本發(fā)明涉及桑黃乙醇提取物在機(jī)體中治療尿毒癥的新用途，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

尿毒癥是影響人類(lèi)健康的重大疾病之一。隨著高血壓和糖尿病患病率的增加，尿毒癥的發(fā)生率在持續(xù)上升。尿毒癥是指在各種慢性腎臟疾病發(fā)病的基礎(chǔ)上，不可逆地喪失腎功能和腎單位，導(dǎo)致以代謝產(chǎn)物和酸堿平衡紊亂以及內(nèi)分泌失調(diào)為特征的臨床綜合征。國(guó)際腎臟病協(xié)會(huì)統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示尿毒癥在自然人群中的年發(fā)病率為98-198/100萬(wàn)，經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)的日本和美國(guó)的發(fā)病率分別達(dá)996/100萬(wàn)和802/100萬(wàn)。

目前常用內(nèi)科療法、透析療法及腎臟移植等。這些療法可以改善臨床癥狀，減輕臨床患者的痛苦，但內(nèi)科療法尚難以徹底阻斷病理進(jìn)展，且副作用大；透析只能解決腎臟的部分代謝問(wèn)題，尚不能較好改善腎臟的內(nèi)分泌功能；腎移植的腎源有限，且免疫排斥現(xiàn)象一時(shí)還難以解決。加之透析療法和腎臟移植費(fèi)用昂貴，使眾多患者望而卻步。

隨著各種疾病發(fā)病率的上升，藥物的使用越來(lái)越多，因藥物引起的腎損傷發(fā)生率很高（大部分藥物及其代謝產(chǎn)物經(jīng)腎臟排出體外）。研究顯示藥物導(dǎo)致急性腎小管壞死或急性腎間質(zhì)腎炎的發(fā)生率高達(dá)18.3%，目前臨床常見(jiàn)的對(duì)腎損傷的藥物有抗感染類(lèi)（氨基糖苷類(lèi)、萬(wàn)古霉素、β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素、兩性霉素B、抗病毒制劑）；免疫制劑（環(huán)孢素、它克莫司）；抗腫瘤藥物（順鉑、異環(huán)磷酰胺、甲氨蝶呤、多柔比星、二炭磷酸鹽化合物）、甾體類(lèi)抗炎藥（乙酰水楊酸、對(duì)乙酰氨基酚、雙氯芬酸）；天然產(chǎn)物化學(xué)成分（馬兜鈴酸、雷公藤甲素）及利尿藥（甘露醇）等，其中抗生素腎損害的發(fā)生率達(dá)36%。藥物性腎損傷位居與腎臟有關(guān)的疾病的首位，特別是引起醫(yī)學(xué)界的廣泛關(guān)注。藥物性腎損傷也是新藥開(kāi)發(fā)過(guò)程中的常見(jiàn)問(wèn)題，它是導(dǎo)致藥物撤市的重要原因之一，消耗了大量的人力和財(cái)力。因此，如何有效防治尿毒癥一直是全球關(guān)注的難點(diǎn)和熱點(diǎn)之一，繼續(xù)堅(jiān)持不懈地研究和探尋治療尿毒癥新藥物仍是當(dāng)前醫(yī)學(xué)研究的一項(xiàng)艱巨任務(wù)。

目前，尿毒癥的治療有西藥藥用活性炭和中藥復(fù)方尿毒清顆粒、百令膠囊等。西藥雖然有一定的療效，但存在毒副作用大且復(fù)發(fā)率高等不足，如藥用活性炭在疾病的初期階段有效，但后期反而會(huì)使病情加重，不能改善增加血肌酐和尿素，出現(xiàn)難以控制的癥狀，最終會(huì)發(fā)展為更嚴(yán)重的后果。中醫(yī)藥在防病治病方面有著獨(dú)特的特點(diǎn)。

