本申請(qǐng)要求2014年12月5日提交的序列號(hào)為62/088,061的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)和2014年11月7日提交的序列號(hào)為62/076,770的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)的優(yōu)先權(quán)，所述公開(kāi)內(nèi)容明確并入本文。本發(fā)明關(guān)于抗vegf抗體的水性醫(yī)藥劑型、其制備方法和這些劑型的用途。
背景技術(shù)：
：血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vegf)為一種已知的血管生成和新血管形成的調(diào)節(jié)子，且已展示為與腫瘤和眼內(nèi)病癥相關(guān)聯(lián)的新血管形成的關(guān)鍵介導(dǎo)子(ferrara等endocr.rev.18:4-25(1997))。vegfmrna在許多人類(lèi)腫瘤中過(guò)表達(dá)，且眼液中vegf濃度與患有糖尿病和其他缺血相關(guān)的視網(wǎng)膜病的患者中血管活躍增生的存在高度相關(guān)(berkman等,jclininvest91:153-159(1993)；brown等hμmanpathol.26:86-91(1995)；brown等cancerres.53:4727-4735(1993)；mattern等brit.j.cancer.73:931-934(1996)；和dvorak等amj.pathol.146:1029-1039(1995)；aiello等n.engl.j.med.331:1480-1487(1994))。此外，最近研究已展示受amd影響的患者中脈絡(luò)膜新生血管膜中局部性vegf的存在(lopez等invest.ophtalmo.vis.sci.37:855-868(1996))?？箆egf中和抗體可用于抑制裸鼠中各種人類(lèi)腫瘤細(xì)胞系的生長(zhǎng)，也抑制缺血性視網(wǎng)膜病癥模型中的眼內(nèi)血管生成(kim等nature362:841-844(1993)；warren等j.clin.invest95:1789-1797(1995)；borgstrom等cancerres.56:4032-4039(1996)；和melnyk等cancerres.56:921-924(1996))(adamis等arch.opthalmol.114:66-71(1996))。許多抗體經(jīng)批準(zhǔn)用于人類(lèi)和其他哺乳動(dòng)物的治療用途，包括抗vegf抗體。液體醫(yī)藥劑型中治療抗體的濃度根據(jù)例如施用途徑而廣泛變化。當(dāng)需要小體積時(shí)，通常需要抗體的高濃度劑型。例如，高濃度劑型對(duì)于玻璃體內(nèi)注射或皮下施用而言可以令人滿意。然而，具有高濃度抗體的劑型可能保質(zhì)期較短，且經(jīng)調(diào)配的抗體可能由于儲(chǔ)存期間化學(xué)和物理不穩(wěn)定性損失生物活性。已知聚集、脫酰胺和氧化是抗體降解最普遍的原因。具體地，聚集可潛在地引起患者中免疫反應(yīng)增加，從而引起安全性擔(dān)憂。因此，必須將聚集降至最低程度或防止。生物治療劑型中顆粒的形成也是主要的質(zhì)量考慮，因?yàn)槿祟?lèi)裸眼大體上可看到數(shù)十微米至亞毫米和毫米尺寸范圍內(nèi)的顆粒(參見(jiàn)das,2012,aapspharmscitech,13:732-746)。治療性眼用制劑中的顆粒可造成對(duì)眼睛的損傷。因此，存在規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)以確保眼用劑型中的亞可見(jiàn)(sub-visible)顆粒物質(zhì)內(nèi)容物在一定限度內(nèi)。例如，美國(guó)藥典委員會(huì)(usp)已設(shè)置對(duì)于眼用溶液中顆粒物質(zhì)的要求，諸如通過(guò)顯微鏡法顆粒計(jì)數(shù)確定的≥10μm直徑的粒子的最大數(shù)目為50/ml，≥25μm直徑的粒子的最大數(shù)目為5/ml，以及≥50μm直徑的粒子的最大數(shù)目為2/ml(參見(jiàn)usp通則<789>)。已知用于產(chǎn)生高濃度抗體劑型的方法。然而，抗體的氨基酸序列對(duì)抗體在各種醫(yī)藥賦形劑、緩沖液等的存在下形成聚集體或降解的趨勢(shì)有無(wú)法預(yù)期的影響，尚不存在能克服這一影響的通用方法。此外，制備含可接受水平亞可見(jiàn)粒子的高濃度蛋白質(zhì)(諸如抗體)的眼用劑型具有挑戰(zhàn)性且不可預(yù)測(cè)。本發(fā)明的一個(gè)目的是提供其他改良的具有高濃度抗vegf抗體以及低水平抗體聚集物和亞可見(jiàn)粒子的劑型，其適于向人類(lèi)施用，尤其向人眼施用。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：因此，本發(fā)明是關(guān)于一種水性醫(yī)藥組合物，其包含適合用于眼用注射的高濃度抗vegf抗體。在某些方面，本發(fā)明的水性醫(yī)藥組合物顯示出低至不可檢測(cè)水平的抗體聚集或降解，其中在制造、制備、運(yùn)輸和長(zhǎng)期儲(chǔ)存期間極少損失甚至不損失生物活性，抗vegf抗體的濃度為至少約50mg/ml、60mg/ml、80mg/ml、100mg/ml、120mg/ml、140mg/ml、160mg/ml、180mg/ml或200mg/ml。本發(fā)明提供包含抗vegf抗體、穩(wěn)定劑、緩沖劑和表面活性劑的水性醫(yī)藥組合物。在某些方面，水性醫(yī)藥組合物包含：(i)至少50mg/ml抗vegf抗體，(ii)作為穩(wěn)定劑的蔗糖或海藻糖，(iii)檸檬酸鹽或組氨酸緩沖劑，(iv)作為表面活性劑的聚山梨醇酯80。在某些方面，水性醫(yī)藥組合物包含約4.5％-11％w/v蔗糖或5％-10％海藻糖、0.006％至0.012％檸檬酸(w/v)、0.2％至0.6％二水合檸檬酸三鈉(w/v)和約0.01％至0.1％聚山梨醇酯80(w/v)，其中所述劑型的ph為6.3至7.3。根據(jù)以下某些優(yōu)選實(shí)施方式的更詳細(xì)描述和權(quán)利要求書(shū)，本發(fā)明具體的優(yōu)選實(shí)施方式是顯見(jiàn)的。附圖說(shuō)明圖1展示以不同ph調(diào)配的1008的濁度分析結(jié)果圖。x軸展示在55℃下的培育時(shí)間；同時(shí)y軸展示在350nm下監(jiān)測(cè)的光密度。圖2a和圖2b展示監(jiān)測(cè)在55℃下培育180min的不同1008劑型中od360改變的濁度分析(圖2a)。將在60min內(nèi)獲得的od360曲線展開(kāi)并示于(圖2b)中。圖2a和2b中的樣本編號(hào)對(duì)應(yīng)于表13中的劑型編號(hào)。為了簡(jiǎn)便起見(jiàn)，圖3展示了在0至90分鐘之間收集數(shù)據(jù)的濁度分析。整個(gè)實(shí)驗(yàn)為180分鐘。監(jiān)測(cè)在55℃下培育的不同1008劑型的od360改變。圖中的樣本編號(hào)對(duì)應(yīng)于表15中的劑型編號(hào)。圖4展示在40℃下儲(chǔ)存6周期間8種所選劑型中主峰的sec結(jié)果的圖。具體實(shí)施方式本發(fā)明提供包含高濃度抗vegf抗體的水性醫(yī)藥組合物。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的水性醫(yī)藥組合物在2-8℃下穩(wěn)定至少18個(gè)月，且適合用于眼部施用，包括注射或輸注。在一個(gè)具體的實(shí)施方式中，本發(fā)明的水性醫(yī)藥組合物滿足usp<789>相對(duì)于顆粒物質(zhì)存在的要求。因此，在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明水性醫(yī)藥組合物中≥10μm直徑粒子的最大數(shù)目為50/ml，本發(fā)明水性醫(yī)藥組合物中≥25μm直徑粒子的最大數(shù)目為5/ml，且本發(fā)明水性醫(yī)藥組合物中≥50μm直徑粒子的最大數(shù)目為2/ml，這些粒子數(shù)目如美國(guó)藥典委員會(huì)通則<789>所要求是通過(guò)光透和/或顯微鏡粒子計(jì)數(shù)方法來(lái)確定的。如本文所用，“水性”醫(yī)藥組合物是適合用于醫(yī)藥用途的組合物，其中水性載體是蒸餾水。適合用于醫(yī)藥用途的組合物可為無(wú)菌的、均質(zhì)的和/或等滲的。水性醫(yī)藥組合物可以直接制備入水性形式(例如在即用的預(yù)填充注射器中)(“水性劑型”)，或以制備為使用前短時(shí)內(nèi)復(fù)原的凍干物形式。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“水性醫(yī)藥組合物”是指液體劑型或復(fù)原凍干劑型。