本發(fā)明涉及易于重建的高分子納米粒子冷凍干燥粉末或塊狀物及其制備方法，更詳細(xì)地，涉及在大氣壓下以注射用稀釋液進(jìn)行重建時，在5分鐘內(nèi)容易得到重建的高分子納米粒子冷凍干燥粉末或塊狀物及其制備方法，所述高分子納米粒子冷凍干燥粉末或塊狀物是通過包括對高分子納米粒子水溶液進(jìn)行退火的步驟的冷凍干燥過程來處理而獲得，所述高分子納米粒子水溶液包含兩親性嵌段共聚物、具有羧基端基的聚乳酸衍生物及冷凍干燥助劑。
背景技術(shù)：
：已知高分子納米粒子是用于將藥物特異性地輸送到患者的病灶部位的有效手段。尤其，由生物降解性高分子組成的納米粒子在體內(nèi)緩慢分解并消失，因此，其生物相容性優(yōu)異，從而實(shí)際上正適用于納米醫(yī)藥品中。但是，這種生物降解性高分子的納米粒子在水溶液中不穩(wěn)定，從而通常使用時以需要重建的冷凍干燥劑型制備。此時，與普通冷凍干燥注射劑相比，由于高分子的特性，將高分子納米粒子重新分散到注射介質(zhì)等中時需要相對更長時間，導(dǎo)致實(shí)際使用中具有困難。公知的制備高分子納米粒子的方法有透析法、乳化法、有機(jī)溶劑蒸發(fā)法等各種方法。韓國第10-2009-0049239號公開專利中公開了一種高分子膠束的制備方法，所述方法為將溶于有機(jī)溶液的氨甲喋呤滴加到甲氧基聚乙二醇與殼聚糖的共聚物水溶液中，并用蒸餾水透析該混合溶液后進(jìn)行冷凍干燥。此外，美國us2009/0036389a1號公開專利中公開了以下方法，即，用與水具有混溶性且沸點(diǎn)低于水的沸點(diǎn)的溶劑(即，乙腈、甲醇、乙醇及丙酮)溶解兩親性嵌段共聚合物和疏水性藥物，并以恒定的速度將充分量的水加到其中以形成膠束，并添加冷凍干燥助劑后去除有機(jī)溶劑，再次進(jìn)行冷凍干燥。此外，韓國第10-0421451號授權(quán)專利中提供了含有藥物的高分子膠束組合物的制備方法，所述方法包括：a)將兩親性嵌段共聚物和疏水性藥物溶解在有機(jī)溶劑中，然后蒸發(fā)有機(jī)溶劑來制備藥物-高分子基體，其中，所述兩親性嵌段共聚物為由親水性嵌段(a)和疏水性嵌段(b)組成且疏水性嵌段(b)的末端被用于提高與疏水性藥物的親和性的官能團(tuán)取代；b)將藥物-高分子基體溶解于水，從而制備封裝有藥物的高分子膠束水溶液；c)將高分子膠束水溶液進(jìn)行冷凍干燥后進(jìn)行滅菌。韓國第10-0531269號授權(quán)專利和美國us7,311,901b2號授權(quán)專利中提出了一種制備高分子納米粒子的方法，所述方法為將兩親性嵌段共聚物、聚乳酸衍生物的一價金屬鹽及疏水性藥物一起溶解在揮發(fā)性有機(jī)溶劑中，從而制備均質(zhì)的溶液，然后通過減壓蒸餾去除有機(jī)溶劑，再向其中添加水來制備混合膠束，然后添加二價金屬陽離子。然而，上述專利均沒有涉及關(guān)于具體的冷凍干燥方法和冷凍干燥后的重建時間的內(nèi)容。國際wo2003/005992a1號公開專利中提出了一種改善冷凍干燥后的再溶解性的方法，所述方法為在由兩親性嵌段共聚物組成的含有藥物的高分子膠束中添加選自糖類和聚乙二醇中的一種以上的穩(wěn)定劑。然而，該方法具有在作為常規(guī)的冷凍干燥劑的糖類中添加額外的作為賦形劑的聚乙二醇的問題。優(yōu)選地，希望在不使用這種額外的賦形劑的情況下，僅通過特定構(gòu)成的冷凍干燥條件來改善再溶解性。另外，雖然在美國us2014/0199286a1號公開專利、日本jp2008-231067號公開專利及日本jp2007-526329a號公開專利中公開了冷凍干燥循環(huán)對冷凍干燥制劑的影響，但是us2014/0199286a1號中是以由蛋白質(zhì)、磷酸鈉、甘露醇，海藻糖及聚山梨醇酯組成的制劑為對象，jp2008-231067a號中是以僅由喹諾酮類抗菌劑與ph調(diào)節(jié)劑組成的制劑為對象，jp2007-526329a號中是以含有蛋白質(zhì)或核酸、病毒的制劑為對象等，并不是以使用兩親性嵌段共聚物等的高分子制劑為對象。到目前為止，尚未公開改善高分子制劑的冷凍干燥方法的方法。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：要解決的技術(shù)問題本發(fā)明是為了解決如上所述的現(xiàn)有技術(shù)的問題，本發(fā)明的目的在于提供高分子納米粒子的冷凍干燥粉末或塊狀物及其制備方法，所述高分子納米粒子的冷凍干燥粉末或塊狀物為生物相容性優(yōu)異的生物降解性高分子納米粒子的冷凍干燥物，在大氣壓狀態(tài)下用注射用稀釋液進(jìn)行重建時，在5分鐘內(nèi)容易地得到重建。