相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用本pct申請(qǐng)要求2014年10月7日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)系列號(hào)62/060,988和2015年4月7日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)系列號(hào)62/144,145的優(yōu)先權(quán)，其全部公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用結(jié)合到本文中。發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及用于通過(guò)吸入經(jīng)肺遞送的方法和藥物組合物，所述組合物包含雷帕霉素，用于預(yù)防和治療肺高壓。發(fā)明背景肺高壓(ph)是肺動(dòng)脈、肺靜脈或肺毛細(xì)血管(總稱為肺脈管系統(tǒng))中的血壓升高，導(dǎo)致胸痛、頭暈、昏厥、疲勞、腿腫脹，運(yùn)動(dòng)期間頭暈眩，活動(dòng)期間氣短和/或虛弱。ph的癥狀與其它更常見(jiàn)的心肺問(wèn)題相似。這些病癥包括哮喘、肺炎、慢性阻塞性肺疾病(copd)、左心衰竭和/或冠狀動(dòng)脈疾病，這使得ph診斷常常具有挑戰(zhàn)性。ph的起始原因仍然未知。在ph中觀察到與肺連接的和肺內(nèi)的血管收縮或緊縮。最小血管的壁增厚，不再能夠在血液和肺之間正常轉(zhuǎn)移氧氣和二氧化碳。這使得心臟更難通過(guò)肺泵血。隨著時(shí)間的推移，受影響的血管在稱為纖維化的過(guò)程中變得更堅(jiān)硬和更厚。這進(jìn)一步增加肺內(nèi)的血壓并損害血液流動(dòng)，增加心臟的工作負(fù)荷，并引起右心室肥大。心臟較少能夠通過(guò)肺泵血，導(dǎo)致患者心力衰竭和死亡。居住在海平面的人在靜止時(shí)正常肺動(dòng)脈壓的平均值為8-20mmhg。當(dāng)靜止時(shí)的平均肺動(dòng)脈壓超過(guò)25mmhg時(shí)，存在ph。世界衛(wèi)生組織(who)將ph分為不同的組，例如：who組1-肺動(dòng)脈高壓(pah)(例如特發(fā)性，遺傳性(bmpr2，alk1，endogolin，未知)，藥物和毒素誘導(dǎo)，與結(jié)締組織病、hiv感染、門靜脈高壓、先天性心臟病、血吸蟲病或慢性溶血性貧血(包括鐮狀細(xì)胞性貧血)相關(guān)的ph，新生兒的持續(xù)性肺高壓)，who組i'-肺靜脈閉塞性疾病(pvod)和/或肺毛細(xì)血管血管瘤病(pch)，who組ii-由于左心臟病(例如收縮或舒張功能障礙，瓣膜疾病)引起的肺高壓，who組iii-由肺部疾病和/或缺氧(例如慢性阻塞性肺疾病，間質(zhì)性肺疾病，具有混合限制性和阻塞性模式的其它肺部疾病，睡眠呼吸障礙，肺泡通氣低下病癥，慢性暴露于高海拔，發(fā)育性異常)引起的ph，who組iv-慢性血栓栓塞性肺高壓(cteph)和/或who組v-具有不清楚的多因素機(jī)制的ph(例如血液學(xué)疾病：骨髓增生性疾病，脾切除術(shù)，全身性疾病：結(jié)節(jié)病，肺朗格漢斯細(xì)胞組織細(xì)胞增多癥：淋巴管平滑肌瘤病，神經(jīng)纖維瘤病，血管炎，代謝病癥：糖原貯積病，戈謝病，甲狀腺疾病，和其它：腫瘤阻塞，纖維化縱隔炎，透析時(shí)的慢性腎衰竭)。肺高壓(ph)無(wú)法治愈。治療只能減輕癥狀，減緩疾病進(jìn)展。盡管在ph的醫(yī)學(xué)療法方面取得了相當(dāng)大的進(jìn)展，但長(zhǎng)期死亡率仍然很高，主要是由于心力衰竭和其它心血管疾病。如果已知潛在的肺部疾病，則可以治療某些類型的ph。目前可用于患有未知原因的ph的患者的治療選擇靶向?qū)е旅}管系統(tǒng)收縮的細(xì)胞功能障礙。諸如前列環(huán)素，前列腺素類，磷酸二酯酶-5抑制劑，內(nèi)皮素受體拮抗劑和其它血管擴(kuò)張劑的療法主要通過(guò)引起肺血管擴(kuò)張來(lái)起作用。例如，通過(guò)手術(shù)植入皮膚的導(dǎo)管靜脈內(nèi)給予的前列環(huán)素改善了生活質(zhì)量，增加了存活并降低了肺移植的緊迫性。血管擴(kuò)張劑如鈣通道阻滯劑，一氧化氮和前列環(huán)素通常對(duì)與硬皮病，慢性肝病和hiv感染相關(guān)的ph有幫助。相比之下，對(duì)于潛在肺部疾病引起的ph的患者，這些藥物尚未被證明有效。對(duì)于pah利尿劑，通常應(yīng)用dixogin和氧療法處方。不幸的是，許多患者對(duì)這些療法反應(yīng)不佳，或者隨著時(shí)間的推移對(duì)它們停止響應(yīng)。那么，唯一剩下的選擇是單肺和/或雙肺移植，或心肺移植以治療ph。雖然有一些證據(jù)表明可用的療法對(duì)血管重塑具有繼發(fā)作用，但目前還沒(méi)有靶向ph的異常細(xì)胞增殖的療法。ph的分子機(jī)制尚不清楚，但認(rèn)為內(nèi)皮功能障礙導(dǎo)致內(nèi)皮衍生的血管擴(kuò)張劑例如一氧化氮和前列環(huán)素的合成降低。肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(pa-smc)增生是導(dǎo)致肺血管結(jié)構(gòu)重塑和閉塞的所有形式ph的病理特征。肺血管重塑是由于異常增殖和對(duì)形成血管壁的細(xì)胞(包括pa-smc、內(nèi)皮細(xì)胞和肺外膜成纖維細(xì)胞)的凋亡的抗性。已知涉及絲氨酸/蘇氨酸激酶akt和哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶(mtor)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)途徑對(duì)細(xì)胞增殖和癌癥至關(guān)重要，并且還可參與ph中血管平滑肌細(xì)胞的增殖。在pa-smc中，akt和mtor信號(hào)傳導(dǎo)可以被許多生長(zhǎng)因子以及物理刺激例如剪切應(yīng)力和缺氧激活。因此，akt-mtor信號(hào)傳導(dǎo)途徑由作用于pa-smc并可誘導(dǎo)ph的各種物理和生物刺激共享。雷帕霉素是由吸水鏈霉菌(streptomyceshygroscopicus)產(chǎn)生的大環(huán)三烯抗生素(見(jiàn)美國(guó)專利號(hào)3,929,992)。雷帕霉素是mtor的抑制劑。雷帕霉素的免疫抑制和抗炎特性最初顯示其在移植領(lǐng)域和在自身免疫性疾病的治療中的應(yīng)用。例如，已顯示它預(yù)防響應(yīng)于白蛋白過(guò)敏攻擊的體液(ige-樣)抗體的形成，抑制鼠t-細(xì)胞激活，和延長(zhǎng)在組織不相容的嚙齒動(dòng)物中器官移植的存活時(shí)間。在自身免疫性疾病的嚙齒動(dòng)物模型中，它抑制與系統(tǒng)性紅斑狼瘡、膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎、自身免疫性i型糖尿病、自身免疫性心肌炎、實(shí)驗(yàn)性變應(yīng)性腦脊髓炎、移植物抗宿主疾病和自身免疫性葡萄膜視網(wǎng)膜炎相關(guān)的免疫介導(dǎo)的事件。雷帕霉素也用其藥品通用名，西羅莫司(見(jiàn)例如，dr.reddyslabsltd.的anda#201578，2013年5月28日批準(zhǔn))提及。西羅莫司是fda批準(zhǔn)的并由wyeth(pfizer)以商品名rapamune在美國(guó)上市，用于預(yù)防器官排斥和腎移植。它以口服溶液劑(1mg/ml)或片劑(多規(guī)格)的形式存在。wyeth(pfizer)也以商品名torisel(坦羅莫司)上市一種治療晚期腎細(xì)胞癌的衍生物，其經(jīng)靜脈內(nèi)給予。坦羅莫司是西羅莫司的水溶性前藥。cordis，johnson&johnson的分支機(jī)構(gòu)，以商品名cypher上市一種西羅莫司-洗脫冠狀動(dòng)脈支架。在這種情況下，西羅莫司的抗增殖作用在球囊血管成形術(shù)后預(yù)防冠狀動(dòng)脈的再狹窄。授權(quán)至berg等(novartis)的us2010/0305150描述用于治療和預(yù)防神經(jīng)皮膚性障礙，例如由tsc介導(dǎo)的那些，包括結(jié)節(jié)性硬化癥，以及由神經(jīng)纖維瘤病1型(nf-1)介導(dǎo)的那些的雷帕霉素衍生物。雷帕霉素及其衍生物被進(jìn)一步描述于nishimura,t.等(2001)am.j.respir.crit.caremed.163:498-502和美國(guó)專利號(hào)6,384,046和us6,258,823中。雷帕霉素在其臨床上批準(zhǔn)的范圍內(nèi)的使用有幾個(gè)已知的不利影響，包括肺毒性(rapamune標(biāo)簽警示，它不適用于肺移植患者)、增加的癌風(fēng)險(xiǎn)，和糖尿病-樣癥狀。雷帕霉素與肺毒性的出現(xiàn)有關(guān)，通常呈現(xiàn)為間質(zhì)性肺炎的形式，但肺泡蛋白沉積癥也已有記錄。見(jiàn)例如，nocera等,肝移植患者中的西羅莫司療法：?jiǎn)我恢行牡某醪浇?jīng)驗(yàn)(sirolimustherapyinlivertransplantpatients:aninitialexperienceatasinglecenter),transplantationproceedings(2008),40(6),1950-1952;perez等,肝移植中與西羅莫司有關(guān)的間質(zhì)性肺炎：一個(gè)病例報(bào)告(interstitialpneumonitisassociatedwithsirolimusinlivertransplantation:acasereport),transplantationproceedings(2007),39(10),3498-3499;hashemi-sadraei等,在長(zhǎng)期抗凝治療的腎移植接受者中的西羅莫司-相關(guān)的彌漫性肺泡出血(sirolimus-associateddiffusealveolarhemorrhageinarenaltransplantrecipientonlong-termanticoagulation),clinicalnephrology(2007),68(4),238-244;pedroso等,肺泡蛋白沉積癥-西羅莫司的一種罕見(jiàn)的肺毒性,transplantinternational(2007),20(3),291-296。雷帕霉素-誘導(dǎo)的肺毒性的原因尚不知道。對(duì)于其治療ph的用途，雷帕霉素的肺毒性是主要顧慮。嚴(yán)重的呼吸不利事件也與在長(zhǎng)期給藥下導(dǎo)致循環(huán)血濃度大于1毫微克/ml范圍的用作抗癌療法的西羅莫司有關(guān)。例如，西羅莫司前藥，坦羅莫司的肺毒性，在2009年的題目為“間質(zhì)性肺疾病是坦羅莫司治療腎癌患者的罕見(jiàn)副作用(interstitiallungdiseaseisararesideeffectoftemsirolimustreatmentinrenalcancerpatients)”的報(bào)告有記錄。aparicio等,clinical&translationaloncology(2009),11(8),499-510;vahid等,用于實(shí)體瘤的新型抗腫瘤劑的肺并發(fā)癥(pulmonarycomplicationsofnovelantineoplasticagentsforsolidtumors),chest(2008)133:528-538。此外，一項(xiàng)2012匯總-分析的結(jié)論是給予坦羅莫司或依維莫司的10%癌癥患者可能經(jīng)歷輕度級(jí)別的毒性，伴隨生活質(zhì)量的不斷惡化，在一些病例中療法中斷。見(jiàn)iacovelli等,用mtor抑制劑治療的惡性疾病患者中的肺毒性的發(fā)生率和風(fēng)險(xiǎn)(incidenceandriskofpulmonarytoxicityinpatientstreatedwithmtorinhibitorsformalignancy)。一項(xiàng)公開(kāi)的試驗(yàn)的匯總-分析(ameta-analysisofpublishedtrials),actaoncologica(2012),51(7),873-879。而且，在大鼠中用坦羅莫司進(jìn)行的安全性藥理學(xué)研究(見(jiàn)坦羅莫司nda的pharm/tox章節(jié))顯示呼吸速率減少以及肺泡巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)和肺部炎癥(見(jiàn)從usfda網(wǎng)站獲得的對(duì)坦羅莫司nda22088的藥理學(xué)評(píng)論)。這些不利作用在所述藥物由于系統(tǒng)給予在循環(huán)血容量中的相對(duì)高濃度的情況下被觀察到。盡管雷帕霉素有可能對(duì)肺有毒性，但已經(jīng)研究雷帕霉素作為各種動(dòng)物模型中ph的潛在治療(ghofrani等，j.am.coll.cardiol.54(1):s108-s118(2009);paddenberg等，biomedcentral8(15):1-12(2007))。美國(guó)專利申請(qǐng)2014/0271871和wo2008/137148(統(tǒng)稱為“abraxis申請(qǐng)”)描述了通過(guò)給予雷帕霉素的納米顆粒和載體蛋白例如白蛋白來(lái)治療、穩(wěn)定、預(yù)防和/或延緩ph的方法。一般性描述了這些雷帕霉素納米顆粒的各種給藥方式，包括吸入。但是直接遞送到肺部的雷帕霉素氣霧劑制劑，被認(rèn)為由于雷帕霉素眾所周知的肺部毒性而非常不可能成功，如上述引用的文章所例示。事實(shí)上，abraxis申請(qǐng)中描述的預(yù)言性臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)僅包括靜脈內(nèi)給藥。abraxis申請(qǐng)中沒(méi)有數(shù)據(jù)可以向技術(shù)人員指明與雷帕霉素肺毒性相關(guān)的問(wèn)題已被克服。由lehrer在2013年發(fā)表的美國(guó)專利申請(qǐng)反映了這樣的觀點(diǎn)，即“雷帕霉素(西羅莫司)由于其證據(jù)充分的肺毒性，間質(zhì)性肺炎而不能安全地吸入”。見(jiàn)us20130004436，引用chhajed等(2006)73:367-374。lehrer專利申請(qǐng)涉及用于治療和預(yù)防肺癌和淋巴管平滑肌瘤病的組合物和方法。盡管一些早期出版物，例如授予sturm等的美國(guó)專利號(hào)5,080,899(1991年2月提交)和美國(guó)專利號(hào)5,635,161(1995年6月提交)，包含一些用于通過(guò)吸入遞送的雷帕霉素的一般描述，這樣的一般描述沒(méi)有任何證據(jù)支持并且在許多報(bào)告的雷帕霉素-誘導(dǎo)的肺毒性的發(fā)生之前出現(xiàn)，所述肺毒性在其更廣泛的接受(在移植情況下作為免疫抑制劑和在抗癌情況下作為細(xì)胞增殖抑制劑)之后出現(xiàn)，如通過(guò)上文討論的報(bào)告所證實(shí)的。wo2011/163600描述他克莫司的氣溶膠制劑，其如同雷帕霉素，是一種大環(huán)內(nèi)酯。但他克莫司是不同于西羅莫司的獨(dú)特的化學(xué)實(shí)體和他克莫司的分子靶標(biāo)是鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶，而不是mtor，和雷帕霉素不同，他克莫司不顯示肺毒性并且事實(shí)上適合于在肺移植后預(yù)防排斥。鑒于廣泛認(rèn)識(shí)的雷帕霉素-誘導(dǎo)的肺毒性的潛在性，用于肺部遞送的包含雷帕霉素的藥物組合物并不被認(rèn)為是在人類中的一項(xiàng)可行的治療選項(xiàng)。通過(guò)吸入的方式將藥物遞送至肺是治療多種病癥的重要的手段，所述病癥包括常見(jiàn)的局部病癥，例如囊性纖維化、肺炎、支氣管哮喘和慢性阻塞性肺??；一些系統(tǒng)性病癥，包括激素替代、疼痛控制、免疫缺陷、紅血球生成、糖尿病、肺癌等。見(jiàn)yi等的綜述j.aerosolmed.pulm.drugdeliv.23:181-7(2010)。適合于通過(guò)吸入治療肺癌的藥物包括順鉑、卡鉑、紫杉烷類和蒽環(huán)類。見(jiàn)例如，美國(guó)專利號(hào)6,419,900；6,419,901；6,451,784；6,793,912；和美國(guó)專利申請(qǐng)公布號(hào)us2003/0059375和us2004/0039047。此外，通過(guò)吸入給藥的多柔比星和替莫唑胺已被提議用于治療肺轉(zhuǎn)移。見(jiàn)例如，美國(guó)專利號(hào)7,288,243和美國(guó)專利申請(qǐng)公布號(hào)2008/0008662。對(duì)雷帕霉素、其前藥、衍生物和類似物的藥物制劑存在需要，所述制劑可安全地直接遞送至肺，優(yōu)選地通過(guò)吸入，以提供更加有效的用于治療和預(yù)防受tor信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑影響的疾病和病癥的劑型，其減少或消除與雷帕霉素的口服劑型有關(guān)的毒性和不良事件。附圖簡(jiǎn)述圖1：小鼠血中10.6ng/ml雷帕霉素(上部)和內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)(底部)的lc-ms/ms色譜圖。圖2：小鼠肺勻漿中10.6ng/ml雷帕霉素(上部)和內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)(底部)的代表性色譜圖。圖3：小鼠血中雷帕霉素的校準(zhǔn)曲線。圖4：小鼠肺勻漿中雷帕霉素的校準(zhǔn)曲線。圖5：在采自通過(guò)opa給予雷帕霉素的小鼠2-07的血中雷帕霉素(上部)和內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)(底部)的代表性色譜圖。圖6：在采自通過(guò)opa給予雷帕霉素的小鼠2-07的肺勻漿中雷帕霉素(上部)和內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)(底部)的代表性色譜圖。圖7：雷帕霉素抑制tsc2突變細(xì)胞的生長(zhǎng)(底部)并且抑制s6磷酸化(上部)。圖8a和b：在(a)opa和口服給予雷帕霉素，和(b)經(jīng)吸入給予后小鼠肺中的s6磷酸化。圖9：每日一次重復(fù)給予肺的預(yù)測(cè)雷帕霉素血濃度。發(fā)明概述本發(fā)明部分地基于雷帕霉素組分的安全和有效的氣溶膠制劑的開(kāi)發(fā)，其能夠遞送在靶組織中有效發(fā)揮有效的生物學(xué)活性的量的雷帕霉素組分至所述靶組織，同時(shí)使雷帕霉素相關(guān)的毒性最小化。此外，本發(fā)明利用按本文所述配制的雷帕霉素組分的令人驚訝的藥代動(dòng)力學(xué)的發(fā)現(xiàn)。如下文更詳細(xì)論述的，直接遞送至肺的雷帕霉素組分在肺組織中產(chǎn)生顯著更高濃度的藥物。肺組織中的藥物量出人意料地高于從之前口服和靜脈內(nèi)研究可預(yù)期的量。并且令人驚訝的是，甚至相對(duì)高的直接遞送至肺的雷帕霉素的量也不對(duì)肺組織產(chǎn)生毒性。此外，通過(guò)本文所述的方法實(shí)現(xiàn)的肺組織中的藥物量經(jīng)證實(shí)有效發(fā)揮有效的生物學(xué)活性，包括在靶組織中抑制細(xì)胞生長(zhǎng)和成活力以及抑制s6磷酸化。這些生物學(xué)活性表明根據(jù)本發(fā)明的方法的雷帕霉素組分的遞送劑量足以在靶組織中抑制mtor信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。因此，這些結(jié)果證實(shí)，本文所述的氣溶膠制劑能夠遞送低但治療有效劑量的雷帕霉素，其提供非常低的藥物系統(tǒng)暴露，以及高功效。結(jié)果是當(dāng)根據(jù)本發(fā)明給予時(shí)對(duì)于雷帕霉素的顯著改進(jìn)的治療指數(shù)。本發(fā)明提供用于直接遞送至肺的雷帕霉素組分的氣溶膠藥物制劑。在本文中，術(shù)語(yǔ)“氣溶膠制劑”可以指水性組合物、干粉組合物或基于拋射劑的組合物，如下文更詳細(xì)描述的。本發(fā)明的氣溶膠制劑可以不同的方式遞送至受試者，例如經(jīng)鼻或口服，例如通過(guò)吸入。本文使用的術(shù)語(yǔ)“雷帕霉素組分”可以指雷帕霉素本身，優(yōu)選地呈描述為西羅莫司的無(wú)定形的形式，或其前藥或衍生物。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的雷帕霉素組分提供在靶組織中有效抑制mtor信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的量的雷帕霉素，其中對(duì)所述組織具有低毒性或無(wú)毒性，和伴隨的雷帕霉素血液水平小于約1ng/ml。與導(dǎo)致持續(xù)在1ng/ml-15ng/ml范圍內(nèi)血濃度的目前的雷帕霉素劑型相比，預(yù)期本發(fā)明的組合物呈現(xiàn)了一種改進(jìn)的安全概況，特別是在它們的慢性或長(zhǎng)期使用方面。鑒于產(chǎn)生的雷帕霉素的極低血水平，這由于本組合物的低的肺毒性與由于系統(tǒng)暴露于雷帕霉素導(dǎo)致的無(wú)或基本上較少不利事件的可能性結(jié)合而得到預(yù)期。因此，預(yù)期本發(fā)明的組合物顯示與現(xiàn)有的經(jīng)由胃腸道或靜脈內(nèi)遞送的劑型比較的更大的治療指數(shù)。在一個(gè)實(shí)施方案中，與雷帕霉素的其它劑型(例如口服或靜脈內(nèi)劑型)相比，本發(fā)明的雷帕霉素組分提供改進(jìn)的安全性概況，如通過(guò)較高的治療指數(shù)所證明的，尤其是對(duì)于其慢性或長(zhǎng)期使用。