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的水性醫(yī)藥組合物適合用于向人類(lèi)對(duì)象眼用施用。在一個(gè)特定的實(shí)施方式中，本發(fā)明的水性醫(yī)藥組合物適合用于玻璃體內(nèi)施用。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的水性醫(yī)藥組合物適合用于通過(guò)玻璃體內(nèi)輸注施用。本發(fā)明提供新型醫(yī)藥劑型，特別是活性成分包含人類(lèi)vegf抗體的新型醫(yī)藥劑型。在一個(gè)方面中，本發(fā)明關(guān)于具有高濃度抗vegf抗體的水性醫(yī)藥組合物。本發(fā)明劑型中優(yōu)選的抗vegf抗體描述于wo2009/155724中，其全部?jī)?nèi)容以引用的方式并入本文。如本文所用的術(shù)語(yǔ)“抗體”包括全抗體和其任何抗原結(jié)合片段(即“抗原結(jié)合部分”、“抗原結(jié)合多肽”或“免疫結(jié)合劑”)或單鏈。“抗體”包括包含通過(guò)二硫鍵互連的至少兩條重(h)鏈和兩條輕(l)鏈的糖蛋白或其抗原結(jié)合部分。各重鏈包含重鏈可變區(qū)(本文中縮寫(xiě)為vh)和重鏈恒定區(qū)。重鏈恒定區(qū)包含ch1、ch2和ch3三個(gè)結(jié)構(gòu)域。各輕鏈包含輕鏈可變區(qū)(本文中縮寫(xiě)為vl)和輕鏈恒定區(qū)。輕鏈恒定區(qū)由一個(gè)結(jié)構(gòu)域cl組成。vh區(qū)和vl區(qū)可進(jìn)一步再分成被稱(chēng)為互補(bǔ)決定區(qū)(cdr)的超變區(qū)，穿插有被稱(chēng)為構(gòu)架區(qū)(fr)的較保守區(qū)。各vh和vl由三個(gè)cdr和四個(gè)fr構(gòu)成，這些區(qū)域依以下順序自氨基端至羧基端排列：fr1、cdr1、fr2、cdr2、fr3、cdr3、fr4。重鏈和輕鏈可變區(qū)含有與抗原相互作用的結(jié)合域?？贵w的恒定區(qū)可介導(dǎo)免疫球蛋白與宿主組織或因子的結(jié)合，這些宿主組織或因子包括免疫系統(tǒng)的各種細(xì)胞(例如效應(yīng)細(xì)胞)和經(jīng)典補(bǔ)體系統(tǒng)的第一組分(clq)。術(shù)語(yǔ)抗體的“抗原結(jié)合部分”(或簡(jiǎn)言之“抗體部分”)是指保留對(duì)抗原(例如vegf)特異性結(jié)合能力的抗體的一或多個(gè)片段。已表明抗體的抗原結(jié)合功能可由全長(zhǎng)抗體的片段執(zhí)行。涵蓋在術(shù)語(yǔ)抗體的“抗原結(jié)合部分”內(nèi)的結(jié)合片段的實(shí)例包括(i)fab片段，由vl、vh、cl和ch1結(jié)構(gòu)域組成的單價(jià)片段；(ii)f(ab')2片段，包含通過(guò)鉸鏈區(qū)的二硫橋連接的兩個(gè)fab片段的二價(jià)片段；(iii)由vh和ch1結(jié)構(gòu)域組成的fd片段；(iv)由抗體單臂的vl和vh結(jié)構(gòu)域組成的fv片段；(v)由vh結(jié)構(gòu)域組成的單結(jié)構(gòu)域或dab片段(ward等，(1989)nature341：544-546)；和(vi)分離的互補(bǔ)決定區(qū)(cdr)；或(vii)兩種或兩種以上分離的cdr的組合，這些cdr可任選地通過(guò)合成接頭連接。此外，盡管fv片段的兩個(gè)結(jié)構(gòu)域vl和vh由單獨(dú)的基因編碼，但是其可使用重組方法通過(guò)合成接頭連接，該接頭使其能夠制造成單蛋白質(zhì)鏈，在該單蛋白質(zhì)鏈中vl和vh區(qū)成對(duì)形成單價(jià)分子(稱(chēng)為單鏈fv(scfv)；參見(jiàn)例如，bird等(1988)science242：423-426；和huston等(1988)proc.natl.acad.sci.usa85：5879-5883)。這些單鏈抗體也涵蓋在術(shù)語(yǔ)抗體的“抗原結(jié)合部分”內(nèi)。這些抗體片段可從本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)技術(shù)獲得，且這些片段經(jīng)篩選以與完整抗體相同的方式應(yīng)用。抗原結(jié)合部分可通過(guò)重組dna技術(shù)或通過(guò)完整免疫球蛋白的酶促或化學(xué)裂解生成?？贵w可為不同的同種型，例如igg(例如igg1、igg2、igg3或igg4亞型)、iga1、iga2、igd、ige或igm抗體。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，本發(fā)明的水性醫(yī)藥組合物包含具有如seqidno：1中所示序列的可變重鏈和如seqidno：2中所示序列的可變輕鏈。vh：seqidno：1evqlvesggglvqpggslrlsctasgfsltdyyymtwvrqapgkglewvgfidpdddpyyatwakgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycaggdhnsgwgldiwgqgtlvtvssvl：seqidno：eivmtqspstlsasvgdrviitcqaseiihswlawyqqkpgkapklliylastlasgvpsrfsgsgsgaeftltisslqpddfatyycqnvylastnganfgqgtkltvlg在另一優(yōu)選實(shí)施方式中，抗vegf抗體為單鏈fv(scfv)抗體片段，其包含序列：eivmtqspstlsasvgdrviitcqaseiihswlawyqqkpgkapklliylastlasgvpsrfsgsgsgaeftltisslqpddfatyycqnvylastnganfgqgtkltvlgggggsggggsggggsggggsevqlvesggglvqpggslrlsctasgfsltdyyymtwvrqapgkglewvgfidpdddpyyatwakgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycaggdhnsgwgldiwgqgtlvtvss(seqidno：3)本發(fā)明的水性醫(yī)藥組合物中抗vegf抗體可如例如wo2009/155724中所述產(chǎn)生。如本文所述，scfv可使用表達(dá)載體產(chǎn)生。在其未轉(zhuǎn)譯后裂解的情況下，來(lái)源于表達(dá)載體中起始密碼子的甲硫氨酸存在于最終蛋白質(zhì)中(參見(jiàn)實(shí)施例中的seqidno:4)。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的水性醫(yī)藥組合物中抗vegf抗體包含如seqidno:5、6和7中所示的重鏈cdr1、cdr2和cdr3，和如seqidno:8、9和10中所示的輕鏈cdr1、cdr2和cdr3。seqidno:5gfsltdyyymtseqidno:6fidpdddpyyatwakgseqidno:7gdhnsgwgldiseqidno:8qaseiihswlaseqidno:9lastlasseqidno:10qnvylastngan在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的水性醫(yī)藥組合物中抗vegf抗體的濃度為至少50mg/ml。優(yōu)選地，本發(fā)明的水性醫(yī)藥組合物包含約50mg/ml、約60mg/ml、約70mg/ml、約80mg/ml、約90mg/ml、約100mg/ml、約110mg/ml、約120mg/ml、約130mg/ml、約140mg/ml、約150mg/ml、約160mg/ml、約170mg/ml、約180mg/ml、約190mg/ml、約200mg/ml、約210mg/ml、約220mg/ml、約230mg/ml、約240mg/ml、約250mg/ml或約300mg/ml抗vegf抗體。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的水性醫(yī)藥組合物包含60mg/ml-120mg/ml的抗vegf抗體，例如包含seqidno:1和seqidno:2的抗體。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的水性醫(yī)藥組合物包含60mg/ml抗vegf抗體，其包含seqidno:3。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的水性醫(yī)藥組合物包含120mg/ml抗vegf抗體，其包含seqidno:3。本發(fā)明的水性醫(yī)藥組合物除抗vegf抗體外也包括其他組分，諸如下列一或多個(gè)：(i)穩(wěn)定劑；(ii)緩沖劑；(iii)表面活性劑；和(iv)游離氨基酸。包含各所述其他組分可得抗vegf抗體低聚集的組合物。優(yōu)選地，本發(fā)明的水性醫(yī)藥組合物除抗vegf抗體外也包括：(i)穩(wěn)定劑；(ii)緩沖液；和(iii)表面活性劑。