技術(shù)方案為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供高分子納米粒子的冷凍干燥物的制備方法，所述通過對高分子納米粒子溶液進(jìn)行冷凍干燥處理來制備高分子納米粒子冷凍干燥物的制備方法中，所述高分子納米粒子溶液包含：包含親水性嵌段(a)和疏水性嵌段(b)的a-b、a-b-a或b-a-b形態(tài)的兩親性嵌段共聚物、具有羧基端基的聚乳酸衍生物及冷凍干燥助劑；所述高分子納米粒子溶液的高分子濃度為120mg/ml以下；所述冷凍干燥處理包括：a)第一冷凍步驟，在-10～-45℃的溫度范圍內(nèi)將高分子納米粒子溶液進(jìn)行冷凍，b)退火步驟，將所述第一冷凍產(chǎn)物升溫至-25～0℃的溫度范圍，c)第二冷凍步驟，在-10～-45℃的溫度范圍內(nèi)將所述退火產(chǎn)物進(jìn)行冷凍，d)第一干燥步驟，在低于0℃的溫度且減壓條件下將所述第二冷凍產(chǎn)物進(jìn)行干燥，以及e)第二干燥步驟，在0℃以上的溫度且減壓條件下將所述第一干燥產(chǎn)物進(jìn)行干燥；其中，所述高分子納米粒子的冷凍干燥物在大氣壓下通過水性溶劑進(jìn)行重建時，在5分鐘內(nèi)得到重建。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選具體例，所述冷凍干燥處理中，所述第一冷凍步驟是在初始溫度為0～25℃、最終溫度為-10～-45℃、降溫時間為0.5～24小時及降溫后的維持時間為0.5～24小時的條件下進(jìn)行，所述退火步驟是在初始溫度為-10～-45℃、最終溫度為-25～0℃、升溫時間為0.5～24小時及升溫后的維持時間為0.2～8小時的條件下進(jìn)行，所述第二冷凍步驟是在初始溫度為-25～-0℃、最終溫度為-10～-45℃、降溫時間為0.5～24小時及降溫后的維持時間為1～24小時的條件下進(jìn)行，所述第一干燥步驟是在真空度為50～500毫托、干燥溫度為-45～低于0℃及干燥時間為24～96小時的條件下進(jìn)行，所述第二干燥步驟是在真空度為50～500毫托、干燥溫度為0～50℃及干燥時間為24～96小時的條件下進(jìn)行。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供高分子納米粒子的冷凍干燥物，其包含：包含親水性嵌段(a)和疏水性嵌段(b)的a-b、a-b-a或b-a-b形態(tài)的兩親性嵌段共聚物、具有羧基端基的聚乳酸衍生物及冷凍干燥助劑；孔隙率(％)為70～99.9％；平均孔隙大小為70μm以上；在大氣壓下通過水性溶劑進(jìn)行重建時，在5分鐘以內(nèi)得到重建。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供高分子納米粒子的冷凍體，其包含：包含親水性嵌段(a)和疏水性嵌段(b)的a-b、a-b-a或b-a-b形態(tài)的兩親性嵌段共聚物、具有羧基端基的聚乳酸衍生物及冷凍干燥助劑；崩潰(collapse)溫度為-25℃以上。發(fā)明效果根據(jù)本發(fā)明，能夠獲得在大氣壓狀態(tài)下以注射用稀釋液進(jìn)行重建時，能夠在5分鐘以內(nèi)，更優(yōu)選為3分鐘以內(nèi)容易地得到重建，并且生物相容性優(yōu)異的生物降解性高分子納米粒子的冷凍干燥物，其中，可以適當(dāng)?shù)睾兴幬?，尤其是水難溶性藥物。附圖說明圖1為示出實(shí)驗(yàn)例1中測量的實(shí)施例1和比較例1的重建時間的圖表。圖2為示出實(shí)驗(yàn)例2中測量的實(shí)施例1及2和比較例2的重建時間的圖表。圖3為示出實(shí)驗(yàn)例3中測量的實(shí)施例1在真空狀態(tài)和大氣壓狀態(tài)下的重建時間的圖表。圖4為實(shí)施例3中得到的冷凍干燥物的電子顯微鏡照片。圖5為比較例1中得到的冷凍干燥物的電子顯微鏡照片。最佳實(shí)施方式以下更詳細(xì)地說明本發(fā)明。本發(fā)明中使用的高分子納米粒子溶液包含：包含親水性嵌段(a)和疏水性嵌段(b)的a-b、a-b-a或b-a-b形態(tài)的兩親性嵌段共聚物、具有羧基端基的聚乳酸衍生物及冷凍干燥助劑，該溶液中的高分子濃度為1mg/ml以上且120mg/ml以下，更優(yōu)選為10mg/ml以上且100mg/ml以下。當(dāng)高分子納米粒子溶液中的高分子濃度超過120mg/ml時，存在冷凍干燥物的重建時間變長的問題。以重建時間為基準(zhǔn)，雖然高分子濃度的下限越低越優(yōu)選，但是，當(dāng)高分子濃度過低時，冷凍干燥后難以維持塊狀形態(tài)，因此，為了維持塊狀形態(tài)，需要添加充分的冷凍干燥助劑。就本發(fā)明的一個實(shí)施例而言，所述兩親性嵌段共聚物的特征在于，其為親水性嵌段(a)與疏水性嵌段(b)以a-b形態(tài)連接的二嵌段共聚物，并且是非離子性的。此外，所述兩親性嵌段共聚物在水溶液中形成核-殼(core-shell)形態(tài)的高分子膠束(micelle)，其中，疏水性嵌段(b)形成核(core)，親水性嵌段(a)形成殼(shell)。