相關(guān)申請的交叉引用本申請根據(jù)35u.s.c.§119(e)要求2014年11月18日提交的美國臨時申請序列號62/081,412的權(quán)益，其在此引入作為參考。
背景技術(shù)：
：線粒體是細(xì)胞代謝的中心，其提供維持生物活性的能量和用于生物合成的代謝中間體。葡萄糖以及脂質(zhì)如甘油三酯是細(xì)胞中最重要的燃料。葡萄糖首先通過糖酵解代謝成丙酮酸。然后，丙酮酸進(jìn)入線粒體，在其中轉(zhuǎn)化為乙酰輔酶a。類似地，甘油三酸酯首先被水解成甘油和脂肪酸，其進(jìn)入線粒體，在那里它們被氧化成乙酰輔酶a。在線粒體基質(zhì)中，來自葡萄糖代謝以及脂質(zhì)代謝的乙酰輔酶a然后通過tca循環(huán)進(jìn)行氧化。從氧化反應(yīng)釋放的能量以nadh和fadh2分子中高能電子的形式儲存。然后來自nadh和fadh2的電子進(jìn)入線粒體電子轉(zhuǎn)運鏈，其定位在線粒體的內(nèi)膜上。隨著電子傳播通過電子轉(zhuǎn)運鏈并達(dá)到電子受體氧分子，釋放能量并用于將質(zhì)子從線粒體基質(zhì)泵送穿過線粒體內(nèi)膜，從而跨膜形成質(zhì)子梯度。最后，質(zhì)子通過fof1-atp合酶穿過線粒體內(nèi)膜，并驅(qū)使可以被各種細(xì)胞機(jī)構(gòu)直接使用的能量分子atp的合成。在正常條件下，線粒體氧化提供超過90％的細(xì)胞atp。此外，線粒體氧化提供并調(diào)節(jié)生物合成大分子如rna、dna、脂質(zhì)所需的代謝中間體的可用性。通常，乙酰輔酶a的線粒體氧化和atp合成響應(yīng)于細(xì)胞能量需要而偶聯(lián)。然而，線粒體氧化可以通過線粒體解偶聯(lián)劑與atp合成解偶聯(lián)。線粒體解偶聯(lián)劑促進(jìn)質(zhì)子向內(nèi)轉(zhuǎn)移穿過線粒體內(nèi)膜(不通過fof1-atp合酶)，從而消散或降低質(zhì)子梯度而不產(chǎn)生atp。線粒體解偶聯(lián)可以通過蛋白質(zhì)線粒體解偶聯(lián)劑如ucp1蛋白或化學(xué)解偶聯(lián)劑如dnp(二硝基苯酚)介導(dǎo)。因此，線粒體解偶聯(lián)劑通常導(dǎo)致以下效果：(1)降低線粒體能量效率，(2)增加脂質(zhì)和葡萄糖氧化，(3)激活ampk酶，(4)改變細(xì)胞增殖所需的生物質(zhì)生物合成的代謝中間體的可用性。雖然已經(jīng)在文獻(xiàn)中報道了線粒體的化學(xué)解偶聯(lián)劑，但仍然需要發(fā)現(xiàn)具有有利的藥代動力學(xué)和藥效學(xué)性質(zhì)的組合的新型化學(xué)線粒體解偶聯(lián)劑。技術(shù)實現(xiàn)要素：本申請的多種實施方案提供預(yù)防和治療代謝疾病和癌癥的化合物、組合物和方法。本文所述的化合物具有線粒體解偶聯(lián)、活化ampk、和抑制細(xì)胞增殖的活性。在一方面提供具有以下結(jié)構(gòu)的式(i)的化合物:或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物、或前藥，其中:r1選自h、m、po(oh)2、po2(oh)m、po3m2、po(oh)ra、po(om)ra、po(ra)2和c(o)ra，其中m為金屬陽離子或有機(jī)胺；r2、r3、r4和r5各自獨立地選自h、鹵素、cf3、sf3、cn、no2、烷基、鹵代烷基、芳基、cooh、coora和conhra；x為具有以下結(jié)構(gòu)的9-元環(huán):其中t為o、s或nra；w3、x3、x3’、y3和z3各自獨立地為crb或n；各個ra獨立地選自h、烷基、芳基、烷氧基、芳基氧基、烷氧基烷基、氨基、烷基氨基和烷基-羰基氧基-烷基；各個rb獨立地選自h、鹵素、cn、no2、co2h、co2ra、cf3、ocf3、sf3、c6-10芳基、烷基、鹵代烷基、conhra和c＝nrc(n(rd)2)；各個rc獨立地選自h、cn、o-烷基、nh2、單-烷基取代的氨基和二烷基取代的氨基；和各個rd獨立地選自h和烷基，其中所述烷基任選取代有鹵素、cn、no2、co2h、co2ra、cf3、ocf3、sf3、c6-10芳基或conhra；且條件是所述9-元環(huán)包含至少一個氮且不為吲哚。在一些實施方案中，所述9-元環(huán)為任選取代有rb的苯并噻唑。本發(fā)明另一方面提供具有以下結(jié)構(gòu)的式(i)的化合物:或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物、或前藥，其中:r1選自h、m、po(oh)2、po2(oh)m、po3m2、po(oh)ra、po(om)ra、po(ra)2和c(o)ra，其中m為金屬陽離子或有機(jī)胺；r2、r3、r4和r5各自獨立地選自h、鹵素、sf3、cf3、ocf3、cn、no2、烷基、鹵代烷基、芳基、co2h、co2ra和conhra；x為具有以下結(jié)構(gòu)的六元雜芳基:其中w2、x2、y2和z2中兩個為n且另外兩個為crb，且w2和z2不都為n；各個ra獨立地選自h、烷基、芳基、烷氧基、芳基氧基、烷氧基烷基、氨基、烷基氨基和烷基-羰基氧基-烷基；且各個rb獨立地選自h、鹵素、cn、no2、co2h、co2ra、cf3、ocf3、sf3、c6-10芳基、烷基、鹵代烷基、conhra和c＝nrc(n(rd)2)；各個rc獨立地選自h、cn、o-烷基、nh2、單-烷基取代的氨基和二烷基取代的氨基；各個rd獨立地選自h和烷基，其中所述烷基任選取代有鹵素、cn、no2、co2h、co2ra、cf3、ocf3、sf3、c6-10芳基或conhra；且條件是當(dāng)所述六元雜芳基為吡嗪時，rb選自鹵素、cn、no2、co2h、co2ra、cf3、ocf3、sf3、c6-10芳基、烷基、鹵代烷基、conhra和c＝nrc(n(rd)2)。在一些實施方案中，所述6-元環(huán)為取代有rb的吡嗪。本發(fā)明另一方面提供具有以下結(jié)構(gòu)的式(i)的化合物:或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物、或前藥，其中:r1選自h、m、po(oh)2、po2(oh)m、po3m2、po(oh)ra、po(om)ra、po(ra)2和c(o)ra，其中m為金屬陽離子或有機(jī)胺；r2、r3、r4和r5各自獨立地選自h、鹵素、cf3、sf3、cn、no2、烷基、鹵代烷基、芳基、cooh、coora和conhra；x為取代有一個或多個rb的吡啶環(huán)，其中各個rb獨立地選自鹵素、cn、no2、co2h、co2ra、cf3、ocf3、sf3、c6-10芳基、烷基、鹵代烷基、conhra和c＝nrc(n(rd)2)，條件是所述鹵素不取代在環(huán)氮的鄰位上；各個ra獨立地選自h、烷基、芳基、烷氧基、芳基氧基、烷氧基烷基、氨基、烷基氨基和烷基-羰基氧基-烷基；各個rc獨立地選自h、cn、o-烷基、nh2、單-烷基取代的氨基和二烷基取代的氨基；和各個rd獨立地選自h和烷基，其中所述烷基任選取代有鹵素、cn、no2、co2h、co2ra、cf3、ocf3、sf3、c6-10芳基或conhra。本發(fā)明另一方面提供式(i)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物、或前藥，其中:r1選自h、m、po(oh)2、po2(oh)m、po3m2、po(oh)ra、po(om)ra、po(ra)2和c(o)ra，其中m為金屬陽離子或有機(jī)胺；r2、r3、r4和r5各自獨立地選自h、鹵素、cf3、sf3、cn、no2、烷基、鹵代烷基、芳基、cooh、coora和conhra；x任選取代有至少一個rb且x選自咪唑、吡咯、四唑、氰基-噻唑、三嗪、吲唑、嘌呤、苯并咪唑、苯并噁唑、苯并噻唑、異喹啉和喹唑啉；各個ra獨立地選自h、烷基、芳基、烷氧基、芳基氧基、烷氧基烷基、氨基、烷基氨基和烷基-羰基氧基-烷基；各個rb獨立地選自h、鹵素、cn、no2、co2h、co2ra、cf3、ocf3、sf3、c6-10芳基、烷基、鹵代烷基、conhra和c＝nrc(n(rd)2)；各個rc獨立地選自h、cn、o-烷基、nh2、單-烷基取代的氨基和二烷基取代的氨基；和各個rd獨立地選自h和烷基，其中所述烷基任選取代有鹵素、cn、no2、co2h、co2ra、cf3、ocf3、sf3、c6-10芳基或conhra；條件是當(dāng)x為氰基-噻唑時，所述氰基-噻唑未取代有叔丁基。本發(fā)明另一方面提供具有以下結(jié)構(gòu)的式(i)的化合物:或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物、或前藥，其中:r1選自po(oh)2、po2(oh)m、po3m2、po(oh)ra、po(om)ra、po(ra)2和c(o)re，其中m為金屬陽離子或有機(jī)胺；r2、r3、r4和r5各自獨立地選自h、鹵素、cf3、sf3、cn、no2、烷基、鹵代烷基、芳基、cooh、coora和conhra；x為任選取代有一個或多個rb的c6-10芳基；各個ra獨立地選自h、烷基、芳基、烷氧基、芳基氧基、烷氧基烷基、氨基、烷基氨基和烷基-羰基氧基-烷基；各個rb獨立地選自h、鹵素、cn、no2、co2h、co2ra、cf3、ocf3、sf3、c6-10芳基、烷基、鹵代烷基、conhra和c＝nrc(n(rd)2)；各個rc獨立地選自h、cn、o-烷基、nh2、單-烷基取代的氨基和二烷基取代的氨基；各個rd獨立地選自h和烷基，其中所述烷基任選取代有鹵素、cn、no2、co2h、co2ra、cf3、ocf3、sf3、c6-10芳基或conhra；且re為任選取代有一個或兩個烷基的nh2。在一些實施方案中，r1選自po(oh)2、po2(oh)m、po3m2、po(oh)ra、po(om)ra和po(ra)2。在另一方面提供包含本文所述的任一化合物的組合物。在一些實施方案中，提供所述化合物的線粒體解偶聯(lián)活性。在一些實施方案中，提供所述化合物在活化ampk(amp-活化激酶)中的有效性。在一些實施方案中，提供所述化合物在抑制細(xì)胞增殖和集落生成中的有效性。在另一方面提供在受試者中使用治療有效量的本文所述的化合物作為線粒體解偶聯(lián)劑以治療或預(yù)防代謝疾病或障礙的方法。在一些實施方案中，提供本文所述的化合物或組合物用于治療或預(yù)防代謝疾病或障礙的用途，其中所述疾病或障礙為2型糖尿病。在一些實施方案中，提供本文所述的化合物或組合物用于治療或預(yù)防糖尿病引起的并發(fā)癥的用途，所述糖尿病引起的并發(fā)癥包括心血管疾病、神經(jīng)變性疾病、動脈粥樣硬化、高血壓、冠心病、腎病、視網(wǎng)膜病、神經(jīng)病、糖尿病性心力衰竭。在一些實施方案中，待治療的受試者為哺乳動物或人。在一些實施方案中，作為線粒體解偶聯(lián)劑的本文所述的化合物與第二種抗糖尿病藥物組合給藥。在一些實施方案中，作為線粒體解偶聯(lián)劑的本文所述的化合物在第二種抗糖尿病藥物的給藥之前、同時或之后給藥。在一些實施方案中，第二種抗糖尿病藥物選自胰島素、胰島素類似物、磺酰脲、雙胍、氯茴苯酸、噻唑烷二酮、葡萄糖苷酶抑制劑、glp-1激動劑和dpp-4抑制劑。在一些實施方案中，第二種抗糖尿病藥物為二甲雙胍。在一些實施方案中，提供本文所述的化合物或組合物用于治療或預(yù)防代謝疾病或障礙的用途，其中所述疾病或障礙為肥胖癥，酒精性脂肪肝病，非酒精性脂肪肝病，或血脂異常。在一些實施方案中，所述代謝疾病或障礙為肥胖癥或肥胖癥-相關(guān)的并發(fā)癥。在另一方面提供在受試者中使用治療有效量的本文所述的化合物作為線粒體解偶聯(lián)劑以用于治療或預(yù)防癌癥的方法。在一些實施方案中，作為線粒體解偶聯(lián)劑的本文所述的化合物通過口服、靜脈內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、經(jīng)皮、向腹膜內(nèi)，或其它藥理可接受的途徑給藥。在一些實施方案中，本文所述的化合物為藥理可接受的制劑和劑量的形式。在另一方面提供使用本文所述的化合物作為線粒體解偶聯(lián)劑通過減少血漿葡萄糖用于長期慢性疾病管理的新的方法。在一些實施方案中，所述用于長期疾病管理的代謝疾病或障礙包括肥胖癥、肥胖癥-相關(guān)的并發(fā)癥和2型糖尿病。在另一方面，提供作為線粒體解偶聯(lián)劑的本文所述的化合物在制備用于治療代謝疾病和癌癥的藥物中的用途。發(fā)明詳述在本專利申請中定義的代謝疾病是以異常葡萄糖和/或脂質(zhì)代謝癥狀為特征的疾病家族，其具有多種組織細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)異常積累和胰島素抵抗的共同起因。更具體地，所提及的代謝疾病包括但不限于：肥胖癥(脂肪組織細(xì)胞中過度脂肪積累)、代謝綜合征(外周組織中的胰島素抵抗，通常由肝臟、肌肉或脂肪組織的細(xì)胞中的異常脂肪積累引起)、2型糖尿病(通常由肝臟、肌肉或脂肪組織細(xì)胞中的異常脂肪積累引起的外周組織中的胰島素抵抗和由胰島素抵抗引起的高血糖)、由2型糖尿病、酒精性脂肪肝病引起的多種已知并發(fā)癥(肝細(xì)胞中的異常脂質(zhì)積累)、多個階段的非酒精性肝臟脂肪肝病(或nafld，由肝細(xì)胞中異常脂質(zhì)積累引起，所述階段包括肝脂肪變性、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、肝硬化和nafld誘導(dǎo)的肝細(xì)胞癌(hcc))，和各種類型的血脂異常(在肝臟、肌肉、心臟的細(xì)胞中的異常脂質(zhì)積累，這是由于脂質(zhì)從脂肪組織再分配到其他組織)。降低能量效率和促進(jìn)無效脂質(zhì)氧化的線粒體解偶聯(lián)劑將有效減少脂質(zhì)的細(xì)胞積累。此外，最近的研究已經(jīng)證明脂質(zhì)在肝臟、肌肉中的異常細(xì)胞內(nèi)積累以及脂肪組織中脂質(zhì)的過度積累是各種形式代謝疾病的胰島素抵抗的根本原因(samuelv.t.，等人，lancet，2010，375:2267-77)。實際上，最近的研究表明化學(xué)線粒體解偶聯(lián)劑在預(yù)防和治療代謝疾病方面是有效的(perryrj,zhangd,zhangxm,boyerjl,shulmangi.,science2015mar13；347(6227):1253-6.)，導(dǎo)致：(1)減少包括脂肪組織在內(nèi)的各種組織中的脂質(zhì)積累，(2)胰島素抵抗降低，(3)血糖濃度降低，(4)血糖控制改善和疾病進(jìn)展減緩。