專利名稱：白芨膠為載體的雷帕霉素眼內(nèi)植入型釋藥系統(tǒng)的制作方法
白S^為載體的雷帕霉素眼內(nèi)I1A型釋藥系統(tǒng)
獄領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種眼內(nèi)t!A型釋藥系統(tǒng)，，1」涉MU—種以白S^作為藥^a體的雷帕霉素長鄉(xiāng)艮內(nèi) 緩釋系^~~白M為載體的雷帕霉素眼內(nèi)SA型釋藥系統(tǒng)。 背景獄
角^l錢治療角膜盲的，復明手術(shù)'也是治療，頑固角膜病變的主^t施。角目fi^:后的 :fegft斥鵬仍為角Jl^植規(guī)的首要原因。;fcS題管化角ms多次角麟植等高危角麟植的患者， 術(shù)后繊訴Sra生率高達60%以上，戲斷氐了角mtt)t的存活率。其中角麟z她管化是高危角
植的 ±要、最常見的因素。因tt角rafi/gw^fesft斥asa^的同附贈^^e制角 Mtt管的^g，貝何;b^高角腐iM"的存活率，延長ti;t的透明時間。
雷帕霉素(R鄰amycin，商品名Siroliraus)是一種新型弓駭戈的^q)帝柳，具有懶桷麟她管的 增殖，對其斷氐角自lt lt后免翻訴^gi3Z和延長g)t存活時間fe^Sg的作用。目前雷帕霉素僅有全 身帶厠，但全身用藥眼內(nèi)藥物^S低，；f ^。雷帕霉素屬臘溶I4I 物，溶解瞎、治療窗口窄，尚不 能在眼科廣泛應用。對此，山東割艮科研究所開展了雷帕霉素眼內(nèi)植入型緩釋系統(tǒng)(專利申請?zhí)?200410086255.0)的研究，《頓Wt;體限于S^原、^^糖(幾丁質(zhì)、PGA (^^強乙膨、PUl (聚乳膨、 EVA潔乙^M乙豳旨)及其共^t!PLGA (,逮乙酸與乳酸的共lgtl)、 PGLC (乙効^丙効旨一己內(nèi)酯 三元恐JW繊)等，載^ft有治療作用，僅為一禾t^體而已。
但角膨新她管的 ^—個及其鋭的 1程，其勝與 管 因子增加、抑偉鵬 因子MiK ifeTO^等多個因素有關(guān)，^因素之間具有代償性， 一個因素作用^l卿制，其它因素作 用就可代償ttW強，如 管 因子\^^的^^穀1 !]，成鄉(xiāng)書飾鵬長因子(bFGF)和白介素 6 (IL"6) ^iSjfiL管M因^ii貝噲相應增加，產(chǎn)生"耐受性"。如能i^用藥謝頓有懶噺^lfiL管 作用的載體賴恪緩釋齊!M同時作用于角MfefiL管W^i程的^WI，貝脂統(tǒng)SWt強藥效， M^、藥物用量，同時也^1>了不良^ 耐受性的發(fā)生。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的^^一種以白;KK作為藥t^體的雷帕霉素長劍艮內(nèi)緩釋系統(tǒng)，以彌補現(xiàn)有獄的 不足。
本發(fā)明是在原雷帕霉素眼內(nèi)HA型緩釋系統(tǒng)(鍋l抻i轉(zhuǎn)200410086255.0)研，|11±，倉|跑|4±&使 用白S^作為緩^m體。研微現(xiàn)，白SK本身具有很強的鵬呢賺她管的作用，包括角膜、皮J^膜 和視網(wǎng)麟'扭管在內(nèi)卿Miftt管，且作用機牽胖噹帕霉素不一致，同時，白SJ^體內(nèi)生物卿率，緩
慢釋放出i)tifiL管增'J^物雷帕霉素，兩者^1頓，同時作用，ra^L管M^S31程的M"W， 可使SA劑^^Ki、協(xié)同的治療作用，取得更佳的防治高危角M^植免翻一斥S^和新^t^殖的 鄉(xiāng)。但商品化白SI^雜質(zhì)多、好量分布廣，僅P艮于口K^卜用，不適劊艮內(nèi)細。將普通白芨