本發(fā)明涉及使用設(shè)計(jì)用于肺部遞送、優(yōu)選地通過(guò)吸入的、包含雷帕霉素的藥物組合物，治療和預(yù)防肺動(dòng)脈高壓(pah)的組合物和方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種在需要治療的人受試者中治療和預(yù)防pah的方法，該方法包括給予受試者如本文所述的包含雷帕霉素組分的氣溶膠藥物制劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供通過(guò)每日一次給予有需要的人受試者包含雷帕霉素組分的氣溶膠藥物制劑，用于治療和預(yù)防pah的組合物和方法，所述雷帕霉素組分的量有效實(shí)現(xiàn)從約0.25至0.75ng/ml的雷帕霉素組分的最大血液水平和從約0.075至0.25ng/ml的血谷水平。在一個(gè)實(shí)施方案中，最大血液水平為約0.5ng/ml，血谷水平為約0.1ng/ml，和制劑中的雷帕霉素組分的量為約25-100微克，或約50微克，每日一次遞送。本發(fā)明的氣溶膠制劑可用單獨(dú)的雷帕霉素組分配制，或與一種或多種另外的治療劑在相同劑型中組合配制。此外，本發(fā)明的氣溶膠制劑可單獨(dú)給予，或與一種或多種另外的療法組合給予，各自通過(guò)相同或不同的途徑給予，例如口服、靜脈內(nèi)等。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的氣溶膠制劑可與一種或多種另外的治療方案組合給予，以治療pah。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含雷帕霉素組分的氣溶膠藥物制劑，所述雷帕霉素組分的量在靶組織中有效實(shí)現(xiàn)所述組分的治療水平。在一個(gè)實(shí)施方案中，靶組織是肺。在一個(gè)實(shí)施方案中，遞送后12或24小時(shí)，優(yōu)選地遞送后24小時(shí)測(cè)定治療水平。在一個(gè)實(shí)施方案中，遞送后，治療水平持續(xù)至少24小時(shí)。在一個(gè)實(shí)施方案中，遞送后24小時(shí)所述組分的肺與血液濃度比為約5-50或約10-30。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述氣溶膠制劑中雷帕霉素組分的量為5-500微克、10-250微克、15-150微克或20-100微克。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述氣溶膠制劑中雷帕霉素組分的量為20、40、50、100、125或250微克。在一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素組分為西羅莫司。在一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素組分選自依維莫司、坦羅莫司、地磷莫司、烏米莫司和唑羅莫司。在一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素組分是西羅莫司和具有大于30:1或大于35:1的異構(gòu)體b:c比率。在一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素組分具有3.5%-10%的異構(gòu)體b:c比率。在一個(gè)實(shí)施方案中，給予受試者所述組合物的步驟產(chǎn)生包含雷帕霉素的平均直徑范圍為0.1-10微米的顆粒。在一個(gè)實(shí)施方案中，給予受試者所述組合物的步驟產(chǎn)生包含雷帕霉素的平均直徑范圍為0.5-6微米的顆粒。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法進(jìn)一步包括一種或多種另外的療法或治療方案。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的氣溶膠制劑適合于每日一次給予，和根據(jù)本文描述的方法，氣溶膠制劑一日一次給予。在一個(gè)實(shí)施方案中，氣溶膠制劑是適合于通過(guò)吸入遞送的干粉組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述干粉包含呈微粒形式的雷帕霉素組分(即微粒雷帕霉素)、載體顆粒和一種或多種任選的賦形劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，微粒由具有從約0.1至10微米或從約1至5微米的平均直徑的藥物顆粒組成。在一個(gè)實(shí)施方案中，顆粒具有約1.5-4微米，約1.5-3.5微米，或約2-3微米的平均直徑。載體可選自阿拉伯糖、葡萄糖、果糖、核糖、甘露糖、蔗糖、海藻糖、乳糖、麥芽糖、淀粉、葡聚糖、甘露醇、賴氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、二棕櫚?；字Ｄ憠A、卵磷脂、聚乳酸、聚(乳酸-谷氨酸)共聚物和木糖醇，和任何前述載體的混合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，載體包含兩種不同的載體的共混物或由兩種不同的載體的共混物組成。載體的顆?？删哂蟹秶鷱闹?00微米，從30至100微米，或少于10微米的直徑。當(dāng)載體由兩種不同的載體的共混物組成時(shí)，每種載體由測(cè)定為平均顆粒直徑的不同尺寸范圍的顆粒組成。在一個(gè)實(shí)施方案中，載體由兩種不同的載體，第一載體和第二載體的共混物組成。第一載體由具有范圍從約30至100微米的直徑的顆粒組成和第二載體由具有少于10微米的直徑的顆粒組成。兩種不同的載體的比例是在從3:97至97:3的范圍內(nèi)。在一個(gè)實(shí)施方案中，兩種不同的載體的比例是在97:3或95-98:2-5的范圍內(nèi)。在一個(gè)實(shí)施方案中，載體由兩種不同的乳糖載體的共混物組成。粉末中的藥物與載體比例可以是從0.5%至2%(w/w)。在一個(gè)實(shí)施方案中，粉末中的藥物與載體比例是1%(w/w)。基于組合物的總重量計(jì)，所述氣溶膠制劑中雷帕霉素組分的量為約0.1%-20%(w/w)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述量為約0.25%-2%(w/w)。在一個(gè)實(shí)施方案中，一種或多種任選的賦形劑存在于組合物中并選自磷脂和脂肪酸的金屬鹽，和前述賦形劑的混合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，磷脂選自二棕櫚?；字Ｄ憠A和卵磷脂。在一個(gè)實(shí)施方案中，脂肪酸的金屬鹽是硬脂酸鎂。在一個(gè)實(shí)施方案中，一種或多種賦形劑以范圍從0.01至0.5%的賦形劑與大的載體顆粒的重量比被涂覆在載體顆粒上。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述氣溶膠制劑中雷帕霉素組分的量為有效抑制mtorc1的生物學(xué)活性的量。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述量為有效抑制s6k蛋白的磷酸化的量。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述氣溶膠制劑中雷帕霉素組分的量為有效實(shí)現(xiàn)遞送至肺的5-500微克的可呼吸劑量的量。在一個(gè)實(shí)施方案中，可呼吸劑量為約5、約20、約50、約100或約250微克。在一個(gè)實(shí)施方案中，可呼吸劑量為約20微克、約50微克或約100微克。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述量為在肺組織中有效產(chǎn)生1ng/g-1微克(ug)/g的雷帕霉素組分的濃度的量。在一個(gè)實(shí)施方案中，在肺組織中雷帕霉素組分的濃度為約5-30ng/g。在一個(gè)實(shí)施方案中，在肺中的濃度為約5ng/g,約10ng/g,約15ng/g,約20ng/g,約25ng/g,約30ng/g,約50ng/g,約60ng/g,約100ng/g或約200ng/g。根據(jù)前述實(shí)施方案，伴隨的雷帕霉素組分血谷水平為小于5ng/ml,小于2ng/ml,小于1ng/ml,小于0.5ng/ml或小于0.25ng/ml。在一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素組分在給藥(優(yōu)選地給予人受試者)后以約1ng/g,約5ng./g,約10ng/g,約15ng/g,約20ng/g,約25ng/g,約50ng/g或約100ng/g的治療水平保持在肺中一段時(shí)間，所述一段時(shí)間選自約6-10小時(shí)、約6-14小時(shí)、約6-24小時(shí)和約6-72小時(shí)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述一段時(shí)間選自約12小時(shí)、約14小時(shí)、約24小時(shí)和約72小時(shí)。在一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素組分以約5-100ng/g或約5-30ng/g的治療水平保持在肺中約12或24小時(shí)的一段時(shí)間。在一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素組分以約5ng/g,約10ng/g,約20ng/g,約30ng/g,約50ng/g,約60ng/g,約70ng/g,約80ng/g或約90ng/g的治療水平保持在肺中。在一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素組分以至少5ng/g、至少20ng/g或至少30ng/g的治療水平保持在肺中。在一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素組分以約20ng/g-約30ng/g或約50ng/g-約80ng/g的治療水平保持在肺中。在一個(gè)實(shí)施方案中，在1-12個(gè)月或1-36個(gè)月的貯存后，所述制劑具有大于20%的細(xì)顆粒分?jǐn)?shù)(fpf)，其中相應(yīng)的細(xì)顆粒劑量(fpd)的范圍為5微克-2毫克，優(yōu)選地小于0.5毫克。在一個(gè)實(shí)施方案中，可呼吸劑量，其為遞送至肺的劑量，亦稱為遞送劑量(dd)或噴射劑量(ed)，范圍為10微克-2.5毫克，優(yōu)選地小于0.5毫克。在一個(gè)實(shí)施方案中，遞送劑量為約20-100微克、約10-25微克或約30-60微克。在一個(gè)實(shí)施方案中，遞送劑量為20或50微克。在一個(gè)實(shí)施方案中，遞送劑量為100微克。在一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素組分的可呼吸劑量為約20微克，肺組織中的藥物濃度為約5-25ng/g，血液中的cmax為小于1.0ng/ml或約0.50ng/ml-1.0ng/ml或約0.50ng/ml-0.90ng/ml，給藥后24小時(shí)的血谷藥物濃度為小于約0.20ng/ml，和給藥后14天的血液中的穩(wěn)態(tài)藥物濃度為小于約0.90ng/ml或小于約0.80ng/ml。在一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素組分的可呼吸劑量為約50微克，肺組織中的藥物濃度為約2-15ng/g，血液中的cmax為小于2.0ng/ml或約0.25ng/ml-0.1ng/ml或約0.10ng/ml-0.5ng/ml，單劑量給藥后24小時(shí)后的血谷藥物濃度為小于約0.10ng/ml，和一天一次重復(fù)5天后的藥物血谷濃度為小于約1.0ng/ml或小于約0.50ng/ml。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述制劑適合于每日一次給予。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述制劑還包含一種或多種另外的治療劑。本發(fā)明還提供本發(fā)明的組合物用于在需要治療的人受試者中治療和預(yù)防pah的用途。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供用于在需要治療或預(yù)防的人受試者中治療和預(yù)防pah的方法，所述方法包括通過(guò)吸入給予受試者本文所述的組合物或單位劑型。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述組合物遞送有效改善受試者的肺功能的量的藥物，如通過(guò)最大肺活量(fvc)和最大呼氣量(fev1)所測(cè)量的。本發(fā)明還提供包含氣溶膠制劑的單位劑型，所述氣溶膠制劑包含本文所述的雷帕霉素組分，其中雷帕霉素組分的量為約5-2500微克、20-500微克或50-250微克。在一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素組分的量為約50-125微克。在一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素組分的量為約40、約50、約100、約125或約250微克。在一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素組分的量為約250微克。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述單位劑型是適合用于干粉吸入器裝置的膠囊。在一個(gè)實(shí)施方案中，膠囊包含1mg-100mg的粉末(總量，包括雷帕霉素組分、載體和任何任選的賦形劑)或10mg或40mg的粉末。膠囊可以是明膠、塑料或纖維素膠囊，或呈適合用于dpi裝置的箔/箔或箔/塑料罩泡的形式。本發(fā)明還提供藥包或藥盒，其包含本文所述的組合物或單位劑型，和使用說(shuō)明書。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述制劑通過(guò)濕拋光方法產(chǎn)生，包括制備藥物的水性懸浮液，使藥物懸浮液進(jìn)行微流化，和噴霧干燥得到的顆粒以形成干粉的步驟。在一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素組分是西羅莫司，所述載體由兩種不同乳糖載體的共混物組成，第一載體由平均直徑范圍為約30-100微米的顆粒組成，和第二載體由平均直徑小于10微米的顆粒組成，兩種不同載體的比例為約97:3至3:97，和雷帕霉素的量為25-1400微克。本發(fā)明還提供一種包含貯庫(kù)的干粉遞送裝置，所述貯庫(kù)包含本文描述的組合物或單位劑型。貯庫(kù)可以是裝置內(nèi)的內(nèi)置腔室、膠囊或泡罩。在一個(gè)實(shí)施方案中，裝置選自plastiape?rs01型7、plastiape?rs00型8、xcaps?、handihaler?、flowcaps?twincaps?，和aerolizer?。在一個(gè)實(shí)施方案中，裝置選自plastiape?rs01型7或plastiape?rs00型8。在一個(gè)實(shí)施方案中，裝置是plastiape?rs00型8。發(fā)明詳述本發(fā)明提供用于在需要治療的人受試者中治療和預(yù)防pah的方法和組合物。需要所述治療的人受試者是已診斷患有pah的人受試者。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法包括通過(guò)吸入給予受試者包含在合適的載體中的雷帕霉素和任選一種或多種添加劑的組合物。術(shù)語(yǔ)“雷帕霉素”在本公開(kāi)內(nèi)容全文一般用于指雷帕霉素本身，亦稱為西羅莫司，以及其前藥(例如坦羅莫司)和衍生物。雷帕霉素的衍生物包括這樣的化合物，其結(jié)構(gòu)上類似于雷帕霉素，為相同的化學(xué)類別，為雷帕霉素類似物，或?yàn)槔着撩顾鼗蚱溲苌锏乃帉W(xué)上可接受的鹽。雷帕霉素、其前藥和衍生物的進(jìn)一步的描述和實(shí)例在后續(xù)部分中提供。本文所述的組合物稱為“氣溶膠制劑”和意在描述適合于產(chǎn)生包含雷帕霉素組分的可呼吸顆?；蛞旱蔚目蓺馊苣z化組合物，所述雷帕霉素組分如上文所述是指雷帕霉素本身，優(yōu)選地呈描述為西羅莫司的無(wú)定形形式，或其前藥或衍生物。在一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素組分選自西羅莫司、依維莫司和坦羅莫司。在一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素組分是西羅莫司。本文所述的氣溶膠制劑可包含雷帕霉素組分、載體和任選一種或多種添加劑。氣溶膠制劑可以呈水溶液、干粉或一種或多種藥學(xué)上可接受的拋射劑和載體的混合物的形式，如下文標(biāo)題為“用于吸入的組合物”的部分所詳細(xì)描述的。本發(fā)明還提供用于在需要治療的人受試者中治療和預(yù)防pah的方法，所述方法包括經(jīng)肺給予受試者本發(fā)明的氣溶膠制劑的步驟。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述組合物的給予劑量足以在肺組織中實(shí)現(xiàn)雷帕霉素組分的治療水平，同時(shí)在受試者中保持低血液水平，或血谷水平。例如，雷帕霉素組分的治療水平可以是約1ng/g、約5ng/g、約10ng/g、約15ng/g、約20ng/g、約25ng/g、約50ng/g和血谷水平是0.01-0.15ng/ml、0.075-0.350ng/ml、0.150-0.750ng/ml、0.750-1.5ng/ml或1.5-5ng/ml。在一個(gè)實(shí)施方案中，給予劑量足以在肺中實(shí)現(xiàn)約5ng/g-50ng/g或約5ng/g-20ng/g的雷帕霉素組分的治療水平和小于5ng/ml、小于2ng/ml、小于1ng/ml或小于0.5ng/ml的雷帕霉素組分的血谷水平。優(yōu)選地，前述治療水平通過(guò)一天一次給予本文所述的氣溶膠制劑實(shí)現(xiàn)。在一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素組分的總每日劑量范圍為5-100微克、20-250微克、50-500微克(0.05-0.5毫克)、250-1000微克(0.25-1毫克)或500-2000微克(0.5-2毫克)。在一個(gè)實(shí)施方案中，總每日劑量為小于500微克、小于100微克、小于50微克、小于20微克或小于10微克。在一個(gè)實(shí)施方案中，總每日劑量為小于500微克、小于250微克、小于100微克、小于50微克或小于10微克。在一個(gè)實(shí)施方案中，給予受試者的總每日劑量為小于0.5mg或小于0.25mg/天。經(jīng)肺遞送和給藥的進(jìn)一步的方面，包括組合療法，描述于下文標(biāo)題為“肺給藥和劑量”的部分。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法包括經(jīng)肺途徑與一種或多種另外的藥劑組合給予雷帕霉素。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述一種或多種另外的藥劑選自前列腺素類、磷酸二酯酶抑制劑或內(nèi)皮素拮抗劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述前列腺素類選自前列腺素、血栓烷和前列環(huán)素。所述一種或多種另外的藥劑可通過(guò)與雷帕霉素組分相同或不同的給藥途徑給予。例如，所述藥劑可通過(guò)吸入、鼻內(nèi)、口服或靜脈內(nèi)給予。本發(fā)明的方法和組合物有效地在需要治療的受試者(優(yōu)選地人受試者)中治療和預(yù)防pah。如本文使用的，本發(fā)明的組合物的有效量是指足以減少或改善pah的進(jìn)展、嚴(yán)重性和/或持續(xù)時(shí)間或pah的一個(gè)或多個(gè)癥狀，防止pah的進(jìn)展，導(dǎo)致pah的消退，防止與pah有關(guān)的一個(gè)或多個(gè)癥狀的發(fā)展或發(fā)生，在pah的一個(gè)或多個(gè)癥狀的嚴(yán)重性或發(fā)生方面或在pah的發(fā)展或進(jìn)展方面增強(qiáng)或改善另一療法(例如預(yù)防或治療劑)的預(yù)防或治療效果的量。在具體實(shí)施方案中，關(guān)于ph的治療，治療有效量是指抑制或減少血管細(xì)胞增殖，抑制或減少平滑肌細(xì)胞增殖或減少肺內(nèi)血管增厚或改善fvc或fev1或減少可通過(guò)放射檢查檢測(cè)到的胸腔積液量的療法(例如治療劑)的量。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，相對(duì)于對(duì)照(例如，磷酸鹽緩沖鹽水(“pbs”))，治療有效量的療法(例如治療劑)將血管細(xì)胞的增殖或肺內(nèi)血管的增厚減少至少5％，優(yōu)選至少10％，至少15％，至少20％，至少25％，至少30％，至少35％，至少40％，至少45％，至少50％，至少55％，至少60％，至少65％，至少70％，至少75％，至少80％，至少85％，至少90％，或至少95％。因此，因此，在本發(fā)明的方法的情況下，術(shù)語(yǔ)“治療”是指pah或與pah有關(guān)的一個(gè)或多個(gè)癥狀的嚴(yán)重性、持續(xù)時(shí)間或進(jìn)展的減小。在具體實(shí)施方案中，該術(shù)語(yǔ)可以指抑制平滑肌細(xì)胞的增殖或減少平滑肌細(xì)胞的增殖，抑制或減少肺內(nèi)血管增厚，肺血管重塑進(jìn)展的發(fā)展或心血管疾病例如心力衰竭或右心室壁增厚的發(fā)展或進(jìn)展，其可通過(guò)超聲心動(dòng)圖或心電圖檢測(cè)。