重要的是，使用線粒體解偶聯(lián)劑治療代謝疾病具有許多吸引人的特征；例如，由于它們校正了胰島素抵抗(異常脂質(zhì)積累)的原因，所以這種方法可以為一些代謝疾病提供治愈。盡管有令人興奮的優(yōu)勢，目前沒有解偶聯(lián)藥物已被批準(zhǔn)用于臨床使用或臨床試驗。發(fā)現(xiàn)具有有利的藥物動力學(xué)和藥效學(xué)特性的組合的新型化學(xué)線粒體解偶聯(lián)劑對于開發(fā)用于治療上述代謝疾病的線粒體解偶聯(lián)藥物是至關(guān)重要的。癌癥是一類疾病家族，其特征在于由致癌基因和腫瘤抑制基因中的遺傳突變的組合產(chǎn)生的各種組織類型的細(xì)胞的不受控制的生長和增殖。眾所周知，腫瘤發(fā)生的一個要求是細(xì)胞代謝的改變。對于快速增殖和生長，癌細(xì)胞不僅需要能量，而且還需要用于生物合成大分子如dna和rna的構(gòu)建塊(代謝中間體)。癌細(xì)胞中的代謝以這樣的方式發(fā)生改變，它可以支持能量需求和各種代謝中間體(構(gòu)建塊)對大分子生物合成的巨大需求(vanderheidenmg,cantleylc,thompsoncb.science.2009may22；324(5930):1029-33)。因此，大多數(shù)癌癥表現(xiàn)出獨特的細(xì)胞代謝模式，稱為warburg效應(yīng)或需氧糖酵解，其防止葡萄糖或脂質(zhì)的完全氧化，并允許生產(chǎn)用于大分子生物合成的葡萄糖代謝物(vanderheidenmg,cantleylc,thompsoncb.science.2009may22；324(5930):1029-33)。線粒體解偶聯(lián)會降低能量效率，從而剝離癌細(xì)胞的能量需求。此外，線粒體解偶聯(lián)促進(jìn)葡萄糖和脂質(zhì)的完整線粒體氧化，從而減少細(xì)胞增殖所需的大分子生物合成所必需的代謝中間體的產(chǎn)生。此外，線粒體解偶聯(lián)可導(dǎo)致ampk活化，這是抑制細(xì)胞生長的已知事件。事實上，以前的文獻(xiàn)顯示線粒體解偶聯(lián)劑表現(xiàn)出抗癌活性(us20130231312)。通過線粒體解偶聯(lián)靶向癌細(xì)胞將剝奪對癌細(xì)胞生長和增殖絕對必需的能量以及生物合成代謝中間體。再次，盡管新的抗癌策略具有吸引力的特征，但目前尚未批準(zhǔn)用于癌癥治療或臨床試驗的線粒體解偶聯(lián)藥物。發(fā)現(xiàn)具有有利的藥代動力學(xué)和藥效學(xué)特性的組合的新型化學(xué)線粒體解偶聯(lián)劑對于治療各種類型的癌癥是至關(guān)重要的。本申請的多種實施方案提供具有線粒體解偶聯(lián)活性的化合物。這些化合物可用于預(yù)防和治療代謝疾病和癌癥，包括，但不限于，肥胖癥、代謝綜合征、2型糖尿病、酒精性脂肪肝病、非酒精性脂肪肝病、血脂異常、多種組織起源的原發(fā)性癌、和轉(zhuǎn)移性癌癥。在一方面提供式(i)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物、或前藥，其中:r1為h、po(oh)2、po3m2、po(oh)ra、po(om)ra、po(ra)2、c(o)ra、或b(oh)2，其中m為金屬陽離子(例如na+、k+、mg2+、ca2+)、有機(jī)胺(例如帶正電荷的有機(jī)胺如質(zhì)子化胺或季銨陽離子)、或其衍生物；r2、r3、r4和r5各自獨立地選自h、鹵素、cf3、sf3、cn、no2、烷基、鹵代烷基、芳基、cooh、coora和conhra；各個ra獨立地選自h、烷基、芳基、烷氧基、芳基氧基、烷氧基烷基、氨基、烷基氨基和烷基-羰基氧基-烷基；其中各個烷基、芳基、烷氧基、芳基氧基、或烷氧基烷基任選取代有一個、兩個、三個或四個取代基，各個取代基選自羥基、氰基、硝基、鹵素、羰基、c1-8烷基、c2-8烯基、c2-8炔基、羥基-c1-8烷基、鹵代-c1-8烷基、c1-8烷氧基、鹵代-c1-8烷氧基、氨基、c1-8烷基-氨基、氨基-c1-8烷基、c1-8烷基-氨基-c1-8烷基、c1-8烷氧基-c1-8烷基、c1-8烷基硫基、c1-8烷基-羰基、c1-8烷氧基-羰基、c1-8烷基-羰基氧基或氨基-磺?；?。x為c5-10雜芳基或單環(huán)或雙環(huán)c6-10芳基。所述雜芳基包含至少一個氮和任選一個氧或一個硫原子，且所述雜芳基任選取代有一個或多個rb。所述c6-10芳基任選取代有一個或多個rb。各個rb獨立地選自h、鹵素、cn、no2、co2h、co2ra、cf3、ocf3、sf3、c6-10芳基、烷基、鹵代烷基、conhra和c＝nrc(n(rd)2)。各個rc獨立地選自h、cn、o-烷基、nh2、單-烷基取代的氨基和二烷基取代的氨基。各個rd獨立地選自h和烷基，其中所述烷基任選取代有鹵素、cn、no2、co2h、co2ra、cf3、ocf3、sf3、c6-10芳基或conhra。作為取代基的烷基的示例性實施方案包括c1-6烷基、c1-8烷基、c1-10烷基和c1-20烷基。作為取代基的芳基和雜芳基可為c6-10芳基或c5-10雜芳基。在一些實施方案中，x為5、6、9或10-元取代或未取代的雜芳基，其包含至少一個氮且任選包含硫和/或氧，且選自咪唑、吡咯、吡唑、四唑、噁唑、噻唑、吡啶、嘧啶、吡嗪、噠嗪、三嗪、吲唑、嘌呤、苯并咪唑、苯并噁唑、苯并噻唑、喹啉、異喹啉和喹唑啉；在一些實施方案中，r2、r3、r4和r5中至少三個為h。在一些實施方案中，“烷基”基團(tuán)為碳鏈、直鏈或支鏈的，其具有1至8個碳。在一些實施方案中，x為具有以下結(jié)構(gòu)的9-元環(huán):其中t為o、s或nra；w3、x3、x3’、y3和z3各自獨立地為crb或n；各個ra獨立地選自h、烷基、芳基、烷氧基、芳基氧基、烷氧基烷基、氨基、烷基氨基和烷基-羰基氧基-烷基；各個rb獨立地選自h、鹵素、cn、no2、co2h、co2ra、cf3、ocf3、sf3、c6-10芳基、烷基、鹵代烷基、conhra和c＝nrc(n(rd)2)；各個rc獨立地選自h、cn、o-烷基、nh2、單-烷基取代的氨基和二烷基取代的氨基；和各個rd獨立地選自h和烷基，其中所述烷基任選取代有鹵素、cn、no2、co2h、co2ra、cf3、ocf3、sf3、c6-10芳基或conhra；且條件是所述9-元環(huán)包含至少一個氮且不為吲哚。在一些實施方案中，x為具有以下結(jié)構(gòu)的六元雜芳基:其中w2、x2、y2和z2中兩個為n，另外兩個為crb，且w2和z2不都為n；各個ra獨立地選自h、烷基、芳基、烷氧基、芳基氧基、烷氧基烷基、氨基、烷基氨基和烷基-羰基氧基-烷基；且各個rb獨立地選自h、鹵素、cn、no2、co2h、co2ra、cf3、ocf3、sf3、c6-10芳基、烷基、鹵代烷基、conhra和c＝nrc(n(rd)2)；各個rc獨立地選自h、cn、o-烷基、nh2、單-烷基取代的氨基和二烷基取代的氨基；各個rd獨立地選自h和烷基，其中所述烷基任選取代有鹵素、cn、no2、co2h、co2ra、cf3、ocf3、sf3、c6-10芳基或conhra；且條件是當(dāng)所述六元雜芳基為吡嗪時，rb選自鹵素、cn、no2、co2h、co2ra、cf3、ocf3、sf3、c6-10芳基、烷基、鹵代烷基、conhra和c＝nrc(n(rd)2)。在一些實施方案中，x為取代有一個或多個rb的吡啶環(huán)，其中各個rb獨立地選自鹵素、cn、no2、co2h、co2ra、cf3、ocf3、sf3、c6-10芳基、烷基、鹵代烷基、conhra和c＝nrc(n(rd)2)，條件是所述鹵素不取代在環(huán)氮的鄰位上；各個ra獨立地選自h、烷基、芳基、烷氧基、芳基氧基、烷氧基烷基、氨基、烷基氨基和烷基-羰基氧基-烷基；各個rc獨立地選自h、cn、o-烷基、nh2、單-烷基取代的氨基和二烷基取代的氨基；和各個rd獨立地選自h和烷基，其中所述烷基任選取代有鹵素、cn、no2、co2h、co2ra、cf3、ocf3、sf3、c6-10芳基或conhra。在式(i)的一些實施方案中，x為具有以下結(jié)構(gòu)的5-元環(huán):其中w1、x1和y1各自獨立地為crc、n、o或s；z1為crb或n；條件是所述5-元環(huán)包含至少一個氮原子；各個rb獨立地如上所述或不存在；各個r6獨立選自鹵素、cn、no2、co2h、co2ra和conhra；且各個r7獨立選自h、cn、no2、co2ra和conhra。式i-a和i-b中的圓圈表示該環(huán)的芳香特性。雙鍵的具體位置可根據(jù)w1、x1、y1和z1的具體基團(tuán)而改變。式i-a和i-b的實例包括:本發(fā)明另一方面提供具有以下結(jié)構(gòu)的式(i)的化合物:或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物、或前藥，其中:r1選自po(oh)2、po2(oh)m、po3m2、po(oh)ra、po(om)ra、或po(ra)2和c(o)re，其中m為金屬陽離子或有機(jī)胺；r2、r3、r4和r5各自獨立地選自h、鹵素、cf3、sf3、cn、no2、烷基、鹵代烷基、芳基、cooh、coora和conhra；x為取代有一個或多個rb的單環(huán)或雙環(huán)任選c6-10芳基；各個ra獨立地選自h、烷基、芳基、烷氧基、芳基氧基、烷氧基烷基、氨基、烷基氨基和烷基-羰基氧基-烷基；各個rb獨立地選自h、鹵素、cn、no2、co2h、co2ra、cf3、ocf3、sf3、c6-10芳基、烷基、鹵代烷基、conhra和c＝nrc(n(rd)2)；各個rc獨立地選自h、cn、o-烷基、nh2、單-烷基取代的氨基和二烷基取代的氨基；各個rd獨立地選自h和烷基，其中所述烷基任選取代有鹵素、cn、no2、co2h、co2ra、cf3、ocf3、sf3、c6-10芳基或conhra；且re為任選取代有一個或兩個烷基的nh2。在另一方面提供選自以下的化合物:n-(5-溴吡嗪-2-基)-5-氯-2-羥基苯甲酰胺，5-氯-n-(5-氰基吡嗪-2-基)-2-羥基苯甲酰胺，5-氯-n-(3-氯-5-氰基吡嗪-2-基)-2-羥基苯甲酰胺，5-氯-2-羥基-n-(嘧啶-5-基)苯甲酰胺，5-氯-n-(2,4-二氯嘧啶-5-基)-2-羥基苯甲酰胺，5-氯-n-(2-氯嘧啶-5-基)-2-羥基苯甲酰胺,5-氯-n-(2-氰基嘧啶-5-基)-2-羥基苯甲酰胺，5-氯-2-羥基-n-(噠嗪-3-基)苯甲酰胺，5-氯-n-(6-氯噠嗪-3-基)-2-羥基苯甲酰胺，5-氯-n-(5-氰基吡啶-2-基)-2-羥基苯甲酰胺，n-(苯并[d]噻唑-5-基)-5-氯-2-羥基苯甲酰胺，5-氯-n-(5-氰基噻唑-2-基)-2-羥基苯甲酰胺，n-(苯并[d]噻唑-2-基)-5-氯-2-羥基苯甲酰胺，5-氯-n-(4-氟苯并[d]噻唑-2-基)-2-羥基苯甲酰胺，磷酸二氫4-氯-2-((5-氰基吡嗪-2-基)氨基甲?；?苯基酯，4-氯-2-((5-氰基吡嗪-2-基)氨基甲?；?苯基磷酸酯磷酸鈉，5-氯-2-羥基-n-(異喹啉-7-基)苯甲酰胺,5-氯-2-羥基-n-(喹喔啉-6-基)苯甲酰胺,二甲基氨基甲酸4-氯-2-((5-氰基吡嗪-2-基)氨基甲?；?苯基酯,[1,4’-聯(lián)哌啶]-1’-甲酸4-氯-2-((5-氰基吡嗪-2-基)氨基甲?；?苯基酯,[1,4’-聯(lián)哌啶]-1’-甲酸4-氯-2-((5-氰基吡嗪-2-基)氨基甲?；?苯基酯，乙基氨基甲酸4-氯-2-((5-氰基吡嗪-2-基)氨基甲?；?苯基酯,5-氯-n-(6-氟苯并[d]噻唑-2-基)-2-羥基苯甲酰胺,二甲基氨基甲酸4-氯-2-((6-氟苯并[d]噻唑-2-基)氨基甲?；?苯基酯,5-氯-2-羥基-n-(4-(三氟甲基)苯并[d]噻唑-2-基)苯甲酰胺,二甲基氨基甲酸4-氯-2-((4-(三氟甲基)苯并[d]噻唑-2-基)氨基甲?；?苯基酯,5-氯-2-羥基-n-(6-(三氟甲基)苯并[d]噻唑-2-基)苯甲酰胺,二甲基氨基甲酸4-氯-2-((6-(三氟甲基)苯并[d]噻唑-2-基)氨基甲?；?苯基酯,二甲基氨基甲酸4-氯-2-((4-氟苯并[d]噻唑-2-基)氨基甲?；?苯基酯,二甲基氨基甲酸4-氯-2-((2-氯-4-硝基苯基)氨基甲?；?苯基酯，5-氯-2-羥基-n-(5-(三氟甲基)吡嗪-2-基)苯甲酰胺，5-氯-n-(6-氰基苯并[d]噻唑-2-基)-2-羥基苯甲酰胺，和它們藥學(xué)上可接受的鹽。在另一方面提供化合物，其選自:磷酸氫4-氯-2-((2-氯-4-氰基苯基)氨基甲酰基)苯基·乙基酯，磷酸二氫4-氯-2-((2-氯-4-氰基苯基)氨基甲?；?苯基酯，磷酸4-氯-2-((2-氯-4-氰基苯基)氨基甲酰基)苯基酯鈉，和它們藥學(xué)上可接受的鹽。在另一方面提供組合物，其用于治療或預(yù)防肥胖癥、2型糖尿病、非酒精性或酒精性脂肪肝病、血脂異常、癌癥、相關(guān)疾病和并發(fā)癥，所述組合物包含本發(fā)明的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物、或前藥。所述藥物組合物可包含一種或多種本發(fā)明的化合物，和其生物活性的類似物、同系物、衍生物、修飾物、和藥學(xué)上可接受的鹽，和藥學(xué)上可接受的載體。本發(fā)明的化合物和組合物可以通過口服、胃腸外(例如，肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、icv、腦池內(nèi)注射或輸注、皮下注射或移植)、吸入噴霧、經(jīng)鼻、陰道、直腸、舌下或局部給藥途徑給予，并且可以單獨或一起配制于包含適合于每種給藥途徑的常規(guī)無毒藥學(xué)上可接受的載體、助劑和媒介物的適合的單位劑量制劑中。除治療恒溫動物(諸如小鼠、大鼠、馬、牛、羊、狗、貓、猴子等)之外，本發(fā)明的化合物也可有效用于人類。術(shù)語“給予和“給藥”應(yīng)當(dāng)被理解為向需要治療的個體提供本發(fā)明的化合物或本發(fā)明的化合物的前藥。本發(fā)明的化合物和組合物可以以預(yù)防上有效的劑量水平給予以預(yù)防上述的病癥和障礙，以及預(yù)防特征為胰島素抵抗或高血糖的其它病癥和障礙。用于口服使用的藥物組合物可以根據(jù)本領(lǐng)域已知的用于制備藥物組合物的任何方法來制備，并且這樣的組合物可以含有一種或多種試劑，包括例如甜味劑、調(diào)味劑、著色劑和防腐劑，以提供藥學(xué)上精致和適口的制劑。片劑含有與適合于制備片劑的無毒藥學(xué)上可接受的賦形劑混合的活性成分。所述片劑可以是未包衣的或者可以采用已知技術(shù)包衣來延遲在胃腸道的崩解和吸收，并且由此提供更長時間內(nèi)的持續(xù)作用。