尿毒癥病多由慢性腎臟病進(jìn)一步發(fā)展而來(lái)，尿毒癥屬危急重癥范疇。中醫(yī)認(rèn)為尿毒癥特點(diǎn)是脾腎陽(yáng)虛，濕毒內(nèi)潴，濁邪滯留，壅而化熱，內(nèi)攻上逆和腎絡(luò)淤血，氣化不利、下關(guān)上格。在病機(jī)上存在著“濁”與“瘀”的共性，同時(shí)又因人體素質(zhì)差異而表現(xiàn)有“虛”與“逆”等虛實(shí)夾雜，錯(cuò)綜復(fù)雜的癥候群。雖然透析或腎移植是尿毒癥患者生存的治療手段，但是在尿毒癥的早、中期，在治療原發(fā)病的基礎(chǔ)上，采用行之有效的藥物治療措施以有效地阻止或延緩尿毒癥進(jìn)展是一個(gè)較為理想的方法。研究表明中藥對(duì)尿毒癥早、中期患者可有效地阻止或延緩腎功能的進(jìn)行性惡化，延緩尿毒癥的發(fā)展。目前使用的單味中藥（豬苓、冬蟲(chóng)夏草、大黃等）或復(fù)方中藥（百令膠囊、腎衰寧、尿毒清顆粒等）在治療尿毒癥方面顯示著獨(dú)特的療效，有著巨大的發(fā)展?jié)摿Α闹兴幹袑ふ一钚詮?qiáng)且低毒的能減輕或延緩尿毒癥進(jìn)展的新藥物，對(duì)治療尿毒癥有著重要的意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種天然藥物桑黃提取物，特別是一種乙醇提取物；

本發(fā)明的另一目的是提供上述桑黃提取物的制備方法；

本發(fā)明還有一個(gè)目的是克服現(xiàn)有治療尿毒癥藥物的缺點(diǎn)，提供桑黃提取物在制備尿毒癥藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明實(shí)現(xiàn)過(guò)程如下：

桑黃乙醇提取物提取和制備工藝：桑黃粉碎后，用6-8倍體積的80-95%乙醇浸泡12-36小時(shí)，超聲提取2-5次，回收乙醇，濃縮得棕色膏狀物。

將桑黃乙醇提取物作為活性成分，與適宜的賦形劑相結(jié)合，制成各種藥物制劑，包括顆粒劑、片劑、膠囊、口服液等口服劑型，以及注射劑型，上述的制劑可按照各種制劑常規(guī)的制備工藝制成。

上述制劑中可含有輔助物質(zhì)、穩(wěn)定劑、潤(rùn)濕劑和其它常用的添加劑，如檸檬酸、乳糖、硬脂酸、酒石酸、石膏粉、硬脂酸鎂、蔗糖、滑石粉、玉米淀粉、瓊脂、明膠、花生油、果膠、可可脂、橄欖油、抗壞血酸、乙二醇、甘露醇等。

本發(fā)明桑黃乙醇提取物可以降低腎功能的生化指標(biāo)血尿素和血肌酐，能改善腎功能、減少腺嘌呤代謝產(chǎn)物對(duì)腎臟的病理性損害具有較好保護(hù)作用，為臨床提供一種新的治療尿毒癥的藥物，具有廣闊的應(yīng)用前景。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1桑黃乙醇提取物的制備

目前提取藥材的方法有滲漉法、加熱回流法、超聲提取法、索式提取法等。申請(qǐng)者采用簡(jiǎn)單快速的超聲提取方法，考察桑黃經(jīng)干燥、粉碎后，用6-8倍體積的85%乙醇浸泡約24小時(shí)，超聲時(shí)間（15分鐘、30分鐘、45分鐘、60分鐘）和超聲次數(shù)（2次和3次）對(duì)提取率（提取浸膏/生藥量）的影響。結(jié)果顯示在超聲提取2次的前提下，超聲時(shí)間為15分鐘、30分鐘、45分鐘、60分鐘時(shí)的提取率分別為2.0%、2.2%、2.7%、3.2%；在超聲提取3次的前提下，超聲時(shí)間為15分鐘、30分鐘、45分鐘、60分鐘時(shí)的提取率分別為2.5%、2.9%、3.5%、3.7%。最終超聲提取的條件是：超聲提取3次，每次45分鐘。超聲提取液回收乙醇，濃縮得棕色膏狀物即為桑黃提取物。