用于與本發(fā)明一起使用的合適穩(wěn)定劑可充當(dāng)例如增黏劑、增容劑、增溶劑等。穩(wěn)定劑可為離子的或非離子的(例如糖)。作為糖，其可包括但不限于單糖，例如果糖、麥芽糖、半乳糖、葡萄糖、d-甘露糖、山梨糖等；雙糖，例如，乳糖、蔗糖、海藻糖、纖維二糖等；多糖，例如棉子糖、松三糖、麥芽糊精、葡聚糖、淀粉等；和醛醇，例如甘露醇、木糖醇、麥芽糖醇、乳糖醇、木糖醇山梨醇(葡萄糖醇)等。例如，糖可為蔗糖、海藻糖、棉子糖、麥芽糖、山梨醇或甘露醇。糖可為糖醇或氨基糖。優(yōu)選蔗糖和海藻糖。最優(yōu)選蔗糖。作為離子穩(wěn)定劑，其可包括鹽諸如nacl或氨基酸組分諸如精氨酸-hcl。用于與本發(fā)明一起使用的合適緩沖劑包括但不限于有機(jī)酸鹽諸如檸檬酸鹽、抗壞血酸鹽、葡萄糖酸鹽、碳酸鹽、酒石酸鹽、琥珀酸鹽、乙酸鹽或鄰苯二甲酸鹽；tris、鹽酸氨基丁三醇或磷酸鹽緩沖劑。此外，氨基酸組分也可用作緩沖劑。檸檬酸鹽或組氨酸緩沖劑特別有用，包括10-20mm組氨酸緩沖液，例如0.13％至0.26％(w/v)組氨酸和0.03％-0.07％(w/v)一水合組氨酸鹽酸鹽，或10-20mm檸檬酸鹽緩沖液，例如0.006％至0.012％檸檬酸(w/v)和0.2％至0.6％二水合檸檬酸三鈉(w/v)。用于本發(fā)明劑型的檸檬酸可為任何水合形式，例如無(wú)水或一水。水性醫(yī)藥組合物包括這類(lèi)緩沖劑或ph調(diào)節(jié)劑以提供改良的ph控制。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的水性醫(yī)藥組合物的ph在5.0與8.0之間、5.0與7.0之間、6.0與8.0之間或6.0與7.0之間。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的水性醫(yī)藥組合物的ph為約6.3至約7.3。在一個(gè)特定的實(shí)施方式中，本發(fā)明的水性醫(yī)藥組合物具有約6.8的ph。如本文所用，本文中術(shù)語(yǔ)“表面活性劑”是指具有兩親結(jié)構(gòu)的有機(jī)物質(zhì)；即其由溶解趨勢(shì)相反的基團(tuán)組成，通常是油溶性烴鏈和水溶性離子基團(tuán)。對(duì)于生物材料的各種醫(yī)藥組合物和制劑，表面活性劑可根據(jù)界面活性部分的電荷而分類(lèi)成陰離子、陽(yáng)離子和分散劑。用于與本發(fā)明一起使用的合適表面活性劑包括但不限于非離子表面活性劑、離子表面活性劑和兩性離子表面活性劑。用于與本發(fā)明一起使用的典型表面活性劑包括但不限于去水山梨醇脂肪酸酯(例如單辛酸去水山梨醇酯、單月桂酸去水山梨醇酯、單棕櫚酸去水山梨醇酯)、三油酸去水山梨醇酯、甘油脂肪酸酯(例如單辛酸甘油酯、單肉豆蔻酸甘油酯、單硬脂酸甘油酯)、聚甘油脂肪酸酯(例如單硬脂酸十甘油酯、二硬脂酸十甘油酯、單亞油酸十甘油酯)、聚氧乙烯去水山梨醇脂肪酸酯(例如聚氧乙烯去水山梨醇單月桂酸酯、聚氧乙烯去水山梨醇單油酸酯、聚氧乙烯去水山梨醇單硬脂酸酯、聚氧乙烯去水山梨醇單棕櫚酸酯、聚氧乙烯去水山梨醇三油酸酯、聚氧乙烯去水山梨醇三硬脂酸酯)、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯(例如聚氧乙烯梨糖醇四硬脂酸酯、聚氧乙烯山梨醇四油酸酯)、聚氧乙烯甘油脂肪酸酯(例如聚氧乙烯甘油單硬脂酸酯)、聚乙二醇脂肪酸酯(例如聚乙二醇二硬脂酸酯)、聚氧乙烯烷基醚(例如聚氧乙烯月桂醚)、聚氧乙烯聚氧丙烯烷基醚(例如聚氧乙烯聚氧丙烯二醇、聚氧乙烯聚氧丙烯丙醚、聚氧乙烯聚氧丙烯十六醚)、聚氧乙烯烷基苯基醚(例如聚氧乙烯壬基苯基醚)、聚氧乙烯氫化蓖麻油(例如聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氫化蓖麻油)、聚氧乙烯蜂蠟衍生物(例如聚氧乙烯山梨醇蜂蠟)、聚氧乙烯羊毛脂衍生物(例如聚氧乙烯羊毛脂)和聚氧乙烯脂肪胺(例如聚氧乙烯硬脂胺)；c10-c18烷基硫酸鹽(例如十六烷基硫酸鈉、月桂基硫酸鈉、油烯基硫酸鈉)、平均加有2至4摩爾環(huán)氧乙烷單元的聚氧乙烯c10-c18烷基醚硫酸鹽(例如聚氧乙烯月桂基硫酸鈉)和c1-c18烷基磺基琥珀酸酯鹽(例如月桂基磺基琥珀酸酯鈉)；和天然表面活性劑諸如卵磷脂、甘油磷脂、鞘磷脂(例如神經(jīng)鞘磷脂)和c12-18脂肪酸的蔗糖酯。組合物可包括這些表面活性劑中的一或多個(gè)。優(yōu)選表面活性劑為聚氧乙烯去水山梨醇脂肪酸酯，例如聚山梨醇酯20、40、60或80。尤其優(yōu)選聚山梨醇酯80。用于與本發(fā)明一起使用的合適游離氨基酸包括但不限于精氨酸、賴(lài)氨酸、組氨酸、鳥(niǎo)氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸、谷氨酸或天冬氨酸。優(yōu)選包括堿性氨基酸，即精氨酸、賴(lài)氨酸和/或組氨酸。若組合物包括組氨酸，則其可既充當(dāng)緩沖劑也充當(dāng)游離氨基酸，但當(dāng)使用組氨酸緩沖液時(shí)，通常包括非組氨酸游離氨基酸，例如包括組氨酸緩沖液和賴(lài)氨酸。氨基酸可以d-和/或l-形式存在，但通常是l-形式。氨基酸可以任何合適的鹽存在，例如鹽酸鹽，諸如精氨酸-hcl。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，本發(fā)明的水性醫(yī)藥組合物不包含任何這類(lèi)游離氨基酸。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，糖以3％與11％(w/v)之間的濃度存在于本發(fā)明的水性醫(yī)藥組合物中(例如凍干物在水中復(fù)原后)。在某些實(shí)施方式中，糖是濃度約4.5％至約11％的蔗糖或濃度約5％至約10％的海藻糖。優(yōu)選6.75％(w/v)濃度的蔗糖。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，緩沖劑以1mm與60mm之間的濃度存在于本發(fā)明的水性醫(yī)藥組合物中(例如凍干物在水中復(fù)原后)，例如10-40mm、15-30mm、15-25mm。在某些實(shí)施方式中，緩沖劑為檸檬酸鹽或組氨酸。優(yōu)選15mm濃度的檸檬酸鹽緩沖液。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，表面活性劑以至多0.2％(按體積計(jì))的濃度存在于本發(fā)明的水性醫(yī)藥組合物中(例如凍干物在水中復(fù)原后)，例如0.01-0.1％、0.03-0.08％、0.04-0.08％。優(yōu)選0.05％濃度的聚山梨醇酯80?？捎糜诒景l(fā)明水性醫(yī)藥組合物中的其他預(yù)期賦形劑包括例如抗微生物劑、抗氧化劑、抗靜電劑、脂質(zhì)諸如磷脂或脂肪酸、類(lèi)固醇諸如膽固醇、蛋白質(zhì)賦形劑諸如血清白蛋白(人類(lèi)血清白蛋白)、重組人類(lèi)白蛋白、明膠、酪蛋白、成鹽抗衡離子諸如鈉等。這些和其他已知的適合用于本發(fā)明劑型中的醫(yī)藥賦形劑和/或添加劑為本領(lǐng)域所知，例如如以下所列：thehandbookofpharmaceuticalexcipients,第4版,rowe等編,americanpharmaceuticalsassociation(2003)；和remington:thescienceandpracticeofpharmacy,第21版,gennaro編,lippincottwilliams&wilkins(2005)。本發(fā)明的優(yōu)選劑型示于以下實(shí)施例的表40中。在某些實(shí)施方式中，考慮凍干抗vegf抗體來(lái)得到用于治療患者的本發(fā)明水性醫(yī)藥組合物。本領(lǐng)域已知抗體凍干技術(shù)，例如參見(jiàn)johnf.carpenter和michaelj.pikal,1997(pharm.res.14,969-975)；xialin(charlie)tang和michaelj.pikal,2004(pharm.res.21,191-200)。在將凍干物向患者施用之前，應(yīng)將其用水性復(fù)原劑復(fù)原。該步驟允許凍干物中的抗體和其他組分重新溶解以得到適合用于向患者注射的溶液。用于復(fù)原的水性材料體積決定所得醫(yī)藥組合物中抗體的濃度。用體積小于凍干前體積的復(fù)原劑復(fù)原得到比凍干之前更濃縮的組合物。復(fù)原因子(凍干之后劑型的體積:凍干之前劑型的體積)可為1:0.5至1:6。1:3的復(fù)原因子是可用的。如上文所提及，可將本發(fā)明的凍干物復(fù)原以得到抗vegf抗體濃度至少50mg/ml(即至少60mg/ml、70mg/ml、80mg/ml、90mg/ml、100mg/ml、110mg/ml、120mg/ml或130mg/ml)的水性組合物，且可相應(yīng)地選擇復(fù)原物的體積。當(dāng)需要時(shí)，可在向患者施用之前酌情將復(fù)原劑型稀釋以遞送預(yù)計(jì)劑量。凍干抗體的典型復(fù)原劑包括無(wú)菌水或緩沖液，可任選含有防腐劑。