用于口服使用的組合物也可以呈現(xiàn)為硬明膠膠囊劑(其中活性成分與惰性固體稀釋劑(例如碳酸鈣，磷酸鈣或高嶺土)混合)或軟明膠膠囊劑(其中活性成分與水或油性介質(zhì)(例如花生油，液體石蠟或橄欖油混合))。含水混懸液、含油混懸液、可分散的粉末或顆粒、水包油乳液、以及無菌可注射含水或含油混懸液可以采用本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)方法來制備。包含本發(fā)明的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的組合物，也可制備為粉末或液體濃縮物形式。用于本文所述的化合物的藥學(xué)上可接受的堿加成鹽可從無機(jī)和有機(jī)堿制備。衍生自無機(jī)堿的鹽，包括，僅作為實例，鈉、鉀、鋰、銨、鈣和鎂鹽。衍生自有機(jī)堿的鹽包括，但不限于，伯、仲和叔胺的鹽，所述伯、仲和叔胺如烷基胺、二烷基胺、三烷基胺、取代的烷基胺、二(取代的烷基)胺、三(取代的烷基)胺、烯基胺、二烯基胺、三烯基胺、取代的烯基胺、二(取代的烯基)胺、三(取代的烯基)胺、環(huán)烷基胺、二(環(huán)烷基)胺、三(環(huán)烷基)胺、取代的環(huán)烷基胺、二取代的環(huán)烷基胺、三取代的環(huán)烷基胺、環(huán)烯基胺、二(環(huán)烯基)胺、三(環(huán)烯基)胺、取代的環(huán)烯基胺、二取代的環(huán)烯基胺、三取代的環(huán)烯基胺、芳基胺、二芳基胺、三芳基胺、雜芳基胺、二雜芳基胺、三雜芳基胺、雜環(huán)胺、二雜環(huán)胺、三雜環(huán)胺、混合的二和三胺(其中所述胺上取代基的至少兩個不同且選自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、環(huán)烯基、取代的環(huán)烯基、芳基、雜芳基、雜環(huán))等。還包括其中兩個或三個取代基與氨基氮一起形成雜環(huán)基或雜芳基的胺。合適的胺的實例包括，僅作為實例，異丙基胺、三甲基胺、二乙基胺、三(異丙基)胺、三(正丙基)胺、乙醇胺、2-二甲基氨基乙醇、氨丁三醇、賴氨酸、精氨酸、組氨酸、咖啡因、普魯卡因、海巴明(hydrabamine)、膽堿、甜菜堿、乙二胺、葡糖胺、n-烷基葡糖胺、可可堿、嘌呤、哌嗪、哌啶、嗎啉、n-乙基哌啶等。還應(yīng)理解其它羧酸衍生物可用于本發(fā)明的實踐，例如，羧酸酰胺，包括甲酰胺、低級烷基甲酰胺、二烷基甲酰胺等?？梢允褂帽绢I(lǐng)域熟知的標(biāo)準(zhǔn)方法獲得可接受的鹽，例如通過使足夠堿性的化合物如胺與得到生理上可接受的陰離子的合適的酸反應(yīng)。還可以制備有機(jī)酸(例如羧酸)的堿金屬(例如鈉、鉀或鋰)或堿土金屬(例如鈣)的鹽。本文所述的藥物組合物可以酌情包括一種或多種另外的載體成分，例如稀釋劑，緩沖劑，調(diào)味劑，粘合劑，表面活性劑，增稠劑，潤滑劑和防腐劑(包括抗氧化劑)。此外，可以包括其它佐劑以使制劑與預(yù)期接受者的血液等滲。根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物可以以廣泛范圍的劑型施用，包括例如固體劑型和液體劑型。固體劑型可以包括粉劑、片劑、丸劑、膠囊劑、栓劑或可分散的顆粒劑。固體載體可以是一種或多種用作稀釋劑、調(diào)味添加劑、溶劑、潤滑劑、懸浮劑、粘合劑、防腐劑、片劑崩解物質(zhì)或包封材料的物質(zhì)。以粉末形式，載體可以是包括乳糖、羥丙基甲基纖維素和pvp在內(nèi)的細(xì)粉碎固體，與適量的活性成分混合。用于粉末和片劑形式的合適的載體包括例如碳酸鎂、硬脂酸鎂、滑石、糖、乳糖、果膠、糊精、硬化劑、明膠、黃蓍膠、甲基纖維素和羧甲基纖維素鈉。液體劑型包括例如溶液、懸浮液和乳液。還包括固體形式的組合物，其意在恰好在被消耗之前轉(zhuǎn)化為液體形式。除了活性成分之外，這些形式可以包括人造色素、調(diào)味劑、穩(wěn)定劑、緩沖劑、天然或人造甜味劑、分散劑、增稠劑、溶解劑等。溶液或混合物可以使用常規(guī)方法例如滴劑或噴霧劑直接施用于鼻腔。組合物可以單或多劑量形式制備。多劑量形式將包括遞送預(yù)定體積的組合物的滴管、吸量管或霧化器。藥物組合物優(yōu)選以包含適量的活性成分的單個劑量單位提供。各個劑量可以提供在包裝中，或作為包括測量裝置的試劑盒，例如用于測量口服或可注射劑量的裝置(即量杯、針或注射器)。該試劑盒還可以包括其他材料，如緩沖液、稀釋劑、過濾器和具有用法指示的包裝說明書。標(biāo)簽可能存在于試劑盒上，以表明該組合物用于特定治療，也可以指示使用方向。在另一方面提供治療或預(yù)防受試者代謝疾病或障礙的方法，包括向受試者給藥治療有效量的上述線粒體解偶聯(lián)劑或組合物。已經(jīng)在文獻(xiàn)中報道了關(guān)于線粒體解偶聯(lián)調(diào)節(jié)與組織中脂質(zhì)積累減少、胰島素抵抗、血糖和體重控制之間的關(guān)系的研究(參見例如wo2012068274，taoh，zhangy，zengx，shulmangi，jins.natmed.2014，20：1263-1269.perryrj，zhangd，zhangxm，boyerjl，shulmangi.，science2015mar13；347(6227):1253-6)。因此，本發(fā)明尤其提供了治療和緩解以下疾病的方法：肥胖癥狀(特征在于脂肪細(xì)胞中脂質(zhì)過度積累)，前驅(qū)型2型糖尿病(pre-type2diabetes)(其特征在于通常由肝臟和肌肉的細(xì)胞中的脂質(zhì)的異常積累引起的胰島素抵抗)，2型糖尿病(以胰島素抵抗和高血糖癥為特征)，非酒精性脂肪性肝病或酒精性脂肪性肝病(以肝臟脂質(zhì)異常積累為特征)，血脂異常(特征為在脂肪之外的組織中的異常脂質(zhì)沉積)，以及上述代謝疾病的并發(fā)癥，包括但不限于高血壓、心血管疾病、腎病和神經(jīng)病變。這些疾病或障礙可能由飲食、環(huán)境、醫(yī)學(xué)和/或遺傳因素引起。本發(fā)明的方法還可以用于預(yù)防具有危險因素的受試者的上述代謝性疾病，包括但不限于飲食、環(huán)境、醫(yī)學(xué)和遺傳傾向。此外，本發(fā)明通過降低血液中的胰島素抵抗或降低血糖水平，提供了長期慢性病管理和長壽管理的新方法。在該方面的一些實施方案中，所述代謝疾病或障礙為2型糖尿病，或?qū)е乱葝u素抵抗或高血糖的相關(guān)疾病。在該方面的一些實施方案中，所述代謝疾病或障礙為肥胖癥。在該方面的一些實施方案中，所述代謝疾病或障礙為非酒精性脂肪肝病(nafld)，包括非酒精性脂肪性肝炎(nash)和肝硬化，或酒精性脂肪肝病(afld)。在一些實施方案中，所述代謝疾病或障礙為肝臟脂肪變性、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、肝硬化、或nafld誘導(dǎo)的肝細(xì)胞癌(hcc)。在該方面的一些實施方案中，所述疾病或障礙為2型糖尿病并發(fā)癥包括但不限于2型糖尿病誘導(dǎo)的高血壓、心血管疾病、腎病、動脈粥樣硬化、血脂異常、視網(wǎng)膜病、神經(jīng)變性疾病、糖尿病性心力衰竭和神經(jīng)病。在該方面的一些實施方案中，所述代謝疾病或障礙為前驅(qū)型2型糖尿病。在該方面的一些實施方案中，所述代謝疾病或障礙為血脂異常。在一些實施方案中，待治療的疾病可為線粒體障礙。在一些實施方案中，所述代謝疾病可為lhon(萊伯遺傳性視神經(jīng)病變)，melas(線粒體肌病，線粒體性腦肌病，乳酸性酸中毒和中風(fēng)樣發(fā)作)，merrf(肌陣攣性癲癇和破裂紅肌纖維)，leigh綜合征，mils(母體遺傳性leigh綜合征)，narp(神經(jīng)源性肌無力，共濟(jì)失調(diào)和色素性視網(wǎng)膜炎)，fbsn(家族性雙側(cè)紋狀體壞死)或kss(卡恩斯-塞爾綜合征，kearnssayresyndrome)。在一些實施方案中，待治療的疾病可為心臟病。在一些實施方案中，所述心臟病可為高血壓或心血管疾病。在一些實施方案中，待治療的疾病可為中樞神經(jīng)系統(tǒng)(cns)疾病。在一些實施方案中，所述cns疾病可為中風(fēng)，阿爾茨海默病，帕金森病，亨廷頓病或als(肌萎縮性側(cè)索硬化)。在一些實施方案中，待治療的疾病可以是與增加的ros(活性氧)產(chǎn)生相關(guān)的病癥。增加的ros與老化、阿爾茨海默病、帕金森病、亨廷頓舞蹈病、als(肌萎縮性側(cè)索硬化)、線粒體疾病和癌癥有關(guān)。在該方面的一些實施方案中，本文所述的化合物用作獸醫(yī)藥物以治療糖尿病或糖尿病相關(guān)的疾病，且所述受試者為哺乳動物。在該方面的一些實施方案中，所述受試者為人。在該方面的一些實施方案中，本發(fā)明的化合物與指示用于上述障礙或疾病的第二藥物組合給藥，在第二藥物給藥的同時、之前或之后給藥。在該方面的一些實施方案中，所述線粒體解偶聯(lián)劑與第二種抗糖尿病藥物組合給藥。在該方面的一些實施方案中，第二種抗糖尿病藥物為二甲雙胍.在該方面的一些實施方案中，第二種抗糖尿病藥物選自胰島素、胰島素類似物、磺酰脲、雙胍、氯茴苯酸、噻唑烷二酮、α葡萄糖苷酶抑制劑、glp-1激動劑、dpp-4抑制劑、和sglt2抑制劑。在該方面的一些實施方案中，所述線粒體解偶聯(lián)劑與第二種抗非酒精性脂肪肝病藥物組合給藥。在該方面的一些實施方案中，所述線粒體解偶聯(lián)劑與第二種抗酒精性脂肪肝病藥物組合給藥。在該方面的一些實施方案中，所述線粒體解偶聯(lián)劑與第二種抗血脂異常藥物組合給藥。在該方面的一些實施方案中，所述線粒體解偶聯(lián)劑通過口服、靜脈內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、經(jīng)皮、向腹膜內(nèi)，或其它藥理可接受的途徑給藥。在本發(fā)明另一方面提供代謝疾病或障礙的長期疾病管理的方法，包括向需要該長期管理的受試者給藥有效量的本文所述的化合物或組合物。在本發(fā)明另一方面提供上述化合物作為線粒體解偶聯(lián)劑在制備用于治療以下疾病的藥物中的用途：肥胖癥、糖尿病、非酒精性或酒精性脂肪肝病、血脂異常、或相關(guān)疾病或并發(fā)癥，包括肝臟脂肪變性、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、肝硬化、或nafld誘導(dǎo)的肝細(xì)胞癌(hcc)。所述給藥途徑可根據(jù)給藥的化合物的類型而改變。一方面，化合物通過口服、局部、直腸、肌肉內(nèi)、粘膜內(nèi)、鼻內(nèi)、吸入、眼部和靜脈內(nèi)途徑施用。本發(fā)明進(jìn)一步提供施用作為控釋制劑的本發(fā)明化合物。在另一方面，提供了治療或預(yù)防受試者中的癌癥的方法，包括向受試者施用治療有效量的上述線粒體解偶聯(lián)劑或組合物。已經(jīng)在文獻(xiàn)中報道了關(guān)于線粒體解偶聯(lián)和癌癥之間關(guān)系的研究(參見例如us20130231312)。因此，本發(fā)明尤其提供了預(yù)防和治療癌癥的方法，包括但不限于原發(fā)性癌癥和轉(zhuǎn)移性癌癥。在該方面的一些實施方案中，所述癌癥為原發(fā)性癌，包括但不限于肝細(xì)胞癌、結(jié)腸直腸癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、白血病、淋巴瘤、黑素瘤、卵巢癌、肺癌。在該方面的一些實施方案中，所述癌癥為源自其它組織類型的原發(fā)性腫瘤的轉(zhuǎn)移性肝癌。在該方面的一些實施方案中，所述癌癥為源自其它組織類型的原發(fā)性腫瘤的轉(zhuǎn)移性肺癌。在該方面的一些實施方案中，所述癌癥為達(dá)到其它位點的轉(zhuǎn)移性癌癥，包括腹膜內(nèi)腔。在該方面的一些實施方案中，本文所述的化合物用作獸醫(yī)藥物以治療癌癥，且所述受試者為哺乳動物。在該方面的一些實施方案中，所述受試者為人。在該方面的一些實施方案中，本發(fā)明的化合物與第二種抗癌劑或抗癌方案組合給予，本發(fā)明的化合物在第二種抗癌劑或抗癌方案給予的同時、之前或之后給予。如果需要，本發(fā)明的組合物還可以包含一種或多種另外的活性劑。適當(dāng)?shù)那闆r下，任何活性劑可以以化合物本身的形式，和/或以鹽、多晶型物、酯、酰胺、前藥、衍生物等的形式施用，條件是鹽、多晶型物、酯、酰胺、前藥或衍生物在藥理學(xué)上是合適的。在合適的情況下，活性劑的鹽、酯、酰胺、前藥和其它衍生物可以使用合成有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)方法制備，并且描述于例如j.march，advancedorganicchemistry：reactions，mechanismsandstructure，第4版(newyork:wiley-interscience，1992)中。對于可以以對映體形式存在的任何活性劑，所述活性劑可以作為外消旋體或以對映異構(gòu)體富集的形式摻入本發(fā)明組合物中。施用的活性化合物的劑量將取決于待治療的病癥、特定化合物和其他臨床因素，例如被治療的受試者的年齡、性別、體重和健康狀況，化合物給藥途徑和給藥的組合物的類型(片劑、凝膠帽、膠囊、溶液、懸浮液、吸入劑、氣溶膠、酏劑、錠劑、注射劑、貼劑、軟膏、乳膏等)。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明具有人和動物使用的應(yīng)用。用于治療所需的化合物或其活性鹽或衍生物的量將最終由巡診醫(yī)生或臨床醫(yī)生決定。如上所述，本發(fā)明的化合物可用于預(yù)防、治療、控制、改善或減少本文所述的疾病、病癥和病況的風(fēng)險?？梢愿淖儽景l(fā)明組合物中作為活性成分的化合物的劑量，從而獲得合適的劑型?；钚猿煞挚梢砸詫⑻峁┳罴阉幬锕πУ膭┝渴┯糜谛枰@種治療的患者(動物和人)。選擇的治療有效劑量取決于所需的治療效果、給藥途徑和治療持續(xù)時間。取決于疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重性、患者的體重、隨后的患者的具體飲食、并行治療的藥物和本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識的其它因素，治療有效劑量將隨患者的不同而變化。通常，將具有治療有效劑量水平為每日0.001至100mg/kg體重的活性成分的本發(fā)明的藥物組合物給予患者，例如人和老年人。治療有效劑量范圍通常為每個患者每天約0.5mg至10g，其可以以單劑量或多劑量施用。