本發(fā)明涉及中藥技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及水翁花提取物及其制備方法、應(yīng)用。

背景技術(shù)：

目前，臨床上的解熱藥物主要包括非留體類抗炎藥和類固醇解熱藥。前者包括如水楊酸類、苯胺類、P比哩酮類以及其他抗炎有機(jī)酸類，這些藥物共同的作用機(jī)制是通過抑制環(huán)氧化酶，減少前列腺素(prostaglandin,PG)合成，使體溫調(diào)節(jié)中樞的SP恢復(fù)正常而產(chǎn)生解熱作用，但是這些藥物同時抑制了胃粘膜PG的合成，增加了胃酸分泌，削弱了屏障作用，導(dǎo)致胃腸道的不良反應(yīng)，甚至引起胃粘膜損傷嚴(yán)重出現(xiàn)胃、十二指腸出血和饋病。傳統(tǒng)中藥由于其成分多，可能涉及多作用靶點發(fā)揮解熱作用，且研究表明其降溫作用穩(wěn)定而持久。臨床上，中藥的解熱抗炎藥物大多為復(fù)方，由于其成分復(fù)雜，很難闡明其物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制，所以，從具有解熱藥效的單一藥材入手，闡明其發(fā)揮作用的部位，進(jìn)而尋找有效的成分，為開發(fā)成分明確、質(zhì)量可控、安全有效的解熱抗炎藥物具有重要的意義，為臨床用藥提供更廣泛的選擇。

水翁花始載于《嶺南采藥錄》，為桃金娘科水翁屬植物水翁Cleistocalyx rculatus(Roxb.)Merr.et Perry的干燥幼嫩花蕾，又名水雍花、大蛇藥、水翁仔、水榕花、水翁、酒翁、水榕樹、水香；性寒，味苦，歸脾、胃經(jīng)；能清熱解毒，去濕消滯；主用于夏天暑濕食滯所致的發(fā)熱，咽干，口渴腹脹或嘔吐泄瀉。水翁花在民間應(yīng)用廣泛，屬于廣東地產(chǎn)藥材，夏季常作涼茶以解暑，是“清熱涼茶”等中藥的主要原料之一。目前上尚未有相關(guān)的藥物制劑上市。

水翁花醇提取物的藥效活性研究未有文獻(xiàn)報道。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明提供水翁花提取物及其制備方法、應(yīng)用。該提取物對小鼠巨噬細(xì)胞的抑制率較好，且呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系，水翁花提取物組在劑量為25μg/ml時，對小鼠巨噬細(xì)胞的抑制率為99.3％，水翁花提取物組顯著抑制前列腺素E2的活性，顯示出較強(qiáng)的抗炎作用。且該水翁花提取物組解熱效果更好，水翁花提取物組在劑量為80mg/kg時，300min和360min后解熱效果更加明顯。

為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了2',4'-二羥基-6'-甲氧基-3',5'-二甲基査耳酮(DMC)在制備前列腺素E2的抑制劑中的應(yīng)用。

本發(fā)明提供了2',4'-二羥基-6'-甲氧基-3',5'-二甲基査耳酮(DMC)在制備預(yù)防和/或治療抗炎的藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明提供了2',4'-二羥基-6'-甲氧基-3',5'-二甲基査耳酮(DMC)在制備預(yù)防和/或治療解熱的藥物中的應(yīng)用。

在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述2',4'-二羥基-6'-甲氧基-3',5'-二甲基査耳酮(DMC)的有效劑量為3.094～12.375μg/(0.4×10⁵個cell/mL)。

在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述2',4'-二羥基-6'-甲氧基-3',5'-二甲基査耳酮(DMC)的有效劑量為20～80mg/kg。