若凍干物包括緩沖劑，則復(fù)原劑可包括額外緩沖劑(其可與凍干物的緩沖劑相同或不同)，或反之，其可不包括緩沖劑(例如wfi(注射用水)或生理鹽水)。包含抗vegf抗體的本發(fā)明水性醫(yī)藥組合物可用于治療不同疾病或病癥。包含抗vegf抗體的醫(yī)藥組合物尤其可用于治療對(duì)象的新生血管眼部疾病?？墒褂帽景l(fā)明水性醫(yī)藥組合物治療的“新生血管眼部疾病”包括與眼部新生血管形成相關(guān)聯(lián)的病狀、疾病或病癥，其包括但不限于異常的血管生成、脈絡(luò)膜新生血管(cnv)、視網(wǎng)膜血管通透性、視網(wǎng)膜水腫、糖尿病性視網(wǎng)膜病(特別是增生性糖尿病性視網(wǎng)膜病)、糖尿病性黃斑水腫、新生血管(滲出性)老年性黃斑變性(amd)、包括與namd(新生血管amd)相關(guān)聯(lián)的cnv、與視網(wǎng)膜缺血相關(guān)的后遺癥、視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞(crvo)和后節(jié)新生血管形成。本發(fā)明的水性醫(yī)藥組合物可包括除抗vegf抗體外的其他活性成分。其他的藥理學(xué)試劑可包括例如可用于治療眼部疾病的其他抗體。本發(fā)明的水性醫(yī)藥組合物可向患者施用。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“對(duì)象”或“患者”指人類(lèi)和非人類(lèi)哺乳動(dòng)物，包括但不限于靈長(zhǎng)類(lèi)、兔、豬、馬、狗、貓、羊和牛。對(duì)象或患者優(yōu)選為人類(lèi)。施用通常經(jīng)由注射器。因此，本發(fā)明提供一種包括本發(fā)明醫(yī)藥組合物的遞送裝置(例如注射器)，例如預(yù)填充的注射器?；颊邔⒔邮苡行Я康目箆egf抗體作為主要活性成分(即足以達(dá)成或至少部分達(dá)成所需效果的量)。治療有效量若能使基本相關(guān)癥狀或病癥產(chǎn)生(即便)量變就已充分。治療有效劑量不必完全治愈疾病或完全消除癥狀。優(yōu)選地，治療有效劑量可至少部分遏制正罹患該疾病患者的疾病和其并發(fā)癥。有效用于該用途的量將取決于正在治療的病癥的嚴(yán)重程度和患者自身免疫系統(tǒng)的綜合狀態(tài)。劑量可由具有治療該疾病或病狀的一般技術(shù)的醫(yī)師使用已知的劑量調(diào)整技術(shù)容易地確定。例如，本發(fā)明水性醫(yī)藥組合物中所用的治療有效量的抗vegf抗體通過(guò)考量所需的劑量體積和施用方式來(lái)確定。通常，治療有效的組合物是以每劑0.001mg/ml至約200mg/ml范圍內(nèi)的劑量施用。優(yōu)選地，本發(fā)明方法中所用的劑量為約60mg/ml至約120mg/ml(即約60mg/ml、70mg/ml、80mg/ml、90mg/ml、100mg/ml、110mg/ml或120mg/ml)。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明方法中所用的抗vegf抗體的劑量為60mg/ml或120mg/ml。在某些實(shí)施方式中，直接向患者的眼睛施用劑量。在一個(gè)實(shí)施方式中，每眼的劑量為至少約0.5mg至約6mg。優(yōu)選的每眼劑量包括約0.5mg、0.6mg、0.7mg、0.8mg、0.9mg、1.0mg、1.2mg、1.4mg、1.6mg、1.8mg、2.0mg、2.5mg、3.0mg、3.5mg、4.0mg、4.5mg、5.0mg、5.5mg和6.0mg。劑量可以各種適合用于眼部施用的體積施用，諸如50μl或100μl，例如包括3mg/50μl或6mg/50μl。也可使用較小體積，包括10μl或更小，例如約10μl或約8.0μl。在某些實(shí)施方式中，將1.2mg/10μl或1mg/8.0μl(例如1mg/8.3μl)的劑量遞送至患者眼睛用于治療或改善上文所述的一或多個(gè)疾病和病癥。例如可通過(guò)玻璃體內(nèi)注射或輸注遞送。本發(fā)明也提供用作藥物的本發(fā)明劑型(即水性醫(yī)藥組合物)，例如用于向患者遞送抗體，或用于治療或改善上述一或多個(gè)疾病和病癥。本發(fā)明進(jìn)一步提供一種用于向患者遞送抗vegf抗體的方法，其包含向患者施用本發(fā)明水性醫(yī)藥組合物的步驟。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明向患者遞送抗vegf抗體的方法包含以下步驟：(i)將本發(fā)明的凍干物復(fù)原得到水性劑型，和(ii)向患者施用水性劑型。步驟(ii)理想地發(fā)生在步驟(i)的24小時(shí)內(nèi)(例如在12小時(shí)內(nèi)、在6小時(shí)內(nèi)、在3小時(shí)內(nèi)或在1小時(shí)內(nèi))。本發(fā)明的某些特定實(shí)施方式如下文編號(hào)所述：1.一種水性醫(yī)藥組合物，包含(i)至少50mg/ml抗vegf抗體，其包括seqidno:5、6和7所示的重鏈cdr1、cdr2和cdr3，和seqidno:8、9和10所示的輕鏈cdr1、cdr2和cdr3，(ii)蔗糖或海藻糖，(iii)檸檬酸鹽或組氨酸緩沖劑，和(iv)作為表面活性劑的聚山梨醇酯80。2.如實(shí)施方式1的水性醫(yī)藥組合物，包含4.5％至11％(w/v)蔗糖或5％至10％海藻糖、0.006％至0.012％檸檬酸(w/v)、0.2％至0.6％二水合檸檬酸三鈉(w/v)和0.01％至0.1％聚山梨醇酯80(w/v)，其中該組合物的ph為約6.3至約7.3。3.如實(shí)施方式2的水性醫(yī)藥組合物，其中蔗糖的濃度為6.75％(w/v)，檸檬酸的濃度為約0.01％(w/v)，二水合檸檬酸三鈉的濃度為約0.428％(w/v)，聚山梨醇酯80的濃度為約0.05％(w/v)，且ph為約6.8。4.如實(shí)施方式1-3中任一項(xiàng)的水性醫(yī)藥組合物，其中該抗vegf抗體的濃度為至少60mg/ml、至少70mg/ml、至少80mg/ml、至少90mg/ml、至少100mg/ml、至少110mg/ml、至少120mg/ml、至少130mg/ml、至少140mg/ml或至少150mg/ml。5.如實(shí)施方式1-4中任一項(xiàng)的水性醫(yī)藥組合物，其中該抗vegf抗體的濃度為約60mg/ml、約70mg/ml、約80mg/ml、約90mg/ml、約100mg/ml、約110mg/ml、約120mg/ml、約130mg/ml、約140mg/ml或約150mg/ml。6.如實(shí)施方式1-5中任一項(xiàng)的水性醫(yī)藥組合物，其中該抗vegf抗體包含seqidno:1和seqidno:2的序列。7.如實(shí)施方式1-6中任一項(xiàng)的水性醫(yī)藥組合物，其中該抗vegf抗體包含seqidno:3的序列。8.如實(shí)施方式1-7中任一項(xiàng)的水性醫(yī)藥組合物，其中該抗vegf抗體的濃度為約60mg/ml或約120mg/ml。9.一種遞送裝置，其包括實(shí)施方式1-8中任一項(xiàng)的水性醫(yī)藥組合物。10.如實(shí)施方式9的遞送裝置，其為預(yù)填充的注射器。11.一種用于向?qū)ο筮f送抗vegf抗體的方法，其包含向該對(duì)象施用實(shí)施方式1-8中任一項(xiàng)的水性醫(yī)藥組合物的步驟。12.一種治療由vegf介導(dǎo)的眼部疾病或病癥的方法，其包含向?qū)ο笫┯脤?shí)施方式1-8中任一項(xiàng)的水性醫(yī)藥組合物。13.如實(shí)施方式12的方法，其中該眼部疾病或病癥為眼部新生血管疾病。14.一種通過(guò)將實(shí)施方式1-8中任一項(xiàng)的水性醫(yī)藥組合物凍干而制備的凍干劑型。15.一種用于制備凍干物的方法，其包含以下步驟：(i)制備抗vegf抗體、蔗糖或海藻糖、檸檬酸鹽或組氨酸緩沖劑和表面活性劑的水溶液；和(ii)將該水溶液凍干。16.如實(shí)施方式15的方法，其中該抗vegf抗體包括seqidno:5、6和7所示的重鏈cdr1、cdr2和cdr3，和seqidno:8、9和10所示的輕鏈cdr1、cdr2和cdr3。17.如實(shí)施方式16的方法，其中該抗vegf抗體包含seqidno:1和seqidno:2的序列。18.如實(shí)施方式16-17中任一項(xiàng)的方法，其中該抗vegf抗體包含seqidno:3的序列。19.用于向?qū)ο筮f送抗vegf抗體的實(shí)施方式1-8中任一項(xiàng)的水性醫(yī)藥組合物，所述遞送包含向?qū)ο笫┯迷撍葬t(yī)藥組合物的步驟。20.用于治療由vegf介導(dǎo)的眼部疾病或病癥的實(shí)施方式1-8中任一項(xiàng)的水性醫(yī)藥組合物，包含向?qū)ο笫┯迷撍葬t(yī)藥組合物。21.如實(shí)施方式20的用途，其中該眼部疾病或病癥為眼部新生血管疾病。如本文所用且除非另外說(shuō)明，所有百分比為重量百分比。如本文所用且除非另外指明，術(shù)語(yǔ)“一個(gè)”和“一種”用于表示“一個(gè)(種)”、“至少一個(gè)(種)”或“一或多個(gè)(種)”。