麟品進行多鵬化，得激繊辭斗細要求的翻白賺。
本發(fā)明包括作為藥物的雷帕霉薪n載體，，征在^^體是白 ,該白^i^皿為由甘,
和 ~糖以1: 4聚合而成的 甘露聚糖，平均M量在65000 150000，白，以^lfi甘露聚Hi十，賴跳而其中作為藥物的雷帕霉素加入量為載體干重計0.05% 50%o J^的白^Kift^平均^T量99658 it^K頓。
J^的白皿中可加A^固化作用的3^IJ，而將載體之間或藥物與載體之間進行交f^，更增 加載體的載藥量，M^、離，增3麟物緩釋 蝶。交職i偽甲醛、戊二醛、乙^^M7jC甘油醚、丙二 醇)5^i7K甘油IM丁二醇) ^i7iC甘油醚，^i^!j入量為白SK和^F鵬質(zhì)量比為100: 0.01 20。 上述白 中可加入以白^^千重計0.5 4戰(zhàn)的白蛋白、明| 可拉伯膠。 本發(fā)明所需的白賺以如下工2JI取和純化方跑摘且多糖提取和分離純化
一、 粗多糖提取
將白發(fā),Tf臨粉碎、過篩、烘干，加20倍^IR蒸餾7K 60。C回^l取4h。 M提取一次。合并 兩^Ji取液。離心，50:清，7(TCMffi亂縮,力口三^MR95呢乙ll^淀。離心i&ft^淀，冷凍千燥，得粗 白賺(簡寫為BR0)，即得到翻的商品白賺。
二、 分離純化
將BR0溶Tft小1^P冰中，Sevag法脫蛋白至考馬斯離G-250法檢測幾無蛋白J^^測出，然后用 乂術(shù)爐斤三天，真空冷凍千燥，得^^化白艦~~BR1:
將BR1 400mg溶于20ml蒸餾水中，離心^J:清液，在陰離子效鄉(xiāng)B隹素DE-52 Ith^析，先以2 5個柱鵬的蒸餾7jC狐再用0 4mol/LNaCl溶^lB^gM, M^j24ml/h，以4ral麟1， 緣硫酸法檢測糊定多糖的繊健并 ^，冷凍千燥，得1^ 化白艦~~BR2;
將BR2 50mg溶于2ml蒸餾水中，離心^Lh清液，上S印hadex G-100柱以0. 02mol/L NaCl洗脫，流 速16ml/h，以2ml收集一管，1H"硫酸法檢測并確定多糖的M^位置，l&* ^，冷凍千燥即得 本發(fā)明所需的麟啲白賺。
本發(fā)明充分利用白鄉(xiāng)體內(nèi)生物,牟，緩漫釋放出活ftH物，可4摘物^S長時間iS^繊為穩(wěn)定 的治療水平，M^、了藥物的用量、用藥7MS[和毒副作用，對于藥,及收困難的鵬，也倉鵬服好的用 藥'文裸。形卜，白芨提取物本身也具有綱噺她管、搠中瘤割乍用，K^頓可使禾lA劑^f鵬、
協(xié)同的治療作用，"^m得s^,防治，。


圖l:不同雷帕霉素ltA劑房水中雷帕霉素^^化曲線(n=5)。
圖2: A組(空白對照)術(shù)后2周，斬7乂腫、混濁增厚，^M(i她管^A角職lJt2 3nm，植 片勝繊訴腿(箭頭示斷與ffi^微)。 X10
圖3: E組(白賺雷帕霉鬆1釋片前房SA，賴帕霉素0.5呢)術(shù)后8周，l肪透明，S tt管消退，前房內(nèi)RAPA緩釋片大部M收，僅存原沬1/3 (箭Mf^)。 X10
圖4: F組(白^^雷帕霉穀夷釋片前房豐1A，賴帕霉素0.3mg)術(shù)后8周，tt/t透明，IS
tt管消退，前房內(nèi)RAPA緩釋片在位，未見⑩，明顯變小(箭頭戶際)。 X10