在一些實施方案中，治療有效劑量范圍為每位患者每天約0.5mg至2500mg；在一些實施方案中，每個患者每天約0.5mg至200mg；在一些實施方案中，每個患者每天約0.5mg至500mg；在一些實施方案中，每個患者每天約0.5mg至1000mg；在一些實施方案中，每位患者每天約1mg至250mg；而在一些其它實施方案中，每個患者每天約5mg至50mg。藥物組合物可以以含有治療有效量的例如約1mg，5mg，10mg，25mg，50mg，100mg，200mg，250mg，500mg，1000mg，1500mg或2000mg的活性成分的制劑提供。對于口服給藥，組合物可以以含有1.0-2000毫克活性成分的片劑形式提供，例如1、5、10、15、20、25、50、75、100、150、200、250、300、400、500、600、750、800、900、1000和2000毫克的活性成分，用于對要治療的患者的劑量根據(jù)癥狀進(jìn)行調(diào)整。所述化合物或藥物組合物可以每天1至4次的方式施用，例如每天一次，兩次或三次。本發(fā)明的化合物可以具有前藥形式。在體內(nèi)轉(zhuǎn)化以提供生物活性劑的任何化合物是在本發(fā)明的范圍和精神內(nèi)的前體藥物。各種形式的前藥是本領(lǐng)域公知的(參見例如medicinalchemistry:principlesandpractice,f.d.king,ed.,theroyalsocietyofchemistry,cambridge,uk,1994；hydrolysisindrugandprodrugmetabolism.chemistry,biochemistryandenzymology,b.testa,j.m.mayer,vcha和wiley-vch,zurich,switzerland,2003；thepracticeofmedicinalchemistry,c.g.wermuth,2nded.,academicpress,sandiego,ca,1999)。在一些實施方案中，本發(fā)明的化合物的前藥可為氨基甲酸酯形式。例如，式(i)的化合物可具有r1為c(o)ra，其中ra為氨基(-nh2)、烷基氨基或芳基氨基。所述烷基氨基可為單-取代的或二取代的烷基氨基。在一些實施方案中，烷基具有1-10個碳。非限制性實例包括–nhch3、–nhch2ch3、–nhch2ch2ch3、–n(ch3)2和–n(ch2ch3)2。定義除非另有說明，否則本文所用的冠詞“一”和“一個”是指“一個或多個”或“至少一個”。也就是說，通過不定冠詞“一”和“一個”提及本發(fā)明的任何元素不排除存在多于一種元素的可能性。如本文所述，術(shù)語"烷基"預(yù)期包括具有指定數(shù)量的碳原子的支鏈和直鏈的飽和脂族烴基。例如，"c1-c10烷基"或"c1-10烷基"(或亞烷基)，預(yù)期包括c1、c2、c3、c4、c5、c6、c7、c8、c9和c10烷基。此外，例如，"c1-c6烷基"或"c1-6烷基"表示具有1至6個碳原子的烷基。烷基可為未取代的或取代的，其中至少一個氫被另一化學(xué)基團(tuán)替代。烷基的實例包括，但不限于，甲基(me)、乙基(et)、丙基(例如、正丙基和異丙基)、丁基(例如、n-丁基、異丁基、叔丁基)和戊基(例如、正戊基、異戊基、新戊基)。烷基氨基包括單-取代的烷基氨基(例如nhr、r＝烷基)和二取代的烷基氨基(例如nrr，r＝烷基)。"烯基"預(yù)期包括直鏈或支鏈構(gòu)型的烴鏈，其具有指定數(shù)量的碳原子和1個或多個，優(yōu)選1至3個碳-碳雙鍵，所述碳-碳雙鍵可在沿著鏈的任何穩(wěn)定的點出現(xiàn)。例如，"c2-c6烯基"或"c2-6烯基"(或亞烯基)，預(yù)期包括c2、c3、c4、c5和c6烯基。烯基的實例包括、但不限于、乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-戊烯基、2-己烯基、3-己烯基、4-己烯基、5-己烯基、2-甲基-2-丙烯基和4-甲基-3-戊烯基。"炔基"預(yù)期包括直鏈或支鏈構(gòu)型的烴鏈，其具有1個或多個，優(yōu)選1至3個碳-碳三鍵，所述碳-碳三鍵可在沿著鏈的任何穩(wěn)定的點出現(xiàn)。例如，"c2-c6炔基"預(yù)期包括c2、c3、c4、c5和c6炔基；如乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基和己炔基。術(shù)語"烷氧基"或"烷基氧基"是指-o-烷基。"c1-c6烷氧基"或"c1-6烷氧基"(或烷基氧基)，預(yù)期包括c1、c2、c3、c4、c5和c6烷氧基。烷氧基的實例包括，但不限于，甲氧基、乙氧基、丙氧基(例如，正丙氧基和異丙氧基)，和叔丁氧基。術(shù)語"鹵"或"鹵素"是指氟、氯、溴和碘。"鹵代烷基"預(yù)期包括具有指定數(shù)量的碳原子的支鏈和直鏈的飽和脂族烴基，其取代有一個或多個鹵素。鹵代烷基的實例包括，但不限于，氟甲基、二氟甲基、三氟甲基和三氯甲基。"鹵代烷氧基"或"鹵代烷氧基"表示通過氧橋連接的具有指定數(shù)量碳原子的如上定義的鹵代烷基。例如，"c1-c6鹵代烷氧基"或"c1-6鹵代烷氧基"，預(yù)期包括c1、c2、c3、c4、c5和c6鹵代烷氧基。鹵代烷氧基的實例包括，但不限于，三氟甲氧基、三氯甲氧基和2,2,2-三氟乙氧基。"芳基"基團(tuán)是指單環(huán)或多環(huán)芳香烴，包括，例如，苯基和萘基。"c6-c10芳基"或"c6-10芳基"是指苯基和萘基。除非另有所述，"芳基"、"c6-c10芳基"、"c6-10芳基"或"芳族殘基"可為未取代或取代有1至5個選自以下的基團(tuán)：-oh、-och3、-ci、-f、-br、-i、-cn、-no2、-nh2、-nh(ch3)、-n(ch3)2、-cf3、-ocf3、-c(o)ch3、-sch3、-s(o)ch3、-s(o)2ch3、-ch3、-ch2ch3、-co2h和-co2ch3。術(shù)語"芐基"，如本文所述，是指其中一個氫原子被苯基取代的甲基，其中所述苯基可以任選地被1至5個，優(yōu)選1至3個取代基取代，所述取代基獨立地選自甲基、三氟甲基(-cf3)、羥基(-oh)、甲氧基(-och3)、鹵素、氰基(-cn)、硝基(-no2)、-co2me、-co2et和-co2h。芐基的代表性實例包括，但不限于，phch2-、4-meo-c6h4ch2-、2,4,6-三甲基-c6h2ch2-和3,4-二-cl-c6h3ch2-。本文所用的“化合物”是指通常被認(rèn)為是用作藥物的藥物或候選物的任何類型的物質(zhì)或藥劑，以及上述的組合和混合物。當(dāng)提及本發(fā)明的化合物時，除非另有說明，術(shù)語“化合物”旨在不僅包括指定的分子實體，而且還包括其藥學(xué)上可接受的、藥理學(xué)活性的類似物，包括但不限于鹽、多晶型物、酯、酰胺、前藥、加合物、綴合物、活性代謝物等，其中對分子實體的這種修飾是合適的。如本文所用，化合物的“衍生物”是指可以在一個或多個步驟中由另一種類似結(jié)構(gòu)的化合物制備的化合物。非限制性實例包括用烷基、?；虬被〈鷋。如本文所用，“有效量”或“治療有效量”是指足以產(chǎn)生選定效果的量，例如減輕疾病或病癥的癥狀的量。在給予組合形式的化合物例如多種化合物的情況下，當(dāng)與另一種化合物組合施用時，每種化合物的量可以不同于該化合物單獨施用時的量。因此，雖然各化合物的實際量可能變化，但有效量的化合物的組合整體統(tǒng)稱為組合。術(shù)語“更有效”意味著一種治療所達(dá)到的選擇的效果相比于與其進(jìn)行比較的第二治療，更大程度上緩解了。術(shù)語"式"和"結(jié)構(gòu)"在此可互換使用。如本文所述，術(shù)語"雜芳基"預(yù)期是指穩(wěn)定的單環(huán)和多環(huán)芳香烴，其包含至少一個雜原子環(huán)成員，如硫、氧或氮。雜芳基包括，但不限于，吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、噠嗪基、三嗪基、呋喃基、喹啉基、異喹啉基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、吲哚基、吡咯基、噁唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、異噁唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、吲唑基、1,2,4-噻二唑基、異噻唑基、嘌呤基、咔唑基、苯并咪唑基、二氫吲哚基、苯并二氧雜環(huán)戊烷基和苯并二噁烷。除非另有所述，雜芳基可為未取代或取代有1至5個選自以下的基團(tuán)：-oh、-och3、-ci、-f、-br、-i、-cn、-no2、-nh2、-nh(ch3)、-n(ch3)2、-cf3、-ocf3、-c(o)ch3、-sch3、-s(o)ch3、-s(o)2ch3、-ch3、-ch2ch3、-co2h和-co2ch3。氮原子為取代或未取代的(即，n或nr，其中r為h或另一取代基，如果有定義的話)。所述氮和硫雜原子可任選被氧化(即，n→o和s(o)p，其中p為0、1或2)。術(shù)語“線粒體解偶聯(lián)”也被稱為“解偶聯(lián)”，是指質(zhì)子通過獨立于atp合成酶的途徑進(jìn)入線粒體基質(zhì)的過程，從而使?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)氧化與atp生產(chǎn)脫離。該過程可以通過小分子線粒體質(zhì)子載體(protonophore)藥理學(xué)誘導(dǎo)，其直接將質(zhì)子穿過線粒體內(nèi)膜輸送基質(zhì)。需氧細(xì)胞能量產(chǎn)生的主要途徑涉及線粒體中營養(yǎng)物(包括脂肪、碳水化合物和氨基酸)的氧化，其促進(jìn)質(zhì)子流出線粒體基質(zhì)。該過程產(chǎn)生跨過線粒體內(nèi)膜的ph和電化學(xué)梯度。質(zhì)子通常通過atp合酶重新進(jìn)入線粒體基質(zhì)，導(dǎo)致atp產(chǎn)生。質(zhì)子也可以通過獨立于atp合酶的途徑重新進(jìn)入線粒體基質(zhì)，其將營養(yǎng)物質(zhì)氧化和質(zhì)子的流出與atp生產(chǎn)“解偶聯(lián)”。術(shù)語“藥學(xué)上可接受的”在本文中用于指在合理的醫(yī)學(xué)判斷范圍內(nèi)適合用于與人以及動物的組織接觸的那些化合物、材料、組合物和/或劑型，其沒有過多的毒性、刺激性、過敏反應(yīng)和/或其他問題或并發(fā)癥，與合理的利益/風(fēng)險比相稱。如本文所用，“藥學(xué)上可接受的鹽”是指所公開的化合物的衍生物，其中母體化合物通過制備其酸或堿鹽進(jìn)行修飾。藥學(xué)上可接受的鹽的實例包括但不限于堿性基團(tuán)例如胺的無機(jī)酸或有機(jī)酸的鹽；和酸性基團(tuán)如羧酸的堿金屬鹽或有機(jī)鹽。藥學(xué)上可接受的鹽包括常規(guī)的無毒鹽或由例如無毒無機(jī)酸或有機(jī)酸形成的母體化合物的季銨鹽。例如，這種常規(guī)的無毒鹽包括衍生自無機(jī)酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸和硝酸的那些；由有機(jī)酸如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、雙羥萘酸、馬來酸、羥基馬來酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水楊酸、對氨基苯磺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、富馬酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙二磺酸、草酸和羥乙磺酸制備的鹽。本發(fā)明的藥學(xué)上可接受的鹽可以通過常規(guī)的化學(xué)方法由含有堿性或酸性部分的母體化合物合成。通常，這些鹽可以通過使這些化合物的游離酸或堿形式與化學(xué)計量的適當(dāng)?shù)膲A或酸在水或有機(jī)溶劑中或兩者的混合物中反應(yīng)來制備；通常，非水性介質(zhì)如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈是優(yōu)選的。合適的鹽的列表在remington'spharmaceuticalsciences，第18版，mackpublishingcompany，easton，pa，1990中找到，其公開內(nèi)容通過引用并入本文。如本文所述，術(shù)語"藥學(xué)上可接受的載體"包括標(biāo)準(zhǔn)藥物載體的任一種，如磷酸鹽緩沖鹽水溶液、水、乳液如油/水或水/油乳液，和各種類型的濕潤劑。該術(shù)語還包括由美國聯(lián)邦政府的監(jiān)管機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)或在美國藥典中列為用于動物(包括人類)的任何試劑?！扒八帯笔侵冈隗w內(nèi)轉(zhuǎn)化為母體藥物的藥劑。前藥通常是有用的，因為在某些情況下，它們可能比母體藥物更易于施用。例如，它們通過口服給藥可能具有生物利用度，而母體則不是。前藥還可以在藥物組合物中比母體藥物具有改善的溶解度，或可以顯示增加的適口性或更容易配制。本文所用的術(shù)語“受試者”旨在包括人和非人動物。非人類動物包括所有脊椎動物，例如哺乳動物和非哺乳動物，例如非人靈長類動物、綿羊、狗、貓、牛、馬、雞、兩棲動物和爬行動物，但哺乳動物是優(yōu)選的，例如非人靈長類動物、綿羊、狗、貓、牛和馬。優(yōu)選的受試者包括需要增強(qiáng)免疫應(yīng)答的人類患者。該方法特別適用于治療具有可通過增加免疫應(yīng)答治療的病癥的人類患者。本文所用的術(shù)語“治療”或“治療”是指將化合物或藥劑施用于患有疾病或有發(fā)展疾病風(fēng)險的受試者，其目的是對疾病、疾病的癥狀、繼發(fā)于疾病的疾病狀態(tài)或?qū)膊〉囊赘行赃M(jìn)行治愈、緩解、改善、補(bǔ)救、延緩發(fā)作、預(yù)防或改善。實施例用于制備本發(fā)明化合物(例如式i或ia)或用于制備可用于制備式i化合物或本發(fā)明其它式的化合物的中間體的方法作為本發(fā)明的另外的實施方案提供或為本領(lǐng)域已知的方法。盡管以下文本可以舉例說明具體的化合物和相應(yīng)的合成途徑，但并不意圖將本發(fā)明的范圍限制于這樣的具體參考或?qū)嵤├?。鑒于實際和經(jīng)濟(jì)考慮，例如試劑的來源和具體的反應(yīng)條件，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以進(jìn)行各種修改。