本發(fā)明涉及特定分子量范圍的玻璃酸二甲基硅烷醇復(fù)合物在醫(yī)藥和日用化工領(lǐng)域的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：玻璃酸(hyalouronicacid，HA)又名透明質(zhì)酸，是由(1-β-4)D-葡糖醛酸和(1-β-3)N-乙?；?D-氨基葡糖雙糖單位重復(fù)連接組成的鏈狀聚陰離子黏多糖。HA是構(gòu)成皮膚細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分之一，自20世紀(jì)80年代開始應(yīng)用于化妝品，被譽(yù)為理想的天然保濕因子。玻璃酸二甲基硅烷醇復(fù)合物(dimethylsilanolhyaluronate,DSHA)具有保濕、消除黏濕感、抗降解以及預(yù)防和修復(fù)皮膚損傷的作用(FR2561915和MC200122)。有研究發(fā)現(xiàn)50kDa～750kDA分子量范圍的HA能夠刺激角質(zhì)細(xì)胞的增殖[參考文獻(xiàn)：①KayaG,TranC,SorgO,etal，HyaluronatefragmentsreverseskinatrophybyaCD44-dependentmechanism.PLoSMed.2006,3(12):2291-2303；②FR2865651]，從而增加表皮的厚度，提高皮膚的屏障作用。在此基礎(chǔ)上，MC200122公開了采用分子量150kDa～750kDa的HA與硅烷醇結(jié)合的復(fù)合物，用于預(yù)防和修復(fù)皮膚損傷?；谄つw和黏膜的不同在于：皮膚的表皮能夠不斷分裂形成最外一層的角質(zhì)層，而黏膜是分布在口腔、鼻腔、呼吸道、消化道、尿道、陰道等器官內(nèi)表面的一層薄膜，內(nèi)有血管和神經(jīng)，能分泌黏液，為未角化的上皮組織?，F(xiàn)有的DSHA復(fù)合物應(yīng)用研究尚未見(jiàn)涉及黏膜，在我們的研究中，出乎意料地發(fā)現(xiàn)，除了保濕、潤(rùn)滑作用之外，DSHA對(duì)陰道黏膜細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖有一定促進(jìn)作用，動(dòng)物試驗(yàn)研究表明，DSHA對(duì)口腔、鼻腔和陰道黏膜無(wú)刺激作用，能夠減輕外界刺激對(duì)黏膜細(xì)胞正常功能的影響，對(duì)黏膜微小損傷的修復(fù)和功能恢復(fù)有顯著的促進(jìn)作用。本發(fā)明開發(fā)DSHA在黏膜領(lǐng)域的應(yīng)用，制備改善口腔、鼻腔和陰道黏膜功能的組合物，可有效減輕外界因素對(duì)黏膜的刺激，緩解身體自身原因造成的黏膜功能紊亂，恢復(fù)黏膜的正常功能，預(yù)防和減少相關(guān)疾病的發(fā)生。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供特定分子量范圍的玻璃酸二甲基硅烷醇復(fù)合物作為黏膜保護(hù)劑的用途，以及含有所述復(fù)合物的組合物及其在制備改善口腔黏膜、鼻腔黏膜和陰道黏膜功能產(chǎn)品的應(yīng)用，屬于醫(yī)藥和日用化工領(lǐng)域。本發(fā)明提供一種平均分子量范圍在300kDa～1800kDa的玻璃酸二甲基硅烷醇復(fù)合物作為黏膜保護(hù)劑在制備組合物中的用途，所制備的組合物用于保護(hù)和/或恢復(fù)黏膜的功能。所述的黏膜包括分布于口腔、鼻腔和陰道黏膜。