本發(fā)明的掛共下列^Qi例，MS—斜兌明本發(fā)明戶，師ttA劑的緩,P協(xié)同作用的S^。 鄉(xiāng)例i
本發(fā)明的白M6^l取以如下工2^取和純4t^發(fā)明所需的白皿。一、 粗多糖提取
將白芨塊莖干制品粉碎、過篩、烘干，加20倍ftf只蒸餾7jC， 60。C回，取4h。重復提取一次。合并 兩^^取液。離心(5000Xg， 10min) ,^Lh清，7(TCMffiM,力tH^f^只95%乙 ^淀。離l^B^ 淀，冷凍T^燥，得粗白 (簡寫為BR0)。
二、 分離純化
將BR0溶雅小^R7K中，Sevag、M蛋白至考馬斯離G-250法檢測幾無蛋白M^測出，然后用 嘛爐斤三天，真空冷凍千燥，得1純化白SflS~~BR1;
將BR1 400mg溶于20ml蒸餾水中，離心 O:清液，在陰離子娥飛隹素DE-52禾ihM析，先以2 5個柱術(shù)只的蒸餾7jC離再用0 4mol/LNaCl溶體繊度鵬，繊為24ml/h，以M雌1， 蒽》"硫酸法檢測糊定多糖的鵬健并1^* ^，冷凍千燥，得1純化白娜~BR2:
將BR2 50mg溶于2ml蒸餾7K中，離心社清液，上S印hadex G-IOO柱以O(shè). 02mol/L NaCl洗脫，流 速16ml/h,以2ml收集1， HI"硫酸法檢測并確定多糖盼^^B， ttMP^物，冷凍千燥即得 本發(fā)明所需的麟啲白賺。
白 ^鑒定為^@￡甘露聚糖單^ 為95.8%， ^ 為99658彰爾頓。
實施例2
選用實施例l制備的白賺，配制1 的白 7]<溶液，取白^K^溶液20.0ml，力口入無M^ffi 中，無菌割牛下，力口入雷帕霉素微粉ft^末600mg， ^f分鵬勻，再加入乙二^L銜K甘油醚20rag， ^#&勻，55"7jC浴，3"^小時。取出充分洗滌以去除殘留的交聯(lián)劑，夂^K的膠液倒入聚四氟乙烯
m^中，置于4o。c的烘箱千燥偉鵬。待斷充iH^燥后，取出mA糊生a^7jc充分浸泡洗滌，將膜
片取出'待完^P鵬，得到厚度為1.5-2就的片)KI^IJ，再用孔徑為1.5-2.0就的M^1lM厚 為1. (h2. 0戟、直徑為1. 5-2. 0就的第蹄J。將此制劑用環(huán)氧乙廳蒸24小時頓消毒、再隨1 周后即可。 實施例3
將實施例1乙二醇雙縮水甘油醚換成丙二醇雙縮水甘油醚，其余斜牛不變， 得到同樣的交聯(lián) 作用。 實施例4
將實施例1乙二醇雙縮水甘油醚換成丙二醇雙縮水甘油醚，其余剝牛不變，3KSI得到同樣的交聯(lián) 作用。 實施例5
選用實施例1制備的白M，配制腦的白MtK溶液，取lTO的白SlfeK溶液50. Oml于IO(M燒 杯中，加入雷帕霉素微粉^^末5.0g， |^分|^勻，再加入乙二醇^f水甘油醚500.0mg， ^^均勻， 55。C水浴放置3 5小時以充分交聯(lián)固化白刻交，固化結(jié)束后用目生SfeR充分浸泡洗滌以去除未aS 的娜U。洗滌后高爾夫球整個燒杯置于冷凍千鵬中，冷凍千燥72小時以充被除水。糊令凍千鵬的i1^ 狀載有雷帕霉素的白SM艦^lffi制鵬約0.5ml的致密薄膜，40。C的烘箱千燥制膜，再用孔徑為 1.0"2.0就的淋辦MS徑為1.0"2.0絲的制厠。將此制厠用環(huán)氧乙烷熏蒸24小時滅菌消毒、再 方燈l周后即可。鄉(xiāng)例6
細^i例i制備的白賺，配制腦的白^7K溶液，取纖的白^*溶液2.歸，力口入無離