本發(fā)明還提供了一種水翁花提取物，其中2',4'-二羥基-6'-甲氧基-3',5'-二甲基査耳酮(DMC)在所述水翁花提取物中含量為40％～90％。

本發(fā)明還提供了所述的水翁花提取物的制備方法，包括如下步驟：

步驟1：取水翁花經(jīng)乙醇提取獲得稀浸膏；

步驟2：將步驟1制得的所述稀浸膏經(jīng)有機(jī)溶劑萃取，收集萃取液，減壓回收有機(jī)溶劑、干燥，得到浸膏；

步驟3：將步驟2制得的所述浸膏用乙醇溶解，經(jīng)樹脂吸附并用乙醇淋洗除去雜質(zhì)，用乙醇梯度洗脫吸附于樹脂上的水翁花提取物；收集洗脫液減壓濃縮，得到浸膏；

步驟4：將步驟3制得的浸膏，干燥粉碎后得到水翁花提取物。

在本發(fā)明的一些具體實施方案中，步驟1中乙醇的體積濃度為60％～90％；

步驟2中所述有機(jī)溶劑為乙酸乙酯；

步驟3中所述樹脂為苯乙烯、二乙烯苯、丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯中任意一種或幾種為骨架材料的極性或非極性樹脂；

步驟3中所述淋洗除去雜質(zhì)的所述乙醇的體積濃度為30％～65％。

在本發(fā)明的一些具體實施方案中，步驟3中所述梯度洗脫的乙醇的體積濃度為50％～90％。

本發(fā)明還提供了一種中藥制劑，由所述的水翁花提取物或如所述的制備方法制得的水翁花提取物與藥學(xué)上可接受的載體制成。

本發(fā)明提供了2',4'-二羥基-6'-甲氧基-3',5'-二甲基査耳酮(DMC)在制備前列腺素E2的抑制劑中的應(yīng)用。還提供了2',4'-二羥基-6'-甲氧基-3',5'-二甲基査耳酮(DMC)在制備預(yù)防和/或治療抗炎的藥物中的應(yīng)用。除此之外，本發(fā)明還提供了2',4'-二羥基-6'-甲氧基-3',5'-二甲基査耳酮(DMC)在制備預(yù)防和/或治療解熱的藥物中的應(yīng)用。

水翁花提取物組與水翁花水層部位組相比，水翁花提取物組對小鼠巨噬細(xì)胞的抑制率較好，且呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系，水翁花提取物組在劑量為25ug/ml時，對小鼠巨噬細(xì)胞的抑制率為99.3％，水翁花提取物組顯著抑制前列腺素E2的活性，顯示出較強(qiáng)的抗炎作用。

水翁花提取物組與水翁花水層部位組相比，水翁花提取物組解熱效果更好，水翁花提取物組在劑量為80mg/kg時，300min和360min后解熱效果更加明顯。

本發(fā)明的優(yōu)點在于：本發(fā)明所提供的水翁花提取物，其制備工藝簡單，采用乙酸乙酯充分萃取，使水翁花提取物中DMC的含量在40-90％之間，用藥更安全，易于操作，成本低廉。

附圖說明

為了更清楚地說明本發(fā)明實施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對實施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹。

圖1示本發(fā)明實施例1中2',4'-二羥基-6'-甲氧基-3',5'-二甲基査耳酮標(biāo)準(zhǔn)品的HPLC檢測圖譜；

圖2示本發(fā)明實施例1中水翁花提取物含量測定的HPLC檢測圖譜；

圖3示本發(fā)明實施例2中水翁花提取物含量測定的HPLC檢測圖譜；

圖4示本發(fā)明實施例3中水翁花提取物含量測定的HPLC檢測圖譜；

圖5示本發(fā)明實施例4中水翁花提取物含量測定的HPLC檢測圖譜；

圖6示本發(fā)明實施例5中水翁花提取物含量測定的HPLC檢測圖譜；

圖7示本發(fā)明實施例6中水翁花提取物含量測定的HPLC檢測圖譜。

具體實施方式

本發(fā)明公開了水翁花提取物及其制備方法、應(yīng)用，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的方法及應(yīng)用已經(jīng)通過較佳實施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對本文所述的方法和應(yīng)用進(jìn)行改動或適當(dāng)變更與組合，來實現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。

