本發(fā)明涉及中醫(yī)藥學(xué)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種治療痤瘡的中藥外用凝膠及其制備方法。
背景技術(shù)：
痤瘡，是一種毛囊、皮脂腺的慢性炎癥，常好發(fā)于顏面、頸部及胸背部位，臨床以黑頭粉刺、丘疹、膿皰、結(jié)節(jié)、囊腫為主要損害，嚴(yán)重者可形成瘢痕。本病發(fā)病率高，10余歲青少年中有90％發(fā)生過(guò)不同嚴(yán)重程度的痤瘡，而且常反復(fù)發(fā)作，給患者身心健康帶來(lái)嚴(yán)重的影響。痤瘡的發(fā)生與多種內(nèi)外因素有關(guān)，遺傳因素、精神情緒、飲食、睡眠、環(huán)境和護(hù)膚品等均可以影響和加重痤瘡的病情，女性患者還與月經(jīng)周期相關(guān)。
傳統(tǒng)中醫(yī)稱痤瘡為“肺風(fēng)粉刺”。中醫(yī)對(duì)痤瘡的認(rèn)識(shí)，主要責(zé)之于肺胃，引起痤瘡的原因是由肺經(jīng)風(fēng)熱阻于肌膚所致或因過(guò)食肥甘、油膩、辛辣食物，脾胃蘊(yùn)熱，濕熱內(nèi)生，熏蒸于面而成。
目前醫(yī)學(xué)上對(duì)痤瘡尚無(wú)有效的治療方法，主要是使用四環(huán)素、甲硝唑、維A酸等西藥治療，存在療效不確切、療程長(zhǎng)、副作用大、容易復(fù)發(fā)等缺陷。
中藥外治多采用清熱解毒、消腫散結(jié)、行氣活血之品，通過(guò)搽、敷、洗、熏等方法直接作用于患處，安全性更高。顛倒散來(lái)源于《醫(yī)宗金鑒·外科心法要訣》，由等量硫磺、大黃組成，具有破瘀活血、清除油垢之功效，是中醫(yī)治療痤瘡、脂溢性皮炎、皮脂溢出癥、酒渣鼻的經(jīng)典外用名方，但是其劑型較為原始，使用不便，不利于在臨床上廣泛的推廣應(yīng)用。
有鑒于此，特提出本發(fā)明。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的第一目的在于提供一種中藥外用凝膠，所述的中藥外用凝膠不僅在治療痤瘡、酒渣鼻、皮脂溢出癥及脂溢性皮炎時(shí)療效更好，且具有吸收好、使用方便、安全無(wú)刺激等優(yōu)點(diǎn)。
本發(fā)明的第二目的在于提供一種所述的中藥外用凝膠的制備方法，該方法操作簡(jiǎn)單，易于掌握，方便溶解各種成分，適合批量生產(chǎn)和廣泛的應(yīng)用。
為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術(shù)方案：
一種中藥外用凝膠，按重量份計(jì)，所述中藥外用凝膠包括以下組份：
黃連總生物堿提取物、大黃醇提物、硫磺0.2～0.8份、冰片0.2～0.8份以及水性凝膠基質(zhì)800～1000份；
以原料組份的重量份計(jì)，所述黃連總生物堿提取物由黃連6～14份制得，所述大黃醇提物由大黃1～5份制得。
優(yōu)選的，如上所述的中藥外用凝膠，按重量份計(jì)，所述中藥外用凝膠包括以下組份：
黃連總生物堿提取物、大黃醇提物、硫磺0.3～0.7份、冰片0.3～0.7份以及水性凝膠基質(zhì)820～990份；
以原料組份的重量份計(jì)，所述黃連總生物堿提取物由黃連8～12份制得，所述大黃醇提物由大黃2～4份制得。
黃連(Coptidis Rhizoma)性寒味苦，歸心，肝，脾，膽，胃，大腸經(jīng)。有清熱燥濕，瀉火解毒之功效。外治濕疹，濕瘡，耳道流膿。
大黃(Rhei Radix et Rhizoma)性寒味苦，歸肝，脾，胃，大腸，心包經(jīng)。外用有清熱解毒、祛淤、涼血等功效。
硫磺(Sulfur)味酸，性溫，歸腎、大腸經(jīng)。外用解毒殺蟲(chóng)療瘡，用于疥癬，禿瘡，陰疽惡瘡；與皮膚分泌物接觸后，有軟化表皮及殺滅皮膚寄生蟲(chóng)的作用。
冰片(Borneolum Syntheticum)味辛、苦，性涼，入心、脾、肺經(jīng)；開(kāi)竅醒神，清熱止痛。用于瘡瘍腫痛，潰后不斂等癥狀，有清涼效果，可散火解毒、清熱開(kāi)竅。