璃瓶中，無菌斜牛下，力口入雷帕霉素微粉ft^末100mg， JP^分鵬勻，再加入10%戊二膨抆溶液0.21111， 撤半均勻，55'C7K浴皿3 5小時。取出充分洗滌以去除殘留的交職!J, 4t^聯(lián)的膠液倒入聚四氟乙烯 ^中，置于4(TC的烘箱千燥帝鵬。待斷充OTM^，取出^A糊生aS7jC充分浸泡洗滌，將膜 片取出，待完纖鵬，得到厚度為1.5-2戟、呈10納米/h ,的片)^MJ，再用孔徑為1.5-2.0 4^的^WE^) 為1.0~2.0 M、直徑為1.5-2.0 ，的帝擠U。將此制劑用環(huán)氧乙^^ 24小時滅 菌消毒、再腿1周即可。 鄉(xiāng)例7
將^M例5中戊二醛賊甲醛，其余剝牛不變，^rf穀胴樣的交駒乍用。
鄉(xiāng)例8
糊^M例1帝恪的白 ，配制5%的白^7乂溶液，取5%的白^7乂溶液100. Oml預^^^S 中，加入2.58的明膠，5CTC水浴體一夜以溶脹明鵬，無菌斜牛下，力口入雷帕霉素微粉tt^末5g， i^^分,勻，再加入10%甲^*溶液5.亂，^^均勻，55。C7K浴方爐3 5小時。取出充分洗滌以去 除殘留的交職U， )It^聯(lián)的膠液倒入聚四氟乙烯6m^中，置于40。C的烘箱千麟鵬。待斷充^f燥 后，取出^A激生S&7jC充分浸泡洗滌，將斷取出，待完^P鵬，得到厚度為1.5-2.0就、呈 10納米/W虎構(gòu)的片^Rj，再用孑W5為1.5—2.0絲的74 1! ￥為1.0~2.0就、直徑為1.5-2.0 就的第擠U。將此制劑用環(huán)氧乙^^24小時頓消毒、再體1周即可。 鄉(xiāng)例9
翻^li例1諱恪的白賺，配制l戰(zhàn)的白^feK溶液，取1M的白^7K溶液200. Oml ^E菌鵬 瓶中，力口入6g的阿拉伯膠，5(TC水浴體一夜以溶脹明脇，無菌斜牛下，力口入雷帕霉素微粉ft^末 5g， ^^分tfcf^勻，再加入10%甲^7抆溶液20.亂，^f均勻，55。C水浴方燈3 5小時。取出充分洗 滌以去除殘留的交職U， 4tX聯(lián)的膠液倒入聚四氟乙烯附媒中，置于4(TC的烘箱千燥第i鵬。待斷充 ^P燥后，取出^A皿生Sfe7K充分浸泡洗滌，將斷取出，待完^B蹄，得到厚度為1.5-2.0毫 米、呈10納米小孑虛構(gòu)的片 劑，再用孔徑為1.5-2.0 g的淋餅M) :為1.0"2.0 *、直徑為 1.5-2.0就的帝擠U。將此帝擠,環(huán)氧乙^^24小時滅菌消毒、再腿l周即可
細^li例1諱恪的白賺，配制腦的白SK7K溶液，取篇的白SlfeK溶液2. Oml和8%的牛血 清白蛋白溶液lml，力qA無Sl^^瓶中，無菌劍牛下，力口入雷帕霉素微粉^^末280rag， JP^分鵬勻， 再加入乙二醇)5^水甘油醚3.0mg， ^^均勻，55'C水浴體34小時。取出充分洗滌以去除殘留的交 職U， >1^^聯(lián)的膠液倒入聚四氟乙烯6^中，置于40。C的烘箱干燥律鵬。待斷充^P鵬，取出放 入湖生aa;K充分浸泡洗滌，將斷取出，待完^P鵬，得到厚度為1.5-2就、呈10納米小孑閣 構(gòu)的片鵬劑，再用孑L徑為1.5-2.0就的M4劍ffi^i 為1.0~2.0就、直徑為1.5-2.0就的制劑。 將此串擠,環(huán)氧乙，蒸24小時，消毒、再放置1周后即可。 鄉(xiāng)例ll
本發(fā)明的體外釋辦性
將制得的載藥0.3g的植雷帕霉素白芨^A劑方爐于25mL含0.05%疊氮化鈉的pH7.4磷 緩沖液中，SA37'C恒^7icM蕩器以72rpm的m7K^^蕩，頭兩周每天M^介質(zhì)并用i^t液相測定介質(zhì)中 雷帕霄素的藥tft，兩周后每周測定一次，縣測定12周，結(jié)果表明體外具有明顯的緩賺性。 魏例12