本發(fā)明提供的用作黏膜保護(hù)劑的玻璃酸二甲基硅烷醇復(fù)合物是指二甲基硅烷一醇或二甲基硅烷二醇與玻璃酸的復(fù)合物，其獲得可以采用已公開的制備方法，如將玻璃酸溶液和硅烷醇鈉溶液混合反應(yīng)后用陽(yáng)離子交換樹脂調(diào)整pH獲得復(fù)合物水溶液(FR2961915)，按比例將硅烷醇水溶液和玻璃酸水溶液混合(EP0289366)，有機(jī)硅化合物與玻璃酸在水和乙醇溶液中反應(yīng)結(jié)合后蒸除溶劑(EP0867445)，也可以采用氯硅烷與混懸在有機(jī)溶液中的玻璃酸反應(yīng)后經(jīng)沉淀獲得固體復(fù)合物(CN103450368)。本發(fā)明所述玻璃酸二甲基硅烷醇復(fù)合物的平均分子量是指采用高效分子排阻色譜-多角激光散射法(GPC-MALLS)測(cè)定的平均分子量，其范圍在300kDa～1800kDa，在該范圍內(nèi)的復(fù)合物均可以作為黏膜保護(hù)劑用于制備口腔護(hù)理產(chǎn)品、鼻腔護(hù)理產(chǎn)品或陰道護(hù)理產(chǎn)品。其中平均分子量相對(duì)較低的一組(I組)優(yōu)選范圍在300kDa～900kDa，更優(yōu)選500kDa～800kDa；另外平均分子量相對(duì)較高的一組(II組)優(yōu)選范圍在900kDa～1800kDa，更優(yōu)選1000kDa～1300kDa。本發(fā)明用于黏膜保護(hù)的玻璃酸二甲基硅烷醇復(fù)合物可以采用平均分子量的單一組分，也可以采用高、低分子量的混合組分，例如以I組:II組在20:1～1:20的比例范圍內(nèi)，將不同平均分子量的玻璃酸二甲基硅烷醇復(fù)合物混合作為黏膜保護(hù)劑，用于制備口腔護(hù)理產(chǎn)品、鼻腔護(hù)理產(chǎn)品或陰道護(hù)理產(chǎn)品。對(duì)于制備口腔護(hù)理產(chǎn)品、鼻腔護(hù)理產(chǎn)品，采用平均分子量相對(duì)較低的一組復(fù)合物效果較好，而對(duì)于陰道護(hù)理產(chǎn)品制，采用平均分子量相對(duì)較高的一組復(fù)合物效果較好。但是不排除采用二者按一定比例混合制備口腔護(hù)理產(chǎn)品、鼻腔護(hù)理產(chǎn)品或陰道護(hù)理產(chǎn)品，例如以I組:II組在10:1～1:1的比例范圍將不同平均分子量的玻璃酸二甲基硅烷醇復(fù)合物混合作為黏膜保護(hù)劑，制備口鼻腔護(hù)理產(chǎn)品，或以I組:II組在1:1～1:10的比例范圍將不同平均分子量的玻璃酸二甲基硅烷醇復(fù)合物混合作為黏膜保護(hù)劑，制備陰道護(hù)理產(chǎn)品。本發(fā)明提供的含有上述復(fù)合物的、用于黏膜保護(hù)的組合物，可以是以單劑量包裝、一次性使用、不含防腐劑的無(wú)菌產(chǎn)品方式提供，也可以是以多劑量包裝、多次重復(fù)使用、含有防腐劑的無(wú)菌產(chǎn)品方式提供。后一種方式的產(chǎn)品組合物中可以包括防腐劑，所述防腐劑選自潔爾滅、玉潔新、洗必泰、山梨酸、山梨酸鉀、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯、苯乙醇、對(duì)甲基芐基醇、1,2-己二醇、1,2-戊二醇、2-甲基-1,3-丙二醇、辛甘醇和苯氧乙醇其中的一種或兩種以上的混合物。防腐劑的用量可以是化妝品、護(hù)膚品、藥物制劑中的常規(guī)用量，或低于常規(guī)用量，根據(jù)防腐劑的種類和具體的產(chǎn)品種類的不同而不同。本發(fā)明提供的用于黏膜保護(hù)的組合物中所含有的玻璃酸二甲基硅烷醇復(fù)合物的濃度為0.05g/L～50g/L，優(yōu)選0.5g/L～20g/L，更優(yōu)選1g/L～10g/L。