所述兩親性嵌段共聚物的親水性嵌段(a)為溶于水的高分子，具體為聚亞烷基二醇(polyalkyleneglycol)，例如，聚乙二醇(polyehtyleneglycol)、聚乙烯-丙二醇共聚物(polyethylene-co-propyleneglycol)等；聚亞烷基二醇衍生物，例如，單甲氧基聚亞烷基二醇(monomethoxypolyalkyleneglycol)、單乙酰氧基聚乙二醇(monoacetoxypolyethyleneglycol)等；聚乙烯醇(polyvinylalcohol)；聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylpyrrolidone)；或者聚丙烯酰胺(polyacrylamide)等，更具體地，選自聚乙二醇、單甲氧基聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇及聚丙烯酰胺。優(yōu)選地，所述親水性嵌段(a)的數(shù)均分子量為500～50000道爾頓，更具體為500～20000道爾頓，進(jìn)一步具體為1000～20000道爾頓。所述兩親性嵌段共聚物的疏水性嵌段(b)為不溶于水且生物相容性優(yōu)異的生物降解性高分子，具體為聚酯(polyester)、聚酸酐(polyanhydride)、聚氨基酸(polyaminoacid)、聚原酸酯(polyorthoester)或聚磷腈(polyphosphazine)等，更具體地可以選自聚丙交酯(polylactide)、聚乙交酯(polyglycolide)、聚二氧雜環(huán)己烷-2-酮(polydioxan-2-one)、聚己內(nèi)酯(polycaprolactone)、聚丙交酯-乙交酯共聚物(polylactic-co-glycolide)、聚丙交酯-己內(nèi)酯共聚物(polylactic-co-caprolactone)、聚丙交酯-二氧雜環(huán)己烷-2-酮共聚物(polylactic-co-dioxan-2-one)、聚乙交酯-己內(nèi)酯共聚物(polyglycolic-co-caprolactone)及其羧酸末端被脂肪酸基團(tuán)取代的它們的衍生物。此外，可以取代所述疏水性嵌段(b)的羧酸端基的脂肪酸基團(tuán)可以舉例為丁酸基、丙酸基、乙酸基、硬脂酸基或棕櫚酸基。優(yōu)選地，所述疏水性嵌段(b)的數(shù)均分子量為500～50000道爾頓，更具體為500～20000道爾頓，進(jìn)一步具體為1000～20000道爾頓。根據(jù)本發(fā)明的一個實(shí)施例，以重量比為基準(zhǔn)，用于在水溶液相中形成穩(wěn)定的高分子膠束的所述兩親性嵌段共聚物的親水性嵌段(a)和疏水性嵌段(b)的組成比(親水性嵌段(a)：疏水性嵌段(b))為2:8～8:2，更具體為3:7～7:3，進(jìn)一步具體為4:6～6:4。當(dāng)親水性嵌段(a)的比率過低時，高分子無法在水溶液中形成高分子膠束，另一方面，當(dāng)親水性嵌段(a)的比率過高時，由于親水性過度增加而有可能會降低穩(wěn)定性。在本發(fā)明的一個實(shí)施例中，就所述具有羧基端基的聚乳酸衍生物而言，例如，可以在選自聚乳酸、聚丙交酯、聚乙交酯、聚扁桃酸(polymandelicacid)、聚己內(nèi)酯、聚二氧雜環(huán)己烷-2-酮、聚氨基酸、聚原酸酯、聚酸酐及它們的共聚物中的一種以上，更具體地，可以在選自d,l-聚乳酸、d-聚乳酸、聚扁桃酸、d,l-乳酸和乙醇酸的共聚物、d,l-乳酸和扁桃酸的共聚物、d,l-乳酸和己內(nèi)酯的共聚物及d,l-乳酸和1,4-二氧雜環(huán)己烷-2-酮的共聚物中的一種以上的末端上具有羧酸基或羧基上結(jié)合有堿金屬離子的基團(tuán)。一個實(shí)施例中，所述堿金屬離子可以為鈉、鉀或鋰的一價金屬離子。所述聚乳酸衍生物的非羧基末端的另一末端可以為選自羥基(hydroxy)、甲氧基、乙氧基、乙酰氧基(acetoxy)、苯甲酰氧基(benzoyloxy)、癸酰氧基(decanoyloxy)、棕櫚酰氧基(palmitoyloxy)中的一種以上。在所述聚乳酸衍生物中，結(jié)合有堿金屬離子的羧基末端在ph4以上的水溶液中作用為親水性基團(tuán)，從而在水溶液中形成高分子膠束。此外，所述聚乳酸鹽或其衍生物在室溫下以固體狀態(tài)存在，即使暴露于空氣中的水分，由于其ph為中性，因此，顯示為非常穩(wěn)定的形態(tài)。所述在羧基末端結(jié)合有堿金屬離子形態(tài)的聚乳酸衍生物被添加到由兩親性嵌段共聚物組成的膠束中，從而加固膠束核的內(nèi)部，因此，起到提高藥物封裝效率的作用。所述聚乳酸衍生物溶解在水溶液中使存在于聚乳酸衍生物分子內(nèi)的親水性部分和疏水性部分達(dá)到均衡而形成膠束。因此，當(dāng)顯示疏水性的酯部分的分子量變大時，顯示親水性的末端的羧基陰離子之間難以匯合，從而無法很好地形成膠束，當(dāng)顯示疏水性的酯部分的分子量變低時，由于完全溶解在水中，從而難以形成膠束。一個實(shí)施例中，能夠在ph4以上形成膠束的適當(dāng)?shù)木廴樗嵫苌锏臄?shù)均分子量為500～5000道爾頓，更具體為500～2500道爾頓。