在本發(fā)明方法的一個(gè)實(shí)施方案中，以有效改善受試者的肺功能的劑量給予組合物，如通過(guò)最大肺活量(fvc)和最大呼氣量(fev1)測(cè)量的。在另一個(gè)實(shí)施方案中，組合物以使用超聲心動(dòng)圖有效監(jiān)測(cè)右心室-右心房壓力梯度和/或右心室和左心室大小的改善的劑量給予。在某些實(shí)施方案中，所述方法包括經(jīng)肺給予本發(fā)明的組合物作為主要療法。在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物的給予是輔助療法。在任一情況下，本發(fā)明的方法考慮與一種或多種另外的療法組合給予本發(fā)明的組合物以治療疾病或病癥。術(shù)語(yǔ)“療法”是指可用于預(yù)防、治療、控制或改善疾病或病癥或其一個(gè)或多個(gè)癥狀的任何方法、方案和/或藥劑。所述一種或多種另外的療法可在給予本發(fā)明的組合物之前(例如之前5分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時(shí)、2小時(shí)、4小時(shí)、6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)、96小時(shí)、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周)、同時(shí)或之后(例如之后5分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時(shí)、2小時(shí)、4小時(shí)、6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)、96小時(shí)、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周)給予。在一些實(shí)施方案中，另外的治療劑經(jīng)配制用于與呈經(jīng)肺給予的劑型的本發(fā)明的組合物共給予。在其它實(shí)施方案中，另外的治療劑與包含雷帕霉素的劑型通過(guò)與雷帕霉素相同或不同的給藥途徑分開(kāi)給予。本發(fā)明的方法還考慮一種或多種另外的治療劑的組合，其用于與包含雷帕霉素的劑型的給予同時(shí)、之前或之后給予。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法在患有pah的受試者中有效控制pah。在這種情況下，術(shù)語(yǔ)“控制”、“管控”和“管理”指受試者自不導(dǎo)致治愈的療法獲得的有益作用。在一個(gè)實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的方法，在用雷帕霉素治療期間，如果pah進(jìn)展放慢或停止，則pah在患者中受到控制。在另一個(gè)實(shí)施方案中，如果與pah有關(guān)的一種或多種癥狀被改善或穩(wěn)定(即，在治療過(guò)程中癥狀沒(méi)有惡化)，則pah在受試者中得到控制。在一些實(shí)施方案中，本文提供的組合物抑制和/或減少肺動(dòng)脈中的異常細(xì)胞增殖。在一些實(shí)施方案中，異常細(xì)胞增殖是平滑肌和內(nèi)皮細(xì)胞的異常細(xì)胞增殖。在一些實(shí)施方案中，本文提供的組合物抑制和/或減少肺動(dòng)脈中的血管發(fā)生。在一些變型中，通過(guò)抑制基質(zhì)金屬蛋白酶的產(chǎn)生來(lái)抑制和/或減少肺動(dòng)脈中的血管發(fā)生。在一些實(shí)施方案中，本文提供的組合物抑制和/或減少肺動(dòng)脈中的炎癥。在一些實(shí)施方案中，通過(guò)影響嗜中性粒細(xì)胞和t細(xì)胞功能來(lái)抑制和/或減少炎癥。在一些實(shí)施方案中，組合物是足以增加基礎(chǔ)akt活性，增加akt磷酸化，增加pi3-激酶活性，增加akt活化(例如由外源性igf-1誘導(dǎo)的活化)的時(shí)間長(zhǎng)度，抑制irs-1的絲氨酸磷酸化，抑制irs-1降解，抑制或改變cxcr4亞細(xì)胞定位，抑制vegf分泌，降低細(xì)胞周期蛋白d2的表達(dá)，降低存活素(survivin)的表達(dá)，抑制il-6誘導(dǎo)的多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，抑制細(xì)胞增殖，增加凋亡，增加細(xì)胞周期阻滯，增加聚(adp核糖)聚合酶的切割，增加胱天蛋白酶-8/胱天蛋白酶-9的切割，改變或抑制磷脂酰肌醇3-激酶/akt/mtor和/或細(xì)胞周期蛋白d1/視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤途徑中的信號(hào)傳導(dǎo)，抑制血管發(fā)生，和/或抑制破骨細(xì)胞形成的量。在一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素以有效改善以下一種或多種的劑量給予：心肺運(yùn)動(dòng)測(cè)試，連續(xù)侵襲性血液動(dòng)力學(xué)測(cè)試，功能殘留能力，血清vegf-d，生活質(zhì)量和功能性能，6分鐘步行距離，和肺中一氧化碳的擴(kuò)散能力。在一個(gè)實(shí)施方案中，通過(guò)肺途徑遞送的雷帕霉素實(shí)現(xiàn)了有效限制肺部肺血管增厚的雷帕霉素的血液水平。在一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素給予劑量的功效通過(guò)上述任何一種或多種進(jìn)行測(cè)量。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法涉及對(duì)目前可獲得的針對(duì)pah的療法“無(wú)反應(yīng)”或“難醫(yī)治的”受試者。在本文中，術(shù)語(yǔ)“無(wú)反應(yīng)”和“難醫(yī)治的”指受試者對(duì)療法的反應(yīng)在臨床上不足以緩解與pah有關(guān)的一種或多種癥狀。術(shù)語(yǔ)“受試者”和“患者”在本發(fā)明的公開(kāi)內(nèi)容中可互換使用。該術(shù)語(yǔ)指動(dòng)物，優(yōu)選哺乳動(dòng)物包括非靈長(zhǎng)類動(dòng)物(例如牛、豬、馬、貓、狗、大鼠，和小鼠)和靈長(zhǎng)類動(dòng)物(例如黑猩猩、猴例如食蟹猴和人)，并最優(yōu)選人。在一優(yōu)選的實(shí)施方案中，受試者是人。術(shù)語(yǔ)“預(yù)防”、“防止”和“防范”指因給予根據(jù)本發(fā)明方法鑒定的一種或多種化合物或給予這樣的化合物和已知的用于疾病或病癥的療法的組合所致的pah的一種或多種癥狀的復(fù)發(fā)、發(fā)展、進(jìn)展或發(fā)生的預(yù)防。優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明的方法與一種或多種另外的療法組合給予組合物在患有疾病或病癥的受試者中提供協(xié)同反應(yīng)。在這種情況下，術(shù)語(yǔ)“協(xié)同”是指組合的功效比任一單一療法單獨(dú)的加和效果更加有效。在一個(gè)實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的組合雷帕霉素療法的協(xié)同效果允許與其在組合之外的劑量和/或頻率相比，使用較低劑量和/或較低頻率給予組合中的至少一種療法。在另一實(shí)施方案中，協(xié)同效果表現(xiàn)為避免或減少與僅使用組合中的任一療法有關(guān)的不良或不需要的副作用。在本發(fā)明的藥物組合物的上下文中，“載體”指，例如，液體或固體材料例如溶劑、稀釋劑、穩(wěn)定劑、佐劑、賦形劑、輔助劑、拋射劑，或用來(lái)配制雷帕霉素以供遞送的媒介。用于本發(fā)明組合物的藥學(xué)上可接受的載體的實(shí)例包括，但不限于，干燥粉末載體例如乳糖、甘露糖、氨基酸、環(huán)糊精、二棕櫚?；字Ｄ憠A、烴和碳氟化合物拋射劑、壓縮氣體、無(wú)菌液體、水、緩沖鹽水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇、液體聚乙二醇等)、油、去垢劑、助懸劑、碳水化合物(例如葡萄糖、乳糖、蔗糖或右旋糖酐)、抗氧化劑(例如抗壞血酸或谷胱甘肽)、螯合劑、低分子量蛋白，或其合適的混合物。優(yōu)選地，在雷帕霉素的干燥粉末氣溶膠制劑的情況下，載體，如果存在，選自糖類和糖醇。在一個(gè)實(shí)施方案中，載體(如果存在)為乳糖。術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的”表示由聯(lián)邦或州政府的監(jiān)管機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)或美國(guó)藥典或其它公認(rèn)的藥典例如歐洲藥典列出的，用于動(dòng)物，和更特別是用于人的。一種用于溶解難溶于水或水不溶性藥物的方法是形成所述藥物的鹽或制備本身更穩(wěn)定或可用來(lái)形成前藥的水溶性鹽的前藥。用于形成鹽和藥學(xué)上可接受的鹽形式的方法是本領(lǐng)域已知的并包括，但不限于，可以存在于目的藥物或前藥中的酸性或堿性基團(tuán)的鹽。性質(zhì)為堿性的化合物能夠與各種無(wú)機(jī)和有機(jī)酸形成廣泛種類的鹽?？杀挥脕?lái)制備此類堿性化合物的藥學(xué)上可接受的酸加成鹽的酸是形成非-毒性酸加成鹽(即包含藥理學(xué)上可接受的陰離子的鹽)的那些，包括但不限于硫酸、檸檬酸、馬來(lái)酸、乙酸、草酸、鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硝酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸式磷酸鹽、異煙酸鹽、乙酸鹽、乳酸鹽、水楊酸鹽、檸檬酸鹽、酸式檸檬酸鹽、酒石酸鹽、油酸鹽、丹寧酸鹽、泛酸鹽、酒石酸氫鹽、抗壞血酸鹽、琥珀酸鹽、馬來(lái)酸鹽、龍膽酸鹽(gentisinate)、富馬酸鹽、葡萄糖酸鹽、葡萄糖醛酸鹽(glucaronate)、糖二酸鹽(saccharate)、甲酸鹽、苯甲酸鹽、谷氨酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、對(duì)-甲苯磺酸鹽和雙羥萘酸(即，1,1’-亞甲基-雙-(2-羥基-3-萘酸))鹽。性質(zhì)上為酸性的化合物能夠與各種藥理學(xué)上可接受的陽(yáng)離子形成堿性鹽。這樣的鹽的實(shí)例包括堿金屬或堿土金屬鹽并且特別是鈣、鎂、鈉、鋰、鋅、鉀，和鐵鹽。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法和組合物利用雷帕霉素的水溶性前藥或衍生物，優(yōu)選坦羅莫司或相關(guān)化合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法和組合物利用雷帕霉素(西羅莫司)。雷帕霉素雷帕霉素是由吸水鏈霉菌生產(chǎn)的大環(huán)內(nèi)酯。其化學(xué)(iupac)名稱是(3s,6r,7e,9r,10r,12r,14s,15e,17e,19e,21s,23s,26r,27r,34as)-9,10,12,13,-14,21,22,23,24,25,26,27,32,33,34,34a-十六氫-9,27-二羥基-3-[(1r)-2-[(1s,3r,4r)-4-羥基-3-甲氧基環(huán)己基]-1-甲基乙基]-10,21-二甲氧基-6,8,12,14,20,26-六甲基-23,27-環(huán)氧-3h-吡啶并[2,1-c][1,4]氧氮雜環(huán)三十一烷-1,5,11,28,29(4h,6h,31h)-戊酮(pentone)。其分子式是c51h79no13和其分子量是914.172g/mol。其結(jié)構(gòu)顯示于下面。雷帕霉素的異構(gòu)體是已知的，例如異構(gòu)體b和異構(gòu)體c，其具有美國(guó)專利號(hào)7,384,953中所示的結(jié)構(gòu)。通常，雷帕霉素是b和c異構(gòu)體的混合物。在溶液中，雷帕霉素異構(gòu)體b和c互相轉(zhuǎn)化，和達(dá)到平衡。文獻(xiàn)中常見(jiàn)的慣例是描述呈b異構(gòu)體形式的雷帕霉素的結(jié)構(gòu)，其為下文所示的形式。雷帕霉素是白色至灰白色粉末并被認(rèn)為是不溶于水的，僅具有2.6μg/ml的極低溶解性。它易溶于芐醇、氯仿、丙酮，和乙腈。雷帕霉素的水不溶性對(duì)其制劑提出了特別的技術(shù)問(wèn)題。在其配制為口服劑型的情況下，其被制備為呈固體分散體形式的口服溶液(wo97/03654)和包含納米級(jí)(少于400nm)顆粒的片劑(us5,989,591)。但這些程序經(jīng)受了活性劑的溶出并因而其生物利用度的實(shí)質(zhì)性變化。另一種配制方法利用結(jié)晶粉末。根據(jù)本領(lǐng)域認(rèn)可的方法，低溶解性藥物的結(jié)晶形式轉(zhuǎn)化為其無(wú)定形形式可顯著地增加其溶解性。雖然這對(duì)于雷帕霉素也是確實(shí)的，無(wú)定形形式在化學(xué)上是極其不穩(wěn)定的。包含無(wú)定形雷帕霉素(西羅莫司)的藥物劑型被描述于wo06/039237和wo06/094507(包含西羅莫司和濃度49.25%的單硬脂酸甘油酯的緩釋制劑)中。改進(jìn)的穩(wěn)定的雷帕霉素口服劑型被描述于us8,053,444中。該劑型在組合物中采用脂肪酸酯和聚合物(例如聚乙烯吡咯烷酮(pvp)、羥丙基纖維素(hpc)或羥丙基甲基纖維素(hpmc))，以增加西羅莫司的溶解性，而不有害地影響其釋放速率。根據(jù)us8,053,444，超過(guò)10%w/w的脂肪酸酯濃度抑制西羅莫司從制劑釋放的速率，因此應(yīng)該避免，因?yàn)檫@可導(dǎo)致自胃腸道的吸收不足。脂肪酸酯(甘油酯)的優(yōu)選的濃度是1%-5%或5%-9%。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的氣溶膠雷帕霉素組合物不包含與聚合物組合的脂肪酸酯。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的氣溶膠雷帕霉素組合物包含基于組合物重量計(jì)的超過(guò)10%或超過(guò)12%濃度的脂肪酸酯。適合用于本發(fā)明的組合物和方法的雷帕霉素及其衍生物(包括類似物)和前藥包括雷帕霉素(西羅莫司)及其前藥或衍生物，其為mtor細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)途徑的抑制劑，并優(yōu)選為mtor本身的抑制劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素衍生物或前藥是選自依維莫司(affinitor;rad001)、坦羅莫司(cci-779)、地磷莫司(以前稱為deforolimus;ap23573)、烏米莫司(umirolimus)(biolimusa9)、唑羅莫司(abt-578)、novolimus、myolimus、ap23841、ku-0063794、ink-128、ex2044、ex3855、ex7518、azd08055和osi027的mtor抑制劑。其它的衍生物是技術(shù)人員已知的并包括，例如，o-取代的衍生物，其中西羅莫司的環(huán)己基環(huán)上的羥基被-or1替代，其中r1任選地是取代的烷基、酰氨基烷基，或氨基烷基。在一個(gè)實(shí)施方案中，用于本發(fā)明的氣溶膠制劑和方法的化合物是選自類似物依維莫司、坦羅莫司、地磷莫司、烏米莫司和唑羅莫司的雷帕霉素衍生物(類似物)。雷帕霉素類似物依維莫司、坦羅莫司、地磷莫司、烏米莫司和唑羅莫司的化學(xué)結(jié)構(gòu)在下面顯示。在一個(gè)實(shí)施方案中，用于本發(fā)明的氣溶膠制劑和方法的化合物是選自ku-0063794、azd8055、ink128和osi-027的mtor抑制劑。mtor抑制劑ku-0063794、azd8055、ink128和osi-027的化學(xué)結(jié)構(gòu)在下面顯示。西羅莫司、坦羅莫司和依維莫司用于本發(fā)明的方法和組合物是特別優(yōu)選的。在一個(gè)實(shí)施方案中，用于本發(fā)明的氣溶膠制劑和方法的化合物選自西羅莫司、坦羅莫司和依維莫司。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述化合物是西羅莫司或依維莫司。用于吸入的組合物本發(fā)明提供適合于通過(guò)吸入給藥的藥物組合物，其包含呈水性溶液、干燥粉末，或一種或多種藥學(xué)上可接受的拋射劑和載體的混合物的形式的雷帕霉素，或其前藥或衍生物。在一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素被包封在藥學(xué)上可接受的化合物、材料，或基質(zhì)中。在一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素被包封在脂質(zhì)體制劑或非-脂質(zhì)體制劑中。本發(fā)明的組合物是適合于人受試者通過(guò)氣溶膠吸入，經(jīng)肺藥物遞送的雷帕霉素的可氣溶膠化制劑。在這種情況下使用的術(shù)語(yǔ)“氣溶膠”指一種膠體系統(tǒng)，其中分散相由固體或者液體顆粒組成，并且其中分散介質(zhì)是氣體。在一個(gè)實(shí)施方案中，氣體是空氣和制劑是適合于經(jīng)由噴霧器給藥的溶液制劑或適合于經(jīng)由干燥粉末吸入器裝置給藥的干燥粉末制劑。一般來(lái)說(shuō)，可吸入顆?；蛐〉螌⒕哂性?.10-10微米范圍內(nèi)的平均直徑。選擇顆?；蛐〉蔚某叽缫宰畲笙薅鹊匕邢蜻f送至肺本身(即，其中肺是靶組織)或者系統(tǒng)(其中肺被用作系統(tǒng)給藥的可選擇的途徑)。尺寸將優(yōu)選地在約0.5-5微米范圍內(nèi)，其中肺本身是治療靶標(biāo)；或?qū)τ诮?jīng)由肺的全身遞送，少于3微米。尺寸根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法測(cè)量并描述于例如美國(guó)藥典905和601章中。例如，它被測(cè)量為總氣體動(dòng)力學(xué)中位數(shù)直徑(mmad)。在一個(gè)實(shí)施方案中，包含本文描述的組合物的顆粒的平均(average或mean)直徑被測(cè)量為mmad。在一個(gè)實(shí)施方案中，氣溶膠的分散相由液體顆粒或液滴構(gòu)成。在這種情況下，術(shù)語(yǔ)“液體顆粒”和“液滴”可互換使用。在該實(shí)施方案中，本發(fā)明的制劑是溶液制劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，氣溶膠的分散相由固體顆粒組成。在該實(shí)施方案中，本發(fā)明的制劑是干燥粉末制劑。這種尺寸的微粉化顆?？赏ㄟ^(guò)本領(lǐng)域已知的方法，例如通過(guò)機(jī)械研磨(磨碎)、從亞臨界或超臨界溶液中沉淀、噴霧干燥、冷凍干燥，或凍干法生產(chǎn)。一般來(lái)說(shuō)，吸入的顆粒經(jīng)受通過(guò)以下兩種機(jī)制之一的沉積：撞擊，對(duì)于較大顆粒，其通常占優(yōu)勢(shì)，和沉降，對(duì)于較小顆粒，其普遍存在。當(dāng)吸入的顆粒的動(dòng)量大到足以使顆粒不跟隨氣流并遇到生理表面時(shí)，則撞擊發(fā)生。相反，當(dāng)已隨著吸入的氣流移動(dòng)的極小顆粒由于在氣流內(nèi)的隨機(jī)擴(kuò)散而遇到生理表面時(shí)，沉降主要發(fā)生在肺深部中。本發(fā)明的氣溶膠制劑優(yōu)選地通過(guò)撞擊(在上氣道)或者通過(guò)沉降(在肺泡)以使它們的沉積最大化，以實(shí)現(xiàn)所需的治療功效。藥物從遞送裝置，例如噴霧器、pmdi或dpi裝置遞送至患者的量，被稱為遞送劑量。它可在體外通過(guò)測(cè)定從遞送裝置在模擬的吸氣動(dòng)作中噴射的藥物量來(lái)估算。這被稱為噴射劑量(ed)，如根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法，例如在美國(guó)和歐洲藥典，例如在usp的601章和905章提出的那些來(lái)測(cè)定的。因此，“噴射劑量”被認(rèn)為等同于遞送劑量。藥物從遞送裝置遞送至患者的肺的量被稱為可吸入劑量。它可通過(guò)在體外測(cè)定細(xì)顆粒劑量(fpd)估算，如根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法，例如在美國(guó)和歐洲藥典，例如在usp的601章和905章提出的那些方法，使用級(jí)聯(lián)撞擊器，例如新一代撞擊器(ngi)所測(cè)定的。以細(xì)的、可吸入的顆粒從遞送裝置釋放的藥物的量被稱為制劑的細(xì)顆粒分?jǐn)?shù)(fpf)。fpf是潛在可吸入的遞送劑量中的藥物分?jǐn)?shù)。因此，fpf是fpd與ed(噴射或遞送劑量)的比例。制劑的這些特征根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法，例如在美國(guó)和歐洲藥典，例如在usp的601章和歐洲藥典的專論2.9.18中提出的那些方法測(cè)定。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的可氣溶膠化的雷帕霉素制劑具有大于20%的fpf，甚至在長(zhǎng)期貯存后，例如在貯存1至12個(gè)月后或在1至36個(gè)月后，具有范圍從10微克至2毫克，優(yōu)選地少于0.5毫克的相應(yīng)的fpd。在一個(gè)實(shí)施方案中，遞送至患者的劑量，遞送劑量(dd)或噴射劑量(ed)的范圍是從25微克至2.5毫克，優(yōu)選地少于0.5毫克。在某些實(shí)施方案中，雷帕霉素被包封在藥學(xué)上可接受的化合物、材料，或基質(zhì)中。