本發(fā)明將各味中藥合理配伍，對(duì)痤瘡丙酸桿菌等致病菌有明顯的抑制作用。
優(yōu)選的，如上所述的中藥外用凝膠，按重量份計(jì)，所述水性凝膠基質(zhì)包括聚乙烯醇05-88 40～60份、卡波姆940 4～6份、丙二醇80～120份、甘油80～120份、三乙醇胺6.4～9.6份、聚山梨酯-80 8～12份以及蒸餾水600～660份。
凝膠劑是由藥物與基質(zhì)組成的，基質(zhì)既是藥物的載體，同時(shí)也對(duì)藥物的釋放有重要的影響，因此，基質(zhì)的選擇對(duì)凝膠劑的制備尤為重要。凝膠劑根據(jù)基質(zhì)的不同可分為水性凝膠劑和油性凝膠劑。水性凝膠劑具有美觀、使用舒適、生物利用度高、穩(wěn)定性好、不良反應(yīng)少、不污染衣著等優(yōu)點(diǎn)，因此更適合于中藥外用凝膠。
本發(fā)明以黏度、成膜性能和有效成分釋放速率等作為選擇的指標(biāo)，優(yōu)選卡波姆940和聚乙烯醇05-88作為凝膠主要基質(zhì)；卡波姆對(duì)酸、堿、醇都有一定的耐受性；能耐受低溫貯存和高壓濕熱滅菌，有良好的生物相容性，對(duì)眼和皮膚沒(méi)有刺激；聚乙烯醇具有無(wú)毒、無(wú)害、無(wú)色的優(yōu)點(diǎn)，且其力學(xué)性能、生物相容性及親水性非常適合于本發(fā)明所提供的凝膠劑。
丙二醇不僅是凝膠基質(zhì)的成分之一，還具有透皮吸收促進(jìn)劑的功能；
在上述基質(zhì)的基礎(chǔ)上，本發(fā)明又根據(jù)總生物堿的累積釋放量和釋放速率的優(yōu)選，確定配方中pH調(diào)節(jié)劑三乙醇胺、保濕劑甘油和乳化劑聚山梨酯-80的用量。
優(yōu)選的，如上所述的中藥外用凝膠，所述中藥外用凝膠還包括68％～72％的乙醇15～25份以及殺菌防腐劑0.9～1.3份。
優(yōu)選的，如上所述的中藥外用凝膠，所述殺菌防腐劑為羥苯乙酯。
卡波姆基質(zhì)制成的凝膠通常需加入防腐劑，本發(fā)明所選用的羥苯乙酯對(duì)真菌的抑菌效果較強(qiáng)。
優(yōu)選的，如上所述的中藥外用凝膠，所述黃連總生物堿提取物和大黃醇提物為將黃連和大黃通過(guò)乙醇浸提、濃縮、純化后得到。
優(yōu)選的，如上所述的中藥外用凝膠，所述黃連總生物堿提取物的提取過(guò)程具體包括：
黃連飲片用68％～72％的乙醇浸泡50min～70min后，用68％～72％的乙醇回流提取兩次，第一次80min～100min、第二次50min～70min，每次68％～72％的乙醇的使用量按固液比為1g生藥：10mL～14mL 68％～72％的乙醇的比例添加；
將乙醇浸提得到的溶液濃縮至每毫升藥液包含生藥0.3g～0.5g，得到黃連醇提液。
優(yōu)選的，如上所述的中藥外用凝膠，在所述醇提液濃縮至每毫升藥液相當(dāng)于生藥0.3g～0.5g之后，還包括：
趁熱加入占藥液體積13％～17％的氯化鈉，攪拌使溶解，放至室溫后冷藏20h～28h后取出并過(guò)濾，得到黃連總生物堿提取物。
優(yōu)選的，如上所述的中藥外用凝膠，所述大黃醇提物的提取過(guò)程具體包括：
大黃飲片用68％～72％的乙醇浸泡100min～140min，70％乙醇回流提取兩次，每次50min～70min，每次70％乙醇的使用量按固液比為1g生藥：8mL～12mL 70％乙醇的比例添加；提取液減壓回收乙醇，濃縮至稠膏。
如上所述的中藥外用凝膠的制備方法，包括：
1)、將卡波姆940分散于少量蒸餾水中，充分溶脹后加入三乙醇胺并攪勻，得到空白凝膠；
將硫磺研細(xì)并加入所述空白凝膠中攪勻得到第一凝膠混合物；
2)、將冰片及所述大黃醇提物用70％乙醇溶解后加入所述第一凝膠混合物并攪勻得到第二凝膠混合物；
3)、將聚乙烯醇05-88加入少量蒸餾水中并加熱溶解，將所述黃連總生物堿提取物加入得到的溶液中攪勻得到混合液；再將所述混合液加入到所述第二凝膠混合物中并攪勻得到第三凝膠混合物；