5-氯-2-羥基-n-(吡嗪-2-基)苯甲酰胺(1)該化合物是已知的，此處的制備是從文獻(xiàn)的步驟改編(farmaco，2005，vol.60，#5p.399–408)。將5-氯水楊酸(1.0389g，6.020mmol)溶于thf(15.0ml)，然后分別添加催化量的dmf(20μl)和草酰氯(0.62ml，7.224mmol)。將該反應(yīng)在室溫攪拌30分鐘，然后真空濃縮。殘余物重新溶于thf(10.0ml)，然后添加苯酚(510mg，5.418mmol)。將反應(yīng)加熱至80℃且攪拌14小時，然后將其濃縮。殘余物通過硅膠柱色譜法純化，得到已知的化合物5-氯-2-羥基苯甲酸苯基酯(213.0mg，16％產(chǎn)率)。所得5-氯-2-羥基苯甲酸苯基酯(213.0mg，0.857mmol)與氨基吡嗪(68.0mg，0.714mmol)混合且加熱至215℃。將熔融混合物攪拌25分鐘且再冷卻回室溫。殘余物通過硅膠柱色譜法純化，得到5-氯-2-羥基-n-(吡嗪-2-基)苯甲酰胺1(10.0mg，6％產(chǎn)率)。1hnmr(300mhz，氯仿-d)δ9.66(d，j＝1.5hz，1h)，8.90(s，1h)，8.49(dt，j＝2.7，0.5hz，1h)，8.36–8.30(m，1h)，7.69(d，j＝2.5hz，1h)，7.47(ddd，j＝8.9，2.5，0.6hz，1h)，7.04(dd，j＝8.9，0.6hz，1h)。針對[m+h](c11h9cln3o2)計算的ms(esi)精確質(zhì)量，要求m/z250.0，實測值m/z249.9。n-(5-溴吡嗪-2-基)-5-氯-2-羥基苯甲酰胺(2)將5-氯水楊酸(539.0mg，3.123mmol)溶于thf(10.0ml)，然后分別添加催化量的dmf(20μl)和草酰氯(0.32ml，3.748mmol)。將該反應(yīng)在室溫攪拌30分鐘，然后真空濃縮。殘余物重新溶于二甲苯(7.0ml)，然后添加5-溴吡嗪-2-胺(435.0mg，2.498mmol)。將混合物加熱至128℃且攪拌14小時，然后將其返回至室溫。將溶劑真空去除且所得殘余物通過硅膠柱色譜法純化，得到n-(5-溴吡嗪-2-基)-5-氯-2-羥基苯甲酰胺2(15.0mg，2％產(chǎn)率)。1hnmr(300mhz，氯仿-d)δ11.40(s，1h)，9.42(t，j＝1.2hz，1h)，8.52(s，1h)，8.36(d，j＝1.4hz，1h)，7.58(d，j＝2.5hz，1h)，7.52–7.44(m，1h)，7.05(d，j＝8.9hz，1h)。針對[m+h](c11h8brcln3o2)計算的ms(esi)精確質(zhì)量，要求m/z327.9，實測值m/z328.0.5-氯-n-(5-氰基吡嗪-2-基)-2-羥基苯甲酰胺(3)將5-氯-2-甲氧基苯甲酸(370.0mg，1.981mmol)溶于thf(10.0ml)，然后分別添加催化量的dmf(20μl)和草酰氯(0.20ml，2.377mmol)。將該反應(yīng)在室溫攪拌30分鐘，真空濃縮，且殘余物重新溶于thf(10.0ml)。在另一燒瓶中，將5-氨基吡嗪-2-甲腈(170.0mg，1.415mmol)溶于thf(5.0ml)，然后添加nah(85.0mg，2.123mmol，60％在礦物油中)。將混合物攪拌10分鐘，然后在室溫將其滴加至包含新制備的酰基氯的燒瓶。將反應(yīng)在室溫攪拌30分鐘，然后添加硅膠以淬滅反應(yīng)。將溶劑蒸發(fā)且所得殘余物通過硅膠柱色譜法純化，得到5-氯-n-(5-氰基吡嗪-2-基)-2-甲氧基苯甲酰胺(40.0mg，10％產(chǎn)率)，其與吡啶鎓鹽酸鹽(550.0mg)混合。將混合物加熱至200℃，攪拌10分鐘且冷卻至室溫。所得固體溶于水且用乙酸乙酯萃取。將有機(jī)層真空濃縮且殘余物通過硅膠柱色譜法純化，得到5-氯-n-(5-氰基吡嗪-2-基)-2-羥基苯甲酰胺3(27.5mg，72％產(chǎn)率)。1hnmr(300mhz，丙酮-d6)δ9.70(d，j＝1.5hz，1h)，8.90(d，j＝1.5hz，1h)，8.16(d，j＝2.7hz，1h)，7.59–7.51(m，1h)，7.17(d，j＝8.8hz，1h)。針對[m+h](c12h8cln4o2)計算的ms(esi)精確質(zhì)量，要求m/z275.0，實測值m/z275.1。5-氯-n-(3-氯-5-氰基吡嗪-2-基)-2-((4-甲氧基芐基)氧基)苯甲酰胺將5-氯-2-((4-甲氧基芐基)氧基)苯甲酸(96.0mg，0.328mmol)溶于thf(5.0ml)，然后在室溫添加nah(16.0mg，60％在礦物油中)和氯代甲酸異丁酯(52μl)。將混合物在室溫攪拌30分鐘。在另一燒瓶中，將5-氨基-6-氯吡嗪-2-甲腈(46.0mg，0.295mmol)溶于thf(5.0ml)，然后添加nah(14.2mg.60％在礦物油中)。將混合物攪拌10分鐘，然后將其在室溫滴加至包含新制備的?；鹊臒?。將反應(yīng)在室溫攪拌14小時，然后添加硅膠以淬滅反應(yīng)。將溶劑蒸發(fā)且所得殘余物通過硅膠柱色譜法純化，得到5-氯-n-(3-氯-5-氰基吡嗪-2-基)-2-((4-甲氧基芐基)氧基)苯甲酰胺(47.0mg，37％產(chǎn)率)。1hnmr(300mhz，氯仿-d)δ10.96(s，1h)，8.69(s，1h)，8.29(d，j＝2.8hz，1h)，7.57–7.50(m，1h)，7.42–7.37(m，2h)，7.16(d，j＝8.9hz，1h)，6.98–6.92(m，2h)，5.27(s，2h)，3.86(s，3h)。針對[m+h](c20h15cl2n4o3)計算的ms(esi)精確質(zhì)量，要求m/z429.0，實測值m/z429.1。5-氯-n-(3-氯-5-氰基吡嗪-2-基)-2-羥基苯甲酰胺(4)將5-氯-n-(3-氯-5-氰基吡嗪-2-基)-2-((4-甲氧基芐基)氧基)苯甲酰胺(26.0mg，0.0606mmol)溶于dcm(5.0ml)，然后在室溫添加tfa(46μl，0.606mmol)。將混合物在室溫攪拌4小時，然后蒸發(fā)溶劑。殘余物通過硅膠柱色譜法純化，得到5-氯-n-(3-氯-5-氰基吡嗪-2-基)-2-羥基苯甲酰胺4(6.7mg，36％產(chǎn)率)1hnmr(500mhz，丙酮-d6)δ8.93(s，1h)，8.08(s，1h)，7.46(d，j＝8.8hz，1h)，7.19(d，j＝8.8hz，1h)。針對[m+h](c12h7cl2n4o2)計算的ms(esi)精確質(zhì)量，要求m/z309.0，實測值m/z309.0。5-氯-2-羥基-n-(嘧啶-5-基)苯甲酰胺(5)將5-氯-2-((4-甲氧基芐基)氧基)苯甲酸(103.0mg，0.352mmol)溶于thf(8.0ml)，然后在室溫添加tea(59μl，0.422mmol)和氯代甲酸異丁酯(55μl，0.422mmol)。將混合物在室溫攪拌30分鐘，然后添加嘧啶-5-胺(48.2mg，0.422mmol)。將反應(yīng)加熱至70℃且攪拌14小時。添加硅膠以淬滅反應(yīng)且去除溶劑。殘余物通過硅膠柱色譜法純化，得到5-氯-2-((4-甲氧基芐基)氧基)-n-(嘧啶-5-基)苯甲酰胺(34.3mg，26％產(chǎn)率)，然后將其溶于dcm(5.0ml)，然后添加tfa(71μl，0.928mmol)。將反應(yīng)在室溫攪拌4小時，然后將其真空濃縮。殘余物通過硅膠柱色譜法純化，得到5-氯-2-羥基-n-(嘧啶-5-基)苯甲酰胺5(3.0mg，13％產(chǎn)率)。1hnmr(300mhz，dmso-d6)δ10.79(s，1h)，9.14(s，2h)，8.96(s，1h)，7.89(d，j＝2.7hz，1h)，7.54–7.45(m，1h)，7.04(d，j＝8.8hz，1h)。針對[m+h](c11h9cln3o2)計算的ms(esi)精確質(zhì)量，要求m/z250.0，實測值m/z250.0。5-氯-n-(2,4-二氯嘧啶-5-基)-2-羥基苯甲酰胺(6)將5-氯水楊酸(211.4mg，1.225mmol)溶于thf(10.0ml)，然后分別添加催化量的dmf(10μl)和草酰氯(0.13ml，1.470mmol)。將該反應(yīng)在室溫攪拌30分鐘，然后真空濃縮。殘余物重新溶于二甲苯(7.0ml)，然后添加2,4-二氯嘧啶-5-胺(161.0mg，0.980mmol)。將混合物加熱至132℃且攪拌30分鐘，然后將其返回至室溫。將溶劑真空去除且所得殘余物通過硅膠柱色譜法純化，得到5-氯-n-(2,4-二氯嘧啶-5-基)-2-羥基苯甲酰胺6(1hnmr(300mhz，dmso-d6)δ12.45(s，1h)，δ11.04(s，1h)，9.60(s，1h)，7.95(d，j＝2.8hz，1h)，7.55(dd，j＝8.8，2.8hz，1h)，7.11(d，j＝8.8hz，1h)。針對[m+h](c11h7cl3n3o2)計算的ms(esi)精確質(zhì)量，要求m/z318.0，實測值m/z317.9。5-氯-n-(2-氯嘧啶-5-基)-2-羥基苯甲酰胺(7)將5-氯水楊酸(253.4mg，1.468mmol)溶于thf(10.0ml)，然后分別添加催化量的dmf(10μl)和草酰氯(0.15ml，1.762mmol)。將該反應(yīng)在室溫攪拌30分鐘，然后真空濃縮。殘余物重新溶于二甲苯(7.0ml)，然后添加4-氯嘧啶-5-胺(152.0mg，1.174mmol)。將混合物加熱至132℃且攪拌20分鐘，然后將其返回至室溫。將溶劑真空去除且所得殘余物通過硅膠柱色譜法純化，得到5-氯-n-(2-氯嘧啶-5-基)-2-羥基苯甲酰胺7(174.6mg，52％產(chǎn)率)。1hnmr(300mhz，dmso-d6)δ11.54(s，1h)，10.77(s，1h)，9.01(s，2h)，7.86(d，j＝2.7hz，1h)，7.56–7.42(m，1h)，7.06(d，j＝8.8hz，1h)。針對[m+h](c11h8cl2n3o2)計算的ms(esi)精確質(zhì)量，要求m/z284.0，實測值m/z283.9。5-氯-n-(2-氰基嘧啶-5-基)-2-羥基苯甲酰胺(8)將5-氯水楊酸(144.0mg，0.833mmol)溶于thf(5.0ml)，然后分別添加催化量的dmf(10μl)和草酰氯(86μl，1.0mmol)。將該反應(yīng)在室溫攪拌30分鐘，然后真空濃縮。殘余物重新溶于二甲苯(5.0ml)，然后添加4-氯嘧啶-5-胺(80.0mg，0.666mmol)。將混合物加熱至132℃且攪拌1小時，然后將其返回至室溫。將溶劑真空去除且所得殘余物通過硅膠柱色譜法純化，得到5-氯-n-(2-氰基嘧啶-5-基)-2-羥基苯甲酰胺8(25.0mg，14％產(chǎn)率)。1hnmr(500mhz，dmso-d6)δ11.45(s，1h)，11.01(s，1h)，9.30(s，2h)，7.80(d，j＝2.7hz，1h)，7.49(dd，j＝8.8，2.6hz，1h)，7.04(d，j＝8.8hz，1h)。針對[m+h](c12h8cln4o2)計算的ms(esi)精確質(zhì)量，要求m/z275.0，實測值m/z274.9。5-氯-2-羥基-n-(噠嗪-3-基)苯甲酰胺(9)將5-氯-2-甲氧基苯甲酸(196.2mg，1.052mmol)溶于thf(10.0ml)，然后在室溫添加tea(0.18ml，1.262mmol)和氯代甲酸異丁酯(0.17ml，1.262mmol)。將混合物在室溫攪拌30分鐘，然后添加噠嗪-3-胺(100.0mg，1.052mmol)。添加dmf(2.0ml)，且將反應(yīng)加熱至80℃且攪拌14小時。添加硅膠以淬滅反應(yīng)且去除溶劑。殘余物通過硅膠柱色譜法純化，得到5-氯-2-甲氧基-n-(噠嗪-3-基)苯甲酰胺(163.0mg，59％產(chǎn)率)。將5-氯-2-甲氧基-n-(噠嗪-3-基)苯甲酰胺(93.0mg，0.353mmol)溶于dcm，然后在室溫添加三溴化硼(1.8ml，1.0m在dcm中)。將反應(yīng)在室溫攪拌14小時，然后將其用碳酸氫鈉水溶液淬滅。將混合物用乙酸乙酯萃取且分離有機(jī)層。將溶劑濃縮且殘余物通過硅膠柱色譜法純化，得到5-氯-2-羥基-n-(噠嗪-3-基)苯甲酰胺9(15.3mg，17％產(chǎn)率)。1hnmr(300mhz，dmso-d6)δ12.19(s，1h)，11.39(s，1h)，9.03(dd，j＝4.7，1.5hz，1h)，8.48(dd，j＝9.0，1.5hz，1h)，7.97(dd，j＝2.9，1.0hz，1h)，7.86–7.67(m，1h)，7.53(dd，j＝8.8，2.8hz，1h)，7.11(d，j＝8.8hz，1h)。針對[m+h](c11h9cln3o2)計算的ms(esi)精確質(zhì)量，要求m/z250.0，實測值m/z249.9。5-氯-n-(6-氯噠嗪-3-基)-2-羥基苯甲酰胺(10)將5-氯-2-甲氧基苯甲酸(179.7mg，0.963mmol)溶于thf(10.0ml)，然后在室溫添加tea(0.16ml，1.156mmol)和氯代甲酸異丁酯(0.15ml，1.156mmol)。將混合物在室溫攪拌30分鐘，然后添加6-氯噠嗪-3-胺(125.0mg，0.963mmol)。添加dmf(2.0ml)，且將反應(yīng)加熱至80℃且攪拌14小時。添加硅膠以淬滅反應(yīng)且去除溶劑。殘余物通過硅膠柱色譜法純化，得到5-氯-n-(6-氯噠嗪-3-基)-2-甲氧基苯甲酰胺(101.5mg，35％產(chǎn)率)。將5-氯-n-(6-氯噠嗪-3-基)-2-甲氧基苯甲酰胺(25.8mg，0.0865mmol)溶于dcm，然后在室溫添加三溴化硼(0.45ml，1.0m在dcm中)。將反應(yīng)在室溫攪拌3小時，然后將其用碳酸氫鈉水溶液淬滅。將混合物用乙酸乙酯萃取且分離有機(jī)層。將溶劑濃縮且殘余物通過硅膠柱色譜法純化，得到5-氯-n-(6-氯噠嗪-3-基)-2-羥基苯甲酰胺10(18.4mg，75％產(chǎn)率)。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δ12.08(s，1h)，11.40(s，1h)，8.52(d，j＝9.3hz，1h)，7.99–7.86(m，2h)，7.51(dd，j＝8.4，2.3hz，1h)，7.08(d，j＝8.7hz，1h)。針對[m+h](c11h8cl2n3o2)計算的ms(esi)精確質(zhì)量，要求m/z284.0，實測值m/z283.9。5-氯-n-(5-氰基吡啶-2-基)-2-羥基苯甲酰胺(11)該化合物是已知的，此處的制備是從文獻(xiàn)的步驟改編(bioorganicandmedicinalchemistryletters，2013，23(6)，1748-1751)。