在一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素被包封在脂質(zhì)體制劑或非-脂質(zhì)體制劑中。水性溶液組合物在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的可氣溶膠化的組合物是適合經(jīng)由噴霧器，包括噴射、振動(dòng)網(wǎng)篩和靜態(tài)網(wǎng)格或孔霧化器用于肺遞送的雷帕霉素的水性溶液制劑。因此，溶液制劑適合于使氣溶膠小滴在如上所述的從約0.1至10微米直徑的可吸入范圍內(nèi)形成。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物是一種由溶于水、乙醇和低分子量多元醇的雷帕霉素(西羅莫司)或其前藥或衍生物組成的可霧化水性溶液制劑，和任選地包括表面活性劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，水性溶液制劑具有低于20mpa-s、低于10mpa-s，或低于5mpa-s的粘性，和至少45達(dá)因/cm，優(yōu)選地大于60達(dá)因/cm的表面張力。優(yōu)選地，該制劑具有低于5mpa-s的粘性，和超過(guò)45達(dá)因/cm的表面張力。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物具有低于20mpa-s的粘性，低于10mpa-s的粘性，或低于5mpa-s的粘性和至少45達(dá)因/cm，優(yōu)選地大于60達(dá)因/cm的表面張力。在一個(gè)實(shí)施方案中，水性溶液制劑由雷帕霉素、水、乙醇和選自甘油和丙二醇的低分子量多元醇組成。在一個(gè)實(shí)施方案中，水性溶液制劑由雷帕霉素、水和選自甘油和丙二醇的低分子量多元醇組成，而乙醇是任選的。該制劑也可任選地包含非-離子表面活性劑，優(yōu)選peg100，或聚山梨醇酯，優(yōu)選聚山梨醇酯80(“ps80”)，磷脂，優(yōu)選天然磷脂例如卵磷脂，和優(yōu)選氫化大豆卵磷脂，和抗氧化劑或穩(wěn)定劑，優(yōu)選edta二鈉。在一個(gè)實(shí)施方案中，非-離子表面活性劑選自聚乙二醇(peg)peg100、peg1000，和聚山梨醇酯80(也稱為tween?80、單油酸脫水山梨醇酯，或聚氧乙烯油酸脫水山梨醇酯)，及其混合物。雷帕霉素在水性溶液中的量是基于溶液的總重量的從約0.001%至0.01%重量(%wt或%w/w)。在一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素以約0.01mg/ml-約0.1mg/ml的濃度存在于溶液中。在一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素的量是基于溶液的總重量的從0.001%至0.01%w/w。在一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素在溶液中的濃度是從約0.01至.1mg/ml，低分子量多元醇的量是從5至35%w/w，乙醇的量以5-20%w/w的量存在，和非-離子表面活性劑的量是從1至200百萬(wàn)分率(ppm)w/w。優(yōu)選地，非-離子表面活性劑的量是少于100ppm(w/w)。任選的抗氧化劑/穩(wěn)定劑的量從0至少于0.01%w/w。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的水性溶液制劑不包含一種或多種選自聚乙二醇、卵磷脂、edta、嵌段共聚物和環(huán)糊精的添加劑或賦形劑。水性溶液制劑是單相水性溶液，其中雷帕霉素是完全溶解的。制劑中的主要共溶劑是乙醇和選自甘油和丙二醇的低分子量多元醇。雷帕霉素不呈現(xiàn)為混懸液或乳液，而且該溶液也不可描述為膠體溶液或分散液。本發(fā)明的水性溶液制劑缺乏膠體結(jié)構(gòu)例如膠束或脂質(zhì)體。磷脂(如果存在)的量太小以致不能形成脂質(zhì)體或沉淀雷帕霉素。而磷脂和非-離子表面活性劑的合并的量太小以致不能改變表面張力。結(jié)果，無(wú)論是磷脂或是非-離子表面活性劑都不以傳統(tǒng)意義上的足以用作表面活性劑的量存在。在這種情況下，術(shù)語(yǔ)表面活性劑指用來(lái)降低溶液的表面張力或液體和在溶液中的任何固體藥物顆粒之間的界面張力的試劑，以致表面活性劑用作去垢劑、濕潤(rùn)劑、乳化劑或分散劑。相反，本發(fā)明的溶液制劑中的非-離子表面活性劑起著阻斷所述藥物吸附在最終產(chǎn)品被包裝在其中的聚乙烯容器上的作用，從而防止通過(guò)對(duì)容器的吸附所致藥物效力的損失。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，水性溶液制劑是單相水性溶液，其中雷帕霉素是完全溶解的，溶液缺乏膠束或脂質(zhì)體，且溶液不是乳液、分散液或混懸液。在一個(gè)實(shí)施方案中，溶液制劑是無(wú)菌的。在一個(gè)實(shí)施方案中，溶液制劑通過(guò)0.2微米濾器過(guò)濾滅菌。在一個(gè)實(shí)施方案中，溶液制劑不通過(guò)加熱，例如通過(guò)高壓滅菌，或通過(guò)輻照進(jìn)行滅菌。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種包括一或多個(gè)用無(wú)菌水性溶液制劑填充的容器或小瓶(這些術(shù)語(yǔ)可互換使用)的包裝。優(yōu)選地，容器是單位劑量容器。在一個(gè)實(shí)施方案中，容器是聚合物小瓶，優(yōu)選聚乙烯小瓶。在一個(gè)實(shí)施方案中，用本發(fā)明的無(wú)菌水性溶液制劑填充的容器或小瓶通過(guò)包括以下步驟的過(guò)程生產(chǎn)：通過(guò)吹塑成型形成小瓶，此后立即在無(wú)菌條件下用本發(fā)明的無(wú)菌-過(guò)濾的制劑填充小瓶，接著在填充后立即熱密封小瓶。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的水性氣溶膠制劑包含或由以下成分組成：從約0.001%至0.01%w/w的雷帕霉素(或其前藥或衍生物)，從約5%至35%w/w的丙二醇，從約5%至20%w/w的乙醇，從約1至200ppmw/w的聚山梨醇酯80，從約1至100ppmw/w的卵磷脂，和水，其中水的量足以獲得0.01至0.1毫克/毫升之間的雷帕霉素濃度。任選地，可加入穩(wěn)定性增強(qiáng)劑，例如低于0.01%wt/wt的水平的edta二鈉。對(duì)于水性和其它非-加壓液體系統(tǒng)，可獲得多種噴霧器(包括小容量噴霧器)以使制劑氣霧化。壓縮機(jī)-驅(qū)動(dòng)的噴霧器結(jié)合噴射技術(shù)并使用壓縮空氣以生成液體氣溶膠。這樣的裝置可從例如，healthdynetechnologies,inc.;invacare,inc.;mountainmedicalequipment,inc.;parirespiratory,inc.;madamedical,inc.;puritan-bennet;schuco,inc.,devilbisshealthcare,inc.；和hospitak,inc市售獲得。超聲霧化器依靠壓電晶體的振動(dòng)形式的機(jī)械能，以生成可吸入液體小滴并可從例如，omronhealthcare,inc.和devilbisshealthcare,inc市售獲得。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的水性氣溶膠制劑經(jīng)由可從aerogen、pari、philips或omron購(gòu)得的振動(dòng)噴霧器遞送。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的水性氣溶膠制劑被包裝在適合與振動(dòng)網(wǎng)孔噴霧器，例如，aeroneb?go(aerogen,由philipsrespironics分銷)、i-neb?(philips)或e-flow?(pari)，或類似的噴霧器一起使用的容器中。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的水性氣溶膠制劑經(jīng)由孔噴霧器例如購(gòu)自boeringher-ingelheim的respimat?遞送。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種適合于通過(guò)吸入給予人受試者的可霧化水性溶液形式的藥物組合物，水性溶液由雷帕霉素或其前藥或衍生物(優(yōu)選地選自西羅莫司、依維莫司和坦羅莫司)、水、乙醇和低分子量多元醇組成。在一個(gè)實(shí)施方案中，低分子量多元醇是甘油或丙二醇，或其混合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物還包含選自peg100、peg1000和聚山梨醇酯80及其混合物的非離子表面活性劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，非離子表面活性劑在制劑中的量是基于制劑重量的從1至200ppmw/w，優(yōu)選地少于100ppmw/w。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物還包含磷脂、抗氧化劑或化學(xué)穩(wěn)定劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗氧化劑或化學(xué)穩(wěn)定劑在制劑中的量是基于制劑重量的少于0.01%w/w。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗氧化劑或化學(xué)穩(wěn)定劑是edta。在一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素在制劑中的量是基于制劑重量的從0.001至0.01%w/w。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物不包含一種或多種選自聚乙二醇、卵磷脂、edta、嵌段共聚物和環(huán)糊精的添加劑或賦形劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物缺乏選自膠束和脂質(zhì)體的膠體結(jié)構(gòu)。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物適合于通過(guò)噴射噴霧器、振動(dòng)網(wǎng)篩噴霧器、靜態(tài)網(wǎng)格霧化器和孔霧化器的任何一種給藥。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物具有低于20mpa-s，優(yōu)選地低于10mpa-s，最優(yōu)選地低于5mpa-s的粘性，和至少45達(dá)因/cm，優(yōu)選地至少50達(dá)因/cm的表面張力。本發(fā)明還提供一種制備可霧化水性溶液形式的本發(fā)明的藥物組合物的方法，該方法包括通過(guò)0.2微米或更小的孔徑的濾器無(wú)菌過(guò)濾溶液并在無(wú)菌條件下，在收集容器中收集無(wú)菌濾液。在一個(gè)實(shí)施方案中，制備方法還包括在無(wú)菌條件下將無(wú)菌濾液轉(zhuǎn)移至密閉容器中。在一個(gè)實(shí)施方案中，密閉容器是單位-劑量聚乙烯小瓶。在一個(gè)實(shí)施方案中，小瓶通過(guò)吹塑成型生成，然后立即將無(wú)菌濾液轉(zhuǎn)移至小瓶。在一個(gè)實(shí)施方案中，該方法還包括在無(wú)菌濾液轉(zhuǎn)移至小瓶后立即熱密封小瓶的步驟。干燥粉末組合物在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的可氣溶膠化的組合物是包含作為治療劑(也稱為“藥物”)的雷帕霉素或其前藥或衍生物的微粉化顆粒的干燥粉末，所述顆粒具有從0.1至10微米的直徑和約0.5至4.5微米，約1至4微米，約1至3.5微米，約1.5至3.5微米，或約2至3微米之間的平均直徑。干燥粉末制劑適合用于干燥粉末吸入器裝置(dpi)或加壓計(jì)量劑量吸入器(pmdi)。雷帕霉素在干燥粉末中的量是基于粉末總重量的從約0.5至20%(w/w)。在一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素的量是約1%或2%(w/w)。在一個(gè)實(shí)施方案中，微粉化雷帕霉素通過(guò)如下所述的濕拋光或噴射研磨產(chǎn)生，以生成在約0.5至4.5微米，約1至4微米，或約2至3微米范圍內(nèi)的直徑，并將雷帕霉素顆粒以藥物/載體比例范圍從0.5-2%w/w，優(yōu)選1%的比例共混到乳糖載體顆粒中。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物顆粒被輕輕壓緊到包含在遞送裝置(干燥粉末吸入器)內(nèi)的脆性基質(zhì)。在驅(qū)動(dòng)時(shí)，遞送裝置摩擦來(lái)自基質(zhì)的藥物顆粒的一部分，并將它們分散在遞送藥物顆粒至呼吸道的吸入氣中。或者，所述藥物顆?？梢允前谶f送裝置(干燥粉末吸入器)的貯庫(kù)內(nèi)的自由流動(dòng)粉末。貯庫(kù)可以是在裝置內(nèi)的內(nèi)置腔室，或膠囊、泡罩包裝或在驅(qū)動(dòng)前插入裝置的類似的預(yù)成型的貯庫(kù)。在驅(qū)動(dòng)時(shí)，所述裝置從貯庫(kù)分發(fā)一部分所述藥物顆粒并將它們分散在遞送所述藥物顆粒至呼吸道的吸入氣中。在一個(gè)實(shí)施方案中，干燥粉末組合物由藥物顆粒和載體組成，所述載體選自阿拉伯糖、葡萄糖、果糖、核糖、甘露糖、蔗糖、海藻糖、乳糖、麥芽糖、淀粉、葡聚糖、甘露醇、亮氨酸、賴氨酸、異亮氨酸、二棕櫚?；字Ｄ憠A、卵磷脂、聚乳酸、聚(乳酸-谷氨酸)共聚物，和木糖醇，或任何上述載體的混合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，載體是乳糖，特別是一水合物的形式。在一個(gè)實(shí)施方案中，干燥粉末組合物包含兩種或更多種載體的共混物。在一個(gè)實(shí)施方案中，干燥粉末組合物包含藥物和至少兩種不同載體的共混物。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物與載體比例是在從約0.5至20%(w/w)的范圍內(nèi)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物顆粒具有范圍從0.1至10微米的直徑，以及約1-4、1-3.5，或1.5-3.5，或2-3微米的平均直徑。載體顆?？删哂蟹秶鷱?至200微米的直徑。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物包含在泡罩包裝或dpi裝置的貯庫(kù)中。在一個(gè)實(shí)施方案中，干燥粉末組合物被預(yù)加載到明膠、淀粉、纖維素或聚合物膠囊，或適用于dpi裝置的箔/箔或箔/塑料泡罩包裝中。每個(gè)膠囊或泡罩可包含從1至100毫克的干燥粉末組合物。膠囊或泡罩可插入干燥粉末吸入器(dpi)裝置例如aerolizer?、plastiape?rs01型7和plastiape?rs00型8、xcaps?、flowcaps?、arcus?、diskhaler?或microdose?中。在驅(qū)動(dòng)dpi裝置時(shí)，膠囊或泡罩破裂，而粉末被分散在吸入氣中，遞送所述藥物至呼吸道。在一個(gè)實(shí)施方案中，干燥粉末組合物包含在干燥粉末吸入器(dpi)裝置中，所述裝置選自accuhaler?、conixtm、rotahaler?、twincaps?、xcaps?、flowcaps?、turbuhaler?、nexthaler?、cyclohaler?、revolizertm、diskhaler?、diskus?、spinhaler、handihaler?、microdoseinhaler、gyrohaler?、omnihaler?、clickhaler?、duohaler?(vectura)，和arcus?吸入器(civitastherapeutics)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含本文描述的干燥粉末組合物的dpi裝置。在一個(gè)實(shí)施方案中，裝置選自xcaps、flowcaps、handihaler、twincaps、aerolizer?、plastiape?rs01型7，和plastiape?rs00型8。在一個(gè)實(shí)施方案中，包含組合物的裝置選自gyrohaler?、omnihaler?、clickhaler?、duohaler?，和arcus?吸入器。載體顆粒優(yōu)選地具有較大尺寸(大于5微米)以避免載體材料在肺深部中的沉積。在一個(gè)實(shí)施方案中，載體顆粒具有范圍從1至200微米，從30至100微米，或少于10微米的直徑。在一個(gè)實(shí)施方案中，載體顆粒是兩種載體的共混物，一種載體具有約30-100微米的顆粒，而另一種載體具有少于10微米的顆粒。兩種不同載體的比例是在從3:97至97:3的范圍內(nèi)。在一個(gè)實(shí)施方案中，干燥粉末組合物由0.5-20%(w/w)藥物與載體比例組成，所述藥物顆粒具有從0.1至10微米的直徑，平均直徑少于3.5微米。在一個(gè)實(shí)施方案中，載體材料是結(jié)晶載體材料。優(yōu)選地，結(jié)晶載體材料是至少90%，優(yōu)選地大于95%結(jié)晶的載體材料，且其中于室溫在80%或較低相對(duì)濕度的條件下，沒(méi)有或基本沒(méi)有水被載體吸收。這樣的結(jié)晶載體的實(shí)例是乳糖一水合物和葡萄糖一水合物?；诜勰└稍镏亓坑?jì)，載體的量是制劑的1至99.0%或更多，優(yōu)選地是5-99%、10-99%、20-99%、30-99%、40-99%，或50-99%。在一個(gè)實(shí)施方案中，干燥粉末組合物包含在遞送裝置(干燥粉末吸入器)的貯庫(kù)內(nèi)。貯庫(kù)可以是在裝置內(nèi)的內(nèi)置腔室，或膠囊、泡罩包裝或在驅(qū)動(dòng)前插入裝置的類似的預(yù)成型的貯庫(kù)。在驅(qū)動(dòng)時(shí)，所述裝置從貯庫(kù)分發(fā)一部分所述藥物顆粒并將它們分散在遞送所述藥物顆粒至呼吸道的吸入氣中。在一個(gè)實(shí)施方案中，藥物作為細(xì)粉末與藥學(xué)上可接受的載體一起存在。在這種情況下，術(shù)語(yǔ)“細(xì)粉”指在如上討論的可吸入的范圍內(nèi)的粒徑。優(yōu)選地，所述藥物被微粉化，以使顆粒具有10微米或更小范圍內(nèi)的平均直徑。在一個(gè)實(shí)施方案中，在本文描述的干燥粉末組合物中的雷帕霉素(或其前藥或衍生物)顆粒的平均直徑(mmad或dv50)是從0.5至10微米，從0.5至6微米，從1至5微米，從1至4微米，從1至3微米，或從2至3微米。mmad或dv50值是總體體積的50%低于該值的粒徑。在一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素的干燥粉末制劑還包含一種或多種選自以下描述的添加劑的添加劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，一種或多種添加劑包含硬脂酸鎂或由硬脂酸鎂組成。在這個(gè)實(shí)施方案的一個(gè)方面，硬脂酸鎂以基于粉末的干燥重量的0.001至10%的量，優(yōu)選地以從0.01至5%或0.01至2%的量存在。在另一個(gè)實(shí)施方案中，添加劑包含或由基于粉末的干燥重量的0.1%-1%的量，優(yōu)選0.2%-0.6%的量的磷脂，例如卵磷脂(其是磷脂酰膽堿的混合物)組成。在這個(gè)實(shí)施方案的一個(gè)方面，在載體與雷帕霉素顆粒共混步驟之前或同時(shí)，將添加劑涂覆在載體材料上。這可例如，通過(guò)利用高能混合步驟用添加劑涂覆載體，或長(zhǎng)持續(xù)時(shí)間的低能混合，或低能和高能混合的組合以獲得所需水平的涂覆載體材料來(lái)實(shí)現(xiàn)。用于混合干燥粉末以形成共混物的低能裝置是本領(lǐng)域已知的并包括例如，v-型攪拌機(jī)、雙錐攪拌機(jī)、斜錐攪拌機(jī)、立方攪拌機(jī)、料斗攪拌機(jī)、水平或垂直滾筒攪拌機(jī)、靜態(tài)連續(xù)攪拌機(jī)，和動(dòng)態(tài)連續(xù)攪拌機(jī)。其它的高能裝置包括本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的高剪切混合器。在某些實(shí)施方案中，干燥粉末包含在膠囊中。在一個(gè)實(shí)施方案中，膠囊是明膠膠囊、塑料膠囊，或纖維素膠囊，或呈現(xiàn)為箔/箔或箔/塑料泡罩包裝的形式。在每種情況下，膠囊或泡罩適用于dpi裝置，優(yōu)選地以使每個(gè)膠囊的粉末總重量至1mg-100mg的量與載體一起在劑量單位中。或者，干燥粉末可包含在多-劑量dpi裝置的貯庫(kù)中。雷帕霉素的粒徑可通過(guò)常規(guī)方法，例如通過(guò)在空氣噴射研磨機(jī)、球磨機(jī)或振動(dòng)研磨機(jī)中研磨，通過(guò)濕拋光、微量沉淀、噴霧干燥、凍干法或從亞臨界或超臨界溶液中再結(jié)晶，縮減至所需的微粒水平。在這種情況下的噴射研磨或磨碎指干燥藥物顆粒通過(guò)機(jī)械裝置的微粉化。微粉化技術(shù)不需要制備藥物的溶液、漿液或混懸液。相反，藥物顆粒的尺寸經(jīng)機(jī)械方式縮減。由于微粉化采用相對(duì)高的能量，在某些實(shí)施方案中，在共-微粉化混合物中包括載體材料與雷帕霉素是合乎需要的。在這種情況下，載體材料吸收一些可能另外不利地影響雷帕霉素結(jié)構(gòu)的微粉化的能量。在一個(gè)實(shí)施方案中，在尺寸范圍從1至4或從2至3微米的雷帕霉素顆粒通過(guò)噴射研磨方法生產(chǎn)。us2013/0203717中描述的濕拋光法包括使用高剪切以縮減藥物顆粒在混懸液或漿液中的粒徑。濕拋光可僅包括藥物顆?；蚍Q為研磨介質(zhì)的另外的顆粒。