4)、向所述第三凝膠混合物中加入甘油、丙二醇、聚山梨酯-80及羥苯乙酯，攪勻；再加入蒸餾水并攪勻即得。
如上所述的中藥外用凝膠可以用于治療痤瘡、酒渣鼻、皮脂溢出癥及脂溢性皮炎等疾病。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：
本發(fā)明采用凝膠劑型，將各味中藥合理配伍，對(duì)痤瘡丙酸桿菌等致病菌有明顯的抑制作用。中藥凝膠劑不僅使用比傳統(tǒng)劑型使用更加方便，生物相容性更好，使用更舒適，還可以減輕藥物的不良反應(yīng)，適用于更廣泛的人群。
本發(fā)明通過(guò)優(yōu)化凝膠基質(zhì)的組份和配比，使得改制劑具有了良好的黏性，透皮性以及穩(wěn)定性；其次，建立了先進(jìn)合理的提取工藝，最大限度地獲取了黃連和大黃的有效成分，除去雜質(zhì)，減少了藥物的體積和用量，有利于與相關(guān)輔料配伍。
具體實(shí)施方式
下面將結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方案進(jìn)行詳細(xì)描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)理解，下列實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過(guò)市售購(gòu)買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。
實(shí)施例1
本發(fā)明提供的中藥外用凝膠的處方為：
1)、將卡波姆940分散于少量蒸餾水中，充分溶脹后加入三乙醇胺并攪勻，得到空白凝膠；
將硫磺研細(xì)并加入所述空白凝膠中攪勻得到第一凝膠混合物；
2)、黃連飲片用70％乙醇浸泡50min后，70％乙醇回流提取兩次，第一次100min、第二次50min，每次70％乙醇的使用量按固液比為1g生藥：10mL 70％乙醇；
將乙醇浸提得到的溶液濃縮至每毫升藥液包含生藥0.3g，趁熱加入占藥液體積13％的氯化鈉，攪拌使溶解，放至室溫后冷藏28h后取出并過(guò)濾，得到黃連總生物堿提取物。
大黃飲片用70％乙醇浸泡140min，70％乙醇回流提取兩次，每次50min，每次70％乙醇的使用量按固液比為1g生藥：8mL 70％乙醇；提取液減壓回收乙醇，濃縮至稠膏。
將冰片及所述大黃醇提物用70％乙醇溶解后加入所述第一凝膠混合物并攪勻得到第二凝膠混合物；
3)、將聚乙烯醇05-88加入少量蒸餾水中并加熱溶解，將所述黃連總生物堿提取物加入得到的溶液中攪勻得到混合液；再將所述混合液加入到所述第二凝膠混合物中并攪勻得到第三凝膠混合物；
4)、向所述第三凝膠混合物中加入甘油、丙二醇、聚山梨酯-80及羥苯乙酯，攪勻；再加入蒸餾水并攪勻即得。
實(shí)施例2
本發(fā)明提供的中藥外用凝膠的處方為：
1)、將卡波姆940分散于少量蒸餾水中，充分溶脹后加入三乙醇胺并攪勻，得到空白凝膠；
將硫磺研細(xì)并加入所述空白凝膠中攪勻得到第一凝膠混合物；
2)、黃連飲片用70％乙醇浸泡70min后，70％乙醇回流提取兩次，第一次80min、第二次70min，每次70％乙醇的使用量按固液比為1g生藥：14mL 70％乙醇；
將乙醇浸提得到的溶液濃縮至每毫升藥液包含生藥0.5g，趁熱加入占藥液體積17％的氯化鈉，攪拌使溶解，放至室溫后冷藏20h后取出并過(guò)濾，得到黃連總生物堿。
大黃飲片用70％乙醇浸泡100min，70％乙醇回流提取兩次，每次70min，每次70％乙醇的使用量按固液比為1g生藥：12mL 70％乙醇；提取液減壓回收乙醇，濃縮至稠膏。
將冰片及所述大黃醇提物用70％乙醇溶解后加入所述第一凝膠混合物并攪勻得到第二凝膠混合物；
3)、將聚乙烯醇05-88加入少量蒸餾水中并加熱溶解，將所述黃連總生物堿提取物加入得到的溶液中攪勻得到混合液；再將所述混合液加入到所述第二凝膠混合物中并攪勻得到第三凝膠混合物；
4)、向所述第三凝膠混合物中加入甘油、丙二醇、聚山梨酯-80及羥苯乙酯，攪勻；再加入蒸餾水并攪勻即得。