將5-氯-2-甲氧基苯甲酸(324.4mg，1.739mmol)溶于thf(10.0ml)，然后在室溫添加tea(0.29ml，2.086mmol)和氯代甲酸異丁酯(0.27ml，2.086mmol)。將混合物在室溫攪拌10分鐘，然后添加6-氨基煙腈(207.0mg，1.739mmol)。將反應(yīng)加熱至75℃且攪拌14小時。添加硅膠以淬滅反應(yīng)且去除溶劑。殘余物通過硅膠柱色譜法純化，得到5-氯-n-(5-氰基吡啶-2-基)-2-甲氧基苯甲酰胺(147.0mg，29％產(chǎn)率)。將5-氯-n-(5-氰基吡啶-2-基)-2-甲氧基苯甲酰胺(147.0mg，0.511mmol)溶于dcm，然后在室溫添加三溴化硼(2.6ml，1.0m在dcm中)。將反應(yīng)在室溫攪拌14小時，然后將其用碳酸氫鈉水溶液淬滅。將混合物用乙酸乙酯萃取且分離有機(jī)層。將溶劑濃縮且殘余物通過硅膠柱色譜法純化，得到5-氯-n-(5-氰基吡啶-2-基)-2-羥基苯甲酰胺11(3.0mg，2％產(chǎn)率)。1hnmr(dmso-d6)δ12.09(brs，1h)，11.21(s，1h)，8.83(d，j＝2.1hz，1h)，8.32-8.41(m，2h)，7.92(d，j＝2.8hz，1h)，7.52(dd，j1＝8.8hz，j2＝2.8hz，1h)，7.09(d，j＝8.8hz，1h)。磷酸氫4-氯-2-((2-氯-4-氰基苯基)氨基甲?；?苯基·乙基酯(12)5-氯-n-(2-氯-4-氰基苯基)-2-羥基苯甲酰胺將起始材料5-氯水楊酸(561.0mg，3.251mmol)溶于thf(8.0ml)，然后分別添加催化量的dmf(10μl)和草酰氯(0.33ml，3.901mmol)。將該反應(yīng)在室溫攪拌30分鐘，然后真空濃縮。殘余物重新溶于鄰-二甲苯，然后添加氰基苯胺。然后將混合物加熱至128℃且在該溫度攪拌14小時，然后將其冷卻至室溫且過濾。濾餅用冷乙醚洗滌，得到粗氰基酰胺，其進(jìn)一步通過硅膠柱色譜法純化(25％丙酮/己烷)，得到5-氯-n-(2-氯-4-氰基苯基)-2-羥基苯甲酰胺，其為灰白色固體(519.0mg，52％產(chǎn)率)。1hnmr(500mhz，丙酮-d6)δ8.44(d，j＝9.2hz，1h)，8.29(d，j＝2.6hz，1h)，8.22(dd，j＝9.2，2.6hz，1h)，7.92(d，j＝2.2hz，1h)，7.62(dd，j＝8.2，2.2hz，1h)，7.43(d，j＝8.2hz，1h)。針對[m+h](c14h8cl2n2o2)計算的ms(esi)精確質(zhì)量，要求m/z306.0，實測值m/z306.9。磷酸4-氯-2-((2-氯-4-氰基苯基)氨基甲?；?苯基酯二乙基酯將起始材料5-氯-n-(2-氯-4-氰基苯基)-2-羥基苯甲酰胺(225.1mg，0.733mmol)溶于乙腈(15.0ml)且冷卻至0℃，然后添加亞磷酸二乙酯(113μl，0.880mmol)、ccl4(0.51ml)、dmap(11.0mg)和hunig堿(0.30ml)。將混合物逐漸溫?zé)嶂潦覝厍以谑覝財嚢?4h，然后將其真空濃縮。殘余物通過硅膠柱色譜法純化(30％丙酮/己烷)，得到磷酸4-氯-2-((2-氯-4-氰基苯基)氨基甲?；?苯基酯二乙基酯，其為白色固體(227.8mg，70％產(chǎn)率)。1hnmr(300mhz，氯仿-d)δ9.45(s，1h)，8.77(d，j＝8.7hz，1h)，8.06(ddt，j＝2.5，1.2，0.6hz，1h)，7.74(dd，j＝2.0，0.5hz，1h)，7.64(ddt，j＝8.7，2.0，0.6hz，1h)，7.56–7.51(m，2h)，4.34–4.12(m，4h)，1.32(tdd，j＝7.1，1.2，0.5hz，6h)。磷酸氫4-氯-2-((2-氯-4-氰基苯基)氨基甲酰基)苯基·乙基酯(12)將磷酸4-氯-2-((2-氯-4-氰基苯基)氨基甲?；?苯基酯二乙基酯(187.0mg，0.422mmol)溶于氯仿(10.0ml)，然后在室溫滴加溴代三甲基硅烷(0.28ml，2.110mmol)。將反應(yīng)在室溫攪拌24h，然后將其真空濃縮。殘余物重新溶于甲醇，攪拌30分鐘且蒸發(fā)溶劑。將5％水/乙腈的溶液添加至殘余物且將混合物過濾。濾餅用醚洗滌，得到磷酸氫4-氯-2-((2-氯-4-氰基苯基)氨基甲?；?苯基·乙基酯12，其為白色固體(50.0mg，29％產(chǎn)率)。1hnmr(500mhz，dmso-d6)δ11.49(d，j＝4.1hz，1h)，8.32–8.22(m，1h)，8.10(dt，j＝4.4，1.9hz，1h)，7.83(dt，j＝8.6，2.2hz，1h)，7.76(t，j＝2.8hz，1h)，7.60(d，j＝8.8hz，1h)，7.54(dt，j＝10.5，3.5hz，1h)，3.76(p，j＝7.3hz，2h)，1.09–0.94(m，3h)。針對[m+h](c16h13cl2n2o5p)計算的ms(esi)精確質(zhì)量，要求m/z414.0，實測值m/z414.8。磷酸二氫4-氯-2-((2-氯-4-氰基苯基)氨基甲?；?苯基酯(13)將起始的磷酸4-氯-2-((2-氯-4-氰基苯基)氨基甲?；?苯基酯二乙基酯(227.8mg，0.514mmol)溶于氯仿(10.0ml)，然后在室溫滴加碘代三甲基硅烷(0.29ml，2.056mmol)。將反應(yīng)在室溫攪拌72h，然后將其真空濃縮。殘余物重新溶于甲醇，攪拌30分鐘且蒸發(fā)溶劑。將5％水/乙腈的溶液添加至殘余物且將混合物過濾。濾餅用醚洗滌，得到磷酸二氫4-氯-2-((2-氯-4-氰基苯基)氨基甲?；?苯基酯13，其為灰白色固體(120.0mg，60％產(chǎn)率)。1hnmr(500mhz，dmso-d6)δ10.24(s，1h)，8.34(d，j＝8.5hz，1h)，8.12(d，j＝1.9hz，1h)，7.86(dd，j＝8.6，1.9hz，1h)，7.79(d，j＝2.6hz，1h)，7.64(dd，j＝8.8，2.8hz，1h)，7.51(d，j＝8.7hz，1h)。針對[m+h](c14h9cl2n2o5p)計算的ms(esi)精確質(zhì)量，要求m/z386.0，實測值m/z386.8。磷酸4-氯-2-((2-氯-4-氰基苯基)氨基甲?；?苯基酯鈉(14)將起始的磷酸二氫4-氯-2-((2-氯-4-氰基苯基)氨基甲?；?苯基酯(102.3mg，0.264mmol)溶于甲醇(2.0ml)，然后添加naoh(21.1mg，0.528mmol)在甲醇(1.2ml)中的溶液。將混合物在室溫攪拌30分鐘且去除溶劑，得到標(biāo)題化合物14，其為白色固體(120.0mg，定量)。1hnmr(300mhz，氘oxide)δ7.94(d，j＝8.5hz，1h)，7.89–7.73(m，2h)，7.65(d，j＝8.8hz，1h)，7.56–7.39(m，2h)。n-(苯并[d]噻唑-5-基)-5-氯-2-羥基苯甲酰胺(15)將5-氯水楊酸(215.7mg，1.250mmol)溶于thf(8.0ml)，然后分別添加催化量的dmf(10μl)和草酰氯(0.13ml，1.500mmol)。將該反應(yīng)在室溫攪拌30分鐘，然后真空濃縮。殘余物重新溶于鄰-二甲苯，然后添加苯并[d]噻唑-5-胺(150.2mg，1.000mmol)。然后將混合物加熱至135℃且在該溫度攪拌2小時，然后將其冷卻至室溫且過濾。濾餅用冷乙醚洗滌，得到n-(苯并[d]噻唑-5-基)-5-氯-2-羥基苯甲酰胺15，其為灰白色固體(40.6mg，13％產(chǎn)率)。1hnmr(300mhz，dmso-d6)δ11.10(brs，1h)，δ9.41(d，j＝0.8hz，1h)，8.59(d，j＝2.0hz，1h)，8.14(dd，j＝8.7，0.9hz，1h)，7.95(dd，j＝2.7，0.9hz，1h)，7.73(dd，j＝8.7，2.1hz，1h)，7.44(ddd，j＝8.9，2.7，0.9hz，1h)，7.00(dd，j＝8.7，0.9hz，1h)。針對[m+h](c14h10cln2o2s)計算的ms(esi)精確質(zhì)量，要求m/z305.0，實測值m/z305.1。5-氯-n-(5-氰基噻唑-2-基)-2-羥基苯甲酰胺(16)將5-氯-2-甲氧基苯甲酸(186.7mg，1.000mmol)溶于dcm(10.0ml)，然后分別添加催化量的dmf(20μl)和草酰氯(0.10ml，1.200mmol)。將該反應(yīng)在室溫攪拌30分鐘，真空濃縮，且殘余物重新溶于dcm(10.0ml)。在另一燒瓶中，將2-氨基噻唑-5-甲腈(100.0mg，0.800mmol)溶于thf(5.0ml)，然后添加三乙胺(0.17ml，1.200mmol)。將反應(yīng)在室溫攪拌48h，然后添加硅膠以淬滅反應(yīng)。將溶劑蒸發(fā)且所得殘余物通過硅膠柱色譜法純化，得到5-氯-n-(5-氰基噻唑-2-基)-2-甲氧基苯甲酰胺，其與吡啶鎓鹽酸鹽(550.0mg)混合。將混合物加熱至200℃，攪拌10分鐘且冷卻至室溫。所得固體懸浮于水中且過濾。濾餅用乙醚洗滌，得到5-氯-n-(5-氰基噻唑-2-基)-2-羥基苯甲酰胺16(40.3mg，18％產(chǎn)率，經(jīng)2步)。1hnmr(300mhz，dmso-d6)δ8.45(d，j＝1.2hz，1h)，7.85(dd，j＝2.8，1.2hz，1h)，7.52(ddd，j＝8.8，2.8，1.2hz，1h)，7.06(dd，j＝8.9，1.2hz，1h)。針對[m+h](c11h7cln3o2s)計算的ms(esi)精確質(zhì)量，要求m/z280.0，實測值m/z279.9。n-(苯并[d]噻唑-2-基)-5-氯-2-羥基苯甲酰胺(17)將5-氯-2-甲氧基苯甲酸(186.7mg，1.000mmol)溶于dcm(10.0ml)，然后分別添加催化量的dmf(20μl)和草酰氯(0.10ml，1.200mmol)。將該反應(yīng)在室溫攪拌30分鐘，真空濃縮，且然后殘余物溶于thf(10.0ml)。向該燒瓶添加三乙胺(0.17ml，1.200mmol)，然后添加苯并[d]噻唑-2-胺(120.2mg，0.800mmol)。將反應(yīng)在室溫攪拌48h，然后添加硅膠以淬滅反應(yīng)。將溶劑蒸發(fā)且所得殘余物通過硅膠柱色譜法純化，得到n-(苯并[d]噻唑-2-基)-5-氯-2-甲氧基苯甲酰胺(165.8mg，65％產(chǎn)率)。該酰胺(50.0mg，0.157mmol)與吡啶鎓鹽酸鹽(1.0g)混合。將混合物加熱至200℃，攪拌10分鐘且冷卻至室溫。所得固體懸浮于水中且過濾。濾餅用水、乙醚和二氯甲烷洗滌，得到n-(苯并[d]噻唑-2-基)-5-氯-2-羥基苯甲酰胺17(25.0mg，52％產(chǎn)率)。1hnmr(300mhz，dmso-d6)δ8.03(d，j＝7.9hz，1h)，7.95(d，j＝2.7hz，1h)，7.73(s，1h)，7.51(t，j＝7.6hz，2h)，7.44–7.33(m，1h)，7.07(d，j＝8.7hz，1h)。針對[m+h](c14h10cln2o2s)計算的ms(esi)精確質(zhì)量，要求m/z305.0，實測值m/z304.9。5-氯-n-(4-氟苯并[d]噻唑-2-基)-2-羥基苯甲酰胺(18)將5-氯-2-甲氧基苯甲酸(186.7mg，1.000mmol)溶于dcm(10.0ml)，然后分別添加催化量的dmf(20μl)和草酰氯(0.10ml，1.200mmol)。將該反應(yīng)在室溫攪拌30分鐘，真空濃縮，且殘余物然后溶于thf(10.0ml)。向該燒瓶添加三乙胺(0.17ml，1.200mmol)，然后添加4-氟苯并[d]噻唑-2-胺(134.6mg，0.800mmol)。將反應(yīng)在室溫攪拌48h，然后添加硅膠以淬滅反應(yīng)。將溶劑蒸發(fā)且所得殘余物通過硅膠柱色譜法純化，得到5-氯-n-(4-氟苯并[d]噻唑-2-基)-2-甲氧基苯甲酰胺(101.1mg，38％產(chǎn)率)。該酰胺(50.0mg，0.148mmol)與吡啶鎓鹽酸鹽(1.0g)混合。將混合物加熱至200℃，攪拌10分鐘且冷卻至室溫。所得固體懸浮于水中且過濾。濾餅用水、丙酮和乙醚洗滌，得到5-氯-n-(4-氟苯并[d]噻唑-2-基)-2-羥基苯甲酰胺18(15.0mg，31％產(chǎn)率)。1hnmr(300mhz，dmso-d6)δ7.99–7.92(m，1h)，7.92–7.83(m，1h)，7.60–7.50(m，1h)，7.35(h，j＝8.1，7.5hz，2h)，7.11(d，j＝8.5hz，1h)。針對[m+h](c14h19clfn2o2s)計算的ms(esi)精確質(zhì)量，要求m/z323.0，實測值m/z322.9。磷酸二氫4-氯-2-((5-氰基吡嗪-2-基)氨基甲?；?苯基酯(19)將5-氯-n-(5-氰基吡嗪-2-基)-2-羥基苯甲酰胺(200.0mg，0.728mmol)溶于乙腈(10.0ml)且冷卻至0℃，然后添加亞磷酸二乙酯(110μl，0.874mmol)、ccl4(0.51ml)、dmap(11.0mg)和hunig堿(0.30ml)。將混合物逐漸溫?zé)嶂潦覝厍以谑覝財嚢?4h，然后將其真空濃縮。殘余物通過硅膠柱色譜法純化(30％丙酮/己烷)，得到所需產(chǎn)物磷酸4-氯-2-((5-氰基吡嗪-2-基)氨基甲?；?苯基酯二乙基酯，其為無色油狀物(121.0mg，41％產(chǎn)率)。將磷酸4-氯-2-((5-氰基吡嗪-2-基)氨基甲?；?苯基酯二乙基酯(121.0mg，0.295mmol)溶于氯仿(10.0ml)，然后在室溫滴加碘代三甲基硅烷(0.17ml，1.178mmol)。將反應(yīng)在室溫攪拌2h，然后將其真空濃縮。殘余物重新溶于甲醇，攪拌30分鐘且蒸發(fā)溶劑。將乙醚添加至殘余物且將混合物過濾。濾餅用醚洗滌，得到磷酸二氫4-氯-2-((5-氰基吡嗪-2-基)氨基甲?；?苯基酯19，其為灰白色固體(61.2mg，58％收率)。1hnmr(300mhz，dmso-d6)δ11.71(s，1h)，9.51(t，j＝1.5hz，1h)，9.02(t，j＝1.5hz，1h)，7.70(d，j＝2.8hz，1h)，7.64(ddd，j＝8.8，3.8，2.0hz，1h)，7.42(dt，j＝8.9，1.5hz，1h)。針對[m+h](c12h9cln4o5p)計算的ms(esi)精確質(zhì)量，要求m/z355.0，實測值m/z355.0。4-氯-2-((5-氰基吡嗪-2-基)氨基甲酰基)苯基磷酸酯磷酸鈉(20)將磷酸二氫4-氯-2-((5-氰基吡嗪-2-基)氨基甲?；?苯基酯19(540.8mg，1.525mmol)溶于甲醇(10.0ml)，然后添加naoh(122.0mg，3.050mmol)在甲醇(7.0ml)中的溶液。