本發(fā)明所述玻璃酸二甲基硅烷醇復(fù)合物作為黏膜保護(hù)劑的用途，可以用于制備預(yù)防和/或治療黏膜功能紊亂的口鼻腔護(hù)理產(chǎn)品和/或陰道護(hù)理產(chǎn)品，也可以用于制備預(yù)防和/或治療黏膜功能紊亂的口鼻腔護(hù)理產(chǎn)品和/或陰道護(hù)理產(chǎn)品，也可以用于制備預(yù)防和/或治療黏膜功能紊亂的口鼻腔護(hù)理產(chǎn)品和/或陰道護(hù)理產(chǎn)品。所述黏膜功能紊亂選自口腔黏膜、鼻腔黏膜和陰道黏膜的損壞，口腔黏膜損壞如發(fā)生口舌潰爛、舌體干裂、，聲音嘶啞、口干口苦、口腔異味、口腔炎、唇炎和復(fù)發(fā)性口瘡等癥狀，鼻腔黏膜損壞如發(fā)生鼻黏膜干燥、萎縮、纖毛功能障礙和脫落等癥狀，陰道黏膜損壞如發(fā)生陰道干澀、分泌減少和萎縮等癥狀。所述黏膜功能紊亂可以是由外界因素引起的黏膜功能紊亂，包括：化學(xué)刺激(食物、藥物殘留)、微生物(細(xì)菌和病毒)感染造成的口腔黏膜潰瘍及牙周疾病；干燥環(huán)境，霧霾、粉塵和化學(xué)性空氣污染、長(zhǎng)期藥物刺激、頻繁探鼻造成的鼻腔黏膜干燥、纖毛脫落和輕微損傷；長(zhǎng)期使用藥物(如抗腫瘤藥、抗抑郁藥和抗組胺藥)引起分泌減少造成的鼻腔黏膜干燥和陰道黏膜干燥；藥物刺激(如殺精劑、消毒劑)和頻繁性行為造成的陰道黏膜干燥、褶皺減少和輕微損傷。所述黏膜功能紊亂可以是由身體自身原因引起的黏膜功能紊亂，包括：自身機(jī)體防御機(jī)能缺陷，營(yíng)養(yǎng)不良(如維生素B缺乏)，精神壓力、刺激、工作疲勞、失眠引起的內(nèi)分泌失調(diào)，結(jié)核、腎病、遺傳等疾病引起的口臭、口干、口苦、口聲音嘶啞、口腔炎、唇炎、牙齦炎；鼻腔內(nèi)鏡手術(shù)后的鼻黏膜愈合和結(jié)痂；卵巢切除后或其它疾病(更年期、肥胖和糖尿病等)引起雌激素分泌減少造成的陰道干燥、外陰瘙癢、萎縮性陰道炎。本發(fā)明黏膜保護(hù)劑的用途，包括用于預(yù)防和/或治療口腔黏膜例如預(yù)防和緩解口舌潰爛、舌體干裂、，聲音嘶啞、口干口苦、口腔異味、口腔炎、唇炎和復(fù)發(fā)性口瘡等癥狀，恢復(fù)口腔黏膜的正常功能，對(duì)預(yù)防口腔潰瘍、牙齦炎等口腔疾病以及減少由于口腔疾病引起的心血管疾病、敗血癥、糖尿病、高血壓和口腔癌的發(fā)生具有積極意義。本發(fā)明黏膜保護(hù)劑的用途，包括用于預(yù)防和/或治療鼻腔黏膜功能紊亂，例如預(yù)防和緩解鼻腔干癢、灼熱、刺痛、異物感、嗅覺(jué)輕微減退等癥狀，恢復(fù)鼻腔黏膜的自凈功能，及時(shí)清除鼻腔污物及惡性雜質(zhì)(如壞死組織、血痂和分泌物)，改變探鼻等不良習(xí)慣，對(duì)預(yù)防流感和肺炎等呼吸系統(tǒng)疾病以及減少鼻炎和鼻咽癌的發(fā)生具有積極意義。本發(fā)明黏膜保護(hù)劑的用途，包括用于預(yù)防和/或治療陰道黏膜功能紊亂，例如預(yù)防和緩解陰道干燥、瘙癢、灼熱等癥狀，促進(jìn)黏膜微小損傷修復(fù)，提高陰道濕潤(rùn)度，減輕外陰干澀刺痛癥狀，改善陰道萎縮，增加陰道彈性，減輕性交疼痛，對(duì)預(yù)防陰道炎、宮頸炎、宮頸糜爛、陰道萎縮的發(fā)生具有積極意義。本發(fā)明用于黏膜保護(hù)用途的組合物，可以是溶液、凝膠、膏、霜或乳液?？梢允且宰o(hù)理用品的產(chǎn)品形式上市，也可以是以醫(yī)療器械的產(chǎn)品形式上市。該組合物除了含有玻璃酸二甲基硅烷醇復(fù)合物以外，還可以加入化妝品、護(hù)膚品、藥物制劑中的常用的成分，配制成為溶液、凝膠、膏、霜或乳液等多種形式。