實(shí)施例3
本發(fā)明提供的中藥外用凝膠的處方為：
1)、將卡波姆940分散于少量蒸餾水中，充分溶脹后加入三乙醇胺并攪勻，得到空白凝膠；
將硫磺研細(xì)并加入所述空白凝膠中攪勻得到第一凝膠混合物；
2)、黃連飲片用70％乙醇浸泡60min后，70％乙醇回流提取兩次，第一次90min、第二次60min，每次70％乙醇的使用量按固液比為1g生藥：12mL 70％乙醇的比例添加；
將乙醇浸提得到的溶液濃縮至每毫升藥液包含生藥0.3g～0.5g，趁熱加入占藥液體積15％的氯化鈉，攪拌使溶解，放至室溫后冷藏24h后取出并過(guò)濾，得到黃連總生物堿提取物。
大黃飲片用70％乙醇浸泡120min，70％乙醇回流提取兩次，每次60min，每次70％乙醇的使用量按固液比為1g生藥：10mL 70％乙醇；提取液減壓回收乙醇，濃縮至稠膏。
將冰片及所述大黃醇提物用70％乙醇溶解后加入所述第一凝膠混合物并攪勻得到第二凝膠混合物；
3)、將聚乙烯醇05-88加入少量蒸餾水中并加熱溶解，將所述黃連總生物堿提取物加入得到的溶液中攪勻得到混合液；再將所述混合液加入到所述第二凝膠混合物中并攪勻得到第三凝膠混合物；
4)、向所述第三凝膠混合物中加入甘油、丙二醇、聚山梨酯-80及羥苯乙酯，攪勻；再加入蒸餾水并攪勻即得。
實(shí)驗(yàn)例1痤瘡凝膠藥學(xué)研究
1.1藥物提取與純化
1.1.1黃連、大黃提取溶媒選擇：分別以水和70％乙醇作為溶媒進(jìn)行提取，得到的提取物進(jìn)行抑菌試驗(yàn)。結(jié)果表明大黃醇提液和黃連醇提液抑菌效果均優(yōu)于水提液，故選乙醇為大黃、黃連的提取溶媒。
1.1.2大黃的提取條件優(yōu)化：選擇乙醇用量(A)、提取次數(shù)和時(shí)間(B)、浸泡時(shí)間(C)、乙醇濃度(D)四因素的二水平，設(shè)計(jì)L8(27)正交試驗(yàn)，評(píng)價(jià)指標(biāo)為大黃素含量，采用HPLC法測(cè)定。優(yōu)選出的條件為A2B1C2D1，即大黃飲片用70％乙醇浸泡兩小時(shí)后，回流提取兩次，每次1小時(shí)，每次溶劑量為生藥量的十倍；提取液減壓回收乙醇，濃縮至稠膏。
1.1.3黃連的提取與純化：通過(guò)HPLC法測(cè)定提取液中鹽酸小檗堿的含量，確定采用黃連飲片浸泡一小時(shí)后提取。選擇乙醇濃度(A)、溶劑用量(B)、提取次數(shù)和時(shí)間(C)三因素各三水平，設(shè)計(jì)L9(34)正交試驗(yàn)，以鹽酸小檗堿含量和總生物堿含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)；優(yōu)選出的條件為A1B3C2，即黃連飲片用70％乙醇浸泡1小時(shí)后，回流提取兩次，第一次1.5小時(shí)、第二次1小時(shí)，每次溶劑量為生藥量的十二倍。
采用氯化鈉鹽析的方法純化黃連提取物。設(shè)計(jì)L9(34)正交試驗(yàn)，考察影響純化的主要因素藥液濃度和氯化鈉濃度各三個(gè)水平，以鹽酸小檗堿含量和總生物堿含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，優(yōu)選出純化條件為醇提掖濃縮至每ml藥液相當(dāng)于生藥0.4g，趁熱加入藥液體積15％的氯化鈉，攪拌使溶解，放至室溫后冷藏24小時(shí)。取出，濾過(guò)，得到沉淀物，即得。
1.2凝膠成型工藝研究
1.2.1凝膠中主要粘性基質(zhì)篩選：設(shè)計(jì)六種粘性基質(zhì)分別制成凝膠，以黏度、成膜性能和有效成分釋放速率作為考核指標(biāo)。黏度測(cè)定采用動(dòng)力黏度法；取樣品0.1g涂于健康人前臂內(nèi)側(cè)約4cm2，觀察成膜時(shí)間；采用改良的垂直式Franz擴(kuò)散池法，同前法測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)接收液中鹽酸小檗堿含量，計(jì)算釋藥速率。綜合考察結(jié)果，選定卡波姆940 0.5％加聚乙烯醇05-88 5％作為凝膠主要基質(zhì)。