在一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素的粒徑可使用濕拋光工藝(其包括濕法研磨，特別是在高壓下的空化作用)縮減至所需的水平，其中雷帕霉素懸浮于水或其它雷帕霉素不溶于其中的溶劑中，然后接著噴霧干燥混懸液，獲得作為干燥粉末的雷帕霉素。在一個(gè)實(shí)施方案中，尺寸范圍從1至4或從2至3微米的雷帕霉素顆粒通過(guò)濕拋光方法生產(chǎn)，該方法包括制備雷帕霉素的混懸液，使混懸液經(jīng)受微流化作用，并噴霧干燥生成的顆粒以形成干燥粉末。雷帕霉素可懸浮于選自丙醇或丁醇、水和乙酸乙酯的抗溶劑中。在一個(gè)實(shí)施方案中，混懸液是水性混懸液。噴霧干燥通常包括制備所述藥物的溶液、漿液或混懸液，使溶液、漿液或混懸液霧化，形成顆粒，然后蒸發(fā)溶液、漿液或混懸液介質(zhì)，形成顆粒。溶液、漿液或混懸液，可在亞臨界或超臨界條件下形成。蒸發(fā)步驟可通過(guò)升高霧化在其中發(fā)生的氣氛的溫度，或通過(guò)降低壓力，或二者的組合來(lái)完成。在一個(gè)實(shí)施方案中，包含雷帕霉素的粉末制劑通過(guò)噴霧干燥雷帕霉素的水性分散體來(lái)制得，以形成由具有如上所述的適用于肺遞送的尺寸的雷帕霉素的聚集顆粒組成的干燥粉末。可調(diào)整(增加或減少)聚集體粒徑以靶向肺深部或者上呼吸道部位，例如上支氣管區(qū)域或鼻粘膜。這可例如，通過(guò)增加雷帕霉素在噴霧干燥的分散體中的濃度或通過(guò)增加由噴霧干燥器生成的小滴尺寸來(lái)完成。或者，干燥粉末可通過(guò)冷凍干燥(凍干法)水性藥物溶液、分散液或乳液，或通過(guò)噴霧干燥和冷凍干燥的組合來(lái)制得。在一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素和一種或多種任選的添加劑的水性分散體還包含溶解的稀釋劑，例如乳糖或甘露醇，以致當(dāng)分散體被冷凍干燥時(shí)，形成可吸入的稀釋劑顆粒，各自包含至少一種包埋的藥物顆粒和添加劑顆粒(如果存在的話)。在一個(gè)實(shí)施方案中，干燥粉末制劑通過(guò)冷凍干燥雷帕霉素的水性分散體，和一種或多種任選的添加劑制得。在一個(gè)實(shí)施方案中，粉末包含雷帕霉素和添加劑(如果存在)的聚集體，其中聚集體在如上所述的可吸入尺寸范圍內(nèi)。在一個(gè)實(shí)施方案中，干燥粉末包含雷帕霉素載荷的脂質(zhì)體。藥物-載荷的脂質(zhì)體可通過(guò)本領(lǐng)域已知的方法，例如使用在m.chougale等int.j.nanomedicine2:625-688(2007)對(duì)他克莫司描述的技術(shù)生產(chǎn)。簡(jiǎn)言之，雷帕霉素、氫化磷脂酰膽堿(hspc)和膽固醇溶于甲醇和氯仿的混合物中，然后例如在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(rotaevaporator)中經(jīng)歷干燥薄膜形成。脂質(zhì)體經(jīng)水合，將脂質(zhì)體分散體通過(guò)高-壓勻化器用于尺寸縮減。表征所得丸粒的囊泡尺寸和%藥物包埋，然后將相當(dāng)于所需量的雷帕霉素的丸粒分散于合適的介質(zhì)中并經(jīng)受噴霧干燥，獲得為吸入所需尺寸的顆粒。噴霧干燥的粉末可被填充到用于給藥的膠囊、小罐或泡罩包裝中。在一個(gè)實(shí)施方案中，干燥粉末顆?？赏ㄟ^(guò)從超臨界或亞臨界溶液沉淀來(lái)生產(chǎn)。干燥粉末組合物可包含在合適的干燥粉末吸入器裝置，或在用于這樣的裝置的膠囊或泡罩中。這樣的裝置的實(shí)例在上文中提供并包括accuhaler?、aerolizer?、plastiape?rs01型7、plastiape?rs00型8、conixtm、rotahaler?、twincaps?、xcaps?、flowcaps?、turbuhaler?、nexthaler?、cyclohaler?、revolizertm、diskhaler?、diskus?、spinhaler、handihaler?、microdoseinhaler、gyrohaler?、omnihaler?、clickhaler?，或duohaler?(vectura)，或呼吸致動(dòng)的arcus?吸入器(civitastherapeutics)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種包含本文描述的干燥粉末組合物的dpi裝置。在一個(gè)實(shí)施方案中，裝置選自xcaps、flowcaps、handihaler、twincaps、aerolizer?、plastiape?rs01型7和plastiape?rs00型8?；趻伾鋭┑闹苿┰诒景l(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素被配制為基于拋射劑的制劑，其在此通常也可稱為“pmdi制劑”。pmdi制劑適合于通過(guò)裝置例如加壓計(jì)量劑量吸入器(pmdi)遞送。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物包含雷帕霉素、拋射劑和植物油或植物油的藥學(xué)上可接受的衍生物。拋射劑優(yōu)選地選自1,1,1,2-四氟乙烷(hfa134a)和1,1,1,2,3,3,3-七氟丙烷(hfa227)，或其混合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，植物油選自橄欖油、紅花油和豆油。雷帕霉素可以是在拋射劑的溶液或混懸液中。在這種情況下，“在混懸液中”指雷帕霉素以分散于拋射劑中的顆粒形式存在。在一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素被微粉化并存在于拋射劑中的混懸液中。在一個(gè)實(shí)施方案中，該制劑還包含濕潤(rùn)劑或共溶劑例如乙醇。在一個(gè)實(shí)施方案中，制劑還包含多羥基醇例如丙二醇。合適的拋射劑是本領(lǐng)域已知的并包括，例如，鹵代烴，例如氟代甲烷、乙烷、丙烷、丁烷、環(huán)丙烷或環(huán)丁烷，特別是1,1,1,2-四氟乙烷(hfa134a)和1,1,1,2,3,3,3-七氟丙烷(hfa227)，或其混合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，制劑包含微粉化雷帕霉素、乙醇、合適的拋射劑例如hfa134a、hfa227，或合適的拋射劑的混合物，和任選的一種或多種表面活性劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，制劑還包含潤(rùn)滑劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，制劑包含雷帕霉素、拋射劑和植物油。在一個(gè)方面，制劑不包含添加劑或表面活性劑。例如，制劑不包含乙醇、多羥基醇(例如丙二醇)，或表面活性劑(例如三油酸脫水山梨醇酯、單油酸脫水山梨醇酯，或油酸)。在一個(gè)實(shí)施方案中，基于拋射劑的制劑包含壓縮空氣、二氧化碳、氮或選自正-丙烷、正-丁烷、異丁烷或其混合物，或1,1,1,2-四氟乙烷(hfa134a)和1,1,1,2,3,3,3-七氟丙烷(hfa227)，或其混合物的液化拋射劑，伴有或沒(méi)有極性共溶劑例如醇。組合物可以是溶液或混懸液。對(duì)于混懸液，所述藥物顆粒具有從0.1至10微米的直徑，少于3.5微米的平均直徑?；趻伾鋭┑闹苿┩ㄟ^(guò)本領(lǐng)域已知的方法，例如在環(huán)境壓力或在高壓條件下，通過(guò)在液體拋射劑中濕法研磨粗糙的雷帕霉素，和任選的添加劑制備。在某些實(shí)施方案中，添加劑是表面活性劑，其起著預(yù)防聚集(結(jié)塊或結(jié)晶)，促進(jìn)均勻給藥，和(或備選地)提供有利的細(xì)顆粒分?jǐn)?shù)(fpf)的作用。在一個(gè)方面，表面活性劑選自三油酸脫水山梨醇酯、單油酸脫水山梨醇酯，或油酸?；蛘?，包含藥物顆粒的干燥粉末通過(guò)如上討論的噴霧干燥或冷凍干燥藥物顆粒的水性分散液并使生成的粉末分散到用于常規(guī)加壓計(jì)量劑量吸入器(pmdis)的合適的拋射劑中制備。在一個(gè)實(shí)施方案中，吸入裝置是respimat?。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的基于拋射劑的氣溶膠雷帕霉素制劑在延長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)針對(duì)雷帕霉素的粒徑生長(zhǎng)或晶體形態(tài)的變化是穩(wěn)定的。制備無(wú)菌單位劑型的方法在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物是無(wú)菌組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，無(wú)菌組合物是無(wú)菌單位劑型。在一個(gè)實(shí)施方案中，無(wú)菌單位劑型是適用于噴霧器裝置中的膠囊。在一個(gè)實(shí)施方案中，最終組合物在其密閉容器中通過(guò)加熱，例如高壓滅菌，或通過(guò)輻照進(jìn)行滅菌。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物的組成部分首先通過(guò)合適的方法包括用于液體組分的無(wú)菌過(guò)濾和用于固體或液體的輻照或高壓滅菌進(jìn)行滅菌，該方法還包括通過(guò)在密閉容器內(nèi)包裝來(lái)維持無(wú)菌組分的無(wú)菌狀態(tài)，在混合容器中以適宜的比例合并各組分，和將生成的產(chǎn)物填充到密閉容器中，全部均在無(wú)菌套件中進(jìn)行。這種方法具有花費(fèi)昂貴和需要困難的無(wú)菌處理技術(shù)的缺點(diǎn)。因此，它主要用于處理顆粒懸浮液或膠體分散液、脂質(zhì)體制劑，或乳劑，其不能通過(guò)用于滅菌的亞微米濾器。最后，在一個(gè)實(shí)施方案中，最終組合物通過(guò)亞微米濾器，優(yōu)選0.2微米濾器過(guò)濾滅菌。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物是經(jīng)由過(guò)濾滅菌方法滅菌的單相水性溶液。相反，乳劑和脂質(zhì)體制劑在過(guò)濾滅菌方法的高剪切條件下通常是不夠穩(wěn)定的，因此這種方法不是優(yōu)選的。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物是被填充到密閉容器，例如聚合物優(yōu)選聚乙烯形成的小瓶，或者玻璃小瓶的單相水性溶液。當(dāng)小瓶是聚合物小瓶時(shí)，高壓滅菌和輻照是不合適的，因?yàn)榉浅？赡茉谒幬锖?或制劑賦形劑中，以及在容器中造成化學(xué)不穩(wěn)定性，并且因?yàn)闀?huì)生成不需要的雜質(zhì)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物通過(guò)不包括加熱(高壓滅菌)或輻照的方法滅菌，而是代之以包括過(guò)濾滅菌的方法。優(yōu)選地，根據(jù)這個(gè)實(shí)施方案，雷帕霉素的單相水性溶液通過(guò)具有孔徑小于或等于0.2微米的濾器過(guò)濾滅菌。在一個(gè)實(shí)施方案中，無(wú)菌濾液被收集在位于無(wú)菌套件中的收集容器中。在一個(gè)實(shí)施方案中，將無(wú)菌濾液從收集容器轉(zhuǎn)移到無(wú)菌套件的密閉容器中。優(yōu)選地，密閉容器是聚合物小瓶，優(yōu)選單位劑量小瓶，且最優(yōu)選聚乙烯單位劑量小瓶。在一個(gè)實(shí)施方案中，聚合物小瓶通過(guò)吹塑成型形成，隨后立即填充，然后在填充后立即熱封。這種技術(shù)也可被稱為“成型-填充-密封(form-fill-seal)”或“吹填(blow-fill)”。這種技術(shù)在本發(fā)明的組合物為雷帕霉素的單相水性溶液的情況下是特別有利的，因?yàn)檫@種方法不需要加熱或輻照，這兩者均可降解所述藥物本身、制劑賦形劑或者密閉容器。肺給藥和劑量本發(fā)明提供通過(guò)吸入給予雷帕霉素至呼吸道、優(yōu)選至肺的治療和預(yù)防人受試者的pah的組合物和方法。肺遞送優(yōu)選地通過(guò)口和咽喉吸入氣溶膠至肺實(shí)現(xiàn)，但也可通過(guò)鼻吸入氣溶膠實(shí)現(xiàn)。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物經(jīng)鼻內(nèi)遞送。在另一個(gè)實(shí)施方案中，氣溶膠經(jīng)口遞送。本發(fā)明的組合物和方法有利地提供靶向遞送治療有效量的雷帕霉素至肺，同時(shí)將雷帕霉素在血和可全身利用的量減少至極低或不能檢測(cè)的水平。在一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的干燥粉末組合物的單一劑量中的雷帕霉素的量是約5至500微克或約100至300微克，或約50至250微克。與口服劑型比較，低劑量雷帕霉素的直接靶向遞送至肺同時(shí)使系統(tǒng)暴露最小化提供了改進(jìn)的治療指數(shù)。在一個(gè)實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的方法，通過(guò)吸入給予雷帕霉素增加雷帕霉素的治療指數(shù)。在這種情況下，如應(yīng)用于人受試者時(shí)，治療指數(shù)是在50%的群體中產(chǎn)生治療效果的劑量(ed50)與產(chǎn)生毒性的劑量(td50)的比率。該比率表示為td50/ed50。在一個(gè)實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的方法，通過(guò)吸入給予雷帕霉素減少一種或多種與口服給予雷帕霉素相關(guān)的毒性，由此增加雷帕霉素的治療指數(shù)。本發(fā)明包括溶液和粉末形式的可氣溶膠化制劑。因此，根據(jù)本發(fā)明的方法，雷帕霉素可以水性氣溶膠、干燥粉末氣溶膠，或基于拋射劑的氣溶膠的形式給予。在一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素的給予劑量在受試者中產(chǎn)生從0.01至0.15ng/ml，從0.075至0.350ng/ml，從0.150至0.750ng/ml，從0.750至1.5ng/ml或從1.5至5ng/ml的血谷水平。在一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素的給予劑量在受試者中產(chǎn)生少于5ng/ml，少于2ng/ml，少于1ng/ml，或少于0.5ng/ml的血谷水平。在一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素的給予劑量足以在肺組織中產(chǎn)生范圍為1ng/g-1ug/g、優(yōu)選地約5ng/g-100ng/g、約5ng/g-約20ng/g或約5ng/g-約30ng/g的雷帕霉素的濃度。在一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素的給予劑量為5-100微克、20-100微克、20-250微克、50-500微克(0.05-0.5毫克)、250-1000微克(0.25-1毫克)或500-2000微克(0.5-2毫克)。在一個(gè)實(shí)施方案中，給予的雷帕霉素的量為小于500微克、小于100微克、小于50微克、小于20微克或小于10微克。優(yōu)選地，給予的雷帕霉素的量為小于0.5毫克或小于0.25毫克。在一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素每日一次給予。在一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素的每日總劑量的范圍為5-100微克、20-250微克、50-500微克(0.05-0.5毫克)、250-1000微克(0.5-1毫克)或500-2000微克(0.5-2毫克)。在一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素的每日總劑量為小于500毫克、小于100微克、小于50微克、小于20微克或小于10微克。在一個(gè)實(shí)施方案中，給予受試者的雷帕霉素的每日總劑量是小于0.5毫克或小于0.25毫克/天。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物每日一次給予受試者。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物每日兩次或三次給予。優(yōu)選地，組合物每日一次或兩次，或小于每日一次給予。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法包括與一種或多種另外的治療劑組合經(jīng)肺途徑給予雷帕霉素，所述一種或多種另外的治療劑選自前列腺素類、磷酸二酯酶抑制劑或內(nèi)皮素拮抗劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述前列腺素類選自前列腺素、血栓烷和前列環(huán)素。所述一種或多種另外的治療劑可通過(guò)與雷帕霉素相同或不同的給藥途徑給予。例如，所述治療劑可通過(guò)吸入、鼻內(nèi)、口服或靜脈內(nèi)給予。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法包括與一種或多種另外的療法組合經(jīng)肺途徑給予雷帕霉素。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述一種或多種另外的療法選自氧療法、血管舒張療法、激素療法、心血管療法、抗增殖療法、自身免疫療法、抗炎療法和抗雌激素療法。在某些實(shí)施方案中，所述方法包括經(jīng)肺給予本發(fā)明的組合物作為主要療法。在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物的給藥是輔助療法。在任一情況下，本發(fā)明的方法涵蓋與一種或多種另外的治療疾病或病癥的療法聯(lián)合給予本發(fā)明的組合物。術(shù)語(yǔ)“療法”和“治療”指可用于預(yù)防、治療、控制或改善疾病或病癥或其一種或多種癥狀的任何方法、方案和/或藥劑。在某些實(shí)施方案中，療法選自氧療法、血管舒張療法、激素療法、心血管療法、抗增殖療法、自身免疫療法、抗炎療法和抗雌激素療法。優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明的方法，與一種或多種另外的療法聯(lián)合給予包含雷帕霉素或其前藥或衍生物的藥物組合物在患有pah受試者中提供協(xié)同反應(yīng)。在這種情況下，術(shù)語(yǔ)“協(xié)同”是指組合的功效比任一單一療法單獨(dú)的加和效果更加有效。在一個(gè)實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的組合雷帕霉素療法的協(xié)同效果允許與其在組合之外的劑量和/或頻率相比，使用較低劑量和/或較低頻率給予組合中的至少一種療法。在另一實(shí)施方案中，協(xié)同效果表現(xiàn)為避免或減少與僅使用組合中的任一療法有關(guān)的不良或不需要的副作用。噴霧器遞送在一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素被配制為適合于霧化的水性溶液并經(jīng)由噴霧器遞送。對(duì)于水性和其它非-加壓液體系統(tǒng)，多種噴霧器(包括小容量噴霧器)可用來(lái)使制劑氣溶膠化。壓縮機(jī)-驅(qū)動(dòng)的噴霧器結(jié)合噴射技術(shù)并使用壓縮空氣以生成液體氣溶膠。這樣的裝置可從例如，healthdynetechnologies,inc.；invacare,inc.；mountainmedicalequipment,inc.；parirespiratory,inc.；madamedical,inc.；puritan-bennet；schuco,inc.，devilbisshealthcare,inc.；和hospitak,inc經(jīng)市售獲得。超聲噴霧器依賴壓電晶體的振動(dòng)形式的機(jī)械能生成可吸入的液體小滴并可從例如，omronhealthcare,inc.和devilbisshealthcare,inc經(jīng)市售獲得。噴霧器可以是例如，常規(guī)氣動(dòng)噴霧器例如噴氣霧化器，或超聲噴霧器，其可包含例如從1至50ml，通常1至10ml的溶液制劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的水性溶液制劑適合于用包括振動(dòng)篩或固定篩的噴霧器給藥。例如，裝置例如aerx?(aradigm)、respimat?(boehringeringelheim)、i-neb?(philips)，或microaire?(omron)，其中藥物溶液用活塞或氣壓，或用壓電晶體通過(guò)孔或網(wǎng)目推出?；蛘撸芤嚎赏ㄟ^(guò)振動(dòng)篩噴霧器例如e-flow?(pari)或aeroneb?go(aerogen)泵出。這些裝置允許比常規(guī)噴霧器小得多的霧化體積，例如10-100ul，和更高的遞送效率。干燥粉末遞送在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的干燥粉末組合物通過(guò)基于非-拋射劑的干燥粉末吸入器(dpi)裝置遞送。在一個(gè)實(shí)施方案中，粉末包含在適用于dpi裝置的明膠或塑料膠囊中，或在泡罩包裝中。在一個(gè)實(shí)施方案中，粉末以單位劑型和以每膠囊從5mg至100mg粉末的劑量單位提供。在另一個(gè)實(shí)施方案中，干燥粉末包含在多-劑量干燥粉末吸入裝置的貯庫(kù)中。在一個(gè)實(shí)施方案中，吸入器裝置包含氣溶膠小瓶，其提供有適合于遞送計(jì)量劑量，例如10-100μl，如25-50μl的組合物的閥，即一種稱為計(jì)量劑量吸入器的裝置。在一個(gè)實(shí)施方案中，dpi裝置是基于泡罩的裝置例如gyrohaler?