胺柱。

實(shí)施例4

一種絲膠蛋白水凝膠的制備方法，包括以下步驟：

步驟1，取蠶繭破碎，清洗后晾干，得碎片；

步驟2，將碎片加至含有4wt.%復(fù)合酶的水溶液中，高壓均質(zhì)，得到酶解液；

步驟3，采用微濾膜對(duì)酶解液進(jìn)行過(guò)濾除雜，得到清液；

步驟4，將清液導(dǎo)入層析柱中進(jìn)行除雜，得到絲膠蛋白溶液；

步驟5，將所得絲膠蛋白溶液減壓濃縮至體積縮小為20%，加入1.2wt.%戊二醛、0.7wt.%檸檬酸，攪拌，靜置，即得。

其中，步驟1中碎片大小在0.5-1cm；步驟2中復(fù)合酶是中性蛋白酶和液體纖維素酶按重量比2：3組成的混合物，高壓均質(zhì)條件為1.2MPa、循環(huán)5次；步驟4中層析柱是聚酰胺柱。

實(shí)施例5

本實(shí)施例與實(shí)施例3的區(qū)別在于：步驟5中還需要加入0.1-0.5wt.%海藻酸鈉。

一種絲膠蛋白水凝膠的制備方法，包括以下步驟：

步驟1，取蠶繭破碎，清洗后晾干，得碎片；

步驟2，將碎片加至含有1wt.%復(fù)合酶的水溶液中，高壓均質(zhì)，得到酶解液；

步驟3，采用微濾膜對(duì)酶解液進(jìn)行過(guò)濾除雜，得到清液；

步驟4，將清液導(dǎo)入層析柱中進(jìn)行除雜，得到絲膠蛋白溶液；

步驟5，將所得絲膠蛋白溶液減壓濃縮至體積縮小為18%，加入0.6wt.%戊二醛、0.4wt.%檸檬酸，攪拌，靜置，即得。

其中，步驟1中碎片大小在0.5-1cm；步驟2中復(fù)合酶是中性蛋白酶和液體纖維素酶按重量比2：3組成的混合物，高壓均質(zhì)條件為1MPa、循環(huán)5次；步驟4中層析柱是聚酰胺柱。

本發(fā)明采用復(fù)合酶結(jié)合高壓均質(zhì)的工藝提取絲膠蛋白，該工藝絲膠蛋白的提取效率可達(dá)90%，所制成的絲膠蛋白水凝膠不僅具有多孔性、可降解性，還具有良好的生物相容性。