當(dāng)分子量過小時，由于完全溶于水中，從而難以形成膠束，另一方面，當(dāng)分子量過大時，疏水性變得過大，導(dǎo)致難以溶解在水溶液中，從而不能形成膠束。這種聚乳酸衍生物的分子量可以通過適當(dāng)?shù)卣{(diào)整制備時的反應(yīng)溫度和時間等來實(shí)現(xiàn)。在一個實(shí)施例中，在所述羧基末端結(jié)合有堿金屬離子形態(tài)的聚乳酸衍生物可由下述化學(xué)式1來表示。[化學(xué)式1](所述化學(xué)式1中，a為其中，z為氫、甲基或苯基，b為其中，y為氫、甲基或苯基，r為氫、乙?；?、苯甲?；?、癸?；?、棕櫚?；⒓谆蛞一?，m為鈉、鉀或鋰，n為1～30的整數(shù)，m為0～20的整數(shù)。)更具體地，所述在羧基末端結(jié)合有堿金屬離子的聚乳酸鹽或其衍生物可由下述化學(xué)式2來表示。[化學(xué)式2](所述化學(xué)式2中，z、r及m與化學(xué)式1中的定義相同，x為甲基，y'為氫或苯基，p為0～25的整數(shù)，q為0～25的整數(shù)，但是p+q為5～25的整數(shù)。)另一個實(shí)施例中，在所述羧基末端結(jié)合有堿金屬離子形態(tài)的聚乳酸衍生物可以由下述化學(xué)式3或化學(xué)式4來表示。[化學(xué)式3](所述化學(xué)式3中，w-m為pla為d,l-聚乳酸、d-聚乳酸、聚扁桃酸、d,l-乳酸和乙醇酸的共聚物、d,l-乳酸和扁桃酸的共聚物、d,l-乳酸和己內(nèi)酯的共聚物或d,l-乳酸和1,4-二氧雜環(huán)己烷-2-酮的共聚物。)[化學(xué)式4](所述化學(xué)式4中，s為其中，l為-nr1-或-o-(其中，r1為氫或c1～c10的烷基)，a為0～4的整數(shù)，b為1～10的整數(shù)，m為鈉、鉀或鋰，q為ch3、ch2ch3、ch2ch2ch3、ch2ch2ch2ch3或ch2c6h5，pla為d,l-聚乳酸、d-聚乳酸、聚扁桃酸、d,l-乳酸和乙醇酸的共聚物、d,l-乳酸和扁桃酸的共聚物、d,l-乳酸和己內(nèi)酯的共聚物或d,l-乳酸和1,4-二氧雜環(huán)己烷-2-酮的共聚物。)所述兩親性嵌段共聚物和具有羧基端基的聚乳酸衍生物可以在水中一起形成混合膠束水溶液。一個實(shí)施例中，所述高分子納米粒子溶液可進(jìn)一步包含水難溶性藥物，其結(jié)果，所述混合膠束中可以含有水難溶性藥物。在混合膠束中包含水難溶性藥物的方法為，舉例如下：將水難溶性藥物、兩親性嵌段共聚物和具有羧基端基的聚乳酸衍生物溶解于有機(jī)溶劑中，并去除有機(jī)溶劑后，添加水來制備混合膠束；或者，將水難溶性藥物和具有羧基端基的聚乳酸衍生物溶解于有機(jī)溶劑中，并去除有機(jī)溶劑后，在其干燥物中添加將兩親性嵌段共聚物添加到水中并溶解的水溶液，從而制備混合膠束。在一個實(shí)施例中，所述有機(jī)溶劑具體可以為醇類、二氯甲烷、氯仿、丙酮、四氫呋喃、乙酸、乙腈及二氧雜環(huán)己烷中的一種以上。在一個實(shí)施例中，以組合物的總重量為基準(zhǔn)，所述有機(jī)溶劑的含量可以為0.5～30重量％，具體可以為0.5～15重量％，更具體可以為1～10重量％。當(dāng)有機(jī)溶劑的含量小于0.5重量％時，難以溶解藥物，當(dāng)有機(jī)溶劑的含量超過30重量％時，在重建時會析出藥物。所述水難溶性藥物可以與高分子同時或依次溶解在有機(jī)溶劑中?？梢詫⑺幬锖陀袡C(jī)溶劑同時添加到有機(jī)溶劑中進(jìn)行溶解，或者先將高分子溶解在有機(jī)溶劑中，再溶解藥物，或者先將藥物溶解在有機(jī)溶劑后，再添加高分子進(jìn)行溶解。將水難溶性藥物溶解于有機(jī)溶劑時的溫度，雖不限于此，但為了防止藥物的分解，可以為0～60℃，更具體為10～50℃，進(jìn)一步具體為10～40℃。有機(jī)溶劑的去除可以通過減壓蒸餾法、氣力輸送干燥法(pneumaticconveyingdrying)、加熱干燥法等來進(jìn)行。此外，當(dāng)使用少量有機(jī)溶劑時，可以省略有機(jī)溶劑去除工序。所述水溶液可以為常規(guī)的水、蒸餾水、注射用蒸餾水、生理鹽水、5％的葡萄糖，緩沖液等。所述膠束化工序的特征為，在0～80℃，更具體在10～60℃，進(jìn)一步具體在10～40℃的溫度下添加水溶液來形成高分子膠束。所述水難溶性藥物可以選用對水的溶解度(25℃)為100mg/ml以下的藥物。此外，所述水難溶性藥物可以選自抗癌劑(antineoplasticagents)、抗真菌劑(antifungalagents)、免疫抑制劑(immunosuppressants)、麻醉劑(analgesics)、消炎止痛劑(anti-inflammatoryagents)、抗病毒劑(antiviralagents)、鎮(zhèn)靜劑(anxiolyticsedatives)、造影劑(contrastingagents)、皮質(zhì)類固醇(corticosteroids)、診斷試劑(diagnosticagents)、診斷造影劑(diagnosticimagingagents)、利尿劑(diuretics)、前列腺素(prostaglandins)、放射性藥物(radio-pharmaceuticals)、包含類固醇(steroid)的性激素(sexhormones)和它們的組合，但并不限定于此。