本申請?zhí)峁┝艘环N水翁花的提取物，其特征在于，含有藥物有效成分2'，4'-二羥基-6'-甲氧基-3',5'-二甲基査耳酮(DMC)的含量為40-90％。

本申請還提供了所述的水翁花提取物的制備方法，包括以下步驟：

步驟1：取水翁花經(jīng)乙醇提取獲得稀浸膏；

步驟2：將步驟1制得的所述稀浸膏經(jīng)有機(jī)溶劑萃取，收集萃取液，減壓回收有機(jī)溶劑、干燥，得到浸膏；

步驟3：將步驟2制得的所述浸膏用乙醇溶解，經(jīng)樹脂吸附并用乙醇淋洗除去雜質(zhì)，用乙醇梯度洗脫吸附于樹脂上的水翁花提取物；收集洗脫液減壓濃縮，得到浸膏；

步驟4：將步驟3制得的浸膏，干燥粉碎后得水翁花提取物。

本發(fā)明以水翁花藥材為原料，所述水翁花藥材可以為本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的水翁花藥材，本發(fā)明對其來源并無特殊限制。

本發(fā)明首先用乙醇對水翁花藥材進(jìn)行加熱回流提取，過濾后濾液濃縮回收乙醇得稀浸膏。本發(fā)明中，所述乙醇優(yōu)選為60％-90％乙醇(體積分?jǐn)?shù))，更優(yōu)選為70％-85％乙醇；所述水翁花藥材重量與乙醇體積的比例，以g/mL計，優(yōu)選為1:(2-10)，更優(yōu)選為1:(3-7)，所述回流提取優(yōu)選進(jìn)行2-3次。

本發(fā)明對上述濃縮的方法并無特殊限定，可以為本領(lǐng)域公知的濃縮方法，本發(fā)明優(yōu)選采用減壓的方法進(jìn)行濃縮，除去溶劑得到稀浸膏。

得到稀浸膏后，然后用第一有機(jī)溶劑萃取，所述第一有機(jī)溶劑優(yōu)選為乙酸乙酯，回收乙酸乙酯得水翁花提取物粗提物；本發(fā)明中，所述稀浸膏與乙酸乙酯的體積比，優(yōu)選為1：(1-3)，在本發(fā)明的某些具體實施例中，所述比例為1:1，1:1.5，1:3；所述萃取的次數(shù)優(yōu)選為3～4次。

然后，將得到的水翁花提取物粗提物進(jìn)行大孔樹脂吸附，本發(fā)明優(yōu)選采用以苯乙烯、二乙烯苯、丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯中任意一種或幾種為骨架材料的極性或非極性樹脂，例如D101、D201、AB-8、HP-20、XAD-4、XAD-16、HPD100、HPD200、HPD400等,優(yōu)選為苯乙烯型大孔樹脂。

然后，以乙醇淋洗除去雜質(zhì)，所述的乙醇為濃度為30％～65％乙醇，更優(yōu)選為35％-55％，實驗表明，在該洗脫濃度下，雜質(zhì)能夠得到去除而使水翁花提取物得到富集。

然后，用乙醇進(jìn)行梯度洗脫，收集洗脫液，所述梯度洗脫用乙醇濃度為50％-90％。更優(yōu)選為60％-80％，實驗表明，在該洗脫濃度下，得到的水翁花提取物含量較高，總DMC的含量大于40％。

上述所用的干燥方法為真空干燥、冷凍干燥、噴霧干燥、常壓干燥等，最好為真空干燥、冷凍干燥。

本發(fā)明的水翁花提取物是采用上述1-4描述的方法制備得到的。本發(fā)明除了運(yùn)用一些常規(guī)方法外，還采用一些重要的步驟來提高水翁花提取物的含量，如用乙醇回流提取，好處在于充分溶解黃酮類成分；然后采用乙酸乙酯充分萃取，則可有效的除去水溶性較大的化合物；采用樹脂吸附有利于除去大極性的多糖、氨基酸等，提高黃酮的含量。