除非與上下文相反，本文所用的單數(shù)術(shù)語(yǔ)將包括復(fù)數(shù)且復(fù)數(shù)術(shù)語(yǔ)將包括單數(shù)。本說(shuō)明書(shū)中通篇所引用的任何專(zhuān)利、專(zhuān)利申請(qǐng)和參考文獻(xiàn)的內(nèi)容以全文引用的形式并入本說(shuō)明書(shū)。從本文所公開(kāi)的本發(fā)明說(shuō)明書(shū)和實(shí)施來(lái)考慮，本發(fā)明的其他實(shí)施方式會(huì)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員顯見(jiàn)。本發(fā)明說(shuō)明書(shū)和實(shí)施例僅具有示范性，且本發(fā)明的真實(shí)范疇和精神由權(quán)利要求書(shū)和其等效范圍指示。實(shí)施例以下實(shí)施例描述劑型開(kāi)發(fā)工作，其經(jīng)設(shè)計(jì)以鑒別合適的穩(wěn)定化方法和組合物以得到包含抗體1008的穩(wěn)定且高度濃縮的溶液，從而能提供在冷藏儲(chǔ)存條件下具有至少18個(gè)月保質(zhì)期的ivt劑型，符合眼用產(chǎn)品的規(guī)定要求。1008抗體為單鏈抗體，其結(jié)合至人類(lèi)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子a(vegf-a)并抑制人類(lèi)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子a的生物活性。所表達(dá)1008的氨基酸序列為：將1008調(diào)配成在ph6.25下具有0.001％聚山梨醇酯20的15mm檸檬酸鹽緩沖液中的等滲溶液時(shí)，在60mg/ml1008的濃度下觀察到顯著量的亞可見(jiàn)顆粒。該初始劑型的主要問(wèn)題為：即使在-20℃下儲(chǔ)存時(shí)，顆粒物質(zhì)也超過(guò)眼用注射用溶液的規(guī)定限制(usp<789>)。以下實(shí)施例概括了在2-8℃下儲(chǔ)存至少18個(gè)月穩(wěn)定的60mg/ml和120mg/ml1008玻璃體內(nèi)(ivt)溶液的劑型開(kāi)發(fā)。劑型開(kāi)發(fā)工作的重點(diǎn)在于抑制亞可見(jiàn)粒子形成和達(dá)到usp對(duì)含量、純度和效力的要求。分析方法如所示，實(shí)施例通篇使用以下方法。微流成像(mfi)方法賦形劑篩選，針對(duì)60mg/ml優(yōu)化研究的研究1和研究2所用mfi方法如下：所用的總樣本體積0.50ml沖洗體積：0.20ml分析體積：0.26ml用純化的經(jīng)過(guò)濾的不含粒子的水進(jìn)行照明步驟優(yōu)化。分析120mg/ml1008的研究3和研究4所用mfi方法：所用的總樣本體積0.80ml沖洗體積：0.23ml分析體積：0.48ml用純化的經(jīng)過(guò)濾的不含粒子的水進(jìn)行照明步驟優(yōu)化。sec方法se-hplc(體積排阻色譜)根據(jù)體積分離蛋白質(zhì)。通過(guò)樣本分子在其穿過(guò)多孔粒子固定相時(shí)的區(qū)分排阻(differentialexclusion)或納入而實(shí)現(xiàn)分離。高效液相層析系統(tǒng)能夠保持0.25ml/分鐘的流動(dòng)速率和4℃的樣本溫度，裝備有tosohsupersw3000柱(tosohbiosciencellc,kingofprussia,pa)和能夠同時(shí)在214nm和280nm下運(yùn)行的檢測(cè)器。該方法用于純度測(cè)試。iex-hplc方法aiex-hplc(陰離子交換高效液相層析法)根據(jù)凈電荷分離蛋白質(zhì)。該過(guò)程使用高效液相層析法(hplc)進(jìn)行，其能夠保持0.8ml/分鐘的流動(dòng)速率，具有含有強(qiáng)陰離子交換柱的溫控柱室(設(shè)定在25℃)、自動(dòng)取樣器(設(shè)定在4℃)和能夠在280nm下運(yùn)行的可變波長(zhǎng)uv檢測(cè)器。cge方法通過(guò)sds凝膠毛細(xì)管電泳進(jìn)行毛細(xì)管凝膠電泳方法，以確定在10kda與225kda的分子量之間的蛋白質(zhì)的同一性和純度。毛細(xì)管動(dòng)態(tài)地填充有ph8的beckmancoulter0.2％sds凝膠緩沖液這一專(zhuān)有制劑。通過(guò)分子篩電泳進(jìn)行蛋白質(zhì)的分離。蛋白質(zhì)分子量的對(duì)數(shù)與其電泳移動(dòng)率的倒數(shù)成線性關(guān)系。通過(guò)比較蛋白質(zhì)的遷移與分子量標(biāo)準(zhǔn)確定蛋白質(zhì)的同一性。通過(guò)母峰和雜質(zhì)的面積百分比分析確定純度。用光電二極管陣列檢測(cè)器(pda)在220nm下分析樣品。效力分析用競(jìng)爭(zhēng)elisa測(cè)定效力。競(jìng)爭(zhēng)elisa測(cè)量1008與vegfr2/fc競(jìng)爭(zhēng)生物素化vegf的能力。所觀察到的信號(hào)與1008的濃度反相關(guān)，因?yàn)樵黾恿康?008有效地阻止生物素化vegf與其受體vegfr2/fc結(jié)合。在96孔微量滴定板中相對(duì)于1008參考標(biāo)準(zhǔn)分析各樣本，并報(bào)道樣品相對(duì)于參考標(biāo)準(zhǔn)的效力。實(shí)施例1賦形劑篩選在ph6.25的檸檬酸鹽緩沖液中配制1008。劑型組成示于表1中。表1在上述劑型中觀察到顯著數(shù)目的亞可見(jiàn)顆粒。即使在-20℃儲(chǔ)存下，顆粒物質(zhì)超過(guò)眼用注射溶液的規(guī)定限制usp<789>。研究各種賦形劑對(duì)可見(jiàn)顆粒形成的作用以開(kāi)發(fā)更穩(wěn)定的1008的液體溶液。將含有不同賦形劑的60mg/ml蛋白質(zhì)溶液儲(chǔ)存在40℃下且通過(guò)mfi分析大小為1-100μm的顆粒。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)證明，大部分所測(cè)試的賦形劑并不減少顆粒形成，包括精氨酸、葡聚糖、抗壞血酸、甲硫氨酸和乙酸胺。僅在非還原糖諸如蔗糖和海藻糖的存在下，顆粒形成顯著減少。進(jìn)一步進(jìn)行賦形劑篩選。在～60mg/ml1008溶液中評(píng)估賦形劑對(duì)1008穩(wěn)定性的作用。將含有0.1％人類(lèi)血清白蛋白(hsa)、0.1％泊洛沙姆407、0.1％玻雷吉35、3％甘油、50mm甘氨酸的蛋白質(zhì)溶液儲(chǔ)存在40℃下，且在儲(chǔ)存8日、21日和28日之后通過(guò)mfi、sec和iex分析樣品。結(jié)果示于表2中。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)證明在所測(cè)試賦形劑的存在下蛋白質(zhì)的不穩(wěn)定性。表2賦形劑篩選的結(jié)果在ph6.25的20mm磷酸鹽緩沖液中研究57mg/ml1008的穩(wěn)定性。在40℃下儲(chǔ)存6日、14日和27日后分析含有9％蔗糖和0.1％ps80的劑型。結(jié)果列于表3中。表320mm磷酸鹽緩沖液中57mg/ml1008的穩(wěn)定性在40℃下的時(shí)間(日)61427≥10μm通過(guò)mfi(#/ml)434211≥25μm通過(guò)mfi(#/ml)3133≥50μm通過(guò)mfi(#/ml)140總計(jì)通過(guò)mfi(#/ml)14181650425sec(初始％)97.391.982.1iex(初始％)98.392.279.2實(shí)施例2新劑型開(kāi)發(fā)研究1賦形劑篩選將ph6.25且含有0.001％聚山梨醇酯20和0.73％nacl的20mm檸檬酸鹽緩沖液中的60mg/ml1008的蛋白質(zhì)溶液用于樣品制備。為了移除原始蛋白質(zhì)溶液中的表面活性劑，首先使用不含聚山梨醇酯20的載劑用nap-25柱進(jìn)行緩沖液交換。隨后使用具有10kdamwco的vivaspin過(guò)濾器將交換后的蛋白質(zhì)溶液濃縮至約60mg/ml。分別摻入(spike)賦形劑hsa、甘氨酸、甘油、泊洛沙姆407和玻雷吉35。隨后將所制備的樣品經(jīng)0.2μmpvdf膜用注射器過(guò)濾至4ml透明玻璃小瓶中。將約100μl樣品用于初始分析，同時(shí)將剩余樣品在40℃下儲(chǔ)存。在40℃下儲(chǔ)存8日、21日和28日時(shí)，取出各劑型的一毫升樣品用于通過(guò)mfi、sec和iex分析。緩沖劑、糖和表面活性劑的組分選擇基于在內(nèi)部進(jìn)行的賦形劑篩選研究，選擇兩種緩沖劑(檸檬酸鹽和組氨酸)、糖(蔗糖和海藻糖)和表面活性劑(聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯80)用于劑型組分選擇。