在一個實(shí)施例中，所述水難溶性藥物可以選自抗癌劑，具體可以為紫杉烷抗癌劑。例如，所述紫杉烷抗癌劑可以為選自紫杉醇(paclitaxel)、多西紫杉醇(docetaxel)、卡巴他賽(carbazitaxel)、7-表紫杉醇(7-epipaclitaxel)、t-乙?；仙即?t-acetylpaclitaxel)、10-脫乙?；?紫杉醇(10-desacetyl-paclitaxel)、10-脫乙酰基-7-表紫杉醇(10-desacetyl-7-epipaclitaxel)、7-木糖基紫杉醇(7-xylosylpaclitaxel)、10-脫乙?；?7-戊二酰紫杉醇(10-desacetyl-7-glutarylpaclitaxel)、7-n,n-二甲基甘氨酰紫杉醇(7-n,n-dimethylglycylpaclitaxel)及7-l-丙氨酰紫杉醇(7-l-alanylpaclitaxel)中的一種或兩種以上的混合物，更具體地，為紫杉醇或多西紫杉醇。在另一實(shí)施例中，所述水難溶性藥物可選自抗真菌劑，具體可以為唑(azole)類抗真菌劑。例如，所述唑類抗真菌劑為選自伏立康唑(voriconazole)、泊沙康唑(posaconazole)、雷夫康唑(rravuconazole)、氟康唑(fluconazole)、益康唑(econazol)、酮康唑(ketoconazole)及伊曲康唑(itraconazole)中的一種或兩種以上的混合物，更具體地，為伏立康唑。一個實(shí)施例中，相對于兩親性嵌段共聚物和具有羧基端基的聚乳酸衍生物的總100重量％，可以使用0.1～99.9重量％的兩親性嵌段共聚物和0.1～99.9重量％的聚乳酸衍生物，優(yōu)選可以使用20～95重量％的兩親性嵌段共聚物和5～80重量％的聚乳酸衍生物，更優(yōu)選地，可以使用50～90重量％的兩親性嵌段共聚物和10～50重量％的聚乳酸衍生物。在另一個實(shí)施例中，相對于兩親性嵌段共聚物、具有羧基端基的聚乳酸衍生物和水難溶性藥物的總100重量％，可以使用0.1～20重量％的難溶性藥物。在一個實(shí)施例中，所述高分子納米粒子溶液可以進(jìn)一步包含二價或三價金屬離子的鹽，其結(jié)果，所述混合膠束水溶液中可以添加二價或三價金屬離子的鹽。添加這種二價或三價金屬離子是為了進(jìn)一步提高混合兩親性嵌段共聚物和具有羧基端基的聚乳酸衍生物而形成的高分子膠束的穩(wěn)定性，二價或三價金屬離子與聚乳酸衍生物的末端羧基結(jié)合，從而形成結(jié)合有二價或三價金屬離子的高分子膠束。例如，在羧基末端結(jié)合有堿金屬離子的聚乳酸鹽或其衍生物中，二價或三價金屬離子與羧基端基的一價金屬陽離子發(fā)生取代反應(yīng)而形成離子鍵，并且，由于這種離子鍵的強(qiáng)的結(jié)合力，從而起到更加提高高分子膠束的穩(wěn)定性的作用。在一個實(shí)施例中，所述二價或三價金屬離子可以選自鈣(ca2+)、鎂(mg2+)、鋇(ba2+)、鉻(cr3+)、鐵(fe3+)、錳(mn2+)、鎳(ni2+)、酮(cu2+)、鋅(zn2+)及鋁(al3+)。在另一個實(shí)施例中，二價或三價金屬離子以硫酸鹽、氯鹽、碳酸鹽、磷酸鹽或氫氧化物的形態(tài)添加到所述兩親性嵌段共聚物和聚乳酸衍生物的混合高分子組合物中，具體以氯化鈣(cacl2)、氯化鎂(mgcl2)、氯化鋅(zncl2)、氯化鋁(alcl3)、氯化鐵(fecl3)、碳酸鈣(caco3)、碳酸鎂(mgco3)、磷酸鈣(ca3(po4)2)、磷酸鎂(mg3(po4)2)、磷酸鋁(alpo4)、硫酸鎂(mgso4)、氫氧化鈣(ca(oh)2)、氫氧化鎂(mg(oh)2)、氫氧化鋁(al(oh)3)或氫氧化鋅(zn(oh)2)的形態(tài)添加。此外，相對于所述聚乳酸衍生物的羧基端基的當(dāng)量，二價或三價金屬離子可以添加0.001～10當(dāng)量，具體可以添加0.5～2.0當(dāng)量。在一個實(shí)施例中，所述冷凍干燥助劑(也被稱為冷凍干燥化劑)可以選自糖、糖醇及它們的混合物。所述糖可以為選自乳糖、麥芽糖、蔗糖及海藻糖中的一種以上，所述糖醇可以為選自甘露醇、山梨醇、麥芽糖醇、木糖醇及乳糖醇中的一種以上。添加所述冷凍干燥助劑是為了使經(jīng)過冷凍干燥的組合物能夠維持塊狀形態(tài)。此外，所述冷凍干燥助劑在高分子納米粒子組合物的冷凍干燥后進(jìn)行重建(reconsitution)的過程中起到幫助其在短時間內(nèi)均勻地溶解的作用。一個實(shí)施例中，以冷凍干燥組合物總干燥重量為100％計，冷凍干燥助劑的含量為1～90重量％，更具體為10～60重量％。