或omnihaler?(二者購(gòu)自vectura)，基于貯庫(kù)的裝置例如clickhaler?或duohaler?(vectura)，和arcus?吸入器(civitastherapeutics)。在一個(gè)實(shí)施方案中，dpi裝置選自pulmatrix?，和hovionetwincaps和xcaps?。在一個(gè)實(shí)施方案中，裝置選自xcaps、plastiape?rs01型7，和plastiape?rs00型8。在一個(gè)實(shí)施方案中，dpi裝置選自accuhaler?、aerolizer?、plastiape?rs01型7、plastiape?rs00型8、conixtm、rotahaler?、twincaps?、xcaps?、flowcaps?、turbuhaler?、nexthaler?、cyclohaler?、revolizertm、diskhaler?、diskus?、spinhaler、handihaler?、microdoseinhaler、gyrohaler?、omnihaler?、clickhaler?，或duohaler?(vectura)，或呼吸致動(dòng)的arcus?吸入器(civitastherapeutics)。在一個(gè)實(shí)施方案中，dpi裝置選自arcus?、aspirair?、axahaler?、breezhaler?、clickhaler?、conixdry?、cricket?、dreamboat?、genuair?、gemini?、inspiromatic?、isperse?、microdose?、nextdpi?、prohaler?、pulmojet?、pulvinal?、solis?、taifun?、taperdry?、trivai?、novolizer?、podhaler?、skyehaler?、spiromax?、twincaps/flowcaps?，和turbuhaler?。在一個(gè)實(shí)施方案中，dpi裝置適合于從包含劑量單位的干燥粉末的膠囊或泡罩，或多-劑量干燥粉末吸入裝置遞送干燥粉末，所述裝置適合于每次驅(qū)動(dòng)遞送例如5-25mg干燥粉末。pmdi遞送在另一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素以氣溶膠化顆粒的形式從包含上文關(guān)于基于拋射劑的制劑所述的合適拋射劑的加壓容器或分配器遞送。在一個(gè)實(shí)施方案中，吸入器是拋射劑驅(qū)動(dòng)的吸入器，例如pmdi裝置，其在每次驅(qū)動(dòng)時(shí)釋放計(jì)量劑量的雷帕霉素。一個(gè)典型的pmdi裝置包括包含藥物的小罐、藥物計(jì)量閥和管嘴。在這個(gè)實(shí)施方案的一個(gè)方面，雷帕霉素被配制為在拋射劑中的混懸液。在這個(gè)實(shí)施方案的情況下，雷帕霉素被制成懸浮于液化拋射劑或拋射劑共混物中的細(xì)粉末。然后將混懸液在足夠的壓力下貯存于密封小罐中，以維持液體形式的拋射劑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，雷帕霉素被配制為溶液。在這個(gè)實(shí)施方案的情況下，雷帕霉素溶解于液化拋射劑或拋射劑共混物中。在一個(gè)實(shí)施方案中，制劑還包含適合穩(wěn)定制劑一定的時(shí)間以防止沉降、乳狀液分層或絮凝的量的穩(wěn)定劑，這段時(shí)間足以在攪動(dòng)制劑后允許雷帕霉素的可重復(fù)給藥。穩(wěn)定劑可以基于氣溶膠制劑總重量一百萬(wàn)份之約10重量份-約5000重量份的量過(guò)量存在。在一個(gè)實(shí)施方案中，液體載體是1,1,1,2-四氟乙烷、1,1,1,2,3,3,3-七氟丙烷或其混合物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，液體載體是烴(例如正-丁烷、丙烷、異戊烷，或其混合物)。組合物還可包含共溶劑(例如乙醇或其它合適的共溶劑)。在本發(fā)明方法的一個(gè)實(shí)施方案中，包含雷帕霉素的氣溶膠制劑還包含另外的藥物。在這個(gè)實(shí)施方案的一個(gè)方面，另外的藥物選自皮質(zhì)類固醇、雌激素受體拮抗劑、抗膽堿能藥物、β-受體激動(dòng)劑、非-甾體類抗炎藥、大環(huán)內(nèi)酯類抗生素、支氣管擴(kuò)張劑、白三烯受體抑制劑、毒蕈堿拮抗劑、硫酸色甘酸，及其組合。添加劑除了存在于制劑中的任何載體或稀釋劑(例如乳糖或甘露醇)外，本發(fā)明的氣溶膠組合物還可包含一種或多種添加劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，一種或多種添加劑包含或由一種或多種表面活性劑組成。表面活性劑通常具有一或多個(gè)長(zhǎng)脂肪鏈例如脂肪酸，其能使它們直接插入細(xì)胞的脂質(zhì)結(jié)構(gòu)以增強(qiáng)藥物的滲透和吸收。一個(gè)通常用來(lái)表征表面活性劑的相對(duì)親水性和疏水性的經(jīng)驗(yàn)參數(shù)是親水性-親脂性平衡值(“hlb”值)。具有較低hlb值的表面活性劑是更加疏水的，并在油中具有較大的溶解性，而具有較高h(yuǎn)lb值的表面活性劑是更加親水的，并在水性溶液具有較大的溶解性。因此，親水性表面活性劑通常被認(rèn)為是具有hlb值大于約10的那些化合物，和疏水性表面活性劑通常是具有hlb值少于約10的那些化合物。然而，這些hlb值只是一種指導(dǎo)，因?yàn)閷?duì)于許多表面活性劑，hlb值可相差高達(dá)約8個(gè)hlb單位，這取決于所選擇的測(cè)定hlb值的經(jīng)驗(yàn)方法。在用于本發(fā)明的氣溶膠組合物的表面活性劑中有聚乙二醇(peg)-脂肪酸和peg-脂肪酸一和二酯、peg甘油酯、醇-油酯交換產(chǎn)物、聚甘油脂肪酸、丙二醇脂肪酸酯、甾醇和甾醇衍生物、聚乙二醇脫水山梨醇脂肪酸酯、聚乙二醇烷基醚、糖及其衍生物、聚乙二醇烷基酚、聚氧乙烯-聚氧丙烯(poe-pop)嵌段共聚物、脫水山梨醇脂肪酸酯、離子表面活性劑、脂溶性維生素和它們的鹽、水溶性維生素和它們的兩性分子衍生物、氨基酸和它們的鹽，和有機(jī)酸和它們的酯和酐。這些中的每一個(gè)在下文更詳細(xì)地描述。peg脂肪酸酯盡管聚乙二醇(peg)本身不作為表面活性劑起作用，但多種peg-脂肪酸酯具有有用的表面活性劑特性。在peg-脂肪酸一酯中，月桂酸、油酸和硬脂酸的酯在本發(fā)明的實(shí)施方案中是最有用的。優(yōu)選的親水性表面活性劑包括peg-8月桂酸酯、peg-8油酸酯、peg-8硬脂酸酯、peg-9油酸酯、peg-10月桂酸酯、peg-10油酸酯、peg-12月桂酸酯、peg-12油酸酯、peg-15油酸酯、peg-20月桂酸酯和peg-20油酸酯。hlb值在4-20的范圍內(nèi)。聚乙二醇脂肪酸二酯也適合在本發(fā)明的實(shí)施方案的組合物中用作表面活性劑。最優(yōu)選的親水性表面活性劑包括peg-20二月桂酸酯、peg-20二油酸酯、peg-20二硬脂酸酯、peg-32二月桂酸酯和peg-32二油酸酯。hlb值在5-15的范圍內(nèi)。一般來(lái)說(shuō)，表面活性劑的混合物，包括兩種或更多種市售表面活性劑的混合物以及表面活性劑與另一種添加劑或多種添加劑的混合物，在本發(fā)明的實(shí)施方案中也是有用的。幾種peg-脂肪酸酯作為一-和二酯的混合物市售。聚乙二醇甘油脂肪酸酯優(yōu)選的親水性表面活性劑是peg-20甘油月桂酸酯、peg-30甘油月桂酸酯、peg-40甘油月桂酸酯、peg-20甘油油酸酯，和peg-30甘油油酸酯。醇-油酯交換產(chǎn)物大量不同程度的疏水性或親水性的表面活性劑可通過(guò)醇或多元醇與多種天然和/或氫化油的反應(yīng)來(lái)制備。最常見(jiàn)的是，所用的油是蓖麻油或氫化蓖麻油，或食用植物油例如玉米油、橄欖油、花生油、棕櫚仁油、杏樹(shù)仁油(apricotkerneloil)，或杏仁油(almondoil)。優(yōu)選的醇包括甘油、丙二醇、乙二醇、聚乙二醇、山梨醇，和季戊四醇。在這些醇-油酯交換的表面活性劑中，優(yōu)選的親水性表面活性劑是peg-35蓖麻油(incrocas-35)、peg-40氫化蓖麻油(cremophorrh40)、peg-25三油酸酯(tagat.rtm.to)、peg-60玉米甘油酯(crovolm70)、peg-60杏仁油(crovola70)、peg-40棕櫚仁油(crovolpk70)、peg-50蓖麻油(emalexc-50)、peg-50氫化蓖麻油(emalexhc-50)、peg-8辛酸/癸酸甘油酯(labrasol)，和peg-6辛酸/癸酸甘油酯(softigen767)。在這種類別中的優(yōu)選的疏水性表面活性劑包括peg-5氫化蓖麻油、peg-7氫化蓖麻油、peg-9氫化蓖麻油、peg-6玉米油(labrafil.rtm.m2125cs)、peg-6杏仁油(labrafil.rtm.m1966cs)、peg-6杏仁油(labrafil.rtm.m1944cs)、peg-6橄欖油(labrafil.rtm.m1980cs)、peg-6花生油(labrafil.rtm.m1969cs)、peg-6氫化棕櫚仁油(labrafil.rtm.m2130bs)、peg-6棕櫚仁油(labrafil.rtm.m2130cs)、peg-6三油精(labrafil.rtm.bm2735cs)、peg-8玉米油(labrafil.rtm.wl2609bs)、peg-20玉米甘油酯(crovolm40)，和peg-20杏仁甘油酯(crovola40)。聚甘油脂肪酸脂肪酸的聚甘油酯也是用于本發(fā)明的實(shí)施方案的合適表面活性劑。在聚甘油脂肪酸酯中，優(yōu)選的疏水性表面活性劑包括聚甘油油酸酯(plurololeique)、聚甘油-2二油酸酯(nikkoldgdo)、聚甘油-10三油酸酯、聚甘油硬脂酸酯、聚甘油月桂酸酯、聚甘油肉豆蔻酸酯、聚甘油棕櫚酸酯，和聚甘油亞油酸酯。優(yōu)選的親水性表面活性劑包括聚甘油-10月桂酸酯(nikkoldecaglyn1-l)、聚甘油-10油酸酯(nikkoldecaglyn1-0)，和聚甘油-10一、二油酸酯(caprol.rtm.peg860)、聚甘油-10硬脂酸酯、聚甘油-10月桂酸酯、聚甘油-10肉豆蔻酸酯、聚甘油-10棕櫚酸酯、聚甘油-10亞油酸酯、聚甘油-6硬脂酸酯、聚甘油-6月桂酸酯、聚甘油-6肉豆蔻酸酯、聚甘油-6棕櫚酸酯，和聚甘油-6亞油酸酯。聚甘油聚蓖麻醇酸酯(polymuls)也是優(yōu)選的表面活性劑。丙二醇脂肪酸酯丙二醇和脂肪酸的酯是用于本發(fā)明的實(shí)施方案的合適表面活性劑。在這類表面活性劑中，優(yōu)選的疏水性表面活性劑包括丙二醇一月桂酸酯(lauroglycolfcc)、丙二醇蓖麻醇酸酯(propymuls)、丙二醇一油酸酯(myverolp-06)、丙二醇二辛酸酯/二癸酸酯(captex.rtm.200)，和丙二醇二辛酸酯(captex.rtm.800)。甾醇和甾醇衍生物甾醇和甾醇的衍生物是用于本發(fā)明的實(shí)施方案的合適表面活性劑。優(yōu)選的衍生物包括聚乙二醇衍生物。這類的優(yōu)選表面活性劑是peg-24膽固醇醚(solulanc-24)。聚乙二醇脫水山梨醇脂肪酸酯多種peg-脫水山梨醇脂肪酸酯是可利用的并適合用作本發(fā)明的實(shí)施方案中的表面活性劑。在peg-脫水山梨醇脂肪酸酯中，優(yōu)選的表面活性劑包括peg-20脫水山梨醇一月桂酸酯(吐溫-20)、peg-20脫水山梨醇一棕櫚酸酯(吐溫-40)、peg-20脫水山梨醇一硬脂酸酯(吐溫-60)，和peg-20脫水山梨醇單油酸酯(吐溫-80)。聚乙二醇烷基醚聚乙二醇和烷基醇的醚是用于本發(fā)明的實(shí)施方案的合適表面活性劑。優(yōu)選的醚包括peg-3油烯基醚(volpo3)和peg-4月桂基醚(brij30)。糖及其衍生物糖衍生物是用于本發(fā)明的實(shí)施方案的合適表面活性劑。在這類中的優(yōu)選的表面活性劑包括蔗糖一棕櫚酸酯、蔗糖一月桂酸酯、癸酰基-n-甲基葡糖酰胺、正-癸基-β-d-吡喃葡萄糖苷、正-癸基-β-d-吡喃麥芽糖苷、正-十二烷基-β-d-吡喃葡萄糖苷、正-十二烷基-β-d-麥芽糖苷、庚酰基-n-甲基葡糖酰胺、正-庚基-β-d-吡喃葡萄糖苷、正-庚基-β-d-硫代葡萄糖苷、正-己基-β-d-吡喃葡萄糖苷、壬?；?n-甲基葡糖酰胺、正-壬基-β-d-吡喃葡萄糖苷、辛?；?n-甲基葡糖酰胺、正-辛基-β-d-吡喃葡萄糖苷，和辛基-β-d-硫代吡喃葡萄糖苷。聚乙二醇烷基酚幾種peg-烷基酚表面活性劑是可獲得的，例如peg-10-100壬基酚和peg-15-100辛基酚醚、泰洛沙泊、辛苯聚醇、壬苯醇醚，并適合用于本發(fā)明的實(shí)施方案中。聚氧乙烯-聚氧丙烯(poe-pop)嵌段共聚物poe-pop嵌段共聚物是一類獨(dú)特的聚合物表面活性劑。表面活性劑的獨(dú)特結(jié)構(gòu)，具有以良好-限定的比例和位置的親水性poe和疏水性pop部分，提供適合用于本發(fā)明實(shí)施方案的廣泛種類的表面活性劑。這些表面活性劑可以各種商品名，包括synperonicpe系列(ici)；pluronic.rtm.系列(basf)、emkalyx、lutrol(basf)、supronic、monolan、pluracare和plurodac獲得。用于這些聚合物的通用術(shù)語(yǔ)是“泊洛沙姆”(cas9003-11-6)。這些聚合物具有下式：ho(c2h4o)a(c3h6o)b(c2h4o)ah，其中“a”和“b”分別表示聚氧乙烯和聚氧丙烯單元的數(shù)目。這種類別的優(yōu)選親水性表面活性劑包括泊洛沙姆108、188、217、238、288、338，和407。在這種類別中的優(yōu)選疏水性表面活性劑包括泊洛沙姆124、182、183、212、331，和335。脫水山梨醇脂肪酸酯脂肪酸的脫水山梨醇酯是用于本發(fā)明的實(shí)施方案的合適表面活性劑。在這些酯中，優(yōu)選的疏水性表面活性劑包括脫水山梨醇一月桂酸酯(arlacel20)、脫水山梨醇一棕櫚酸酯(span-40)、脫水山梨醇一油酸酯(span-80)、脫水山梨醇一硬脂酸酯。脫水山梨醇一棕櫚酸酯，一種維生素c的兩親的衍生物(其具有維生素c活性)，可在增溶系統(tǒng)中發(fā)揮兩種重要的功能。第一，它具有有效的可調(diào)節(jié)微環(huán)境的極性基團(tuán)。這些極性基團(tuán)是相同的基團(tuán)，其使得維生素c本身(抗壞血酸)成為可獲得的最易溶于水的有機(jī)固體化合物之一：抗壞血酸可以約30wt/wt%溶于水(例如，非常接近氯化鈉的溶解性)。并且第二，當(dāng)ph增加時(shí)，部分抗壞血酸棕櫚酸酯會(huì)轉(zhuǎn)化為更易溶解的鹽，例如抗壞血酸棕櫚酸鈉。離子表面活性劑離子表面活性劑，包括陽(yáng)離子、陰離子和兩性離子表面活性劑，是用于本發(fā)明實(shí)施方案的合適的親水性表面活性劑。優(yōu)選的離子表面活性劑包括季銨鹽、脂肪酸鹽和膽鹽。特別地，優(yōu)選的離子表面活性劑包括苯扎氯銨、芐索氯銨、西吡氯銨、十二烷基三甲基溴化銨、十二烷基硫酸鈉、二烷基甲基芐基氯化銨、依酚氯銨、度米芬；磺基琥珀酸鈉的二烷基酯、二辛基磺基琥珀酸鈉、膽酸鈉和牛磺膽酸鈉。這些季銨鹽是優(yōu)選的添加劑。它們可溶于有機(jī)溶劑(例如乙醇、丙酮，和甲苯)和水二者中。這對(duì)醫(yī)學(xué)裝置涂料是特別有用的，因?yàn)樗?jiǎn)化了制備和涂布工藝并具有良好的粘附特性。水不溶性藥物通常溶于有機(jī)溶劑。脂溶性維生素及其鹽以維生素的各種形式和原維生素形式中的許多形式存在的維生素a、d、e和k被認(rèn)為是脂溶性維生素，并且除了這些外，許多其它的維生素和維生素源或近親也是脂溶性的并具有極性基團(tuán)，和相對(duì)高的辛醇-水分配系數(shù)。明顯地，這樣的化合物的一般類別具有安全使用的歷史和高的收益風(fēng)險(xiǎn)比，使得它們可用作本發(fā)明的實(shí)施方案中的添加劑。脂溶性維生素衍生物和/或來(lái)源的以下實(shí)例也可用作添加劑：α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚、醋酸生育酚、麥角甾醇、1-α-羥基膽鈣化醇、維生素d2、維生素d3、α-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素、γ-胡蘿卜素、維生素a、呋喃硫胺、羥甲基核黃素、奧托硫胺、丙硫硫胺、核黃素、乙烯硫莫、二氫維生素k1、醋酸甲萘氫醌、丁酸甲萘氫醌(menadioldibutyrate)、硫酸甲萘氫醌(menadioldisulfate)、甲萘氫醌、維生素k1、維生素k1氧化物、維生素k2，和維生素k—s(ii)。葉酸也屬于這種類型，盡管它在生理ph下是水溶性的，它可被配制為游離酸形式。用于本發(fā)明實(shí)施方案中的脂溶性維生素的其它衍生物可容易地經(jīng)由熟知的與親水性分子的化學(xué)反應(yīng)獲得。水溶性維生素和它們的兩親的衍生物維生素b、c、u、泛酸、葉酸，和一些以許多它們的各種形式存在的甲萘醌-相關(guān)維生素/原維生素被認(rèn)為是水溶性維生素。這些也可與疏水性部分或多價(jià)離子結(jié)合或絡(luò)合成具有相對(duì)高的辛醇-水分配系數(shù)和極性基團(tuán)的兩性分子形式。此外，這樣的化合物可具有低毒性和高收益-風(fēng)險(xiǎn)比，使得它們可用作本發(fā)明的實(shí)施方案中的添加劑。這些化合物的鹽也可用作本發(fā)明的添加劑。水溶性維生素和衍生物的實(shí)例包括，但不限于，乙酰硫胺、苯磷硫胺、泛酸、西托硫胺、環(huán)硫胺、泛醇、煙酰胺、煙酸、5-磷酸吡哆醛、抗壞血酸煙酰胺、核黃素、磷酸核黃素、硫胺、葉酸、磷酸甲萘氫醌、甲萘醌亞硫酸氫鈉、甲萘多昔(menadoxime)、維生素b12、維生素k5、維生素k6、維生素k6，和維生素u。此外，如上所提及的，葉酸作為鹽在廣泛的ph范圍(包括生理ph)內(nèi)是水溶性的。其中存在氨基或其它堿性基團(tuán)的化合物可容易地通過(guò)與含有疏水基團(tuán)的酸例如脂肪酸(特別是月桂酸、油酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸，或2-乙基己酸)、低-溶解性氨基酸、苯甲酸、水楊酸，或酸性脂溶性維生素(例如核黃素)的簡(jiǎn)單的酸-堿反應(yīng)來(lái)修飾。其它的化合物可通過(guò)這樣一種酸與維生素上的另一基團(tuán)例如羥基反應(yīng)形成鍵例如酯鍵等而獲得。包含酸性基團(tuán)的水溶性維生素的衍生物可在與含有疏水基團(tuán)的反應(yīng)物例如硬脂胺或核黃素的反應(yīng)中生成，例如產(chǎn)生可用于本發(fā)明的實(shí)施方案中的化合物。棕櫚酸酯鏈與維生素c的鍵接產(chǎn)生抗壞血酸棕櫚酸酯。氨基酸和它們的鹽丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、組氨酸、脯氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸、纈氨酸，和它們的衍生物是本發(fā)明實(shí)施方案中的其它有用的添加劑。某些以它們的兩性離子形式和/或以具有單價(jià)或多價(jià)離子的鹽形式存在的氨基酸具有極性基團(tuán)，相對(duì)高的辛醇-水分配系數(shù)，并可用于本發(fā)明的實(shí)施方案中。在本公開(kāi)內(nèi)容的情況下，我們采用“低-溶解性氨基酸”意指氨基酸在未緩沖的水中具有低于約4%(40mg/ml)的溶解性。這些包括胱氨酸、酪氨酸、色氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酸和甲硫氨酸。有機(jī)酸和它們的酯和酐實(shí)例是乙酸和酐、苯甲酸和酐、乙酰基水楊酸、二氟尼柳、2-羥基乙基水楊酸酯、二乙三胺五乙酸二酐、乙二胺四乙酸二酐、馬來(lái)酸和酐、琥珀酸和酐、二甘醇酸酐、戊二酸酐、抗壞血酸、檸檬酸、酒石酸、乳酸、草酸、天冬氨酸、煙酸、2-吡咯烷酮-5-甲酸和2-吡咯烷酮。這些酯和酐可溶于有機(jī)溶劑例如乙醇、丙酮、甲乙酮、乙酸乙酯。具有這些酯和酐的水不溶性藥物可溶于有機(jī)溶劑，然后容易地涂布在醫(yī)療裝置上，然后在高ph條件下水解。經(jīng)水解的酐或酯為酸或醇，其為水溶性的并可有效地?cái)y帶所述藥物離開(kāi)裝置進(jìn)入血管壁。實(shí)施例本發(fā)明在以下實(shí)施例中被進(jìn)一步描述，所述實(shí)施例不限制在權(quán)利要求書描述的本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1：水性氣溶膠制劑雷帕霉素的示例性水性制劑使用以下組分制備組分量(g)質(zhì)量分?jǐn)?shù)(w/w)雷帕霉素0.10.01%乙醇25025%丙二醇25025%聚山梨醇酯800.020.002%水50050%總計(jì)1000混合程序：在一個(gè)1000ml琥珀色容量瓶中，混合250丙二醇與250乙醇直至均勻。然后依次先溶解100mg雷帕霉素，然后溶解20mg聚山梨醇酯80于丙二醇和乙醇溶液中。加入水使體積為1000ml并攪拌或超聲處理直至均勻和所有的雷帕霉素溶解。在控制的溫度下避光貯存。實(shí)施例2：干燥粉末制劑批號(hào)06rp68.hq00008和06rp68.hq00009。這兩個(gè)制劑各自是分散到乳糖載體顆粒表面的微粉化藥物(雷帕霉素)顆粒的共混物。各批的最終組成包含分別具有平均直徑約2.60微米和3.00微米的1%(w/w)藥物顆粒。具有合適的尺寸范圍的藥物顆粒通過(guò)如下所述的濕拋光(06rp68.hq00008)或噴射研磨(06rp68.hq00009)制得。雖然這個(gè)實(shí)施例使用1%(w/w)雷帕霉素，但范圍0.5-20%是可行的。載體顆粒由兩種載體，以95.5%(w/w)存在并具有約30-100微米的粒徑(等同于球徑)的respitose?sv003，和以5.5%(w/w)存在并具有少于10微米的粒徑(等同于球徑)的respitose?lh300(lactohale300)的共混物組成?；旌虾螅瑴y(cè)定共混物以證實(shí)均勻性和1%的藥物含量。為減少藥物顆粒聚集和幫助藥物顆粒的氣溶膠化，任選地包括幾種其它的賦形劑。任選的賦形劑包括磷脂，例如二棕櫚酰基磷脂酰膽堿(dppc)和卵磷脂，和脂肪酸金屬鹽，例如硬脂酸鎂。