1.2.2凝膠中透皮吸收促進(jìn)劑篩選：參考文獻(xiàn)和預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，設(shè)計(jì)7種含不同透皮劑的凝膠配方，采用垂直式改良Franz擴(kuò)散池，以小鼠腹部皮膚構(gòu)成擴(kuò)散室，將一定量的以上7種凝膠涂于角質(zhì)層，采用分光光度法測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)接收液中總生物堿含量，計(jì)算累積透皮量和透皮速率。結(jié)果顯示，透皮吸收促進(jìn)劑能增加凝膠中總生物堿的透皮速率和累積透皮量，其中含丙二醇10％的凝膠配方與不含透皮劑的凝膠配方有顯著差異，故以10％丙二醇作為痤瘡凝膠的透皮吸收促進(jìn)劑。
1.2.3正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選配方中其它基質(zhì)成分：設(shè)計(jì)L9(34)正交實(shí)驗(yàn)，制備9種凝膠，以總生物堿的累積釋放量和釋放速率作為考核指標(biāo)，確定配方中pH調(diào)節(jié)劑三乙醇胺、保濕劑甘油和乳化劑聚山梨酯-80的用量。根據(jù)正交試驗(yàn)結(jié)果，確定其它基質(zhì)用量為甘油10％、聚山梨酯-80 1％、三乙醇胺0.8％。
1.3痤瘡凝膠質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
【性狀】本品為棕黃色至黃棕色粘稠半固體。具有特殊氣味。
【鑒別】(1)取本品10g，加硅藻土10g分散，轉(zhuǎn)移至三角瓶中，加甲醇100ml超聲處理25分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml溶解，作為供試品溶液。另取黃連對(duì)照藥材0.3g，加甲醇20ml，超聲處理20分鐘，濾過(guò)，濾液作為對(duì)照藥材溶液。取鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿、鹽酸藥根堿對(duì)照品，分別加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液和對(duì)照品溶液各2μl，分別點(diǎn)一硅膠G板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-異丙醇-甲醇-水-三乙胺(3：3.5：1：1.5：0.5：1)為展開(kāi)劑，置用濃氨試液預(yù)飽和20分鐘的展開(kāi)缸中，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外燈(365nm)下檢視。供試品溶液色譜中與對(duì)照藥材、對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同黃色熒光斑點(diǎn)。
(2)取本品10g，加硅藻土10g分散，轉(zhuǎn)移至三角瓶中，加甲醇100ml，超聲處理15分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)?ml水溶解，另加鹽酸1ml，60℃超聲30分鐘，立即冷卻，三氯甲烷振搖提取2次，10ml/次，分取三氯甲烷層，蒸干，殘?jiān)尤燃淄?ml使溶解，作為供試品溶液。另取掌葉大黃藥材0.1g，加甲醇20ml，超聲處理15分鐘，其余操作按供試品溶液的制備方法，得對(duì)照藥材溶液。取蘆薈大黃素、大黃酸、大黃酚、大黃素甲醚和大黃素對(duì)照品，各加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液和對(duì)照品溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠H板上，以正己烷—醋酸乙酯—甲酸(30：10：0.5)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外燈(365nm)下檢視。