在一個實(shí)施例中，需經(jīng)冷凍干燥處理的高分子納米粒子溶液原液的高分子濃度(即，包含所述兩親性嵌段共聚物和具有羧基端基的聚乳酸衍生物的高分子的濃度)為1mg/ml以上，更優(yōu)選為10mg/ml以上且120mg/ml以下，更優(yōu)選為100mg/ml以下，進(jìn)一步優(yōu)選為50mg/ml以下。當(dāng)溶液內(nèi)高分子的濃度過高時，在冷凍干燥后進(jìn)行重建時形成高分子塊的可能性大，因此完全溶解需要很長時間。當(dāng)高分子濃度過低時，由于使用時溶液的體積過大而使用不便。高分子納米粒子溶液的冷凍干燥處理包括：a)第一冷凍步驟，在-10～-45℃的溫度范圍內(nèi)將高分子納米粒子溶液進(jìn)行冷凍，b)退火(annealing)步驟，將所述第一冷凍產(chǎn)物升溫至-25～0℃的溫度范圍，c)第二冷凍步驟，在-10～-45℃的溫度范圍內(nèi)將所述退火產(chǎn)物進(jìn)行冷凍，d)第一干燥步驟，在低于0℃的溫度且減壓條件下將所述第二冷凍產(chǎn)物進(jìn)行干燥，以及e)第二干燥步驟，在0℃以上的溫度且減壓條件下將所述第一干燥產(chǎn)物進(jìn)行干燥。通過這種冷凍干燥處理，使冰晶變大，因此，使得冷凍干燥塊狀物的孔隙變大，由此在重建時水容易透過，從而縮短了重建時間。更具體地，在所述冷凍干燥處理中，第一冷凍步驟是在初始溫度為0～35℃(更優(yōu)選為0～25℃，最優(yōu)選為0～15℃)，最終溫度為-10～-45℃(更優(yōu)選為-20～-40℃，最優(yōu)選為-30～-40℃)，降溫時間為0.5～24小時(更優(yōu)選為0.5～12小時，最優(yōu)選為0.5～6小時)及降溫后的維持時間為0.5～24小時(更優(yōu)選為0.5～12小時，最優(yōu)選為0.5～6小時)的條件下進(jìn)行；所述退火步驟是在初始溫度為-10～-45℃(更優(yōu)選為-20～-40℃，最優(yōu)選為-30～-40℃)，最終溫度為-25～0℃(更優(yōu)選為-25～-10℃，最優(yōu)選為-25～-15℃)，升溫時間為0.5～24小時(更優(yōu)選為0.5～12小時，最優(yōu)選為0.5～6小時)及升溫后的維持時間為0.2～12小時(更優(yōu)選為0.5～8小時，最優(yōu)選為0.5～4小時)的條件下進(jìn)行；所述第二冷凍步驟是在初始溫度為-25～-0℃(更優(yōu)選為-25～-10℃，最優(yōu)選為-25～-15℃)，最終溫度為-10～-45℃(更優(yōu)選為-20～-40℃，最優(yōu)選為-30～-40℃)，降溫時間為0.5～24小時(更優(yōu)選為0.5～12小時，最優(yōu)選為0.5～6小時)及降溫后的維持時間為1～24小時(更優(yōu)選為0.5～12小時，最優(yōu)選為0.5～6小時)的條件下進(jìn)行；所述第一干燥步驟是在真空度為50～500毫托(更優(yōu)選為50～150毫托，最優(yōu)選為50～100毫托)，干燥溫度為-45～低于0℃(更優(yōu)選為-5～-40℃，最優(yōu)選為-10～-30℃)及干燥時間為24～96小時(更優(yōu)選為24～72小時，最優(yōu)選為48～72小時)的條件下進(jìn)行；所述第二干燥步驟是在真空度為50～500毫托(更優(yōu)選為50～150毫托，最優(yōu)選為50～100毫托)，干燥溫度為0～50℃(更優(yōu)選為5～40℃，最優(yōu)選為15～35℃)及干燥時間為6～48小時(更優(yōu)選為6～24小時，最優(yōu)選為12～24小時)的條件下進(jìn)行。一個例子中，第一干燥步驟可以包括以下步驟：在-45～低于-20℃下維持1～5小時；從-45～低于-20℃的溫度升溫至-20～低于-10℃，升溫時間為2～6小時；在-20～低于-10℃溫度下維持10～40小時；從-20～低于-10℃的溫度升溫至-10～低于0℃，升溫時間為1～5小時；以及，在-10～低于0℃溫度下維持10～40小時。一個例子中，第二干燥步驟可以包括以下步驟：從-10～低于0℃的溫度升溫至0～20℃，升溫時間為0.5～3小時；在0～低于20℃的溫度下維持0.5～6小時；從0～低于20℃的溫度升溫至20～50℃，升溫時間為2～9小時；以及，在20～50℃的溫度下維持3～30小時。本發(fā)明的高分子納米粒子的冷凍干燥物的制備方法可以進(jìn)一步包括將如上述經(jīng)過冷凍干燥處理的產(chǎn)物投入到小瓶中后填充氮?dú)獠⑦M(jìn)行密封或在真空狀態(tài)下密封的步驟。在一個實(shí)施例中，如上述制備而獲得的高分子納米粒子的冷凍干燥物包含0.1～78.9重量％的兩親性嵌段共聚物、20.0～98.8重量％的在羧基末端結(jié)合有二價或三價的金屬離子的聚乳酸衍生物、0.1～20.0重量％的水難溶性藥物及1～79.8重量％的冷凍干燥助劑。根據(jù)本發(fā)明的高分子納米粒子的冷凍干燥物的制備方法制備的高分子納米粒子的冷凍干燥物的特征為，在大氣壓下用水性溶液進(jìn)行重建時，在5分鐘以內(nèi)，更優(yōu)選在3分鐘以內(nèi)得到重建。