例如滴鼻液、洗鼻液、噴鼻劑、鼻用凝膠、鼻用軟膏、陰道凝膠、陰道護(hù)理液、陰道沖洗液、陰道滋潤(rùn)霜、陰道修復(fù)乳液等。具體實(shí)施例以下實(shí)施例是為了更好地說(shuō)明本發(fā)明，不是限制本發(fā)明。實(shí)施例1玻璃酸二甲基硅烷醇復(fù)合物(DSHA)對(duì)鼻腔黏膜的保護(hù)作用根據(jù)文獻(xiàn)方法[蔣新國(guó),崔景斌,方曉玲,等。藥物的鼻黏膜纖毛毒性及評(píng)價(jià)方法。藥學(xué)學(xué)報(bào),1995,30(11):848-853]，采用中華大蟾蜍作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，以上顎黏膜纖毛持續(xù)運(yùn)動(dòng)時(shí)間作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，探討DSHA對(duì)鼻腔黏膜的保護(hù)作用。實(shí)驗(yàn)一DSHA減輕干燥對(duì)蟾蜍上顎黏膜的刺激作用方法：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分組(表1-1)，仰臥固定，于上顎黏膜處滴加0.5ml受試液，使溶液完全浸沒(méi)上顎30min后，用1200W電動(dòng)吹風(fēng)機(jī)距離30cm中檔風(fēng)速連續(xù)吹15min，然后用生理鹽水(NS)沖洗、分離蟾蜍兩眼之間面積為3mm×3mm的黏膜，平鋪于載玻片上，使黏膜面向上，于表面滴加NS0.2ml，加蓋玻片于10×40倍顯微鏡下觀察黏膜纖毛的擺動(dòng)情況，隨后置于25℃±2℃，RH(60±5)％。間隔時(shí)間取出標(biāo)本，置顯微鏡下觀察纖毛擺動(dòng)情況，直至纖毛擺動(dòng)停止，記錄纖毛持續(xù)運(yùn)動(dòng)時(shí)間。以NS組的纖毛持續(xù)擺動(dòng)時(shí)間為100％，計(jì)算其他組纖毛持續(xù)運(yùn)動(dòng)時(shí)間的相對(duì)百分率。相對(duì)百分率越高，說(shuō)明黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)越好。表1-1不同分子量DSHA對(duì)蟾蜍上顎黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)功能的保護(hù)作用(n＝6)注：*與對(duì)照組比較，p＜0.05，**與對(duì)照組比較，p＜0.01結(jié)果顯示，試驗(yàn)I組和試驗(yàn)VII組纖毛持續(xù)運(yùn)動(dòng)時(shí)間與對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，說(shuō)明平均分子量較低和較高的DSHA(260kDa和2200kDa)在減輕干燥對(duì)蟾蜍上顎黏膜刺激作用與生理鹽水相當(dāng)(p＞0.05)，對(duì)纖毛運(yùn)動(dòng)功能的基本無(wú)保護(hù)，而其它5組DSHA對(duì)蟾蜍上顎黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)功能的均有顯著保護(hù)作用(p＜0.01)。