申請還提供了水翁花提取物的應(yīng)用，主要是將上述的水翁花提取物作為制備治抗炎解熱藥物來使用。

本申請還提供了一種中藥制劑，由上述方案所述的或上述方案所述的制備方法所制備的水翁花提取物與藥學(xué)上可接受的載體制成。在本發(fā)明中，所述藥學(xué)上可接受的載體可根據(jù)藥劑學(xué)領(lǐng)域的常用輔料，根據(jù)劑型和實際情況進(jìn)行恰當(dāng)選擇，例如常用的輔料有淀粉、低取代羥丙基纖維素、微粉硅膠、硬脂酸鎂、淀粉漿、蔗糖、糊精、羧甲基淀粉鈉、滑石粉、聚山梨酯、聚乙二醇、注射用大豆磷脂和注射用甘油等；利用本發(fā)明得到的水翁花提取物制備所需藥物的各種劑型時，可以按照藥劑學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)生產(chǎn)方法制備。如將該提取物與一種或多種載體混合，然后制成相應(yīng)的劑型。作為優(yōu)選，所述中藥制劑的劑型包括注射劑、片劑、栓劑、軟膏劑、凝膠劑、丸劑、片劑、顆粒劑、膠囊劑和合劑。

本發(fā)明的各種制劑中含有水翁花提取物的劑量范圍是相當(dāng)寬的，如可以是2-500mg，在使用時可根據(jù)病人的病情確定用法用量。例如每天服用的劑量可在每公斤體重大約0.5mg-1200mg的范圍內(nèi)。在成人的治療中，劑量范圍最好是在20mg/kg-80mg/kg，一次或幾次服用。實際服用的劑量應(yīng)該由醫(yī)生根據(jù)有關(guān)的情況來決定，這些情況包括被治療者的身體狀態(tài)，選者的給藥途徑、年齡、體重、患者對藥物的個體反應(yīng)，患者癥狀的嚴(yán)重程度等等，因此上述劑量范圍并不是以任何方式限制本發(fā)明的范圍。

本發(fā)明的優(yōu)點在于：本發(fā)明所提供的水翁花提取物，其制備工藝簡單，采用低極性溶劑充分萃取，使水翁花提取物中DMC的含量在40-90％之間，用藥更安全，易于操作，成本低廉。

本發(fā)明提供的水翁花提取物及其制備方法、應(yīng)用中所用原料及試劑均可由市場購得。

下面結(jié)合實施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明：

實施例1水翁花提取物的制備

取水翁花藥材5kg，加85％乙醇30L回流提取二次，每次2小時，濾過，提取液濃縮至5L，加乙酸乙酯5L進(jìn)行萃取，萃取4次，合并萃取液，減壓回收溶劑，干燥即得水翁花粗提物124.5克；粗提物用25％乙醇溶解，吸附于AB-8樹脂，以50％乙醇洗去雜質(zhì)，再以50％-70％乙醇梯度洗脫，濃縮洗脫液，減壓干燥，得水翁花提取物10.1g，經(jīng)HPLC法測得DMC的含量78.23％(圖1-2)。

實施例2水翁花提取物的制備

取水翁花藥材5kg，加60％乙醇25L回流提取二次，每次2小時，濾過，提取液濃縮至5L，加乙酸乙酯7.5L進(jìn)行萃取，萃取3次，合并萃取液，減壓回收溶劑，干燥即得水翁花提取物130.5克；粗提物用25％乙醇水溶解，吸附于HP-20樹脂，以35％乙醇洗去雜質(zhì)，再以50％-80％乙醇梯度洗脫，濃縮洗脫液，減壓干燥，得水翁花提取物9.8g，經(jīng)HPLC法測得DMC的含量52.47％(圖3，標(biāo)準(zhǔn)品譜圖見圖1)。