將混合物在室溫攪拌20分鐘且去除溶劑，得到標(biāo)題化合物4-氯-2-((5-氰基吡嗪-2-基)氨基甲?；?苯基磷酸酯鈉20(607.9mg，定量)。1hnmr(300mhz，dmso-d6)δ9.62(d，j＝1.4hz，1h)，8.81(d，j＝1.4hz，1h)，7.64(d，j＝3.0hz，1h)，7.07–7.00(m，1h)，6.49(d，j＝9.0hz，1h)。5-氯-2-羥基-n-(異喹啉-7-基)苯甲酰胺(21)將5-氯-2-甲氧基苯甲酸(162.0mg，0.868mmol)溶于dcm(5.0ml)，然后分別添加催化量的dmf(10μl)和草酰氯(0.09ml，1.042mmol)。將該反應(yīng)在室溫攪拌30分鐘，且真空濃縮。殘余物重新溶于thf(5.0ml)，添加2,6-二甲基吡啶(0.1ml，0.868mmol)和異喹啉-7-胺(100.0mg，0.694mmol)。將混合物在室溫攪拌18小時，然后添加硅膠以淬滅反應(yīng)。將溶劑蒸發(fā)且所得殘余物通過硅膠柱色譜法純化，得到5-氯-n-(異喹啉-7-基)-2-甲氧基苯甲酰胺(53.0mg，24％產(chǎn)率)。將5-氯-n-(異喹啉-7-基)-2-甲氧基苯甲酰胺(29.8mg，0.0953mmol)溶于dcm，然后在0℃添加三溴化硼(0.29ml，1.0m在dcm中)。將反應(yīng)在室溫攪拌14小時，然后將其用碳酸氫鈉水溶液淬滅。將混合物用dcm萃取且分離有機(jī)層。將溶劑濃縮且殘余物通過硅膠柱色譜法純化，得到5-氯-2-羥基-n-(異喹啉-7-基)苯甲酰胺21(21.3mg，75％產(chǎn)率)。1hnmr(300mhz，丙酮-d6)δ9.41(s，1h)，8.76(s，1h)，8.55–8.48(m，1h)，8.22(dt，j＝5.5，2.6hz，2h)，8.09(d，j＝8.9hz，1h)，7.93(d，j＝5.9hz，1h)，7.53(dd，j＝8.9，2.6hz，1h)，7.15(d，j＝8.9hz，1h)。針對[m+h](c16h11cln2o2)計算的ms(esi)精確質(zhì)量，要求m/z299.1，實測值m/z298.9。5-氯-2-羥基-n-(喹喔啉-6-基)苯甲酰胺(22)將5-氯-2-甲氧基苯甲酸(162.0mg，0.868mmol)溶于dcm(5.0ml)，然后分別添加催化量的dmf(10μl)和草酰氯(0.09ml，1.042mmol)。將該反應(yīng)在室溫攪拌30分鐘，真空濃縮。殘余物重新溶于thf(5.0ml)，添加2,6-二甲基吡啶(0.1ml，0.868mmol)和喹喔啉-6-胺(100.0mg，0.689mmol)。將混合物在室溫攪拌18小時，然后添加硅膠以淬滅反應(yīng)。將溶劑蒸發(fā)且所得殘余物通過硅膠柱色譜法純化，得到5-氯-2-甲氧基-n-(喹喔啉-6-基)苯甲酰胺(85.0mg，39％產(chǎn)率)。該化合物(35.5mg，0.113mmol)與吡啶鎓鹽酸鹽(360.0mg)混合。將混合物加熱至200℃，攪拌5分鐘且冷卻至室溫。所得固體懸浮于水中且用etoac萃取。分離有機(jī)相且蒸發(fā)。所得殘余物通過制備tlc純化，得到5-氯-2-羥基-n-(喹喔啉-6-基)苯甲酰胺22(10.6mg，31％產(chǎn)率)。1hnmr(300mhz，丙酮-d6)δ8.89(dd，j＝14.9，1.8hz，2h)，8.72(d，j＝2.4hz，1h)，8.26–8.07(m，3h)，7.10(d，j＝8.8hz，1h)。針對[m+h](c15h11cln3o2)計算的ms(esi)精確質(zhì)量，要求m/z300.1，實測值m/z299.8二甲基氨基甲酸4-氯-2-((5-氰基吡嗪-2-基)氨基甲酰基)苯基酯(23)向空的燒瓶添加5-氯-n-(5-氰基吡嗪-2-基)-2-羥基苯甲酰胺(109.7mg，0.399mmol)，然后添加thf(5.0ml)和hunig堿(0.14ml，0.798mmol)。向該溶液添加二甲基氨基甲酰氯(44μl，0.479mmol)。將反應(yīng)在70℃攪拌4小時，然后添加硅膠。然后去除溶劑且殘余物通過硅膠柱色譜法純化，得到二甲基氨基甲酸4-氯-2-((5-氰基-吡嗪-2-基)氨基甲酰基)苯基酯23(94mg，80％產(chǎn)率)。1hnmr(500mhz，氯仿-d)δ9.75(d，j＝1.5hz，1h)，9.59(s，1h)，8.58(d，j＝1.5hz，1h)，7.93(d，j＝2.6hz，1h)，7.52(dd，j＝8.8，2.6hz，1h)，7.17(d，j＝8.7hz，1h)，3.20(s，3h)，3.03(s，3h)。針對[m+h](c15h13cln5o3)計算的ms(esi)精確質(zhì)量，要求m/z346.1，實測值m/z345.9。[1,4’-聯(lián)哌啶]-1’-甲酸4-氯-2-((5-氰基吡嗪-2-基)氨基甲酰基)苯基酯(24)向空的燒瓶添加5-氯-n-(5-氰基吡嗪-2-基)-2-羥基苯甲酰胺(200.0mg，0.728mmol)，然后添加thf(5.0ml)和hunig堿(0.26ml，1.456mmol)。向該溶液添加[1,4'-聯(lián)哌啶]-1'-碳酰氯(202mg，0.874mmol)。將反應(yīng)在70℃攪拌16小時，然后添加硅膠。然后去除溶劑且殘余物通過硅膠柱色譜法純化，得到[1,4’-聯(lián)哌啶]-1’-甲酸4-氯-2-((5-氰基吡嗪-2-基)氨基甲酰基)苯基酯24(183.0mg，54％產(chǎn)率)。1hnmr(500mhz，dmso-d6)δ11.81(s，1h)，9.41(d，j＝1.4hz，1h)，9.03(d，j＝1.4hz，1h)，7.74(d，j＝2.6hz，1h)，7.64(dd，j＝8.7，2.6hz，1h)，7.31(d，j＝8.7hz，1h)，4.13(d，j＝13.4hz，1h)，3.95–3.82(m，1h)，2.96–2.83(m，1h)，2.78–2.63(m，1h)，2.38(ddt，j＝11.7，7.2，3.7hz，1h)，2.29(t，j＝5.3hz，4h)，1.58(t，j＝14.5hz，2h)，1.44(q，j＝5.2hz，4h)，1.35(dt，j＝8.5，5.9hz，2h)，1.22(q，j＝12.0，8.3hz，1h)，1.16–1.02(m，1h)。針對[m+h](c23h26cln6o3)計算的ms(esi)精確質(zhì)量，要求m/z469.2，實測值m/z469.0。[1,4’-聯(lián)哌啶]-1’-甲酸4-氯-2-((5-氰基吡嗪-2-基)氨基甲?；?苯基酯鹽酸鹽(25)將[1,4’-聯(lián)哌啶]-1’-甲酸4-氯-2-((5-氰基吡嗪-2-基)氨基甲酰基)苯基酯(68.1mg，0.145mmol)溶于thf(6.0ml)，然后添加hcl(2.0m在醚中，73μl)。將混合物在室溫攪拌10分鐘。將所得白色沉淀過濾且用乙醚洗滌，得到[1,4’-聯(lián)哌啶]-1’-甲酸4-氯-2-((5-氰基吡嗪-2-基)氨基甲?；?苯基酯鹽酸鹽25(64.5mg，88％產(chǎn)率)。1hnmr(300mhz，dmso-d6)δ11.87(s，1h)，9.45(dd，j＝1.5，0.6hz，1h)，9.06(dd，j＝1.5，0.6hz，1h)，7.82(d，j＝2.6hz，1h)，7.73–7.62(m，1h)，7.35(d，j＝8.7hz，1h)，4.25(brm，1h)，4.05(brm，1h)，2.87(brm，5h)，2.09–1.92(m，2h)，1.80(s，5h)，1.55-1.40(brm，4h),1.25(s，1h)。由于hcl鹽的離子性質(zhì)未記錄ms。乙基氨基甲酸4-氯-2-((5-氰基吡嗪-2-基)氨基甲?；?苯基酯(26)向空的燒瓶添加5-氯-n-(5-氰基吡嗪-2-基)-2-羥基苯甲酰胺(100.0mg，0.364mmol)、thf(5.0ml)和異氰酸乙酯(35μl，0.437mmol)。將混合物在70℃攪拌8小時，然后添加硅膠。殘余物通過硅膠柱色譜法純化，得到乙基氨基甲酸4-氯-2-((5-氰基吡嗪-2-基)氨基甲?；?苯基酯26(72.9mg，58％產(chǎn)率)。1hnmr(500mhz，丙酮-d6)δ10.39(s，1h)，9.62(d，j＝1.4hz，1h)，8.88(d，j＝1.5hz，1h)，7.85(d，j＝2.6hz，1h)，7.63(dd，j＝8.7，2.7hz，1h)，7.34(d，j＝8.8hz，1h)，7.11(s，1h)，3.18(qd，j＝7.2，5.7hz，2h)，1.08(t，j＝7.2hz，3h)。針對[m+h](c15h13cln5o3)計算的ms(esi)精確質(zhì)量，要求m/z346.1，實測值m/z345.9。5-氯-n-(6-氟苯并[d]噻唑-2-基)-2-羥基苯甲酰胺(27)將5-氯-2-甲氧基苯甲酸(861.8mg，4.619mmol)溶于dcm(15.0ml)，然后分別添加催化量的dmf(40μl)和草酰氯(0.48ml，5.542mmol)。將該反應(yīng)在室溫攪拌30分鐘且真空濃縮。殘余物重新溶于thf(10.0ml)，且添加hunig堿(0.81ml，4.619mmol)和6-氟苯并[d]噻唑-2-胺(620.0mg，3.686mmol)。將混合物在室溫攪拌72小時，然后將其過濾。濾餅用乙醚和dcm洗滌，得到5-氯-n-(6-氟苯并[d]噻唑-2-基)-2-甲氧基苯甲酰胺(837.0mg，67％產(chǎn)率)。該化合物(204.8mg，0.608mmol)然后與吡啶鎓鹽酸鹽(2.100g)混合。將混合物加熱至210℃，攪拌15分鐘且冷卻至室溫。所得固體懸浮于水中且過濾。濾餅用乙醚洗滌，得到5-氯-n-(6-氟苯并[d]噻唑-2-基)-2-羥基苯甲酰胺27(128.6mg，63％產(chǎn)率)。1hnmr(500mhz，dmso-d6)δ7.99–7.85(m，2h)，7.74(d，j＝8.6hz，1h)，7.51(dd，j＝8.7，2.8hz，1h)，7.32(td，j＝8.9，2.9hz，1h)，7.06(d，j＝8.9hz，1h)。針對[m+h](c14h9clfn2o2s)計算的ms(esi)精確質(zhì)量，要求m/z323.0，實測值m/z322.8。二甲基氨基甲酸4-氯-2-((6-氟苯并[d]噻唑-2-基)氨基甲?；?苯基酯(28)向空的燒瓶添加5-氯-n-(6-氟苯并[d]噻唑-2-基)-2-羥基苯甲酰胺(120.0mg，0.372mmol)，然后添加thf(5.0ml)和hunig堿(0.26ml，1.487mmol)。向該溶液添加二甲基氨基甲酰氯(69μl，0.744mmol)。將反應(yīng)在70℃攪拌16小時，然后添加硅膠。然后去除溶劑且殘余物通過硅膠柱色譜法純化，得到二甲基氨基甲酸4-氯-2-((6-氟苯并[d]噻唑-2-基)氨基甲?；?苯基酯28(122.5mg，84％產(chǎn)率)。1hnmr(300mhz，氯仿-d)δ7.90(d，j＝2.6hz，1h)，7.62(dd，j＝8.9，4.7hz，1h)，7.52(ddd，j＝10.1，8.4，2.6hz，2h)，7.22(d，j＝8.7hz，1h)，7.14(td，j＝8.9，2.6hz，1h)，3.26(s，3h)，3.07(s，3h)。針對[m+h](c17h14clfn3o3s)計算的ms(esi)精確質(zhì)量，要求m/z394.0，實測值m/z393.7。5-氯-2-羥基-n-(4-(三氟甲基)苯并[d]噻唑-2-基)苯甲酰胺(29)將5-氯-2-甲氧基苯甲酸(427.0mg，2.291mmol)溶于dcm(10.0ml)，然后分別添加催化量的dmf(30μl)和草酰氯(0.24ml，2.750mmol)。將該反應(yīng)在室溫攪拌30分鐘且真空濃縮。殘余物重新溶于thf(10.0ml)，且添加hunig堿(0.40ml，2.291mmol)和4-(三氟甲基)苯并[d]噻唑-2-胺(400.0mg，1.833mmol)。將混合物在室溫攪拌48小時，然后將其過濾。濾餅用乙醚和dcm洗滌，得到5-氯-2-甲氧基-n-(4-(三氟甲基)苯并[d]噻唑-2-基)苯甲酰胺(644.3mg，91％產(chǎn)率)。該化合物(333.1mg，0.861mmol)然后與吡啶鎓鹽酸鹽(3.330g)混合。將混合物加熱至210℃，攪拌15分鐘且冷卻至室溫。所得固體懸浮于水中且過濾。濾餅用乙醚洗滌，得到5-氯-2-羥基-n-(4-(三氟甲基)苯并[d]噻唑-2-基)苯甲酰胺29(102.2mg，32％產(chǎn)率)。1hnmr(300mhz，dmso-d6)δ8.38(d，j＝7.9hz，1h)，7.92(d，j＝2.8hz，1h)，7.83(d，j＝7.6hz，1h)，7.59–7.45(m，2h)，7.09(d，j＝8.8hz，1h)。針對[m+h](c15h9clf3n2o2s)計算的ms(esi)精確質(zhì)量，要求m/z373.0，實測值m/z372.8。二甲基氨基甲酸4-氯-2-((4-(三氟甲基)苯并[d]噻唑-2-基)氨基甲?；?苯基酯(30)向空的燒瓶添加5-氯-2-羥基-n-(4-(三氟甲基)苯并[d]噻唑-2-基)苯甲酰胺(120.0mg，0.322mmol)，然后添加thf(5.0ml)和hunig堿(0.22ml，1.288mmol)。向該溶液添加二甲基氨基甲酰氯(60μl，0.644mmol)。將反應(yīng)在70℃攪拌16小時，然后添加硅膠。然后去除溶劑且殘余物通過硅膠柱色譜法純化，得到二甲基氨基甲酸4-氯-2-((4-(三氟甲基)苯并[d]噻唑-2-基)氨基甲?；?苯基酯30(99.6mg，70％產(chǎn)率)。1hnmr(300mhz，氯仿-d)δ10.53(s，1h)，8.10(d，j＝2.7hz，1h)，8.05(ddd，j＝7.5，1.4，0.7hz，1h)，7.76(ddd，j＝7.6，1.3，0.7hz，1h)，7.56(ddd，j＝8.8，2.7，0.6hz，1h)，7.46-7.36(m，1h)，7.28(d，j＝8.8hz，1h)，3.36(s，3h)，3.09(s，3h)。針對[m+h](c18h14clf3n3o3s)計算的ms(esi)精確質(zhì)量，要求m/z444.0，實測值m/z443.7。5-氯-2-羥基-n-(6-(三氟甲基)苯并[d]噻唑-2-基)苯甲酰胺(31)將5-氯-2-甲氧基苯甲酸(535.0mg，2.864mmol)溶于dcm(15.0ml)，然后分別添加催化量的dmf(40μl)和草酰氯(0.30ml，3.437mmol)。將該反應(yīng)在室溫攪拌30分鐘且真空濃縮。殘余物重新溶于thf(10.0ml)，且添加hunig堿(0.50ml，2.864mmol)和6-(三氟甲基)苯并[d]噻唑-2-胺(500.0mg，2.291mmol)。將混合物在室溫攪拌48小時，然后將其過濾。