本發(fā)明的藥1^]力學
鵬家兔8只(2.5±0.5 kg， liP隹不限)
^計將2mg的雷帕霉素白S^緩釋鄰MA剣艮前房，第一周內(nèi)于l、 3、 7天，第二周開々胸 周1次，30號穿刺針自角l^il^a^刺入前房，抽取各只，水O.lmL， iS^液相色it^，帕霉素 的微。作藥時曲線圖，見圖l?？梢娎着撩顾匕譙^IA劑具有顯著的體內(nèi)緩釋作用。 鄉(xiāng)例13
本發(fā)明防,高危角rail^后^f斥和角Jiiftt^tii殖的的藥效學i，。
實驗藥稱雷帕霉素白SK緩釋flA劑(載藥0.5呢和0.3呢》^鵬)、雷帕霉素PLGA緩稱1A 劑(,0.5呢)、空白PLGAHA劑、空白白^KItA劑 家兔70只(2.5±0.5 kg， 1 不限)
高危角麟植動tl^的粒70只兔^!H乍高危角麟植受^lW趣，右B艮角膜4個象限各間 蹄纖1根5-0纖，鄉(xiāng)巨2mn， Mii2/3角膜基質(zhì)層，2周新tt管"feA角M^拆M^。
微併且選擇大于三個象限、新^L管^A角M3i3咖的60只兔，按隨豐臓字 紛為6組，A 組為對照組，無f琉治療；B組為PLGA空白載體組，術(shù)中前房IIAPLGA空白載體1呢；C組為雷帕霉素 PLGA緩稱1A劑組，SAIl釋片lmg (載藥0.5mg): D組為白M空白載體組，術(shù)中前房植入白芨膠嘲 體lmg; E纟戰(zhàn)雷帕霉素白^MIA劑組，豐IAM釋片lrag (載藥0.5mg); F組為雷帕霉素白^MIA劑 組，HAM釋片l呢(織0.3mg)，每組10只。
手;i^tA方法穿透性角膜移植在角膜,拆除3 6 a間進行， ^酮(50mg/kg)和氯丙嗪 (10mg/kg)混合肌肉糊全身鵬，角麟tt管化兔作為受斷同種異體穿透性角W植，斷與植 床直徑分別為7.5和7. Otrni,各組前房tlA藥片后1(H)尼戯間,逢合12針S7jC密枕態(tài)，平衡鹽溶液 形鵬房。
術(shù)后觀察和IiPJ撒示角J3^tl^后2周內(nèi)隔日，之M^周2 ^ffl/t混濁、水腫、新她管生長 及緩釋藥片吸收情^ffl行乂，， ^S1察60天，"E^訴指數(shù)(為角M^昆濁、水腫厄新^L8^12^^) 和新tt管指數(shù)，具體if^標準如下角^S濁0分，角M明；1分，角^BS滅蟲；2分，角鵬 ^t)瞎，前房結(jié)構(gòu)臓青楚；3分，角膨昆Mffl—步加重，前房結(jié)IW^禍；4分，角膜^P混濁，前 房不入。角膨JC腫0分，無角蟛JC腫；l分，角膜基質(zhì)^S增厚；2分，角Et幾制彌^7幼中；3分，角 膜基質(zhì)彌衝JC腫，伴上皮下微小7jC瓶4分，^fi性角膜鞭。角Mff她管0分，禾S)t琉tt管； l分，新tt管"^At餅l個象限；2分，新她管^A植片2個象限；3分，新tt管^A斷3個象
限；4分，新她管^A斷4個象限。排斥指IKiiiMm6分判定為^^訴鵬。
病趣且織 查術(shù)后6天，對6組躺膜、視網(wǎng)膜、肝艦腎ffla行Miii只雜査，蘇木素-
灘(HE)她，觀察鄉(xiāng)娜變化。 微結(jié)果