實(shí)驗(yàn)二DSHA減輕藥物對(duì)蟾蜍上顎黏膜的刺激作用方法：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分組(表1-2)，仰臥固定，用20ml受試液持續(xù)沖洗上顎黏膜約5min，濾紙吸干黏膜表面液體，于上顎黏膜處滴加1％鹽酸偽麻黃堿滴鼻液0.5ml，使溶液完全浸沒(méi)上顎30min后，用生理鹽水(NS)沖洗、分離蟾蜍兩眼之間面積為3mm×3mm的黏膜，平鋪于載玻片上，使黏膜面向上，于表面滴加NS0.2ml，加蓋玻片于10×40倍顯微鏡下觀察黏膜纖毛的擺動(dòng)情況，隨后置于25℃±2℃，RH(60±5)％?？瞻讓?duì)照不滴加鹽酸偽麻黃堿滴鼻液。間隔時(shí)間取出標(biāo)本，置顯微鏡下觀察纖毛擺動(dòng)情況，直至纖毛擺動(dòng)停止，記錄纖毛持續(xù)運(yùn)動(dòng)時(shí)間。以空白對(duì)照組的纖毛持續(xù)擺動(dòng)時(shí)間為100％，計(jì)算其他組纖毛持續(xù)運(yùn)動(dòng)時(shí)間的相對(duì)百分率。相對(duì)百分率越高，說(shuō)明黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)越好。表1-2不同分子量DSHA對(duì)蟾蜍上顎黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)功能的保護(hù)作用(n＝6)注：*與對(duì)照組比較，p＜0.05，**與對(duì)照組比較，p＜0.01，#與空白對(duì)照組比較，p＜0.05結(jié)果顯示，試驗(yàn)組I和VIII纖毛持續(xù)運(yùn)動(dòng)時(shí)間與對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，說(shuō)明平均分子量較低和較高的DSHA(260kDa、530kDa和2200kDa)在減輕藥物對(duì)蟾蜍上顎黏膜刺激作用與生理鹽水相當(dāng)(p＞0.05)，對(duì)纖毛運(yùn)動(dòng)的功能基本無(wú)保護(hù)作用，而其它5組DSHA對(duì)蟾蜍上顎黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)功能的均有顯著保護(hù)作用(p＜0.05)，試驗(yàn)組III、IV、V和VI纖毛持續(xù)運(yùn)動(dòng)時(shí)間與空白對(duì)照組相比無(wú)顯著差異(p＞0.05)，說(shuō)明采用DSHA溶液沖洗黏膜，能夠較好的緩解或消除藥物的刺激作用，能使黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)至正常水平。實(shí)施例2玻璃酸二甲基硅烷醇復(fù)合物對(duì)陰道黏膜的保護(hù)作用實(shí)驗(yàn)一DSHA減輕藥物對(duì)陰道上皮細(xì)胞的毒性根據(jù)文獻(xiàn)方法[FichorovaRN,RheinwaldJG,AndersonDJ.Generationofpapillomavirus-immortalizedcelllinesfromnormalhumanEct1ocervical,End1ocervical,andvaginalepitheliumthatmaintainexpressionoftissue-specificdifferentiationproteins.BiolReprod,1997,57(4):847-855]，采用陰道上皮細(xì)胞Vk2/E6E7體外培養(yǎng)試驗(yàn)，以細(xì)胞相對(duì)增值率作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，探討DSHA對(duì)陰道黏膜的保護(hù)作用。