另外，根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供高分子納米粒子的冷凍干燥物，其包含：包含親水性嵌段(a)和疏水性嵌段(b)的a-b、a-b-a或b-a-b形態(tài)的兩親性嵌段共聚物、具有羧基端基的聚乳酸衍生物及冷凍干燥助劑；孔隙率(％)為70～99.9％，平均孔隙大小(μm)為70μm以上(例如，70～200μm)，更優(yōu)選為90μm以上(例如，90～200μm)，最優(yōu)選為100μm以上(例如，100～200μm)；在大氣壓下用水性溶劑進(jìn)行重建時，在5分鐘以內(nèi)，更優(yōu)選在3分鐘以內(nèi)得到重建。如果孔隙率過低或孔隙過小，則在進(jìn)行重建時，延遲水溶液的透過，從而延長重建時間。一個例子中，孔隙率n(％)可根據(jù)下述數(shù)學(xué)式1來計算得出。[數(shù)學(xué)式1]n＝(v－vs)/v×100(％)其中，vs僅為固體部分的體積(冷凍干燥塊狀物的體積－水的體積)，v為包含孔隙的總體積(冷凍干燥塊狀物的體積)。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供高分子納米粒子的冷凍體，其包含：包含親水性嵌段(a)和疏水性嵌段(b)的a-b、a-b-a或b-a-b形態(tài)的兩親性嵌段共聚物、具有羧基端基的聚乳酸衍生物及冷凍干燥助劑；崩潰(collapse)溫度優(yōu)選為-25～-5℃，更優(yōu)選為-20～-5℃，最優(yōu)選為-15～-5℃。所述崩潰(collapse)溫度是指所述第一干燥步驟(primarydrying)期間可接受的試料的最高溫度，是指在該溫度以上的溫度下進(jìn)行第一干燥步驟時，引起塊狀物的形狀扭曲或崩潰的溫度。崩潰溫度的測量利用冷凍干燥顯微鏡(freeze-dryingmicroscope)。崩潰溫度越高，在不影響冷凍干燥塊狀物的成形的情況下，可以維持更高的第一干燥步驟的溫度，因此，能夠縮短冷凍干燥的時間。以下，通過實(shí)施例更詳細(xì)地說明本發(fā)明。然而，本發(fā)明并不受限于下述實(shí)施例。[實(shí)施例]以下實(shí)施例中使用的兩親性嵌段共聚物和羧基末端結(jié)合有堿金屬離子的聚乳酸鹽或其衍生物是根據(jù)國際公開專利第03/033592號中公開的方法來制備，其全部內(nèi)容在本發(fā)明中作為參考而并入。實(shí)施例1、實(shí)施例2及比較例2：高分子納米粒子冷凍干燥塊狀物的制備作為兩親性嵌段共聚物，合成了數(shù)均分子量為2000～1766道爾頓的單甲氧基聚乙二醇-聚丙交酯。此外，合成了數(shù)均分子量為1800道爾頓的d,l-pla-coona。以下表1所示的使用量，在聚乳酸鹽中添加3.0ml的二氯甲烷，并在40℃下攪拌至溶液變成透明的溶液。使用連接有真空泵的旋轉(zhuǎn)式減壓蒸餾器，通過減壓蒸餾約3小時來去除二氯甲烷，從而生成白色泡沫狀固體。另外，將60℃的水添加到兩親性嵌段共聚物中，攪拌至高分子塊狀物完全溶解，然后冷卻至室溫。將室溫的兩親性嵌段共聚物溶液添加到所述白色泡沫狀固體中，維持約35℃的溫度的同時膠束化至變成藍(lán)色透明溶液。其中，添加氯化鈣形成高分子納米粒子。在所述高分子納米粒子溶液中添加作為冷凍干燥化劑的d-甘露醇并完全溶解后，使用孔隙大小為200nm的過濾器進(jìn)行過濾，然后，根據(jù)下述冷凍干燥條件來進(jìn)行冷凍干燥，從而制備高分子納米粒子的冷凍干燥塊狀物。[表1][表2][表3]<冷凍條件>區(qū)分溫度(℃)時間(分鐘)真空度(毫托)溫度設(shè)定步驟1530大氣壓維持步驟2-4090大氣壓降溫步驟3-40120大氣壓維持步驟4-15100大氣壓升溫步驟5-15120大氣壓維持步驟6-4080大氣壓降溫步驟7-40120大氣壓維持<第一次干燥條件(primarydrying)><第二次干燥條件(secondarydrying)>區(qū)分溫度(℃)時間(分鐘)真空度(毫托)溫度設(shè)定步驟1510050升溫步驟2520050維持步驟32540050升溫步驟42574050維持比較例1：無退火工序的高分子納米粒子冷凍干燥塊狀物的制備以與實(shí)施例1相同的方法實(shí)施，但將冷凍條件進(jìn)行變更，并且沒有進(jìn)行退貨工序和第二次冷凍工序。即，使用了下述表4的冷凍條件。[表4]<冷凍條件>區(qū)分溫度(℃)時間(分鐘)真空度(毫托)溫度設(shè)定步驟1530大氣壓維持步驟2-4090大氣壓降溫步驟3-40120大氣壓維持實(shí)驗(yàn)例1：冷凍條件對高分子納米粒子塊狀物重建時間的影響按照下述方法，將分別在實(shí)施例1和比較例1中制備的高分子納米粒子的冷凍干燥塊狀物進(jìn)行重建，并測量了重建時間。