供試品溶液色譜中與對(duì)照藥材、對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同橙黃色熒光斑點(diǎn)、黃色日光斑點(diǎn)；經(jīng)氨蒸氣熏后，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色。
(3)取冰片對(duì)照藥材2mg，加無(wú)水乙醇1ml使溶解，作為冰片對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述(1)中供試品溶液、對(duì)照藥材溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚(30-60℃)-乙酸乙酯(19：2)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)。
【檢查】pH值：取痤瘡凝膠1g，加蒸餾水10ml，混勻，照中國(guó)藥典(2015年版四部)通則0631pH值測(cè)定法試驗(yàn)，pH值6.0左右。
黏度：照中國(guó)藥典(2015年版四部)通則0633黏度測(cè)定法中第三法試驗(yàn)，動(dòng)力黏度為9000Pa·s左右。
【含量測(cè)定】照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2015年版四部通則0512)測(cè)定。
色譜條件：色譜柱：ZORBAX SBC18(4.6×150mm，5μm)；流動(dòng)相：乙腈-0.1％磷酸水溶液(50：50)(每100ml加十二烷基磺酸鈉0.1g)；流速：1.0ml·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：265nm；柱溫：室溫。
對(duì)照品溶液的制備：取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含0.236mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備：取痤瘡凝膠約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇-0.1％磷酸(1:1)溶液50ml，超聲處理15分鐘，放冷，再次稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
測(cè)定法：分別精密吸取對(duì)照品溶液1μl、供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
本品每克含黃連以鹽酸小檗堿計(jì)，不得少于0.25mg。
實(shí)驗(yàn)例2痤瘡凝膠藥效學(xué)研究
2.1需氧菌抑菌試驗(yàn)
標(biāo)準(zhǔn)菌種：埃希氏大腸桿菌、金黃色葡萄球菌及假單胞綠膿桿菌均為標(biāo)準(zhǔn)菌株，由北京市中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科提供。
藥物制備：痤瘡凝膠Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ(含藥量依次為1.65％、3.3％、3％、2.7％)用生理鹽水按1：2比例稀釋凝膠制劑作為原液。將上述原液高壓滅菌，用無(wú)菌培養(yǎng)液2倍倍比稀釋。