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期VK2/E6E7細(xì)胞株50μl接種于96孔培養(yǎng)板，細(xì)胞種植密度為105個(gè)/mL。加入含有DSHA或HA的培養(yǎng)液作為試驗(yàn)組，對(duì)照組和正常組采用不含DSHA和HA的培養(yǎng)液處理，留一列孔不加細(xì)胞，只加培養(yǎng)液作為空白對(duì)照。置5％CO2培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)24h，吸出孔內(nèi)培養(yǎng)液，試驗(yàn)組和對(duì)照組加入含有0.01mg/ml醋酸氯己定的培養(yǎng)液，正常組采用不含醋酸氯己定的培養(yǎng)液處理，37℃下，5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1h之后，吸出孔內(nèi)培養(yǎng)液，更換新鮮培養(yǎng)液，培養(yǎng)過(guò)夜。每孔加入20μlMTT液(5mg/ml)，避光孵育4h。吸棄上清液后，每孔加入DMSO液100μl，置搖床低速振蕩20min。用酶標(biāo)儀在570nm波長(zhǎng)下檢測(cè)各孔A值，記錄結(jié)果。計(jì)算細(xì)胞的相對(duì)增值率(％)＝(An-A0)/(Ay-A0)×100％。其中An、A0和Ay分別表示試驗(yàn)組、空白對(duì)照組和對(duì)照組的吸收值，結(jié)果見(jiàn)下表。表2-1不同分子量DSHA對(duì)VK2/E6E7的保護(hù)作用(n＝6)注：*與對(duì)照組比較，p＜0.05；**與對(duì)照組比較p＜0.01結(jié)果顯示，8個(gè)試驗(yàn)組細(xì)胞相對(duì)增值率均高于對(duì)照組，除試驗(yàn)組I組和試驗(yàn)VIII細(xì)胞相對(duì)增值率與對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異外(p＞0.05)，其他6組細(xì)胞相對(duì)增值率與對(duì)照組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.05),說(shuō)明DSHA溶液能夠減輕醋酸氯己定對(duì)VK2/E6E7的毒性，對(duì)陰道上皮細(xì)胞具有保護(hù)作用，分子量較低的DSHA(260kDa)和較高的DSHA(2200kDa)該保護(hù)作用不明顯。表2-2不同濃度DSHA和HA對(duì)VK2/E6E7的保護(hù)作用(n＝6)注：*與對(duì)照組比較，p＜0.05；**與對(duì)照組比較p＜0.01結(jié)果顯示，試驗(yàn)組i～iv與試驗(yàn)組v～viii兩兩相比，前者細(xì)胞相對(duì)增值率均高于后者，說(shuō)明分子量相近、濃度相同的DSHA溶液減輕醋酸氯己定對(duì)VK2/E6E7的毒性、對(duì)陰道上皮細(xì)胞的保護(hù)作用好于HA溶液，試驗(yàn)組i、v、vi和試驗(yàn)組vii與對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.05)，說(shuō)明HA溶液濃度1.25mg/ml以上、DSHA溶液濃度0.05mg/ml以上能夠減輕醋酸氯己定對(duì)VK2/E6E7的毒性，對(duì)陰道上皮細(xì)胞具有顯著保護(hù)作用。