實施例3水翁花提取物的制備

取水翁花藥材5kg，加90％乙醇15L回流提取三次，每次2小時，濾過，提取液濃縮至5L，加乙酸乙酯15L進(jìn)行萃取，萃取3次，合并萃取液，減壓回收溶劑，干燥即得浸膏144.5克；上述浸膏用25％乙醇水溶解，吸附于D101樹脂，以55％乙醇洗去雜質(zhì)，再以60％-80％乙醇梯度洗脫，濃縮洗脫液，減壓干燥，得水翁花提取物15.5g，經(jīng)HPLC法測得DMC的含量90.54％(圖4，標(biāo)準(zhǔn)品譜圖見圖1)。

實施例4水翁花提取物的制備

取水翁花藥材5kg，加80％乙醇10L回流提取三次，每次2小時，濾過，提取液濃縮至5L，加乙酸乙酯5L進(jìn)行萃取，萃取4次，合并萃取液，減壓回收溶劑，干燥即得浸膏112.3克；上述浸膏用40％乙醇水溶解，吸附于HPD-100樹脂，以65％乙醇洗去雜質(zhì)，再以60％-90％乙醇梯度洗脫，濃縮洗脫液，減壓干燥，得水翁花提取物12.9g，經(jīng)HPLC法測得DMC的含量81.27％(圖5，標(biāo)準(zhǔn)品譜圖見圖1)。

實施例5水翁花提取物的制備

取水翁花藥材5kg，加75％乙醇50L回流提取二次，每次2小時，濾過，提取液濃縮至5L，加乙酸乙酯7.5L進(jìn)行萃取，萃取3次，合并萃取液，減壓回收溶劑，干燥即得浸膏130.5克；上述浸膏用25％乙醇水溶解，吸附于HPD-200樹脂，以30％乙醇洗去雜質(zhì)，再以60％-85％乙醇梯度洗脫，濃縮洗脫液，減壓干燥，得水翁花提取物10.5g，經(jīng)HPLC法測得DMC的含量40.35％(圖6，標(biāo)準(zhǔn)品譜圖見圖1)。

實施例6水翁花提取物的制備

取水翁花藥材5kg，加70％乙醇35L回流提取三次，每次2小時，濾過，提取液濃縮至5L，加乙酸乙酯15L進(jìn)行萃取，萃取3次，合并萃取液，減壓回收溶劑，干燥即得浸膏164.5克；上述浸膏用25％乙醇水溶解，吸附于XAD-4樹脂，以40％乙醇洗去雜質(zhì)，再以60％-90％乙醇梯度洗脫，濃縮洗脫液，減壓干燥，得水翁花提取物15.5g，經(jīng)HPLC法測得DMC的含量68.45％(圖7，標(biāo)準(zhǔn)品譜圖見圖1)。

實施例7片劑

取實施例1制備的水翁花提取物12.2g，研成細(xì)粉，加入10％淀粉糊約8g，藥用淀粉7g，微粉硅膠0.8g，混合，14目篩制粒，于80℃干燥，整粒，加入硬脂酸鎂0.05g，混勻，壓制成100片，即得。每片重0.2g，口服，每次1片，一日三次。

實施例8硬膠囊

取實施例2制備的水翁花提取物16g，研成細(xì)粉，藥用淀粉3.5g，硬脂酸鎂0.01g，混合均勻，過篩，裝入膠囊，制成100粒，即得。每粒內(nèi)容物重0.2g，口服，每次1粒，一日兩次。

實施例9軟膠囊

取實施例3制備的水翁花提取物12.2g，加入丙二醇0.2g，卵磷脂0.9g，大豆油18g，振動磨超微20分鐘，使混勻，制成軟膠囊100粒，即得。每粒內(nèi)容物重0.3g，口服，每次1粒，一日三次。

實施例10顆粒劑

取實施例4制備的翁花提取物13.8g，研成細(xì)粉，加入糊精25g，乳糖458g，混合均勻，制粒，于80℃干燥，整粒，分裝，制100包，即得。每包重5g，口服，每次1包，一日兩次。