(—)術(shù)后A D躺腐斷混濁、7微、新她管生長瞎況如下 A組(空白對照組)和B組(PLGA載^ltr房ttA組)的觀察結(jié)果樹以術(shù)后一周，植片出現(xiàn)0 1度混濁，1 2駄腫，HLra她管怒張，KA角離片1 2個象,0.5 1咖；術(shù)后2周斷混濁 2 3度，It)t7R腫2 4度，部併纖出J，厶詢，新tt管^A角膜3 4個象限，^A角iWt約l 2ram, H)t出現(xiàn)^Sff斥鵬；術(shù)后4周，f餅混濁3 4度，水腫2 3度，新她管^A角膜2 3rm， 新 管^^禾5 ^所 :術(shù)后8周與12周檢査結(jié)果和術(shù)后4周^fcffl同。C組(雷帕霉素PLGA緩釋片組)術(shù)后一周，ltit透明，不7jC腫，14*新她管 #&較A、 B i05SISS輕，未^A角,片，前房內(nèi)RAPA緩釋片在位，未見爐；術(shù)后2周，斷透 ^，不7jC腫， 繊新她管繊號離，部分象,她管^A植片約0.5跳前房內(nèi)瞧緩釋片無被；術(shù)后4 周，It^透明，不7K腫，tl^TM她管，前房內(nèi)RAPA緩釋片在位，未見被，稍變??；術(shù)后8亂 斷透明，不水腫，Wf^lfiL管基本消退，RAPA緩釋片表面t蠏，約一 吸收；術(shù)后12周，3只 兔出5IfelSf斥鵬，余下7只^l餅透明，不水腫，^ 管狄，前房內(nèi)MPA緩釋片無被，僅 存l/3未吸收。D組(白SK^白載糊)術(shù)后一周，船透明， ^新《管 ^&較A、 B纟I^S禾Mfe 未^角JWt:術(shù)后2周，fl)t透明，不7jC腫，少 ^部分象限新她管^角職餅約0.5卿術(shù) 后4周，植片透明，不7jC腫，職新tt管^M禾!SW所鵬，aH"少Mf^lflL管；術(shù)后8周，豐餅混 濁1 3度，t新7jC腫1 3度，新tt管與術(shù)后2周i^相同，未出現(xiàn)明顯的繊訴鵬；術(shù)后12 周，僅5只兔(2只眼)姓feSS訴反應，余5只兔均未^fe^訴反應，植片混濁2 4度，水腫 2 3度，新5llfiL管0 2度。E組(雷帕霉素白S^IA劑組，賴帕霉素0.5mg):術(shù)后一周，植片透明，Wf^lfiL管明顯減 少；術(shù)后2周至4周，植片透 ^，不7K腫，未見部分象P賺^Ifil管^^A角膨l>t約0.5^1m;術(shù)后8周， 斷混濁1 3度，tt)t7乂腫l 3度，新她管與術(shù)后1周^[相同，出a^f斥鵬；術(shù)后12周， 僅2只兔(5只眼)發(fā)生^(Sf斥鵬，余8只鎖未^^SS訴鵬，It)t混濁l 3度，7幼中1 3 度，新tt管0 2度。F組(雷帕霉素白SK禾IA劑組，賴帕霉素0.3呢)術(shù)后一周，斷透明，豐1^新 管 # 在，^Mggg， ^KA角rait;術(shù)后2周，豐斷透明，不7K腫，少S^部分象卩賺tt管^A角膜 斷；術(shù)后4亂斷透明，不7K腫，Wfftt管頓liSW所賺，tt)t少織tt管；術(shù)后8周， 斷混濁1 3度，斬7幼中1 3度，新tt管與術(shù)后2周;^^相同，未出現(xiàn)明顯免翻訴ffi;術(shù)后 12周，僅3只兔(2只眼)^fe^訴反應，余7只兔均未姓^SS訴反應，斷混濁2 4度，水 腫2 3度，新tt管0 2度。(二) 角JilUt^i斥A、B、C、D、E、F六m角W)t姓^^斥SlS平均時間分別為16. 5±2. 5、16. 0±2.6、67.6±5.8、 35.7±4.1、 75.8±6.9、 63.1士2.8天。