實(shí)驗(yàn)二DSHA減輕藥物對(duì)大鼠陰道黏膜的刺激作用方法：健康雌性SD大鼠隨機(jī)分組(表2-2)，損傷陰道模型于試驗(yàn)前24h采用細(xì)砂紙旋轉(zhuǎn)摩擦3次，至黏膜有點(diǎn)狀出血的輕微損傷。根據(jù)文獻(xiàn)試驗(yàn)方法和評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)[EcksteinP，JacksonMC，MillmanN，etal.Comparisonofvaginaltolerancetestsofspermicidalpreparationsinrabbitsandmonkeys.JReprodFertil，1969，20(1):85-93]，對(duì)照組和試驗(yàn)組動(dòng)物陰道內(nèi)注入0.01mg/ml醋酸氯己定0.2ml，2h后再注入受試液0.2ml，每天1次，連續(xù)10d，第11天處死動(dòng)物，取陰道組織進(jìn)行固定、包埋、切片和病理組織學(xué)檢查。根據(jù)黏膜水腫，血管充血，白細(xì)胞浸潤(rùn)，上皮潰瘍的不同程度分別在1～4分范圍內(nèi)計(jì)分，最高分值16分，總分值在0～8分之間為輕度刺激。結(jié)果如下。表2-3不同分子量DSHA對(duì)大鼠陰道黏膜的保護(hù)作用(n＝6)注：*與對(duì)照組比較，p＜0.05；#損傷黏膜與正常黏膜相比，p＜0.05結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組I-IV正常黏膜和損傷黏膜刺激作用評(píng)分具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異外(p＜0.05)，說(shuō)明DSHA溶液能夠顯著減輕醋酸氯己定對(duì)陰道黏膜的刺激作用。正常黏膜和損傷黏膜相比，除空白對(duì)照組和對(duì)照組外，其它4組刺激作用評(píng)分均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)，說(shuō)明DSHA溶液能夠促進(jìn)陰道黏膜輕微損傷的修復(fù)，使醋酸氯己定對(duì)損傷黏膜的刺激作用減輕至與對(duì)正常黏膜的刺激作用相當(dāng)。實(shí)驗(yàn)三DSHA對(duì)雌激素缺失模型大鼠陰道黏膜的保護(hù)作用選取體重200±20g的SD雌性大鼠為試驗(yàn)動(dòng)物，隨機(jī)分組(表2-3)，對(duì)照組和試驗(yàn)組手術(shù)切除動(dòng)物卵巢，假手術(shù)組切除相同體積大小的脂肪，術(shù)后選擇仍表現(xiàn)動(dòng)情周期的動(dòng)物，每只動(dòng)物陰道內(nèi)注入受試液0.2ml，每天1次，連續(xù)14d，第15天處死動(dòng)物，取陰道組織進(jìn)行固定、包埋、切片和HE染色，鏡下觀察和測(cè)量黏膜厚度，以假手術(shù)對(duì)照組黏膜厚度為100％，計(jì)算各組黏膜厚度百分比。結(jié)果如下。表2-2不同分子量DSHA對(duì)雌激素缺失模型大鼠陰道黏膜的保護(hù)作用(n＝6)組別受試液黏膜厚度百分比/％假手術(shù)組NS(0.9％NaCl)100±7.84對(duì)照組NS(0.9％NaCl)28.67±11.91#試驗(yàn)組I1％DSHA(Mr＝260kDa)-NS33.70±18.46#試驗(yàn)組II1％DSHA(Mr＝530kDa)-NS57.76±10.04#*試驗(yàn)組III1％DSHA(Mr＝970kDa)-NS65.17±10.42#*試驗(yàn)組IV1％DSHA(Mr＝1260kDa)-NS65.31±8.84#**與對(duì)照組比較，p＜0.05；#與假手術(shù)組比較，p＜0.05結(jié)果顯示，與假手術(shù)組相比，試驗(yàn)組I-IV和手術(shù)對(duì)照組陰道黏膜厚度均明顯減小(p＜0.05)，說(shuō)明卵巢切除術(shù)對(duì)動(dòng)物陰道黏膜具有顯著的影響。