可以將這些賦形劑以0.01至0.5%的賦形劑與大載體顆粒的重量比范圍涂布在載體顆粒上。膠囊填充：將得自批號(hào)06rp68.hq00008和批號(hào)06rp68.hq00009的20毫克粉末共混物裝載到3號(hào)尺寸的hpmc膠囊中以產(chǎn)生藥物產(chǎn)品。對(duì)于這些共混物，可行的是將5-35毫克藥物裝載到3號(hào)尺寸膠囊中并在plastiape?rs01型7或plastiape?rs00型8裝置中以每分鐘范圍從60至100升的流速驅(qū)動(dòng)時(shí)，從膠囊排空大于95%的載荷的共混物。實(shí)施例3：在經(jīng)口咽吸入(opa)和口服管飼給藥至c57bl6小鼠后，在肺和血中的雷帕霉素的測(cè)定進(jìn)行該研究以在經(jīng)管飼和口咽吸入(opa)給予極高靶劑量1mg/kg的雷帕霉素后，評(píng)價(jià)雄性c57bl/6小鼠中雷帕霉素的濃度。已開(kāi)發(fā)使用帶有串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)的液相色譜(lc-ms/ms)，在小鼠血和肺勻漿中分析雷帕霉素的方法。在小鼠血中，使用一式三份濃度，在1ng/ml和2000ng/ml之間，和在小鼠肺勻漿中，在2ng/ml和20,000ng/ml之間分析雷帕霉素校準(zhǔn)曲線。準(zhǔn)確度、精密度和線性度均在預(yù)期范圍內(nèi)。在試驗(yàn)性研究中，媒介按每只小鼠50μl的體積經(jīng)由口咽吸入遞送至肺的效率通過(guò)給予伊文思藍(lán)染料(evansbluedye)來(lái)評(píng)價(jià)。目測(cè)證實(shí)藍(lán)色染料僅存在于肺中，而在胃中缺乏藍(lán)色染料證實(shí)在所用的程序中避免了遞送至胃。雷帕霉素經(jīng)管飼以1.0mg/kg的劑量口服或者經(jīng)由opa給予雄性c57bl/6小鼠(n=6)?？诜┝渴褂盟幬锟诜后w制劑rapamuneoral?(pfizer)配制。用于opa的雷帕霉素通過(guò)將試驗(yàn)品溶于適量的乙醇中，然后加入適量的水，制備1mg雷帕霉素/ml濃度的10%乙醇溶液來(lái)制備。在異氟烷麻醉下，將雷帕霉素經(jīng)opa給予2組各6只雄性c57bl/6小鼠。另一組6只小鼠僅接受媒介(10%乙醇在水中)。在給予后1小時(shí)，對(duì)口服和opa接受雷帕霉素的一組6只小鼠實(shí)施安樂(lè)死，并經(jīng)心臟穿刺獲得血液，并移出肺。觀察每組經(jīng)opa給予雷帕霉素或媒介的剩余小鼠另外3天。在72-小時(shí)的尸檢時(shí)，通過(guò)心臟穿刺獲得血液并移出肺。在給藥后的72h期間，在雷帕霉素-或媒介-處理的小鼠中未觀察到不利作用。在收集的血和在肺勻漿中通過(guò)lc-ms/ms檢測(cè)雷帕霉素的濃度。在opa雷帕霉素后1小時(shí)，肺組織(3794±1259ng/g組織)中的雷帕霉素濃度為血(641±220ng/ml)中的大約6倍。在口服給予類似劑量的雷帕霉素后，1-h的肺和血的雷帕霉素濃度分別為71±43ng/g和23±16ng/ml。在opa后，肺勻漿濃度為在口服給予相同高劑量(1mg/kg)的雷帕霉素后測(cè)量的那些的53倍。數(shù)據(jù)提示遞送較低劑量的雷帕霉素至肺(并未使系統(tǒng)飽和的劑量水平)將得到可通過(guò)口服給藥實(shí)現(xiàn)的肺中的雷帕霉素水平，但血中的雷帕霉素顯著地低于口服給藥時(shí)出現(xiàn)的。材料和方法試驗(yàn)物質(zhì)：西羅莫司(rapamune，雷帕霉素)mw914.172、c51n79no12,cas號(hào)：53123-88-9。來(lái)源(用于口服管飼)：用于口服給藥的rapamuneoral?(pfizer)，批號(hào):mwgt,失效期：07/16。來(lái)源(用于opa)：雷帕霉素(西羅莫司)固體,lclaboratories,woburnma,批號(hào)：asw-127,失效期：12/2023。動(dòng)物：雄性c57bl/6小鼠，大約8周齡，來(lái)自charlesriverlaboratories,inc,raleigh,nc。對(duì)動(dòng)物喂飼認(rèn)證的purina嚙齒動(dòng)物飼料#5002并自由供給自來(lái)水。對(duì)每批飼料的營(yíng)養(yǎng)素水平和可能的污染物的分析由供應(yīng)商進(jìn)行，由研究指導(dǎo)者檢查，并保持在研究記錄中。飼料在約60?70℉下貯存，且使用期從研磨之日起不超過(guò)6個(gè)月。小鼠被關(guān)養(yǎng)(每籠1只)在帶有不銹鋼棒蓋的、容納一個(gè)水瓶的聚碳酸酯籠中。用于小鼠的籠子尺寸為約11.5"x7.5"x5"高(70平方英寸地板空間)。接觸襯墊為sani-chips硬木碎屑(p.j.murphyforestproductsco.;montville,nj)。小鼠在用于研究前檢疫5天的時(shí)間。獸醫(yī)或有資格的被指定者檢查動(dòng)物，然后將它們從檢疫中釋放。使用自動(dòng)系統(tǒng)(具有signal?軟件的修訂本4.4.1的siebe/barber-colmannetwork8000系統(tǒng)[siebeenvironmentalcontrols(sec)/barber-colmancompany;lovespark,il])，連續(xù)監(jiān)測(cè)、控制和記錄rti動(dòng)物房的溫度和相對(duì)濕度。目標(biāo)環(huán)境范圍是64-79℉(18℃-26℃)的溫度和30-70%的相對(duì)濕度，伴有每天12-h的光照循環(huán)。在生命期結(jié)束時(shí)，通過(guò)過(guò)度暴露于二氧化碳使小鼠安樂(lè)死。試驗(yàn)化學(xué)劑制備：伊文思藍(lán)以0.5%w/v在無(wú)菌蒸餾水制備。rapamuneoral?作為口服給藥供應(yīng)給予。使雷帕霉素(固體)溶于乙醇并用無(wú)菌蒸餾水稀釋，以提供在10%乙醇中的0.5mg/ml的最終濃度。給藥：每只動(dòng)物在給藥之前稱重以測(cè)定欲給予的劑量的量。單一管飼劑量使用配置有頂端球形的20-g不銹鋼管飼給藥針(popper&sonsinc.,newhydepark,ny)的100-μl玻璃注射器(hamilton,reno,nv)給予。給予每只動(dòng)物的劑量從充滿注射器的重量減去排空注射器的重量確定。記錄給藥時(shí)間。動(dòng)物的給藥相隔開(kāi)來(lái)以允許在適當(dāng)?shù)臅r(shí)間收集血。給予每組的劑量制劑在下面顯示。對(duì)于口咽吸入組動(dòng)物，在異氟烷麻醉下，使用配置有頂端球形的24-g不銹鋼管飼給藥針(popper&sonsinc.,newhydepark,ny)的100μl玻璃注射器(hamilton,reno,nv)，給予每只小鼠的單一劑量的雷帕霉素(50μl)。在投藥之前對(duì)小鼠稱重，而給予的雷帕霉素劑量按重量記錄。每只小鼠用異氟烷麻醉，鉗制，并使口張開(kāi)。用鑷子將舌頭保持在口的一側(cè)，而劑量被緩慢地注入到口腔的遠(yuǎn)側(cè)部分。鼻孔用手指擋住呼吸兩次，以確保吸入(rao等,2003)。表1：研究設(shè)計(jì)概述劑量組途徑化合物動(dòng)物數(shù)靶劑量(mg/ml)靶劑量(ul)靶劑量(mg/kg)收集時(shí)間收集樣品1oa伊文思藍(lán)6-5001血,肺2oa雷帕霉素60.5501.01血,肺3管飼口服雷帕霉素61.0251.01血,肺4oa媒介60501.072血,肺5oa雷帕霉素60.5501.072血,肺收集血和肺樣品：在研究終止時(shí)(在給藥后1或72h)，小鼠經(jīng)暴露于co2麻醉，血液通過(guò)心臟穿刺收集，用edta二鉀作為抗凝血?jiǎng)?。切除肺組織并分成右肺和左肺。左肺用于分析，和右肺在液氮中快速冷凍并于-70℃貯存用于進(jìn)一步分析。經(jīng)lc-ms/ms分析樣品的雷帕霉素：用于分析肺和血中的雷帕霉素的lc-ms/ms方法基于wu等(2012)公布的方法制定。不同于公布的方法，血和肺勻漿的體積顯著減少。曲安西龍被用作內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)。經(jīng)稱重的肺樣品在勻化器中用2.8-mm滾珠，在spexsampleprep2010geno/grinder中，用組織+去離子水(1:3w/v)勻化制備肺勻漿。排列標(biāo)準(zhǔn)品的濃度，以使每一標(biāo)準(zhǔn)品來(lái)自備選的儲(chǔ)備標(biāo)準(zhǔn)。6-點(diǎn)校準(zhǔn)曲線，每一點(diǎn)按一式三份獲得，被用于分析物定量。采用有或沒(méi)有權(quán)重的簡(jiǎn)單的線性回歸模型用于曲線擬合。確定的濃度范圍在血中是1-2000ng/ml和在肺勻漿中是2-2000ng/ml。以下方法性能參數(shù)被認(rèn)為是可接受的；對(duì)于濃度-反應(yīng)關(guān)系，決定系數(shù)，r2，≥0.98；標(biāo)稱值的≤±15%(對(duì)于loq以上的濃度)或≤±20%(對(duì)于loq的濃度)的精確度。在所有的分析中r2是大于0.999。三十(30)μl基質(zhì)、30μl摻加溶液(spikingsolution)(用于空白的甲醇和樣品)、10μl內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)溶液(在meoh中)和90μlmeoh被移液到微量離心管中，短暫渦流，然后于~4℃以10,000rpm離心6分鐘。上清液的等分液(90μl)被轉(zhuǎn)移至lc小瓶插入物，然后經(jīng)lc-ms/ms分析(表2)。表2：lc-ms/ms方法柱具有vanguard2.1x5mmhsst31.8μm的watersacquityuplchsst31.8μm,2.1x50mm.流動(dòng)相a10mm乙酸銨在水中，0.1%乙酸流動(dòng)相bmeoh注射體積2ul流速0.5ml/min梯度70%a1min，線性梯度至5%a，1-3min,保持1min，線性梯度至70%a，4-5.1min，和保持在70%直至6min雷帕霉素mrm931.70→864.70曲安西龍(ismrm)395.30→357.20數(shù)據(jù)收集和報(bào)告：收集研究數(shù)據(jù)并報(bào)告在debra?系統(tǒng)版本5.5.10.72(lablogicsystemsltd.,sheffield,england)中。這包括動(dòng)物體重、給予劑量、給藥時(shí)間和樣品收集時(shí)間的數(shù)據(jù)。給予劑量的計(jì)算和樣品收集時(shí)間用debra?系統(tǒng)報(bào)告。結(jié)果雷帕霉素分析：雷帕霉素的分析建立在30μl的血和肺勻漿的樣品體積上。示例色譜圖顯示血和肺中的雷帕霉素和內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)(圖1和2)。在生成研究樣品之前，生成針對(duì)肺和血的一式3份重復(fù)校準(zhǔn)曲線，以驗(yàn)證方法性能。校準(zhǔn)范圍對(duì)于血是1.0-2000ng/ml和對(duì)于肺勻漿是1-20,000ng/ml。肺勻漿用1g肺組織在3體積水中勻化，生成1:4組織勻漿來(lái)制備。在圖3和4中顯示血、肺勻漿和溶劑的校準(zhǔn)曲線?？谘饰耄涸谕ㄟ^(guò)口咽吸入給予雷帕霉素之前，給予伊文思藍(lán)用來(lái)驗(yàn)證opa遞送劑量至肺。小鼠用異氟烷麻醉并通過(guò)opa，使用裝配有鈍針的注射器給予伊文思藍(lán)。緊隨opa后，使小鼠安樂(lè)死并目測(cè)檢查肺和胃，以確保伊文思藍(lán)染料遞送至肺，而不遞送至胃。4只小鼠被成功地給予伊文思藍(lán)，所有染料顯示位于肺部而無(wú)一在胃部。雷帕霉素給藥：給予的劑量溶液的重量通過(guò)在給藥前稱量用劑量溶液充滿的注射器，并在給藥后稱量來(lái)確定。給予的劑量溶液的重量被用來(lái)計(jì)算給予的雷帕霉素的量。給藥時(shí)間被記錄為0。在組2和3中的動(dòng)物在給藥后1h被實(shí)施安樂(lè)死。在組4和5中的動(dòng)物在給藥后觀察72h。在任何組中均未觀察到顯著的臨床體征。血和肺中的雷帕霉素分析：在所有收集樣品的小鼠血和左肺勻漿中分析雷帕霉素(圖6和7)。來(lái)自每只動(dòng)物右肺的樣品被保留用于潛在的進(jìn)一步分析。對(duì)于樣品的概要數(shù)據(jù)提供于表3中。表3：經(jīng)口和口咽(opa)給予雷帕霉素至小鼠(1mg/kg)后在血和中的雷帕霉素濃度對(duì)于所有的樣品組，按照標(biāo)準(zhǔn)組、樣品復(fù)制1、標(biāo)準(zhǔn)組、樣品復(fù)制樣品2、標(biāo)準(zhǔn)組的順序分析一式三份的校準(zhǔn)曲線。在opa雷帕霉素后1h，雷帕霉素的濃度在肺組織(3794±1259ng/g組織)為血中(641±220ng/ml)的~6倍。在口服給予類似劑量的雷帕霉素后，1-h的雷帕霉素的肺和血濃度分別為71±43ng/g和23±16ng/ml。在opa后的肺勻漿濃度為在口服給予相同的高劑量(1mg/kg)雷帕霉素后測(cè)定的那些濃度的53倍。討論該研究調(diào)查了在通過(guò)管飼給予雷帕霉素的市售口服制劑，和通過(guò)口咽給予(opa)在10%乙醇水溶液中制備的混懸液后，雷帕霉素在血和肺組織中的濃度。在經(jīng)由opa給藥后至多72h，在雷帕霉素-或媒介-處理的小鼠中未觀察到不利作用。在給予雷帕霉素之前，開(kāi)發(fā)了一種分析方法，并驗(yàn)證經(jīng)opa給予染料至肺。在opa后，雷帕霉素在肺中的濃度為在血中的6-倍。在opa后72h，雷帕霉素低于血液的定量限，但在肺中是可檢測(cè)的。這個(gè)研究表明，雷帕霉素在肺部給藥后是可全身利用的，并且在遞送至肺后的早期和晚期時(shí)間點(diǎn)，肺組織濃度大大超過(guò)血中的濃度。這些結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)，直接遞送至肺的雷帕霉素在肺組織中達(dá)到比血中意外更高的局部藥物濃度。這個(gè)結(jié)果從已知的有關(guān)雷帕霉素的藥理學(xué)(其預(yù)測(cè)所述藥物在肺組織和血中的濃度大致相等，因?yàn)橐阎着撩顾鼐鶆蚍植荚谡麄€(gè)身體組織中，并由于其高的親脂性而應(yīng)快速地從肺中清除)而言是完全出乎意料的。因此，這些結(jié)果表明，直接給予雷帕霉素至肺應(yīng)該能夠達(dá)到用于治療功效的足夠高的遞送劑量，同時(shí)在相同的時(shí)間實(shí)現(xiàn)幾乎不能檢測(cè)的系統(tǒng)利用度，從而消除與口服給藥有關(guān)的因系統(tǒng)暴露于藥物的毒性。雖然鑒于早期研究對(duì)肺本身的毒性也有憂慮，本文的結(jié)果進(jìn)一步出乎意料地表明，相對(duì)高量的雷帕霉素對(duì)肺組織沒(méi)有急性毒性。實(shí)施例4：雷帕霉素抑制tsc2突變體細(xì)胞的成活力和抑制s6磷酸化雷帕霉素的抗增殖活性針對(duì)血管肌脂瘤(aml)來(lái)源的tsc2缺陷tri-aml101細(xì)胞系進(jìn)行測(cè)試。tri-aml101細(xì)胞系源自tsc2缺陷的原代人aml，由elizabethhenske博士(foxchasecancercenter,philadelphia,pa)提供。腫瘤細(xì)胞通過(guò)兩步驟過(guò)程永生化。首先，細(xì)胞用雙向性逆轉(zhuǎn)錄病毒lxsn16e6e7感染，其編碼hpv16e6和e7開(kāi)放閱讀框和新霉素抗性盒。將細(xì)胞擴(kuò)增和經(jīng)新霉素篩選。分離單個(gè)克隆，和冷凍。接著，轉(zhuǎn)染人端粒酶基因(htert)與潮霉素抗性盒(plxsnhtert-hyg質(zhì)粒)，并通過(guò)潮霉素篩選來(lái)選擇穩(wěn)定系。雷帕霉素的活性通過(guò)進(jìn)行細(xì)胞成活力的10點(diǎn)劑量反應(yīng)分析在tri-aml101細(xì)胞上進(jìn)行測(cè)試。在96孔板上每孔接種2000個(gè)細(xì)胞/50ul生長(zhǎng)培養(yǎng)基(dmem、10%fbs和1%青霉素/鏈霉素)。細(xì)胞接種后24小時(shí)，向細(xì)胞中加入另外50ul的含雷帕霉素的生長(zhǎng)培養(yǎng)基(0.0005-5000nm，10倍稀釋，0.1%最終dmso濃度)或僅dmso。加入化合物后72小時(shí)，通過(guò)celltiter-glo?發(fā)光測(cè)定法(promega)測(cè)定相對(duì)細(xì)胞成活力，和表示為相對(duì)于溶媒(dmso)處理的對(duì)照細(xì)胞的百分比。雷帕霉素在低至0.05nm的濃度下抑制成活力(圖7，下圖)。mtor途徑的抑制還通過(guò)經(jīng)蛋白質(zhì)印跡測(cè)量磷酸化s6的水平得到證實(shí)。aml細(xì)胞與20nm雷帕霉素一起孵育24小時(shí)。然后進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡分析和證實(shí)了雷帕霉素有效抑制s6磷酸化(圖7，上圖)。實(shí)施例5：在口服和opa給予雷帕霉素后的小鼠肺中的s6磷酸化如上所討論的，顯示雷帕霉素在口服和opa給藥后在肺和血中的組織分布的我們的實(shí)驗(yàn)證實(shí)，直接給予雷帕霉素至肺應(yīng)該能夠達(dá)到用于治療功效的足夠高的遞送劑量，同時(shí)在相同的時(shí)間實(shí)現(xiàn)對(duì)所述藥物的極低的全身暴露，從而同時(shí)改進(jìn)治療功效并消除許多與口服給予雷帕霉素有關(guān)的毒性。為了驗(yàn)證這種方法，我們使用在鼠肺組織中存在的磷酸化s6蛋白作為對(duì)mtor活性的生物標(biāo)記物。在使用的小鼠品系(c57bl/6)中，小鼠氣道和肺泡上皮細(xì)胞有組成性活性(磷酸化的，“p”)s6蛋白。s6蛋白通常由s6k磷酸化，s6k在mtorc1的下游并例如由生長(zhǎng)因子例如表皮生長(zhǎng)因子(egf)、akt、erk和rsk的下游激活。mtorc1通過(guò)刺激合成代謝的過(guò)程例如脂質(zhì)、蛋白和細(xì)胞器的生物合成，并抑制分解代謝過(guò)程例如自吞噬，來(lái)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。mtorc1途徑感應(yīng)和整合細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外信號(hào)，包括生長(zhǎng)因子、氧、氨基酸和能量狀態(tài)，以調(diào)節(jié)各種各樣的過(guò)程，例如蛋白和脂質(zhì)合成和自吞噬。mtorc1對(duì)雷帕霉素是劇烈敏感的。在本研究中，從如上所討論的，在給藥后的兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)(1小時(shí)和72小時(shí))，從用經(jīng)由opa(n=6)或經(jīng)由口服管飼(n=6)給予的1mg/kg雷帕霉素或媒介(n=6)處理的c57bl/6小鼠中取出肺組織。如上所討論的，在opa給予后1hr，雷帕霉素被檢測(cè)在血中為641ng/ml和在肺中為3794ng/g組織，和在72hr在肺中仍檢出12.5ng/g，而在該時(shí)間點(diǎn)在血中未能檢測(cè)出。相反地，在口服(管飼)給藥后，在1hr，雷帕霉素被檢測(cè)在血中為23ng/ml和在肺中為71ng/g組織，而在72hr無(wú)論是在肺或是在血中均未能檢測(cè)到。如圖8a中的數(shù)據(jù)所示，磷酸化s6(ps6)的水平通過(guò)opa和口服給予雷帕霉素后1hr均顯著減少，而對(duì)于opa在72hr仍受到抑制。ps6在媒介對(duì)照中最高，因?yàn)檫@些小鼠具有組成性活性的mtor信號(hào)傳導(dǎo)。這些數(shù)據(jù)顯示，雷帕霉素的足以在肺中達(dá)到約70ng/g藥物的遞送劑量在肺組織中基本上消除mtor信號(hào)傳導(dǎo)，如通過(guò)ps6蛋白所測(cè)量的，并且在低至12.5ng/g的水平時(shí)，mtor信號(hào)傳導(dǎo)仍受到抑制。這些結(jié)果證實(shí)，我們的方法利用吸入的雷帕霉素治療至少部分特征是異常高的mtor途徑活性的疾病和病癥，這由吸入的雷帕霉素可以比口服給予雷帕霉素低得多的劑量遞送，以同時(shí)實(shí)現(xiàn)高治療功效和極低毒性所證實(shí)。實(shí)施例6：吸入的雷帕霉素在肺組織中抑制s6磷酸化正常sprague-dawley大鼠通過(guò)吸入給藥以達(dá)到0.354mg/kg的雷帕霉素(lam-001)的靶劑量(n=36)和將6只動(dòng)物的亞組在研究第1天的以下時(shí)間點(diǎn)處死：(1)給藥前，(2)給藥中，(3)給藥后立即，(4)給藥后2小時(shí)，(5)給藥后4小時(shí)，和(6)給藥后12小時(shí)。charlesriver對(duì)各自在其亞組時(shí)間點(diǎn)處死的動(dòng)物測(cè)定雷帕霉素的肺濃度，對(duì)于各組以納克雷帕霉素/克組織(ng/g)計(jì)的平均雷帕霉素濃度在下表中報(bào)告。表4：通過(guò)吸入給藥后肺組織中的雷帕霉素靶劑量11ug第1天給藥中給藥后立即給藥后2hr給藥后4hr給藥后12hr平均肺雷帕霉素(ng/g):46256025019295收集各動(dòng)物的肺樣品和快速冷凍。將各冷凍的肺樣品在含蛋白酶和磷酸酶抑制劑的1xripa緩沖液中勻漿(qiagentissuelyserlt，按照制造商的方案)。與總s6蛋白s6核糖體蛋白水平相比(cellsignalingtechnology抗體，克隆5g10)，通過(guò)蛋白質(zhì)印跡分析mtor下游靶標(biāo)磷酸-s6核糖體蛋白(ser240/244)，分析肺勻漿液(cellsignalingtechnology抗體，克隆d68f8)。