操作流程：以無(wú)菌操作，分別將培養(yǎng)后的菌懸液分區(qū)平涂于血平皿上，37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，分離出單個(gè)菌落。挑取單個(gè)菌落接種于2ml無(wú)菌營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)24h。用一固定接種環(huán)取一環(huán)上述培養(yǎng)的菌懸液再次接種于2ml無(wú)菌營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)6h～8h制成新鮮的菌液，用時(shí)稀釋10-3。
用液體培養(yǎng)基連續(xù)稀釋法中的試管法測(cè)定抗菌活性：以上述制備的藥物原液作為第一管，用營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基依次作2倍稀釋；營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液為陰性對(duì)照。向每管1ml藥液中分別加入10-3稀釋的新鮮菌液0.1ml，于37℃培養(yǎng)24h。鑒于中藥溶液無(wú)法以肉眼觀察其混濁程度，所以將藥液菌液混合液接種于瓊脂培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)24h，觀察有無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，以細(xì)菌不生長(zhǎng)的最高稀釋度為最小抑菌濃度(Mic)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果：痤瘡凝膠對(duì)金葡的Mic為0.168％，對(duì)大腸桿菌的Mic為0.413％，對(duì)綠膿桿菌的Mic為0.825％。
2.2厭氧菌抑菌試驗(yàn)
菌株：痤瘡丙酸桿菌，標(biāo)準(zhǔn)菌株，由西南生物產(chǎn)業(yè)基地提供。
藥物制備：經(jīng)過(guò)需氧菌抑菌試驗(yàn)的初步篩選確定痤瘡凝膠藥物濃度為1.4％。將凝膠與硫乙醇酸鹽厭氧培養(yǎng)基按1：2比例稀釋，此濃度作為第一管，以下按2倍倍比稀釋成不同的濃度梯度。設(shè)不含藥物的硫乙醇酸鹽培養(yǎng)液為陰性對(duì)照，10U青霉素為陽(yáng)性對(duì)照。
操作流程：以無(wú)菌操作，將菌液按1：10接種于硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基中，置于手套式厭氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2周。向每2ml不同濃度的藥液中加入培養(yǎng)后的菌懸液0.1ml，厭氧培養(yǎng)1周，肉眼觀察培養(yǎng)液中是否有菌生長(zhǎng)，以細(xì)菌不生長(zhǎng)的最高稀釋度為最小抑菌濃度(Mic)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果：陰性對(duì)照組的痤瘡桿菌正常生長(zhǎng)，10U青霉素可明顯抑制厭氧菌的生長(zhǎng)，痤瘡凝膠對(duì)痤瘡丙酸桿菌的Mic為0.35％。
最后應(yīng)說(shuō)明的是：以上各實(shí)施例僅用以說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案，而非對(duì)其限制；盡管參照前述各實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說(shuō)明，但本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解：其依然可以對(duì)前述各實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分或者全部技術(shù)特征進(jìn)行等同替換；而這些修改或者替換，并不使相應(yīng)技術(shù)方案的本質(zhì)脫離本發(fā)明各實(shí)施例技術(shù)方案的范圍。