實施例11緩釋片

取上述實施例5的水翁花提取物24.4g，研成細(xì)粉，過100目篩，HPMC10.3g，乳糖16g，十二烷基硫酸鈉1g，過100目篩，混合均勻，加入2％聚維酮(95％乙醇)黏合劑制軟材，過20目篩制粒，于50℃干燥，過18目篩整粒，干顆粒采用外加法加入2％硬脂酸鎂，混勻，壓片，制成緩釋片100片，即得。每片重0.5g?？诜?，每次1片，一日一次。

實施例12滴丸

取上述實施例6的水翁花提取物12.2g，研成細(xì)粉，另取24.8g聚乙二醇4000加熱熔融，加入水翁花提取物，振動磨超微20分鐘，使混合均勻，滴制成滴丸，即得。每丸重0.35g，口服，每次1粒，一日三次。

實施例13注射劑

取上述實施例3的水翁花提取物12.2g，研成細(xì)粉，加入β環(huán)糊精4.5g，蔗糖500g，純水適量(約390g)攪拌加熱溶解，煮沸10分鐘，稍冷后加入10％(W/V)尼泊金乙酯乙醇溶液攪勻，用水調(diào)整至100ml，過濾，分裝，滅菌，即得。每支10ml?？诜看?支，一日三次。

實施例14藥效實驗部分

實驗一、水翁花提取物體外抗炎活性研究

1、試驗材料

實驗組1：水翁花提取物組，按照實施例1方法制備，DMC含量為78.23％實驗組2：水翁花水層部位組，按照實施例1方法制備(提取溶劑為水)。

細(xì)胞株：小鼠巨噬細(xì)胞系RAW 264.7，來源于中醫(yī)科學(xué)院，江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司培養(yǎng)。

脂多糖(LPS)：南京大治生物科技有限公司

前列腺素E2(PGE2)ELISA試劑盒,恩佐生命科學(xué),批號：06241415D

2、試驗方法

用Hank’s液將實驗組1和實驗組2按1∶2、1∶4、1∶8比例進(jìn)行稀釋，藥液濃度分別為25.00ug/ml、12.50ug/ml、6.25ug/ml。將細(xì)胞以0.25％胰酶(含

0.02％EDTA)消化，含10％FBS的DMEM培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞密度為1×105個/ml，均勻接種至24孔板，每孔400μl，種板后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時。在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板的小鼠巨噬細(xì)胞系RAW 264.7單層細(xì)胞中，分別加入不同質(zhì)量濃度的水翁花樣品液，置37℃、5％CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)96h，觀察細(xì)胞病變。培養(yǎng)24小時后，取出24孔板，吸去上清液，加入無血清的DMEM培養(yǎng)基配制的含藥培養(yǎng)基，分為以下幾組：空白對照組(N組)：每孔加入495μl無血清的DMEM培養(yǎng)基；溶媒組(RM組)：每孔加入495μl含千分之一DMSO的無血清DMEM培養(yǎng)基；模型組(M組)：每孔加入495μl無血清的DMEM培養(yǎng)基；給藥樣品組：每孔加495μl含不同濃度含藥的培養(yǎng)基；同時設(shè)6個復(fù)孔，加藥完畢后將24孔板放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)1小時。1小時后，除空白對照和溶劑對照組外，其余每孔加入5μl的100μg/ml的LPS(終濃度為1μg/ml)，溶劑對照組每孔加入5μl的無血清的DMEM培養(yǎng)基，加藥完畢后將24孔板放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)18小時。18小時后收集細(xì)胞培養(yǎng)液，按試劑盒說明，用ELISA法檢測細(xì)胞上清中前列腺素E2的含量。

3、實驗結(jié)果

所有計量資料采用x±s表示，采用下列公式計算抑制率：

表1水翁花不同部位對小鼠巨噬細(xì)胞系RAW 264.7細(xì)胞上清PGE2的影響(x±s,n＝6)