實(shí)施例2

為了驗(yàn)證桑黃乙醇提取物對(duì)尿毒癥治療的效果，申請(qǐng)人采用腺嘌呤誘導(dǎo)的尿毒癥大鼠模型進(jìn)行了藥效學(xué)試驗(yàn)，各種試驗(yàn)情況如下：

1. 實(shí)驗(yàn)藥物和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

桑黃乙醇提取物懸濁液，含2%的阿拉伯樹(shù)膠粉的自來(lái)水配制。健康雄性SD大鼠，體重220-240g，購(gòu)買(mǎi)于第四軍醫(yī)大學(xué)動(dòng)物中心。

實(shí)驗(yàn)儀器和試劑

ZH-B6型大鼠代謝籠（安徽淮北正華生物儀器有限公司）；美特列-托利多十萬(wàn)分之一分析天平；腺嘌呤購(gòu)于sigma公司（批號(hào)：A8626-5g，純度≥99%）。

實(shí)驗(yàn)方法

1）腺嘌呤誘導(dǎo)尿毒癥模型建立及桑黃乙醇提取物治療試驗(yàn)

健康雄性SD大鼠購(gòu)置后一周適應(yīng)環(huán)境，根據(jù)其體重、隨機(jī)分為正常組、腺嘌呤模型組、腺嘌呤+桑黃乙醇提取物治療組，每組均為8只。實(shí)驗(yàn)期間動(dòng)物自由飲水、攝食。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后，正常組以自來(lái)水10ml/kg/d灌胃；模型組和腺嘌呤+桑黃乙醇提取物灌胃200 mg/kg/d腺嘌呤，持續(xù)3周；3個(gè)小時(shí)后腺嘌呤+桑黃乙醇提取物組再給10g/kg生藥灌胃桑黃乙醇提取物進(jìn)行治療，治療給予另外的3周進(jìn)行治療。所有動(dòng)物于實(shí)驗(yàn)第6周末置于代謝籠留取24小時(shí)的尿液后，大鼠麻醉后頸動(dòng)脈取血，解刨取心、肝、腎等組織。分析桑黃乙醇提取物對(duì)尿毒癥大鼠的臟器指數(shù)、血清生化指標(biāo)及血液學(xué)指標(biāo)，并作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果見(jiàn)表1、2、3。

2）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生化指標(biāo)和血液學(xué)指標(biāo)檢測(cè)方法

各種臟器用美特列-托利多十萬(wàn)分之一分析天平稱量并記錄。生化指標(biāo)和血液學(xué)指標(biāo)的測(cè)定委托西安醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院完成。

3）藥效計(jì)算與統(tǒng)計(jì)分析

結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)算p值，將腺嘌呤模型組與正常對(duì)照組、桑黃乙醇提取物組與腺嘌呤模型組進(jìn)行組間差異性比較，t檢驗(yàn)，p<0.05為有顯著性差異，p<0.01為有非常顯著性差異，判斷藥物對(duì)尿毒癥的治療效果。