對(duì)于各肺樣品，蛋白質(zhì)印跡圖像通過(guò)nihimagejv1.48分析，以產(chǎn)生各自的抗體反應(yīng)性/強(qiáng)度和產(chǎn)生s6磷酸化(s6-p)與總s6強(qiáng)度的比率。通過(guò)時(shí)間點(diǎn)組(x-軸)組織起來(lái)的樣品的s6-p/總s6比率(y-軸)在一類變量散射曲線垂直圖上作圖(graphpad,版本4.0)，組內(nèi)的所有樣品在圖上通過(guò)實(shí)心黑點(diǎn)(●)表示，和平均值通過(guò)在各個(gè)組內(nèi)的點(diǎn)之間的水平線顯示(圖8b)。實(shí)施例7：吸入的雷帕霉素顯示出人意料的生物分布至肺文獻(xiàn)中已報(bào)道，在高口服或iv劑量后雷帕霉素在肺中聚集(yanez,j.et.al.,pharmacometricsanddeliveryofnovelnanoformulatedpeg-b-poly(ε-caprolactone)micellesofrapamycin,cancerchemotherapyandpharmacology,61(1),133-1442007)。研究報(bào)道，在給予單劑量10.0毫克/千克(mg/kg)至spraque-dawley(sd)大鼠后，在允許通過(guò)組織區(qū)室分布的時(shí)間(24小時(shí))后，在肺中的雷帕霉素的量為721納克/克(ng/g)，大約為血液中濃度的19倍(表5)。表5.按照yanez等人，iv給予后在肺和血液中的雷帕霉素的生物分布在napoli的早期單獨(dú)研究中(napoli,k.,et.al.,distributionofsirolimusinrattissue,clinicalbiochemistry,30(2):135-142,1997)，每日通過(guò)口服和靜脈內(nèi)(iv)給藥途徑，給予sd大鼠一系列雷帕霉素劑量。在iv給予的14天后，肺組織中的雷帕霉素濃度范圍按劑量比例為200-900ng/g，大約是血液中濃度的23-44倍。但對(duì)于口服給予，對(duì)于相同劑量，低得多的雷帕霉素水平聚集在肺中，即使肺與血液的雷帕霉素濃度比大致相同(表6)。表6：按照napoli等人，經(jīng)14天在第14次每日一次iv給予后24小時(shí)的雷帕霉素的生物分布當(dāng)我們檢查經(jīng)吸入給予后的雷帕霉素的生物分布時(shí)，我們發(fā)現(xiàn)雷帕霉素在肺中積聚遠(yuǎn)高于基于napoli和yanez所預(yù)期的，即使肺與血液比是類似的。在首次的研究中，雷帕霉素通過(guò)吸入以兩個(gè)劑量給予sd大鼠：(1)1.0mg/kg/天和(2)0.0360mg/kg/天，持續(xù)一天。在允許組織區(qū)室分布的12小時(shí)后，對(duì)于高劑量，肺中的雷帕霉素谷濃度為約14,800ng/g和肺中的雷帕霉素濃度為血液中的大約23倍(表7)。對(duì)于低劑量，肺中的濃度為血液中濃度的24倍(表7)。表8顯示在之前實(shí)驗(yàn)中使用的相同的兩個(gè)劑量(即1.0mg/kg/天和0.0360mg/kg/天)下，一天一次重復(fù)給予5天后的肺谷濃度、最大濃度和血谷濃度。表7：?jiǎn)蝿┝亢?2小時(shí)經(jīng)吸入的雷帕霉素的生物分布表8：每日一次經(jīng)吸入的雷帕霉素的生物分布(在第5天作為谷測(cè)量)該初始研究的結(jié)果表明，與根據(jù)yanez和napoli的之前工作通過(guò)替代給藥途徑例如口服或靜脈內(nèi)可達(dá)到的濃度相比，通過(guò)吸入遞送雷帕霉素至肺在肺組織中產(chǎn)生顯著更高的藥物濃度。此外，基于從yanez和napoli所預(yù)期的，經(jīng)吸入遞送后，肺中大量的雷帕霉素出人意料地更高。因?yàn)殪o脈內(nèi)和吸入給藥途徑兩者均具有高的雷帕霉素生物利用度，吸入1mg/kg劑量預(yù)期達(dá)到的肺濃度為通過(guò)napoli的0.4mg/kg/天iv劑量所觀察到的約2.5倍。但事實(shí)上，當(dāng)經(jīng)吸入給予時(shí)，肺中的雷帕霉素的水平為大約17倍(比較表7，經(jīng)吸入1mg/kg/天在肺中產(chǎn)生14,831ng/g藥物，相比表6(napoli)，0.40mg/kg/天iv在肺中產(chǎn)生868ng/g；14,831/868=17)。類似地，通過(guò)yanez給予的10mg/kg靜脈內(nèi)劑量預(yù)期達(dá)到的雷帕霉素的肺濃度為通過(guò)1mg/kg吸入劑量所達(dá)到的約10倍。但事實(shí)上，靜脈內(nèi)劑量達(dá)到的肺濃度為吸入劑量的大約1/20(比較表7，經(jīng)吸入1mg/kg/天在肺中產(chǎn)生14,831ng/g藥物，相比表5(yanez)，10mg/kg/dayiv在肺中產(chǎn)生721ng/g；14,831/721=21)。這可能歸因于雷帕霉素在肺中低的代謝活性和從肺組織區(qū)室緩慢被動(dòng)或主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)至系統(tǒng)循環(huán)。無(wú)論準(zhǔn)確的機(jī)制如何，這些結(jié)果表明，遞送雷帕霉素至肺導(dǎo)致持續(xù)高的局部濃度，而循環(huán)濃度保持低。該初始研究的結(jié)果在另外的大鼠研究和犬研究中重復(fù)和詳述。構(gòu)建這些后續(xù)的研究以確定通過(guò)吸入給予正常sprague-dawley(sd)大鼠和比格犬的與乳糖共混的1%(w/w)雷帕霉素的干粉氣溶膠制劑的重復(fù)劑量毒性和毒物代謝動(dòng)力學(xué)。在第一個(gè)研究中，利用標(biāo)準(zhǔn)圓柱狀穿流(flow-through)僅鼻吸入室以給予sd大鼠干粉制劑。連續(xù)5天內(nèi)，每天動(dòng)物經(jīng)受測(cè)試物300分鐘以達(dá)到0.354mg/kg的雷帕霉素的靶劑量。兩組動(dòng)物用于進(jìn)行該研究的毒物代謝動(dòng)力學(xué)測(cè)量。對(duì)第一組動(dòng)物在研究第1天給藥300分鐘，動(dòng)物在以下時(shí)間點(diǎn)按6只/亞組處死，從動(dòng)物獲取血樣(n=36)和肺樣品(n=36)：(1)給藥前，(2)給藥中，(3)給藥后立即，(4)給藥后2小時(shí)，(5)給藥后4小時(shí)和(6)給藥后12小時(shí)。對(duì)第二組動(dòng)物給藥300分鐘持續(xù)5天，和在研究第5天，動(dòng)物在以下時(shí)間點(diǎn)按6/亞組處死，從動(dòng)物獲取血樣(n=36)和肺樣品(n=36)：(1)給藥前，(2)給藥中，(3)給藥后立即，(4)給藥后2小時(shí)，(5)給藥后4小時(shí)和(6)給藥后12小時(shí)。全血(ng/ml)和肺組織樣品(ng/g)中雷帕霉素的最大濃度以及給藥后12小時(shí)雷帕霉素的濃度。進(jìn)行第二個(gè)重復(fù)暴露研究以評(píng)價(jià)給予sd大鼠和比格犬28天的干粉制劑的重復(fù)劑量毒性和毒物代謝動(dòng)力學(xué)。對(duì)于大鼠研究，按上述使用標(biāo)準(zhǔn)圓柱狀穿流僅鼻吸入室。在連續(xù)28天內(nèi)，每天將動(dòng)物暴露于測(cè)試物300分鐘以分別達(dá)到0.167、4.75和9.50mg/kg的雷帕霉素的靶劑量。對(duì)于三個(gè)給藥組的每一個(gè)，對(duì)一組動(dòng)物(n=36)每天給藥300分鐘連續(xù)28天。在研究第1和28天，按6只/亞組在以下時(shí)間點(diǎn)從動(dòng)物采集血樣：(1)給藥前，(2)給藥中，(3)給藥后立即，(4)給藥后2小時(shí)，(5)給藥后4小時(shí)，(6)給藥后12小時(shí)和(7)給藥后24小時(shí)。對(duì)于犬研究，使用由中心室(centralplenum)和遞送臂組成的正流遞送系統(tǒng)(pfds)。中心室具有模塊設(shè)計(jì)，其中分開(kāi)的端口與5個(gè)遞送臂連接，所述遞送臂配備有口鼻暴露面具，所述面具配備有進(jìn)口管和出口管。將面具安裝到犬的口套上，其方式為鼻在面具的內(nèi)部，允許空氣進(jìn)入和排出。在暴露期間，動(dòng)物戴有固定帶和置于限制平臺(tái)上。固定帶與平臺(tái)上的兩側(cè)桿相連，以限制犬的側(cè)向移動(dòng)。固定帶的前部分與平臺(tái)前面的牽引鉤松散連接，以防止動(dòng)物轉(zhuǎn)動(dòng)。將犬每天暴露于測(cè)試物60分鐘以分別達(dá)到0.020和0.053mg/kg的雷帕霉素的靶劑量。對(duì)于各給藥組，對(duì)一組動(dòng)物(n=6)每天給藥60分鐘連續(xù)28天。在研究第1和28天，按6只/亞組在以下時(shí)間點(diǎn)從動(dòng)物獲取血樣：(1)給藥前，(2)給藥后(t=0)，(3)給藥后1小時(shí)，(4)給藥后4小時(shí)，(5)給藥后8小時(shí)，(6)給藥后12小時(shí)和(7)給藥后24小時(shí)。在第29天，將犬處死，和取出其肺組織的一部分和切碎用于分析雷帕霉素含量。下文提供了全血中雷帕霉素的最大濃度(ng/ml)和雷帕霉素的谷濃度，以及對(duì)人給藥進(jìn)行外推。該表中還包括重復(fù)給藥28天后在犬肺中的雷帕霉素的谷水平(ng/g)。表9：吸入雷帕霉素大鼠數(shù)據(jù)和對(duì)人給藥的外推發(fā)射劑量(ug)重復(fù)吸入的日劑量(ug)最大血液水平(ng/ml)血谷水平(ng/ml)肺24hr谷水平(ng/g)大鼠*5057.62n/a142514370.523.3n/a285028577.821.0n/a犬**160407.41.93242410627.35.961人87350.650.152175701.30.34*大鼠28天重復(fù)日劑量研究7300225–血液數(shù)據(jù)為d28的平均值**犬28天重復(fù)日劑量研究7300227–血液和肺數(shù)據(jù)為d28的平均值**血液和肺估算值從7300225和7300227研究結(jié)果外推獲得值得注意的是，基于此處提供的結(jié)果，在人中范圍約5ng/g的肺中雷帕霉素治療有效量可通過(guò)吸入給予小于約100微克至肺而達(dá)到。相比之下，按照yanez通過(guò)口服遞送達(dá)到相當(dāng)?shù)姆螡舛刃枰?-16毫克。按照napoli通過(guò)iv遞送而達(dá)到相當(dāng)?shù)姆螡舛?，需?0-600微克。此外，基于此處提供的結(jié)果，當(dāng)雷帕霉素通過(guò)吸入遞送時(shí)，肺中約5ng/g的治療范圍可以肺與血液分配比13:1而達(dá)到。這意味著當(dāng)雷帕霉素在肺組織中的治療范圍內(nèi)時(shí)，僅650-1500皮克/ml雷帕霉素的最大濃度在血液中循環(huán)。這種對(duì)雷帕霉素的低系統(tǒng)暴露預(yù)期降低與自口服或iv給予所需的較高水平給藥產(chǎn)生的對(duì)雷帕霉素更高得多的系統(tǒng)暴露有關(guān)的毒性和不良藥物事件。簡(jiǎn)言之，本文所述的結(jié)果證實(shí)了通過(guò)吸入給予雷帕霉素至肺有利地提供在肺中實(shí)現(xiàn)范圍約5ng/g的治療有效劑量所需的低劑量的雷帕霉素，以及對(duì)該藥物的低系統(tǒng)暴露，得到顯著改善的雷帕霉素治療指數(shù)。實(shí)施例8：用于可吸入組合物的雷帕霉素的尺寸縮減使用濕拋光或者噴射研磨工藝，將雷帕霉素的粒徑縮減至2.0μm<dv50<3.0μm的目標(biāo)范圍。對(duì)于噴射研磨，使用來(lái)自jetpharma的實(shí)驗(yàn)室規(guī)模的mcone單元，采用以下操作條件：文丘里壓力2-4巴，研磨壓力3-5巴，進(jìn)料速率90g/h。對(duì)于濕拋光，進(jìn)料混懸液使用純凈水制備。微流體高壓勻化器被用于尺寸縮減步驟，生成的混懸液經(jīng)噴霧干燥。濕拋光工藝的細(xì)節(jié)在下文闡述。用于濕拋光工藝的尺寸縮減步驟的高壓力勻化器是配備有輔助處理模塊(200微米)的小試規(guī)模的微流體高壓勻化器并使用100微米的相互作用室。所述單元在~455巴(增強(qiáng)模塊液壓壓力~30巴)下操作。在微流化作用后，流體通過(guò)噴霧干燥除去以生成干燥粉末。實(shí)驗(yàn)室規(guī)模噴霧干燥器，sd45(büchi，b-290advanced型)裝配有兩個(gè)流體噴嘴(帽和直徑分別為1.4和0.7mm)。兩個(gè)旋流器串聯(lián)使用(為第一標(biāo)準(zhǔn)buchi旋流器和第二高效buchi旋流器)，以收集干燥的產(chǎn)物。噴霧干燥單元用氮并以單通模式操作，即無(wú)干燥氮?dú)庠傺h(huán)。吸氣器，吹出氮，設(shè)定在其容量的100%(最大容量時(shí)的流速是大約40kg/h)。霧化氮?dú)獾牧魉俦徽{(diào)節(jié)至轉(zhuǎn)子流量計(jì)的40±5mm的值。在產(chǎn)物混懸液進(jìn)料之前，用純凈水穩(wěn)定噴霧干燥器，在此期間將流速調(diào)節(jié)至6ml/min(20%在蠕動(dòng)泵中)。調(diào)節(jié)進(jìn)口溫度以達(dá)到目標(biāo)出口溫度(45℃)。在溫度穩(wěn)定后，噴霧干燥器的進(jìn)料從純凈水交換為產(chǎn)物混懸液(保持與在穩(wěn)定期間采用的相同流速)并再次調(diào)節(jié)進(jìn)口溫度以達(dá)到目標(biāo)出口溫度。在儲(chǔ)備混懸液結(jié)束時(shí)，進(jìn)料再次交換為純凈水，以沖洗進(jìn)料線并進(jìn)行受控的關(guān)閉。對(duì)在兩個(gè)旋流器下收集瓶中的干燥產(chǎn)物稱量，而產(chǎn)量計(jì)算為干燥產(chǎn)物相對(duì)于進(jìn)料至高壓勻化器的混懸液中的總固體的質(zhì)量百分比。粒徑分布通過(guò)激光衍射法分析。固態(tài)表征(多晶型和純度)通過(guò)高壓液相色譜(hplc)、x-射線粉末衍射(xrpd)和差示掃描量熱法(mdsc)進(jìn)行。水含量用karlfischer方法測(cè)定。噴射研磨產(chǎn)生具有1.5微米的dv10，2.7微米的dv50和4.9微米的dv90的單分散粒徑分布的結(jié)晶雷帕霉素粉末，如在下表10所示的。濕拋光產(chǎn)生具有1.0微米的dv10，2.4微米的dv50和5.0微米的dv90的單分散粒徑分布的結(jié)晶雷帕霉素粉末(表11)。兩種方法產(chǎn)生在目標(biāo)范圍內(nèi)的雷帕霉素顆粒，而兩種方法均未顯示出對(duì)雷帕霉素的多晶型或純度的影響。下表顯示對(duì)噴射研磨和濕拋光工藝的過(guò)程控制數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)表明兩種工藝能夠產(chǎn)生在目標(biāo)范圍內(nèi)的api粒徑，而不影響api純度或多晶型。表10：噴射研磨數(shù)據(jù)表11：濕拋光數(shù)據(jù)實(shí)施例9：干燥粉末組合物的氣溶膠性能測(cè)試在以上實(shí)施例中生產(chǎn)的膠囊被放置在下面的表格中指定的裝置中并啟動(dòng)。從包含來(lái)自批號(hào)06rp68.hq00008和批號(hào)06rp68.hq00009的共混物的裝置/膠囊遞送的氣溶膠性能使用新一代撞擊器(ngi)，根據(jù)描述于usp的905和601章的方法表征。以60和100升/每分鐘(lpm)的流速測(cè)試氣溶膠。細(xì)顆粒劑量(fpd)和細(xì)顆粒分?jǐn)?shù)(fpf)顯示于下表中。也示出總氣體動(dòng)力學(xué)中位數(shù)直徑(mmad)和幾何標(biāo)準(zhǔn)偏差(gsd)。表12：06rp68.hq00008(濕拋光)+plasitapers01型7表13：06rp68.hq00008(濕拋光)+plastiapers00型8表14：06rp68.hq00009(噴射研磨)+plastiapers01型7表15：06rp68.hq00009(噴射研磨)+plastiapers00型8基于這些氣溶膠性能數(shù)據(jù)，濕拋光藥物顆粒是優(yōu)選的。它們導(dǎo)致較高的細(xì)顆粒劑量、較高的細(xì)顆粒分?jǐn)?shù)、將顯示滲透進(jìn)入中心和周圍肺區(qū)和將具有較少的口腔沉積的粒徑分布。實(shí)施例10：雷帕霉素的藥代動(dòng)力學(xué)建模基于如上所示的氣溶膠性能06rp68.hq00008(濕拋光)+plasitapers01型，和在實(shí)施例3的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可期望吸入的雷帕霉素直接遞送至人肺將類似地導(dǎo)致持久的肺濃度，其為足夠高的治療有效濃度，但具有低的全身暴露(低血濃度)，由此有效地使全身暴露所致的副作用最小化。開(kāi)發(fā)了兩室、藥代動(dòng)力學(xué)模型以預(yù)測(cè)在使用表11中的制劑和dpi吸入器，重復(fù)qd給予后在人血和肺中的濃度。對(duì)于藥代動(dòng)力學(xué)模型，使用來(lái)自批準(zhǔn)的rapamune?(nda21-110，和nda21-083)概要基礎(chǔ)的人pk參數(shù)：分配的體積被假定為780升，清除率是0.0003/分鐘，和消除半衰期是42.3小時(shí)(假設(shè)等同于雷帕霉素iv給藥)。從肺部吸收雷帕霉素的半衰期估計(jì)為約0.5小時(shí)，類似于其它高親脂性化合物，例如丙酸氟替卡松，對(duì)其肺吸收數(shù)據(jù)是可利用的。沉積在肺中的雷帕霉素的生物利用度被假定是約100%。通過(guò)口咽沉積，或通過(guò)粘液纖毛清除從上氣道除去，由gi途徑吸收的雷帕霉素的生物利用度被假定是14%，如在批準(zhǔn)的rapamune?概要基礎(chǔ)所報(bào)告的。對(duì)于普通人以每分鐘60升的流速的吸氣動(dòng)作，如在表11中所示，細(xì)顆粒劑量是57微克，和細(xì)顆粒分?jǐn)?shù)是40%。如在圖9中所示，模型預(yù)測(cè)在11天后達(dá)到平均穩(wěn)態(tài)濃度。從圖中可見(jiàn)，每日一次重復(fù)劑量57微克遞送至肺導(dǎo)致約50皮克/ml的血谷濃度以及低于200皮克/ml的最大濃度，顯著低于在mccormack等(2011),“西羅莫司在淋巴管平滑肌瘤病中的功效和安全性(efficacyandsafetyofsirolimusinlymphangioleiomyomatosis)”,nengljmed364:1595-1606中報(bào)道的5-15ng/ml的濃度。假定850克的肺組織質(zhì)量，在肺中沒(méi)有代謝，和肺吸收半衰期30分鐘，57微克雷帕霉素遞送至肺，將導(dǎo)致在肺組織中的治療水平，且雷帕霉素的局部肺濃度高達(dá)約60ng/克。實(shí)施例11：大鼠和狗的吸入毒理學(xué)研究。以下研究表明吸入雷帕霉素毒性低于口服雷帕霉素。在狗和大鼠中使用lam-001(吸入雷帕霉素)進(jìn)行28天的重復(fù)劑量的吸入良好實(shí)驗(yàn)室規(guī)范(glp)毒理學(xué)研究中，毒物代謝動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)(見(jiàn)表16)表明雷帕霉素濃度分別為miles研究中發(fā)現(xiàn)足以抑制人lam患者肺部mtor活性的系統(tǒng)有效人血液濃度的約6倍和63倍(基于第28天的cmax)。在最敏感的物種中，狗在noael處顯示出約為16.7的谷肺(24小時(shí))與血漿比率。表16.動(dòng)物研究結(jié)果。大鼠耐受每天吸入劑量為人類預(yù)期治療劑量的約60至1700倍。狗達(dá)到人類預(yù)期治療劑量6倍的noael。僅通過(guò)鼻吸入給予雷帕霉素導(dǎo)致呼吸功能沒(méi)有變化。28天大鼠和狗研究中確定的達(dá)到劑量的呼吸noael分別為8.91mg/kg/天和0.0134mg/kg/天；為基于miles試驗(yàn)中提到的功效的人體口服吸入推薦日治療劑量(rdd)的約1713和6倍。這些數(shù)據(jù)與從miles試驗(yàn)收集的臨床數(shù)據(jù)結(jié)合表明，通過(guò)吸入給予雷帕霉素的患者可以實(shí)現(xiàn)安全性方面的顯著益處。此外，通過(guò)吸入遞送雷帕霉素，可以避免首次通過(guò)代謝，口服吸收變化性和全身分布到肺部的潛在變化性。醫(yī)生將能夠更有效和精確地滴定劑量，允許患者接受有效的肺劑量，同時(shí)最大限度地減少全身暴露和雷帕霉素的毒性作用。通過(guò)改變干粉吸入器中的膠囊數(shù)量，雷帕霉素將能夠遞送標(biāo)稱有效劑量，從而為患者提供不能用口服rapamune?獲得的個(gè)性化治療方案。由于將藥物直接遞送至靶組織(肺)和定制治療方案的能力，預(yù)期吸入雷帕霉素將比口服雷帕霉素(例如rapamune?)提供顯著的臨床益處。等價(jià)物本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)或能夠僅僅使用常規(guī)實(shí)驗(yàn)確定，許多與本文描述的本發(fā)明的具體實(shí)施方案的等價(jià)物。這樣的等價(jià)物意欲由所附權(quán)利要求書涵蓋。本文引用的所有參考文獻(xiàn)通過(guò)引用以其全文結(jié)合到本文中并用于所有目的，如同各個(gè)單獨(dú)的出版物或?qū)＠驅(qū)＠暾?qǐng)?zhí)貏e地和單獨(dú)地指明通過(guò)引用以其全文結(jié)合到本文中并用于所有目的的相同程度一樣。本發(fā)明不受本文描述的具體實(shí)施方案的范圍的限制。事實(shí)上，對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，本發(fā)明的各種修飾，除了本文描述的那些外，將從前面的描述和附圖而變得顯而易見(jiàn)。這樣的修飾意欲落入所附權(quán)利要求書的范圍內(nèi)。當(dāng)前第1頁(yè)12