術(shù)后2周時A F7^且禾l)t的排斥指數(shù)分別為4.9、 3.9、 0.3、 0.8、 0.2、 0.3;術(shù)后4周時A、 B、 C、 D四組斷的排斥指數(shù)分別為9.8、 9.2、 0.4、 2.6、 0.2、 0.5; 術(shù)后8周時A、 B、 C、 D四組斷的排斥指數(shù)分別為8.4、 9.4、 0.7、 4.1、 0.4、 0.9;術(shù)后12周時A、 B、 C、 D四組斷的排斥指數(shù)^^別為10.4、 10.0、 2.0、 7.2、 1.8、 2.5。(三) 角殿餅新ttt術(shù)后2周時，A F 7^&^^1^新 管指數(shù)分別為2.4、 2.1、 0. 3、 0.6、 0.2、 0.3 (fM). 000): 術(shù)后4周時A F7^Ii 她管指數(shù)分別為3.8、 3.6、 0.4、 0.8、 0.2、 0.9;術(shù)后8周時A F六纟應生血管指數(shù)分別為3.6、 3.6、 0.4、 1.2、 0.3、 0.2;術(shù)后12周時A F7^Iff她管指數(shù)分別為3.8、 3.8、 0.4、 3.7、 0.3、 0.5。(四)組織繊檢查目艮球病理雜査A、 B組出5I^翻訴的角Jill)t行病aa織雜査，HE她，可見角臌餅厚度 增加，約為正常角^j 度的1.5倍。角膜基質(zhì)內(nèi)^1炎'幽胞浸潤，并見;^i tt管生長。D組出現(xiàn) ^^訴^Z的tl)t厚度增加，角膜基質(zhì)中較多的炎性細胞浸潤，S^的新tt管生長。C、 E、 F組角 MJf度^0E常，角膜基質(zhì)中未見明顯炎性細胞浸潤^f tt管生長。A、 B、 C、 D、 E、 F組動,艮^t刀片，HE鵬，可見視網(wǎng)M) 度正常，各層^T清晰，^ffl胞丟失 及艦，無炎糊胞浸潤。肝徵且織満理^t査A、 B、 C、 D、 E、 F六iMf臟檢頓JESf小葉祠咧月妨i^狀，細l&^l正常， 中央靜EW匯管區(qū)結(jié)構(gòu)無異常，^ffl胞i^E，無炎性細胞浸潤。腎臟檢S^T見腎小球結(jié)構(gòu)，，未JElfiL 管系膨且鄉(xiāng)生，細鵬構(gòu)正常，未見炎糊胞浸潤。i^g果表明載藥0.5mg的雷帕霉素白lMltA齊貯效優(yōu)^^藥0.5mg雷帕霉素PLGA緩釋HA劑， 0.3mg的雷帕霉素白^^tA齊iiir^同載藥0.5mg雷帕霉素PLGA緩釋^A齊湘當，倉,效防治高危角 ，li^后，訴S^和角膨新ttt^值，白S^白^A劑也具有顯著的移植角膨新^管作用。 白娜師豐IA齊,姓棘。 對照例l以聚翻為載體、完全按^S例2的制法、用穀步3雜恪雷帕霉穀夷釋系統(tǒng)。術(shù)后肉膨見察和局 部組織滴理^tS^明雷帕霉素聚^S緩釋系皿良好的眼內(nèi)生物相容性，豐IA后的15周內(nèi)可鄉(xiāng)娥雷帕 霉素^7jC為一定濃度，至U六個月時房水中檢測不到有雷帕霉素，。ii^后^^制齊iJi^ S于前房內(nèi)， 并M卜型、大小和^S無變化，因lt^領(lǐng)再手微出。本發(fā)明釋藥周期為一周到~￥;具有用藥量極少，且能長時間在目艮內(nèi)緩漫釋^^物的特點；對于藥 物吸收困難的細立，倉鵬時斷的用藥鄉(xiāng)?？捎糜谘劭祁A防和治療高危角J1^雖的排斥鵬，也可 用于角膨新ttl^MS其御艮內(nèi)新^L管l^。
權(quán)利要求
1、一種白芨膠為載體的眼內(nèi)植入型釋藥系統(tǒng)，其包括作為藥物的雷帕霉素和載體，其特征在于該載體是白芨膠，該白芨膠為由甘露糖和葡萄糖以1∶4聚合而成的葡配甘露聚糖，平均分子量在65000～150000道爾頓，白芨膠以葡配甘露聚糖計，含量＞85％，而其中作為藥物的雷帕霉素加入量為載體干重計0.05％～50％。