重建方法將36ml的約20℃的注射用蒸餾水添加到裝有4788mg的冷凍干燥塊狀物的小瓶中，并用手劇烈搖晃小瓶一分鐘，然后用手輕輕搖晃至小瓶中的固體成分全部溶解，并確認(rèn)重建時間。測量結(jié)果示于圖1中。從圖1的重建時間測量結(jié)果可知，在冷凍條件中，進(jìn)行第一次冷凍后在熔點(diǎn)以下的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行升溫，并經(jīng)過維持一定時間的退過工序(annealingprocess)，再次進(jìn)行第二次冷凍時(實(shí)施例1：3.7分鐘)的重建時間顯著短于直接降低溫度并只進(jìn)行冷凍時(比較例1：5.9分鐘)的重建時間。實(shí)驗(yàn)例2：冷凍干燥用原液的濃度對高分子納米粒子塊狀物重建時間的影響以與實(shí)驗(yàn)例1相同的方法，將分別在實(shí)施例1、實(shí)施例2及比較例2中制備的高分子納米粒子的冷凍干燥塊狀物進(jìn)行重建，并測量重建時間。測量結(jié)果示于圖2中。從圖2的重建時間測量結(jié)果可知，冷凍干燥中使用的原液的濃度越高，顯示出重建時間越長的傾向。尤其超過1.2mg/ml(以高分子濃度表示約為120mg/ml)時，顯示出重建時間急劇增加的傾向。實(shí)驗(yàn)例3：重建時小瓶中的真空度對高分子納米粒子塊狀物重建時間的影響以與實(shí)驗(yàn)例1相同的方法，將實(shí)施例1中制備的高分子納米粒子的冷凍干燥塊狀物進(jìn)行重建，但重建時變更小瓶內(nèi)部的真空度(真空狀態(tài):大氣壓)，并測量重建時間。測量結(jié)果示于圖3中。從圖3的重建時間測量結(jié)果可知，重建時將小瓶內(nèi)部維持真空狀態(tài)的情況下添加水時，重建時間顯著增加，并且小瓶之間的重建時間的偏差也非常大。實(shí)驗(yàn)例4：冷凍條件對高分子納米粒子的冷凍干燥原液的崩潰(collapse)溫度的影響以如下述表5的凍結(jié)條件，將實(shí)施例1的組成的高分子納米粒子的冷凍干燥用原液進(jìn)行冷凍后，用冷凍干燥電子顯微鏡(freezedryingmicroscope)測量獲得的冷凍體的崩潰溫度。[表5]<冷凍條件和崩潰溫度>1)：以-20℃/分鐘的速度降溫至-45℃(第一次冷凍)；然后以2℃/分鐘的速度升溫至-15℃后，在-15℃的溫度下維持10分鐘(退火)；然后以-20℃/分鐘的速度降溫至-45℃(第二次冷凍)na：不適用從表5的結(jié)果可知，將實(shí)施例1組成的高分子納米粒子冷凍干燥用原液通過包括退火的冷凍工序進(jìn)行冷凍時的崩潰溫度高于通過不包括退火的單純冷凍工序進(jìn)行冷凍時的崩潰溫度。因此，可以確認(rèn)，冷凍時進(jìn)行退火的情況下，可以進(jìn)行更有效率的冷凍干燥。實(shí)施例3：含有多西紫杉醇的高分子納米粒子冷凍干燥塊的制備除了將3.0ml的二氯甲烷添加到如下表6所示的使用量的多西紫杉醇和聚乳酸鹽中，并在40℃下攪拌至變成透明溶液之外，以與實(shí)施例1相同的工序?qū)嵤?。[表6]將36ml的約20℃的注射用蒸餾水添加到裝有4828mg的所述制備的含有多西紫杉醇的高分子納米粒子冷凍干燥塊狀物的小瓶中，用手劇烈搖晃1分鐘，然后用手輕輕搖晃至小瓶中的所有固體成分全部溶解。小瓶中的所有固體成分全部溶解所用的重建時間為4.2分鐘。另外，制備的含有多西紫杉醇的高分子納米粒子冷凍干燥物(多西紫杉醇-pnp)的孔隙率為90.0％(以冷凍干燥原液中的多西紫杉醇濃度表示為1.0mg/ml)用電子顯微鏡放大50倍來觀察實(shí)施例3的冷凍干燥物的結(jié)果示于圖4中。如圖4所示，可知本發(fā)明的冷凍干燥物具有無定形的大孔隙。為了比較，將用電子顯微鏡放大50倍觀察比較例1中得到的冷凍干燥物的結(jié)果示于圖5中。從圖4、圖5及表7可知，可以確認(rèn)本發(fā)明中獲得的冷凍干燥物與通過常規(guī)方法獲得的冷凍干燥物相比具有更大的孔隙。[表7]實(shí)施例4：含有紫杉醇的高分子納米粒子冷凍干燥塊狀物的制備除了將3.0ml的二氯甲烷添加到如下表8所示的使用量的紫杉醇和聚乳酸鹽中，并在45℃的溫度下攪拌至變成透明溶液之外，以與實(shí)施例1相同的工序?qū)嵤?。[表8]將26.4ml的約25℃的生理鹽水添加到裝有3574.5mg的所述制備的含有紫杉醇的高分子納米粒子冷凍干燥塊狀物的小瓶中，用手劇烈搖晃1分鐘，然后用手輕輕搖晃至小瓶中的所有固體成分全部溶解。小瓶中所有的固體成分全部溶解所用的重建時間為1.6分鐘。實(shí)施例5：含有伏立康唑的高分子納米粒子冷凍干燥塊狀物的制備除了將3.0ml的二氯甲烷添加到如下表9所示的使用量的伏立康唑和聚乳酸鹽中，并在40℃下攪拌至變成透明溶液之外，以與實(shí)施例1相同的工序?qū)嵤?。[表9]將36.0ml的約25℃的生理鹽水添加到裝有3410mg的所述制備的含有伏立康唑的高分子納米粒子冷凍干燥塊狀物的小瓶中，用手劇烈搖晃1分鐘，然后用手輕輕搖晃至小瓶中的所有固體成分全部溶解。小瓶中所有固體成分全部溶解所用的重建時間為2.9分鐘。當(dāng)前第1頁12