選擇20mm的緩沖劑強(qiáng)度、264mm的糖濃度和0.1％的表面活性劑濃度用于研究。如下表所示設(shè)計(jì)全因子實(shí)驗(yàn)研究。表4研究1的因子和設(shè)計(jì)因子設(shè)計(jì)緩沖劑20mm檸檬酸鹽或20mm組氨酸糖264mm(9％)蔗糖或264mm(9％)海藻糖表面活性劑0.1％聚山梨醇酯20或0.1％聚山梨醇酯80所用的全設(shè)計(jì)示于下表5中：表5研究1的三因素全因子設(shè)計(jì)編號(hào)緩沖液(mm)糖表面活性劑120mm檸檬酸鹽264mm海藻糖0.1％ps20220mm檸檬酸鹽264mm海藻糖0.1％ps80320mm檸檬酸鹽264mm蔗糖0.1％ps20420mm檸檬酸鹽264mm蔗糖0.1％ps80520mm組氨酸264mm海藻糖0.1％ps20620mm組氨酸264mm海藻糖0.1％ps80720mm組氨酸264mm蔗糖0.1％ps20820mm組氨酸264mm蔗糖0.1％ps80其他參數(shù)：濃度/ph在ph6.25下50-60mg/ml1008緩沖液交換nap25柱，用vivaspin10kdamwco濃縮樣品大小/pkg2-2.5ml在具有螺旋蓋的4ml透明玻璃小瓶中儲(chǔ)存/取出40℃/0、1周、2周和4周分析mfi、sec和iex用含有0.001％聚山梨醇酯20的原始緩沖液中的60mg/ml1008的蛋白質(zhì)溶液進(jìn)行樣品制備。制備四種新的載劑緩沖液，其具有不同緩沖液/糖組合(20mm檸檬酸鹽/264mm海藻糖、20mm檸檬酸鹽/264mm蔗糖、20mm組氨酸/264mm海藻糖、20mm組氨酸/264mm蔗糖)。首先使用illustranap-25柱(gehealthcare)將1008藥物物質(zhì)(ds)交換至載劑緩沖液中。用25ml檸檬酸鹽緩沖液將柱平衡。隨后將2ml1008ds加載到柱上。在ds溶液完全移動(dòng)到柱中之后，將柱用平衡柱所用的2ml相同緩沖液洗滌。在vivaspin6濃縮器(10kdmwco，gehealthcare)中收集6ml自柱洗脫的溶液。隨后使用beckmangs-15r離心機(jī)在9384×g、4℃下將6ml洗脫溶液濃縮至約2ml。隨后使用od280用nanodrop1000分光光度計(jì)測(cè)量蛋白質(zhì)的濃度。在劑型中摻入聚山梨醇酯20(ps20)或聚山梨醇酯80(ps80)到最終濃度為0.1％。隨后將所制備的劑型經(jīng)0.2μmpvdf注射器過(guò)濾器過(guò)濾并裝至4ml透明玻璃小瓶中。將約100ul樣品用于初始分析，同時(shí)將剩余樣品在40℃下儲(chǔ)存。在40℃下儲(chǔ)存1周、2周和4周之后取出一毫升樣品用于mfi、sec和iex分析。進(jìn)行定性研究以選擇劑型最優(yōu)的糖/表面活性劑/緩沖液組成。如上文所討論用兩種緩沖劑(檸檬酸鹽和組氨酸)、糖(蔗糖和海藻糖)、表面活性劑(聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯80)進(jìn)行研究設(shè)計(jì)。在加速條件(40℃)下進(jìn)行四周穩(wěn)定性研究。通過(guò)sec、iex和mfi分析樣品穩(wěn)定性。表6示出通過(guò)sec、iex測(cè)得的穩(wěn)定性結(jié)果和通過(guò)μdsc測(cè)得的熔點(diǎn)(tm)。表6在40℃下60mg/ml1008的因子定性分析*通過(guò)相對(duì)峰面積的損失％使用minitab(minitab公司，statecollegepa)分析穩(wěn)定性結(jié)果。因?yàn)閟ec和iex示出相同趨勢(shì)，所以?xún)H用minitab分析并報(bào)告sec數(shù)據(jù)。sec結(jié)果證明表面活性劑是唯一顯著因子；似乎影響反應(yīng)的其他因子包括緩沖劑選擇和緩沖劑與糖之間的相互作用(程度較低)。sec數(shù)據(jù)表明優(yōu)選劑型組分是檸檬酸鹽為緩沖液、聚山梨醇酯80為表面活性劑和蔗糖為糖。進(jìn)一步通過(guò)minitab分析mfi所得顆粒的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。所評(píng)估的全部三個(gè)因子(糖、表面活性劑和緩沖劑)似乎為不顯著的(α＝0.05)。比較對(duì)顆粒的主要作用，檸檬酸鹽優(yōu)于組氨酸；ps80優(yōu)于ps20；蔗糖類(lèi)似于或略?xún)?yōu)于海藻糖。因此，選擇檸檬酸鹽作為緩沖劑、聚山梨醇酯80作為表面活性劑和蔗糖作為糖用于進(jìn)一步研究。研究2緩沖劑、糖和表面活性劑的濃度的優(yōu)化分別在檸檬酸鹽和組氨酸緩沖液中進(jìn)行在具有兩個(gè)中心點(diǎn)的二水平三因素的全因子研究，以確定各所選劑型組分的優(yōu)選濃度。三種因子為緩沖劑(檸檬酸鹽或組氨酸)、聚山梨醇酯80和蔗糖。因子和設(shè)計(jì)空間列于表7中且詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)示于表8和9中。表7因子和設(shè)計(jì)研究2表8檸檬酸鹽緩沖液中的全因子設(shè)計(jì)操作順序緩沖液(mm)蔗糖(％)聚山梨醇酯80(％)c1104.50.001c2204.50.001c31090.001c42090.001c5104.50.1c6204.50.1c71090.1c82090.1c9156.750.0505c10156.750.0505表9組氨酸緩沖液中的全因子設(shè)計(jì)(具有2個(gè)中心點(diǎn)的二水平三因素)操作順序緩沖液(mm)蔗糖(％)聚山梨醇酯80(％)h1104.50.001h2204.50.001h31090.001h42090.001h5104.50.1h6204.50.1h71090.1h82090.1h9156.750.0505h10156.750.0505為制備各劑型，使用ph6.25、含有0.001％聚山梨醇酯20/0.73％nacl的檸檬酸鹽緩沖液中的60mg/ml1008的蛋白質(zhì)溶液。首先使用nap-25柱將蛋白質(zhì)溶液緩沖液交換成載劑。該載劑含有其目標(biāo)濃度的緩沖劑和蔗糖。使用vivaspin10kdamwco將經(jīng)交換的蛋白質(zhì)溶液濃縮至約60mg/ml的濃度。隨后添加批量的聚山梨醇酯80和氯化鈉以制造最終劑型組合物。用280nmuv所測(cè)吸光度以理論消光系數(shù)驗(yàn)證各樣品中的蛋白質(zhì)濃度。隨后將所制備的劑型經(jīng)0.2μmpvdf注射器過(guò)濾器過(guò)濾至4ml透明玻璃小瓶中。將約100μl樣品用sec和iex進(jìn)行初始分析，同時(shí)將約2-2.5ml樣品在40℃下儲(chǔ)存。在40℃下儲(chǔ)存11、20和27天后取出約600μl樣品通過(guò)mfi、sec和iex分析。基于研究1的結(jié)果，分別在檸檬酸鹽和組氨酸緩沖液中進(jìn)行具有兩個(gè)中心點(diǎn)的二水平三因素的全因子研究，以確定各所選劑型組分的優(yōu)選濃度。所測(cè)試的樣品在40℃下儲(chǔ)存，且在0、1.6周、2.9周和4周取出用mfi、sec和iex分析。結(jié)果列于表10和11中。表10檸檬酸鹽緩沖溶液的穩(wěn)定性結(jié)果表11組氨酸緩沖溶液的穩(wěn)定性結(jié)果用minitab分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。對(duì)于檸檬酸鹽緩沖液中的sec結(jié)果，表面活性劑是影響蛋白質(zhì)聚集的主要因子，而蔗糖、蔗糖與聚山梨醇酯80之間的相互作用和緩沖液強(qiáng)度的作用較不顯著。較高蔗糖濃度和較低聚山梨醇酯80濃度有利于蛋白質(zhì)穩(wěn)定性。蛋白質(zhì)穩(wěn)定性略影響聚集，且較高的檸檬酸鹽緩沖液強(qiáng)度稍促進(jìn)蛋白質(zhì)穩(wěn)定性。對(duì)于檸檬酸鹽緩沖液中的mfi結(jié)果，蔗糖和聚山梨醇酯80的因子以及蔗糖與山梨醇酯80的相互作用在顆粒形成中起同樣重要的作用。高蔗糖和高聚山梨醇酯80顯著地抑制顆粒形成，而在10-20mm范圍內(nèi)的緩沖液強(qiáng)度略影響顆粒形成，優(yōu)選較低的緩沖液強(qiáng)度。組氨酸緩沖液溶液的minitab分析結(jié)果展示，表面活性劑聚山梨醇酯80是影響蛋白質(zhì)聚集的主要因子，而緩沖液強(qiáng)度與聚山梨醇酯80之間的相互作用以及蔗糖起較不顯著的作用。較少聚山梨醇酯80有利于蛋白質(zhì)穩(wěn)定性。緩沖液強(qiáng)度和蔗糖濃度似乎并不影響蛋白質(zhì)聚集。對(duì)于組氨酸緩沖液中的mfi結(jié)果，聚山梨醇酯80、蔗糖和蔗糖與山梨醇酯80的相互作用在顆粒形成中起顯著作用。優(yōu)選高蔗糖和低聚山梨醇酯80以及低緩沖液強(qiáng)度來(lái)抑制顆粒形成。ph優(yōu)化在含有0.1％nacl、6.75％蔗糖和0.05％ps80的15mm檸檬酸鹽緩沖液中、六個(gè)ph條件(5.0、6.0、6.25、6.50、6.75和7.0)下研究ph對(duì)1008的聚集行為的影響。