濾餅用乙醚和dcm洗滌，得到5-氯-2-甲氧基-n-(6-(三氟甲基)苯并[d]噻唑-2-基)苯甲酰胺(710.5mg，80％產(chǎn)率)。該化合物(400.0mg，1.034mmol)然后與吡啶鎓鹽酸鹽(4.000g)混合。將混合物加熱至210℃，攪拌15分鐘且冷卻至室溫。所得固體懸浮于水中且過濾。濾餅用乙醚洗滌，得到5-氯-2-羥基-n-(6-(三氟甲基)苯并[d]噻唑-2-基)苯甲酰胺31(219.1mg，57％產(chǎn)率)。1hnmr(300mhz，dmso-d6)δ8.56(d，j＝2.2hz，1h)，7.93(dd，j＝6.2，4.0hz，2h)，7.84–7.72(m，1h)，7.55(dt，j＝8.8，2.4hz，1h)，7.10(dd，j＝9.0，2.0hz，1h)。針對[m+h](c15h9clf3n2o2s)計算的ms(esi)精確質(zhì)量，要求m/z373.0，實測值m/z372.7。二甲基氨基甲酸4-氯-2-((6-(三氟甲基)苯并[d]噻唑-2-基)氨基甲?；?苯基酯(32)向空的燒瓶添加5-氯-2-羥基-n-(6-(三氟甲基)苯并[d]噻唑-2-基)苯甲酰胺(71.9mg，0.193mmol)，然后添加thf(5.0ml)和hunig堿(84μl，0.482mmol)。向該溶液添加二甲基氨基甲酰氯(27μl，0.290mmol)。將反應(yīng)在70℃攪拌16小時，然后添加硅膠。然后去除溶劑且殘余物通過硅膠柱色譜法純化，得到二甲基氨基甲酸4-氯-2-((6-(三氟甲基)苯并[d]噻唑-2-基)氨基甲?；?苯基酯32(44.3mg，52％產(chǎn)率)。1hnmr(300mhz，氯仿-d)δ8.10(tt，j＝1.4，0.8hz，1h)，7.82(t，j＝2.2hz，1h)，7.67(dq，j＝8.5，0.8hz，1h)，7.62–7.56(m，1h)，7.48–7.42(m，1h)，7.21(dd，j＝8.8，1.7hz，1h)，3.27(d，j＝1.7hz，3h)，3.08(d，j＝1.6hz，3h)。針對[m+h](c18h14clf3n3o3s)計算的ms(esi)精確質(zhì)量，要求m/z444.0，實測值m/z443.7。二甲基氨基甲酸4-氯-2-((4-氟苯并[d]噻唑-2-基)氨基甲?；?苯基酯(33)向空的燒瓶添加5-氯-n-(4-氟苯并[d]噻唑-2-基)-2-羥基苯甲酰胺(66.0mg，0.240mmol)，然后添加thf(5.0ml)和hunig堿(84μl，0.480mmol)。向該溶液添加二甲基氨基甲酰氯(27μl，0.290mmol)。將反應(yīng)在70℃攪拌16小時，然后添加硅膠。然后去除溶劑且殘余物通過硅膠柱色譜法純化，得到二甲基氨基甲酸4-氯-2-((4-氟苯并[d]噻唑-2-基)氨基甲?；?苯基酯33(54.2mg，57％產(chǎn)率)。1hnmr(500mhz，氯仿-d)δ10.66(s，1h)，7.87(d，j＝2.6hz，1h)，7.54(dd，j＝8.0，1.0hz，1h)，7.43(dd，j＝8.8，2.6hz，1h)，7.24–7.17(m，2h)，7.09(ddd，j＝10.5，8.1，1.0hz，1h)，3.26(s，3h)，3.08(s，3h)。針對[m+h](c17h14clfn3o3s)計算的ms(esi)精確質(zhì)量，要求m/z394.0，實測值m/z393.7。二甲基氨基甲酸4-氯-2-((2-氯-4-硝基苯基)氨基甲?；?苯基酯(34)向氯硝柳胺(277mg，0.847mmol)在thf(5.0ml)中的攪拌溶液中添加dipea(592ul，3.4mmol)，然后添加二甲基氨基甲?；?157μl，1.7mmol)。將該反應(yīng)回流過夜。冷卻后，去除thf且殘余物溶于ea且用1nhcl(兩次)、飽和nahco3(兩次)和鹽水(一次)洗滌。有機(jī)層用硫酸鈉干燥，過濾且濃縮，得到34，其為白色固體(336mg，100％)。1hnmr(300mhz，cdcl3)δ9.01(s，1h)，8.82(d，j＝9.2hz，1h)，8.34(d，j＝2.6hz，1h)，8.22(dd，j＝9.2，2.6hz，1h)，7.91(d，j＝2.6hz，1h)，7.52(dd，j＝8.7，2.6hz，1h)，7.14(d，j＝8.7hz，1h)，3.14(s，3h)，3.01(s，3h)。針對[m+na]+(c16h13cl2n3nao5)計算的ms(esi)精確質(zhì)量，要求m/z420.01，實測值m/z419.75。5-氯-2-羥基-n-(5-(三氟甲基)吡嗪-2-基)苯甲酰胺(35)向5,6-二氨基嘧啶-4-醇(1.94g，15.4mmol)在3mnaoh(19.3ml，58mmol)中的冰浴冷卻的溶液中添加3,3-二溴-1,1,1-三氟丙-2-酮(1.36ml，10mmol)。將反應(yīng)在室溫攪拌72h。將反應(yīng)酸化至ph＝5且用dcm萃取三次。合并的有機(jī)相用硫酸鈉干燥，過濾且濃縮。殘余物溶于60％硫酸(15ml)且在135℃攪拌8小時。將反應(yīng)冷卻，倒在冰上且用濃氨水中和至ph＝8，且用ea萃取5次。合并的有機(jī)相用硫酸鈉干燥，過濾且濃縮。殘余物從己烷重結(jié)晶，得到5-(三氟甲基)吡嗪-2-胺，其為白色固體(370mg，22％)。1hnmr(300mhz，cdcl3)δ8.31(s，1h)，8.01(s，1h)，5.43(brs，2h)。針對[m+h]+(c5h5f3n3)計算的ms(esi)精確質(zhì)量，要求m/z164.04，實測值m/z163.85。將5-氯-2-甲氧基苯甲酸(229.0mg，1.226mmol)溶于thf(5.0ml)，然后分別添加催化量的dmf(10μl)和草酰氯(0.127ml，1.472mmol)。將該反應(yīng)在室溫攪拌30分鐘，真空濃縮，且殘余物重新溶于thf(3.0ml)。在另一燒瓶中，將5-(三氟甲基)吡嗪-2-胺(160.0mg，0.981mmol)溶于thf(5.0ml)，然后添加nah(60.0mg，1.47mmol，60％在礦物油中)。將混合物攪拌10分鐘，然后將其在室溫滴加至包含新制備的?；鹊臒?。將反應(yīng)在室溫攪拌30分鐘，然后添加硅膠以淬滅反應(yīng)。將溶劑蒸發(fā)且所得殘余物通過硅膠柱色譜法純化，得到35，其為白色固體(76.0mg，23％產(chǎn)率)。1hnmr(300mhz，cdcl3)δ10.56(s，1h)，9.80(s，1h)，8.63(s，1h)，8.24(d，j＝2.8hz，1h)，7.51(dd，j＝8.8，2.8hz，1h)，7.02(d，j＝8.9hz，1h)，4.11(s，3h)。針對[m+na]+(c13h10clf3n3o2)計算的ms(esi)精確質(zhì)量，要求m/z332.04，實測值m/z331.75。該化合物(95mg，0.287mmol)與吡啶鎓鹽酸鹽(1.0g)混合。將混合物加熱至210℃，攪拌15分鐘且冷卻至室溫。所得固體溶于水且用乙酸乙酯萃取。將有機(jī)層真空濃縮且殘余物通過硅膠柱色譜法純化，得到標(biāo)題化合物，其為黃色固體(67.0mg，75％產(chǎn)率)。1hnmr(400mhz，cdcl3)δ11.23(s，1h)，9.71(s，1h)，8.78(s，1h)，8.69(s，1h)，7.61(d，j＝2.4hz，1h)，7.48(dd，j＝8.9，2.4hz，1h)，7.04(d，j＝9.0hz，1h)。針對[m+h](c12h8clf3n3o2)計算的ms(esi)精確質(zhì)量，要求m/z318.03，實測值m/z317.85。5-氯-n-(6-氰基苯并[d]噻唑-2-基)-2-羥基苯甲酰胺(36)將5-氯-2-甲氧基苯甲酸(107.0mg，0.571mmol)溶于dcm(3.0ml)，然后分別添加催化量的dmf(10μl)和草酰氯(0.06ml，0.685mmol)。將該反應(yīng)在室溫攪拌30分鐘且真空濃縮。殘余物重新溶于thf(3.0ml)，且添加hunig堿(0.10ml，0.571mmol)和2-氨基苯并[d]噻唑-6-甲腈(80.0mg，0.456mmol)。將混合物在室溫攪拌48小時，然后將其過濾。濾餅用乙醚和dcm洗滌，得到5-氯-n-(6-氰基苯并[d]噻唑-2-基)-2-甲氧基苯甲酰胺(122mg，79％產(chǎn)率)。該化合物(122mg，0.356mmol)然后與吡啶鎓鹽酸鹽混合(1.0g)。將混合物加熱至210℃，攪拌15分鐘且冷卻至室溫。所得固體懸浮于水中且過濾。濾餅用乙醚洗滌，得到36，其為黃色固體(31.0mg，32％產(chǎn)率)。1hnmr(300mhz，dmso-d6)δ12.42(s，1h)，8.61(s，1h)，7.91(d，j＝2.7hz，1h)，7.89(d，j＝7.1hz，2h)，7.53(dd，j＝8.8，2.8hz，1h)，7.28(dd，j＝15.7，9.7hz，1h)，7.08(d，j＝8.8hz，1h)。針對[m+h](c15h9cln3o2s)計算的ms(esi)精確質(zhì)量，要求m/z330.01，實測值m/z329.80線粒體解偶聯(lián)活性測試用培養(yǎng)的哺乳動物細(xì)胞，nih-3t3細(xì)胞或hepg2細(xì)胞進(jìn)行活細(xì)胞中的線粒體解偶聯(lián)分析。將細(xì)胞接種到6孔板上，并在補(bǔ)充有10％胎牛血清和2mm谷氨酰胺的dmem培養(yǎng)基中培養(yǎng)。在實驗前使細(xì)胞生長至對數(shù)生長期。用不同濃度的各個合成化合物處理細(xì)胞2小時，然后用終濃度為100nm的tmre(四甲基羅丹明乙酯)染色15分鐘。然后用pbs將細(xì)胞洗滌一次，并在熒光顯微鏡下檢查。用不同濃度的氯硝柳胺乙醇胺處理的細(xì)胞作陽性對照。使用失去線粒體tmre染色的細(xì)胞百分比作為線粒體解偶聯(lián)活性的定量。指定化合物的ec50定義為將細(xì)胞中線粒體tmre染色的熒光強(qiáng)度降低至約50％的濃度。通過細(xì)胞氧消耗分析進(jìn)一步證實了在濃度高于ec50時化合物的線粒體解偶聯(lián)活性，其在寡霉素(5μg/ml)不存在和存在下通過seahorsexf96測定分析。與未處理細(xì)胞相比，在寡霉素存在下用單獨化合物處理的氧消耗的增加進(jìn)一步證實了線粒體解偶聯(lián)活性。表i.合成的化合物的線粒體解偶聯(lián)活性總結(jié)化合物編號活性1化合物編號活性11***19***2***20***3***21**4*22**5*23n/a6*24n/a7***25n/a8**26n/a9*27***10**28n/a11**29***12*30n/a13***31***14***32n/a15***33n/a16***34n/a17***35***18***36***1：***，ec50<＝10μm；**，10μm<ec50<＝50μm；*，ec50>50μm化合物在激活ampk和抑制細(xì)胞增殖中的作用通過用針對磷酸化ampk的抗體的免疫印跡測定進(jìn)行的ampk活化分析：小鼠胰腺癌細(xì)胞系，panc02或nih-3t3成纖維細(xì)胞或人肝癌細(xì)胞系hepg2在dulbecco改良的eagle培養(yǎng)基(dmem)中在37℃和5％co2培養(yǎng)，該培養(yǎng)基補(bǔ)充有10％(體積/體積)胎牛血清、100單位·ml-1青霉素，100μg·ml-1的鏈霉素和0.29mg·ml-1的l-谷氨酰胺。為了處理，首先將各化合物溶于dmso中以制備儲備溶液，然后直接加入到培養(yǎng)基中至所需濃度(通過至少1:1000稀釋)。處理2小時后，收集細(xì)胞并在含有10mmtris-hcl(ph7.9)、10％甘油，0.1mmedta、100mmkcl、0.2％np-40、0.5mmpmsf，1mmdtt、小型完全蛋白酶抑制劑混合物(mini-completeproteaseinhibitorcocktail)(roche，11836153001)和磷酸酶抑制劑混合物(roche，04906845001)(如果需要的話)的裂解緩沖液中均質(zhì)化。將細(xì)胞核和不溶性碎片在eppendorf微量離心機(jī)中在4℃下以10,000rpm離心5分鐘。然后將細(xì)胞提取物在-20℃保存，或立即進(jìn)行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(sds-page)。對于sds-page，將細(xì)胞提取物與5×laemmli加載緩沖液混合，并在95℃加熱5分鐘，然后進(jìn)行電泳。對于免疫印跡，蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到聚偏二氟乙烯(pvdf)膜(millipore，ipvh00010)。在使用一抗(phospho-ampkα(thr172)mab(#2535，cellsignalingtechnology)、ampkαmab(#2793，cellsignalingtechnology)、ran抗體(sc-1156，santacruzbiotechnology))孵育之前，膜在補(bǔ)充有0.1％(體積/體積)吐溫-20的磷酸鹽緩沖鹽水中用5％牛奶在室溫下封閉1小時?；瘜W(xué)發(fā)光檢測用ecl蛋白質(zhì)印跡試劑(amersham，95038-566)完成。通過使用imagej軟件測量帶強(qiáng)度并計算感興趣的蛋白質(zhì)與內(nèi)部負(fù)載對照的比例來確定定量。示例的免疫印跡測定法，用針對磷酸化ampk的抗體，其指示ampk活性。nen、氯硝柳胺乙醇胺作為對照線粒體解偶聯(lián)劑；在該測定中示出了實施例#14作為一個實例。表ii.實施例化合物針對ampk活化的活性與線粒體解偶聯(lián)活性相關(guān)。實施例##2#13#14ampk活化的濃度1*********1：***，<＝10μm.用于確定細(xì)胞增殖抑制活性的集落形成測定(clonogenicassay)：將小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞系mc38以約200個細(xì)胞/孔的密度接種到6-孔板上，如上所述在培養(yǎng)基條件下生長，附著后，細(xì)胞用遞增濃度的實施例化合物處理24-48小時。然后除去含藥培養(yǎng)基，并向每個孔中加入沒有藥物的新鮮培養(yǎng)基。然后使細(xì)胞生長2周以進(jìn)行集落形成。在兩周內(nèi)，吸出舊培養(yǎng)基，每兩天向孔中加入新鮮的無藥物培養(yǎng)基。在實驗結(jié)束時，對每種濃度的處理計數(shù)集落。ic50定義為與無藥物治療對照相比抑制50％集落形成的濃度。表iii.實施例化合物抑制集落形成的活性實施例##14ic50濃度1***1：***，<＝10μm。當(dāng)前第1頁12