4）腺嘌呤誘導(dǎo)尿毒癥模型及桑黃乙醇提取物對(duì)該模型治療的結(jié)果

（1）桑黃乙醇提取物治療組對(duì)尿毒癥大鼠的病理學(xué)的影響

正常組的大鼠腎臟顏色鮮紅且表面光滑，而模型組的大鼠腎臟體積增大、明顯腫大，顏色蒼白、腎臟表面出現(xiàn)凹凸不平現(xiàn)象，與人的大白腎類(lèi)似，部分腎臟體積較正常組增大2倍以上。腎臟出現(xiàn)明顯的炎細(xì)胞浸潤(rùn)，部分腎小管擴(kuò)張，上皮細(xì)胞脫落壞死，甚至呈囊性，最后導(dǎo)致腎間質(zhì)纖維化?？梢?jiàn)大小不一、數(shù)量不等的棕褐色結(jié)晶或異物肉芽腫形成及粉染勻質(zhì)的管型。與正常對(duì)照組相比，腎重指數(shù)、左右腎的長(zhǎng)度和寬度增大且存在統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著性差異。腺嘌呤模型組尿量也增大且存在統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著性差異（表1）。桑黃乙醇提取物對(duì)尿毒癥模型有較好的防治作用，主要表現(xiàn)為腎臟體積減小，顏色蒼白度減輕、腎重指數(shù)、腎臟長(zhǎng)度和寬度減小（表1）且部分指標(biāo)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著性差異。另外，尿量與模型組比較出現(xiàn)降低的趨勢(shì)但沒(méi)有達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著差異，這些結(jié)果證明桑黃乙醇提取物對(duì)腺嘌呤誘導(dǎo)的尿毒癥有較好的保護(hù)作用。

（2）桑黃乙醇提取物治療組腎功能和脂質(zhì)代謝生化指標(biāo)的影響

模型組血中尿素和血肌酐與正常組比較顯著升高且存在統(tǒng)計(jì)學(xué)上的非常顯著差異?？偟鞍?、總膽固醇、甘油三酯和尿酸升高，均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)上的非常顯著差異（表2）。與模型組比較，桑黃乙醇提取物治療組逆轉(zhuǎn)在模型組增加的尿素、血清肌酐和尿酸并存在統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著差異（表2）。桑黃乙醇提取物治療組也同時(shí)改善脂質(zhì)代謝的生化指標(biāo)總膽固醇和甘油三酯的異常變化（表2）。但是桑黃乙醇提取物治療組對(duì)腺嘌呤導(dǎo)致的總蛋白的沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著性差異。這些生化指標(biāo)的變化說(shuō)明桑黃乙醇提取物不僅能促進(jìn)體內(nèi)的氮質(zhì)化合物的排出，而且對(duì)紊亂的脂質(zhì)代謝也有較好的改善作用，表明桑黃乙醇提取物對(duì)腺嘌呤誘導(dǎo)的尿毒癥有較好治療作用。

討論和結(jié)論

腺嘌呤的致病原理是高濃度腺嘌呤進(jìn)入體內(nèi)，通過(guò)黃嘌呤氧化酶的作用生成極難溶于水的2,8-二羥基腺嘌呤沉積在腎小管，影響氮質(zhì)化合物的排泄和電解質(zhì)等物質(zhì)的代謝。病理反應(yīng)是腺嘌呤代謝物的結(jié)晶沉積以及圍繞其所生成的肉芽腫，致使腎小管擴(kuò)張或萎縮、間質(zhì)水腫、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)及腎間質(zhì)纖維組織的增生。這與人類(lèi)腎小管功能減退的病理?yè)p害類(lèi)似。桑黃乙醇提取物在腺嘌呤所致尿毒癥的大鼠體內(nèi)進(jìn)行治療實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)表明桑黃乙醇提取物可以降低腎功能的生化指標(biāo)血尿素和血肌酐且存在統(tǒng)計(jì)學(xué)上非常顯著差異。桑黃乙醇提取物能改善腎功能、減少腺嘌呤代謝產(chǎn)物對(duì)腎臟的病理性損害具有較好保護(hù)作用。此外，桑黃乙醇提取物對(duì)尿毒癥的脂質(zhì)代謝的紊亂也有較好的改善作用，桑黃乙醇提取物不僅可以改善影響氮質(zhì)代謝產(chǎn)物的排泄，而且對(duì)脂質(zhì)類(lèi)代謝產(chǎn)物有較好的改善作用，可為臨床提供一種新的治療尿毒癥的藥物，具有廣闊的應(yīng)用前景。