2、 如權(quán)利要求1所述的白芨膠為載體的眼內(nèi)植入型釋藥系統(tǒng)，其特征在于上述的 白芨膠中加入起固化作用的交聯(lián)劑，交聯(lián)劑入量為白芨膠和交聯(lián)劑的質(zhì)量比100: 0.01 20。
3、 如權(quán)利要求1或2所述的白芨膠為載體的眼內(nèi)植入型釋藥系統(tǒng)，其特征在于上 述白芨膠中又加入以白芨膠干重計0.5 40%的白蛋白、明膠或阿拉伯膠。
4、 如權(quán)利要求1所述的白芨膠為載體的眼內(nèi)植入型釋藥系統(tǒng)，其特征在于上述的 白芨膠優(yōu)選平均分子量99658道爾頓。
5、 如權(quán)利要求2所述的白芨膠為載體的眼內(nèi)植入型釋藥系統(tǒng)，其特征在于上述的 交聯(lián)劑為甲醛、戊二醛、乙二醇雙縮水甘油醚、丙二醇雙縮水甘油醚或丁二醇雙縮水 甘油醚。
6、 眼用白芨膠以提取和純化方法包括粗多糖提取和分離純化 一、粗多糖提取首先將白芨塊莖干制品粉碎、過篩、烘干，加20倍體積蒸餾水，6(TC回流提取4h， 重復提取一次，合并兩次提取液，離心,取上清，70匸減壓濃縮,加三倍體積95%乙醇 沉淀，離心收集沉淀，冷凍干燥，得粗白芨膠——BRO;二、分離純化-將BRO溶于最小體積水中，Sevag法脫蛋白至考馬斯亮藍G-250法檢測幾無蛋白 質(zhì)被測出，然后用對流水透析三天，真空冷凍干燥，得一級純化白芨膠——BR1;將BR1 400mg溶于20ml蒸餾水中，離心取上清液，在陰離子交換纖維素DE-52 柱上層析，先以2 5個柱體積的蒸餾水洗脫，再用0 4mol/L NaCl溶液直線梯度洗 脫，流速為24ml/h，以4ml收集一管，蒽酮-硫酸法檢測并確定多糖的洗脫位置并收 集洗脫產(chǎn)物，冷凍干燥，得二級純化白芨膠——BR2;將BR2 50mg溶于2ml蒸餾水中，離心取上清液，上Sephadex G-100柱以0.02mol/L NaCl洗脫，流速16ml/h，以2ml收集一管，蒽酮-硫酸法檢測并確定多糖的洗脫位置， 收集洗脫產(chǎn)物，冷凍干燥即得本發(fā)明所需的精制的白芨膠。
全文摘要
一種白芨膠為載體的雷帕霉素眼內(nèi)植入型釋藥系統(tǒng)。包括作為藥物的雷帕霉素和載體，其特征在于載體是白芨膠，該白芨膠主要成分為由甘露糖和葡萄糖以1∶4聚合而成的葡配甘露聚糖，平均分子量在65000～150000，白芨膠以葡配甘露聚糖計，含量＞85％，而其中藥物加入的量，以白芨膠干重計0.05％～50％。上述的白芨膠中還加入交聯(lián)劑。交聯(lián)劑為甲醛、戊二醛、乙二醇雙縮水甘油醚、丙二醇雙縮水甘油醚。白芨膠中又加入白蛋白、明膠等。白芨膠有抑制新生血管、抗腫瘤等作用，聯(lián)合使用可發(fā)揮協(xié)同的治療作用，本發(fā)明充分利用白芨膠體內(nèi)生物降解，緩慢釋放出活性藥物，減少了藥物的用量、用藥次數(shù)和毒副作用，而且對于藥物吸收困難的部位，也能達到更好的用藥效果。
文檔編號A61P27/00GK101269220SQ200810093989
公開日2008年9月24日 申請日期2008年4月25日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月25日
發(fā)明者史偉云, 吳祥根, 謝立信 申請人:山東省眼科研究所