首先使用illustranap-10柱(gehealthcare)將1008藥物物質(zhì)交換至具有不同ph的載劑(不含ps80)中。首先用15ml檸檬酸鹽緩沖液將柱平衡。隨后將1ml1008ds加載到柱上。在ds溶液完全移動(dòng)至柱中之后，將柱用2ml平衡柱所用的相同檸檬酸鹽緩沖液洗滌。在vivaspin2濃縮器(10kdmwco，gehealthcare)中收集2ml自柱洗脫的溶液。隨后使用beckmangs-15r離心機(jī)在9384×g、4℃下將2ml洗脫溶液濃縮至約1ml。隨后用nanodrop1000分光光度計(jì)測(cè)量蛋白質(zhì)的濃度。確定該研究的最終1008濃度為約70mg/ml。將ps80摻入劑型，直至0.05％的最終目標(biāo)濃度。使用有兩位池架和溫度調(diào)節(jié)水浴的perkinelmerlambda35分光光度計(jì)進(jìn)行動(dòng)力學(xué)濁度分析。在具有1cm光程的starna亞微米體積石英池(starnascientific公司，英國(guó))中，加入250μl1008劑型或?qū)?yīng)的載劑。將池置于已經(jīng)預(yù)加熱至55℃的池架中。持續(xù)120分鐘監(jiān)測(cè)1008劑型中od350的改變。隨后將不同ph下劑型所獲得的od350數(shù)據(jù)對(duì)時(shí)間繪圖，以用于比較。使用基于濁度的動(dòng)力學(xué)分析，用含有約70mg/ml1008的ph5.0至7.0的劑型研究ph對(duì)1008聚集行為的影響。對(duì)于濁度分析，od350的急劇增大與蛋白質(zhì)的主要聚集事件相關(guān)。因此，各劑型的od350增大所需的培育時(shí)間差異可反映出劑型中不同蛋白質(zhì)的物理穩(wěn)定性。如圖1中所示，在所測(cè)試劑型條件下1008似乎在ph6.75下最穩(wěn)定，因?yàn)槠湓趏d350的急劇增大之前的培育時(shí)間最長(zhǎng)。重復(fù)實(shí)驗(yàn)具有類(lèi)似結(jié)果，證實(shí)所測(cè)試劑型在ph6.75下最穩(wěn)定。研究3賦形劑和高活性濃度的影響進(jìn)行半因子研究(表12)以研究主要?jiǎng)┬蜅l件的影響，包括蛋白質(zhì)濃度(60-120mg/ml)、蔗糖濃度(4.5-9.0％)、檸檬酸鹽緩沖劑濃度(10至20mm)和聚山梨醇酯80濃度(0.01-0.1％)。表12研究3的研究設(shè)計(jì)為制備上述劑型，首先制備ph6.5的20％檸檬酸鹽緩沖液和ph6.5的在20mm檸檬酸鹽緩沖液中的30％蔗糖儲(chǔ)備溶液。隨后將檸檬酸鹽緩沖液、蔗糖儲(chǔ)備溶液和注射用水以適當(dāng)比率混合以得到有ps80的五種緩沖液：4.5％蔗糖于10mm檸檬酸鹽中、9％蔗糖于10mm檸檬酸鹽中、4.5％蔗糖于20mm檸檬酸鹽中、9％蔗糖于20mm檸檬酸鹽中和6.75％蔗糖于15mm檸檬酸鹽中。隨后使用illustranap-25柱(gehealthcare)將1008ds交換至這五種緩沖液中，接著用vivaspin6濃縮器(5kdmwco,gehealthcare)在8000×、5℃下濃縮。在離心期間用nanodrop2000分光光度計(jì)確定各樣品中的蛋白質(zhì)濃度。對(duì)于前四種緩沖液中的樣品，當(dāng)1008濃度達(dá)到～70mg/ml時(shí)將自濃縮器移出樣品的一部分，并通過(guò)添加適當(dāng)量的對(duì)應(yīng)緩沖液并摻入10％ps80中將其用于制備有60mg/mlapi的劑型(表12中的#1、3、5和7)。將剩余樣品進(jìn)一步濃縮至高于130mg/ml，隨后添加緩沖液和10％ps80以獲得最終劑型(表12中的#2、4、6和8)。通過(guò)將交換至緩沖液#5中的1008樣品濃縮至約108mg/ml并隨后與緩沖液和10％ps80混合以達(dá)到最終劑型濃度來(lái)制備表12中的劑型#9和10。測(cè)量所有最終劑型的ph值，并調(diào)節(jié)至6.5。用改良自上述的濁度分析作為用于評(píng)估的分析工具。在這一改良的濁度分析中，使用12池位cary100uv-vis分光光度計(jì)。該分析中所使用的比色皿為帶塞子的1mm石英比色皿。在各比色皿中都添加300μl樣品用于測(cè)試。監(jiān)測(cè)55℃下培育劑型在360nm下的光密度改變。賦形劑和高活性濃度的影響研究3所有劑型的測(cè)得的1008濃度和最終ph概述于表13中。在55℃下培育具有不同蔗糖、ps80濃度和緩沖液強(qiáng)度的低、中和高1008濃度劑型(表4.3.1.-1)，并監(jiān)測(cè)od360的改變。如圖2所示，這些劑型觀察到不同的聚集傾向。培育開(kāi)始后幾乎立即聚集的兩種劑型是劑型2和6，其含有相對(duì)較高的1008濃度(～120mg/ml)和較低的蔗糖濃度(4.5％)。另一方面，含有相對(duì)較低的1008濃度(～60mg/ml)和較高的蔗糖濃度(9％)的劑型3和7的聚集慢于其他劑型。培養(yǎng)基1008和蔗糖濃度的其他組合的聚集傾向介于以上兩組之間。表13研究3的最終劑型條件用各劑型od360達(dá)到0.25的時(shí)間作為標(biāo)準(zhǔn)，比較不同劑型因子的影響。結(jié)果表明，蔗糖對(duì)1008的聚集影響最大，其次為api濃度。蔗糖和api濃度的影響是相反的，表明為獲得更好的劑型穩(wěn)定性?xún)?yōu)選較高蔗糖和較低的api濃度。其他兩個(gè)因子緩沖液強(qiáng)度和ps80顯示影響較小。研究4活性和蔗糖濃度的進(jìn)一步研究基于以上研究3的結(jié)果，進(jìn)行研究4以進(jìn)一步研究ph6.50下含有0.05％ps80的15mm檸檬酸鹽緩沖液中的蛋白質(zhì)濃度(60-120mg/ml)和蔗糖濃度(在6％至9％的較窄范圍)的影響。研究設(shè)計(jì)示于下表中。表14研究4的研究設(shè)計(jì)為制備劑型，將約80g1008藥物物質(zhì)加載到tff系統(tǒng)中，且隨后用約5倍藥物物質(zhì)的體積、含6％蔗糖的15mm檸檬酸緩沖液進(jìn)行緩沖液交換。在緩沖液交換后，使用tff系統(tǒng)將蛋白質(zhì)溶液的體積減小至初始體積的約一半?；厥盏郊s44g濃縮的1008溶液，且通過(guò)nanodrop2000分光光度計(jì)測(cè)量所濃縮的蛋白質(zhì)為約112mg/ml。隨后通過(guò)與適當(dāng)量的10％ps80和含0、6％和/或40％蔗糖的15mm檸檬酸鹽緩沖液混合，用濃縮的1008溶液制備劑型#1、3、5、7-12，以獲得這些劑型中每一個(gè)所對(duì)應(yīng)的最終api、蔗糖和ps80濃度。將剩余1008溶液進(jìn)一步濃縮至約132mg/ml以用相同方式制備劑型#2和4。最后，通過(guò)將1008溶液濃縮至約171mg/ml制備劑型#6，并用10％ps80和含0、6％和/或40％蔗糖的15mm檸檬酸鹽緩沖液調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)、蔗糖和ps80的濃度。各劑型中1008的最終濃度用nanodrop2000分光光度計(jì)確定，并將ph調(diào)節(jié)至6.5。使用上述的濁度分析來(lái)分析樣品。也將8種所選劑型(#1-4和#7-10)在40℃探索性培育箱中儲(chǔ)存6周，并在不同時(shí)間點(diǎn)用mif、iex和sec分析。研究如表15中所列的12種劑型。表15研究4的最終劑型濃度和濁度分析的tm劑型#蔗糖濃度最終1008(mg/ml)最終phtm(分鐘)16％61.66.4962.026％122.86.4927.439％60.06.5086.349％119.06.5134.257.5％47.76.5097.067.5％134.56.5024.275.38％94.66.5033.189.62％86.26.5049.497.5％91.76.5041.2107.5％89.56.5044.5117.5％88.46.4838.6127.5％90.16.5240.0用55℃下的濁度分析監(jiān)測(cè)劑型的聚集。如圖3所示，在相同熱應(yīng)力下這些劑型展示出不同的聚集度。具有相對(duì)較高1008和較低蔗糖濃度的劑型(諸如表15中的劑型#2和6)是在培育之后快速聚集的劑型。具有相對(duì)較低1008和高蔗糖濃度的劑型(表15中的劑型#3和5)聚集慢于其他所有劑型。將不同劑型的濁度分析所獲得的曲線擬合至sigmoid函數(shù)。將對(duì)應(yīng)于轉(zhuǎn)變中點(diǎn)的培育時(shí)間記錄為各劑型的tm(轉(zhuǎn)變中點(diǎn)時(shí)間)。結(jié)果列于表15中。相對(duì)于蔗糖和1008濃度的tm值展示出與蔗糖和1008濃度對(duì)蛋白質(zhì)聚集相反的作用。除了使用55℃下濁度分析的研究，也通過(guò)mfi、sec和iex經(jīng)6周監(jiān)測(cè)40℃下8種所選劑型的穩(wěn)定性。劑型和結(jié)果列于表16至23中。與濁度分析一致的是，mfi結(jié)果展示：與具有較低api濃度的劑型相比較，具有高1008濃度(～120mg/ml)的劑型形成更多粒子，特別是大于25μm的粒子。