試驗(yàn)II、III和IV陰道黏膜厚度較對(duì)照組有明顯增加(p＜0.05)，說(shuō)明平均分子量較高的DSHA能夠顯著減輕卵巢切除術(shù)對(duì)動(dòng)物陰道黏膜的影響，具有明顯的保護(hù)作用，試驗(yàn)組I陰道黏膜厚度與對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)，說(shuō)明平均分子量較低的DSHA(260kDa)對(duì)陰道黏膜的保護(hù)作用不明顯。實(shí)施例3溶液型黏膜保護(hù)劑，每100ml保護(hù)劑中的成分和含量(g)：將氫氧化鈉單獨(dú)溶解于純化水，備用。其他輔料投入純化水中，加熱、攪拌溶解，冷卻至室溫后，加入DSHA，混合均勻，加入適量氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值，過(guò)濾除菌，分裝于適宜的包裝或裝置中，可以制備為用于保護(hù)口腔黏膜的漱口水、牙科清掃水、口腔噴霧劑，也可以制備為用于保護(hù)鼻腔黏膜的滴鼻液、洗鼻液、鼻噴霧劑，也可以制備為用于保護(hù)陰道黏膜的陰道護(hù)理液、陰道沖洗液。實(shí)施例4乳液型黏膜保護(hù)劑，每100ml保護(hù)劑中的成分和含量(g)：將DSHA和水溶性輔料投入純化水中，攪拌溶解，加熱至50℃～70℃；油溶性輔料與聚乙二醇-7-硬脂酸酯和油酸聚乙二醇甘油酯混合，加熱至50℃～70℃，兩相混合乳化，降溫至40℃以下，加入事先用少量醇類溶解的易揮發(fā)物質(zhì)(薄荷腦、樟腦和冰片等)，均質(zhì)后分裝于適宜的包裝或裝置中，可以制備為用于保護(hù)口腔黏膜的漱口水、牙科清掃水、口腔噴霧劑，也可以制備為用于保護(hù)鼻腔黏膜的滴鼻液、洗鼻液、鼻噴霧劑，也可以制備為用于保護(hù)陰道黏膜的陰道護(hù)理液、陰道沖洗液。實(shí)施例5凝膠型黏膜保護(hù)劑，每100ml保護(hù)劑中的成分和含量(g)：將氫氧化鈉單獨(dú)溶解于純化水，備用。將防腐劑加入純化水、丙二醇或丙三醇中，加熱、攪拌溶解，備用。將卡波姆投入純化水中，攪拌溶解，加入DSHA，混合均勻，再加入防腐劑溶液，混合均勻，補(bǔ)加丙二醇或丙三醇至全量，最后加入適量氫氧化鈉溶液或三乙醇胺調(diào)節(jié)pH值，攪拌均勻后分裝于適宜的包裝或裝置中，可以制備為用于保護(hù)口腔黏膜的口腔用凝膠和牙科用凝膠，也可以制備為用于保護(hù)鼻腔黏膜的鼻用凝膠，也可以制備為用于保護(hù)陰道黏膜的陰道凝膠。實(shí)施例6膏霜型黏膜保護(hù)劑，每100g保護(hù)劑中的成分和含量(g)：制備方法：將氫氧化鈉單獨(dú)溶解于純化水，備用。將防腐劑加入到純化水、丙二醇中，加熱、攪拌溶解，備用。水相：將卡波姆、聚甘油-10、C12-13醇磷酸酯鉀投入純化水中，攪拌溶解并加熱至75-80℃，備用；油相：將油相成分進(jìn)行加熱至75-80熔解，備用；水相與油相混合，乳化后加入適量氫氧化鈉溶液或三乙醇胺調(diào)節(jié)pH值，降溫至室溫后補(bǔ)加純化水，攪拌均勻后分裝于適宜的包裝或裝置中，可以制備為用于保護(hù)口腔黏膜、鼻腔黏膜和陰道黏膜的霜?jiǎng)?。?dāng)前第1頁(yè)1 2 3