各組細(xì)胞病變?nèi)绫?所示，結(jié)果表明，水翁花提取物組與水翁花水層部位組相比，水翁花提取物組對小鼠巨噬細(xì)胞的抑制率較好，且呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系，水翁花提取物組在劑量為25μg/ml時，對小鼠巨噬細(xì)胞的抑制率為99.3％，水翁花提取物組顯著抑制前列腺素E2的活性，顯示出較強(qiáng)的抗炎作用。

取實施例2至實施例6制備的水翁花提取物進(jìn)行上述實驗，實驗結(jié)果與實施例1制備的水翁花提取物的結(jié)果相近，與實施例1制備的水翁花提取物的結(jié)果無顯著差異(P＞0.05)。

實驗二、水翁花提取物體內(nèi)解熱實驗研究

1實驗材料

實驗組1：水翁花提取物組，按照實施例1方法制備，DMC含量為78.23％

實驗組2：水翁花水層部位組，按照實施例1方法制備(提取溶劑為水)。

對照藥：對乙酰氨基酚片，由昆明振業(yè)制藥廠有限公司提供，批號：20140901

內(nèi)毒素：10mg/瓶，由sigma公司提供，批號：044M4004V。

實驗動物：健康新西蘭白兔，80只，雄性，體重2.0±0.2kg，清潔級，江蘇省南京市江寧區(qū)青龍山動物繁殖場提供，合格證號：201511853。

2、實驗方法

取健康新西蘭家兔80只，每日適應(yīng)性測肛溫1次，連續(xù)2天，于第3天進(jìn)行實驗，先進(jìn)行預(yù)選兔，持續(xù)監(jiān)測每只家兔體溫變化，15min測一次，連續(xù)測四次，取平均體溫作為基礎(chǔ)體溫，選取體溫在38.0-39.5℃之間的家兔，且體溫波動在0.4℃之內(nèi)的家兔進(jìn)行正式試驗，選取體溫合格的家兔，耳緣靜脈注射0.25ug/ml的內(nèi)毒素生理鹽水溶液，注射體積1ml/kg；注射后持續(xù)監(jiān)測家兔體溫，注射內(nèi)毒素90min內(nèi)，體溫上升超過基礎(chǔ)體溫1.0℃的家兔，即為造模成功。

所有家兔均按上述方法造模，將成模家兔按體溫變化隨機(jī)分成8組，即模型組、對乙酰氨基酚組、水翁花提取物低劑量組、水翁花提取物中劑量組、水翁花提取物高劑量組、水翁花水層部位低劑量組、水翁花水層部位中劑量組、水翁花水層部位高劑量組、每組8只。分組后立即灌胃給藥，模型組給予等容積的蒸餾水，對乙酰氨基酚組給對乙酰氨基酚混懸液70mg/kg，水翁花提取物、水層部位低劑量組分別給予水翁花提取物、水層部位混懸液20mg/kg，水翁花提取物、水層部位中劑量組分別給予水翁花提取物、水層部位混懸液40mg/kg，水翁花提取物、水層部位高劑量組分別給予水翁花提取物、水層部位混懸液80mg/kg。各組給藥容積為10ml/kg。給藥后30min、60min、后續(xù)每隔1小時測一次體溫，測至360min。

3、實驗結(jié)果

表2水翁花不同部位對內(nèi)毒素致家兔發(fā)熱模型體溫的影響(x±s,n＝8)

與模型組比較P^*＜0.05，P^**＜0.01.

家兔體溫變化如表2所示，結(jié)果表明，水翁花提取物組與水翁花水層部位組相比，水翁花提取物組解熱效果更好，水翁花提取物組在劑量為80mg/kg時，300min和360min后解熱效果更加明顯。

取實施例2至實施例6制備的水翁花提取物進(jìn)行上述實驗，實驗結(jié)果與實施例1制備的水翁花提取物的結(jié)果相近，與實施例1制備的水翁花提取物的結(jié)果無顯著差異(P＞0.05)。

以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。