mfi結(jié)果未顯示蔗糖濃度對(duì)于具有相似量1008的劑型(劑型#7至10)的清晰的影響。如圖4所示，在40℃下儲(chǔ)存6周之后，具有高1008濃度的兩種劑型(#2和4)降解最多，其中具有～60mg/ml1008的劑型降解少于其他所有劑型。至于具有～90mg/ml1008的劑型，在較高蔗糖濃度下(劑型#8)觀察到稍少于較低蔗糖濃度(劑型#7)的降解。iex結(jié)果展示與sec相同的趨勢(shì)。表16研究4劑型#1在40℃下加速穩(wěn)定性研究的結(jié)果表17研究4劑型#2在40℃下加速穩(wěn)定性研究的結(jié)果表18研究4劑型#3在40℃下加速穩(wěn)定性研究的結(jié)果表19研究4劑型#4在40℃下加速穩(wěn)定性研究的結(jié)果表20研究4劑型#7在40℃下加速穩(wěn)定性研究的結(jié)果表21研究4劑型#8在40℃下加速穩(wěn)定性研究的結(jié)果表22研究4劑型#9在40℃下加速穩(wěn)定性研究的結(jié)果表23研究4劑型#10在40℃下加速穩(wěn)定性研究的結(jié)果實(shí)例3探索性穩(wěn)定性研究對(duì)照劑型作為對(duì)照，對(duì)在ph6.25下在20mm檸檬酸、0.001％ps20中的60mg/ml1008溶液的劑型進(jìn)行穩(wěn)定性探索。將對(duì)照劑型經(jīng)0.2μm注射器過(guò)濾器過(guò)濾并在40℃下、環(huán)境室溫和冰箱中儲(chǔ)存。對(duì)于40℃樣品在0、2周和5周取出樣品，對(duì)于儲(chǔ)存在環(huán)境室溫和冰箱的樣品則在26周取出樣品。通過(guò)a280、sec、iexcge和elisa測(cè)試所選穩(wěn)定性樣品的ph、滲透壓、含量。結(jié)果示于表24。表24對(duì)照劑型的探索性穩(wěn)定性結(jié)果(在ph6.25下60mg/ml1008在20mm檸檬酸鹽、0.001％ps20中)*目測(cè)觀察到樣品混濁且具有白色沉淀。對(duì)于在ph6.25下在20mm檸檬酸鹽、0.001％ps20和0.73％nacl中的60mg/ml1008溶液進(jìn)行另一項(xiàng)對(duì)照劑型的研究。將劑型經(jīng)0.2μm注射器過(guò)濾器過(guò)濾且在40℃儲(chǔ)存。在1周、2周、3周和4周時(shí)將樣品取出用于mfi分析。結(jié)果示于表25。表25在40℃下poc劑型的穩(wěn)定性結(jié)果(在ph6.25下60mg/ml1008在20mm檸檬酸鹽、0.001％ps20中)時(shí)間(周)01234≥10μm通過(guò)mfi(#/ml)na17289429463183≥25μm通過(guò)mfi(#/ml)na231575391189≥50μm通過(guò)mfi(#/ml)na41992248粒子總計(jì)通過(guò)mfi(#/ml)na238189542971617705具有9％蔗糖和0.5％聚山梨醇酯80的60mg/ml1008的探索性穩(wěn)定性研究對(duì)含有9％蔗糖和0.5％ps80的60mg/ml1008劑型進(jìn)行穩(wěn)定性探索。將劑型經(jīng)0.2μm注射器過(guò)濾器過(guò)濾并在40℃下儲(chǔ)存。在1.6周、2.9周和4周將樣品取出并用于mfi、sec和iex分析。結(jié)果列于表26。表26在40℃下60mg/ml1008劑型的穩(wěn)定性結(jié)果(在ph6.25下60mg/ml1008在20mm檸檬酸鹽、9％蔗糖和0.5％ps80中)時(shí)間(周)01.62.94≥10μm通過(guò)mfi(#/ml)-1280130≥25μm通過(guò)mfi(#/ml)-41212≥50μm通過(guò)mfi(#/ml)-040粒子總計(jì)通過(guò)mfi(#/ml)-68829004876sec(初始％)98.493.388.684.1iex(初始％)97.091.383.978.9在ph6.25下60mg/ml1008、9％蔗糖、20mm檸檬酸鹽、0.1％ps80的試驗(yàn)性穩(wěn)定性研究對(duì)如表27中所示的在ph6.25下含有9％蔗糖、20mm檸檬酸鹽、0.1％ps80的劑型進(jìn)行60mg/ml1008溶液的實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究。將穩(wěn)定性樣品儲(chǔ)存在2-8℃、25℃、40℃和光室(lc)下；也使其經(jīng)歷三個(gè)循環(huán)的凍融(ft)。根據(jù)表28中所示的方案取出樣品，并通過(guò)各種分析方法諸如ph、滲透壓、mfi、含量、sec、iex、cge和效力來(lái)分析。表27試驗(yàn)性穩(wěn)定性劑型的組成表28試驗(yàn)性穩(wěn)定性研究的儲(chǔ)存條件和取出方案在早期階段，開(kāi)始60mg/ml1008溶液的實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究。如表29所示，劑型在ph6.25下含有9％蔗糖、20mm檸檬酸鹽、0.1％ps80。將樣品儲(chǔ)存在2-8℃、25℃、40℃和光室(lc)下；也使其經(jīng)歷三個(gè)循環(huán)的凍融(ft)。根據(jù)表30所示的方案取出樣品，且通過(guò)不同分析方法分析。穩(wěn)定性結(jié)果列于表31-33中。表29試驗(yàn)性穩(wěn)定性劑型的組成60mg/ml1008(1008)溶液表30試驗(yàn)性穩(wěn)定性研究的儲(chǔ)存條件和取出方案條件取出2-8℃(冰箱)0、4周、6.9周、8周、12周和26周25℃2周、4周、6.9周、8周、12周和26周40℃1.1周、2周和4周光室(lc)6周凍融(ft)3個(gè)循環(huán)表31試驗(yàn)性穩(wěn)定性研究的結(jié)果(部分1/3)在ph6.25下6％1008、9％蔗糖、20mm檸檬酸鹽、0.1％ps80表32試驗(yàn)性穩(wěn)定性研究的結(jié)果(部分2/3)在ph6.25下6％1008、9％蔗糖、20mm檸檬酸鹽、0.1％ps80表33試驗(yàn)性穩(wěn)定性研究的結(jié)果(部分3/3)在ph6.25下6％1008、9％蔗糖、20mm檸檬酸鹽、0.1％ps80檸檬酸緩沖液中的穩(wěn)定性探索：60mg/ml1008在15mm檸檬酸鹽/6.75％蔗糖/0.05％ps80/ph6.75對(duì)60mg/ml1008在15mm檸檬酸鹽/6.75％蔗糖/0.05％ps80/ph6.75的劑型進(jìn)行檸檬酸鹽緩沖液中的穩(wěn)定性探索。穩(wěn)定性樣品儲(chǔ)存在5℃和25℃下，以及經(jīng)歷凍融循環(huán)。根據(jù)下表所示的方案取出樣品，并分析外觀、ph、滲透壓、mfi、含量、sec和iex。表34臨時(shí)穩(wěn)定性研究的儲(chǔ)存條件和取出方案條件取出25℃0、1個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月和9個(gè)月5℃3個(gè)月、6個(gè)月和9個(gè)月凍融(ft)3個(gè)循環(huán)類(lèi)似地，對(duì)60mg/ml1008在15mm組氨酸/6.75％蔗糖/0.05％ps80/ph6.75的劑型進(jìn)行組氨酸緩沖液中的穩(wěn)定性探索。將穩(wěn)定性樣品儲(chǔ)存在5℃和25℃下。也使樣品經(jīng)歷凍融循環(huán)。根據(jù)下表所示的方案取出樣品，并分析外觀、ph、滲透壓、mfi、含量、sec和iex。表35臨時(shí)穩(wěn)定性研究的儲(chǔ)存條件和取出方案條件取出25℃0、1個(gè)月、3個(gè)月和6個(gè)月5℃3個(gè)月和6個(gè)月凍融(ft)3個(gè)循環(huán)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)列于下面各表中。表36在25℃下的臨時(shí)穩(wěn)定性研究的結(jié)果(部分1/2)60mg/ml1008在15mm檸檬酸鹽/6.75％蔗糖/0.05％ps80/ph6.75中表37臨時(shí)穩(wěn)定性研究的結(jié)果(部分2/2)60mg/ml1008在15mm檸檬酸鹽/6.75％蔗糖/0.05％ps80/ph6.75中表38在25℃下臨時(shí)穩(wěn)定性研究的結(jié)果(部分1/2)60mg/ml1008在15mm組氨酸/6.75％蔗糖/0.05％ps80/ph6.75中表39臨時(shí)穩(wěn)定性研究的結(jié)果(部分2/2)60mg/ml1008在15mm組氨酸/6.75％蔗糖/0.05％ps80/ph6.75中實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，相較于60mg/ml蛋白質(zhì)濃度下的對(duì)照劑型，所測(cè)試劑型的穩(wěn)定性顯著提高，特別是在抑制顆粒物質(zhì)的形成中顯著提高。如表40所示，經(jīng)鑒定穩(wěn)定溶液劑型含有15mm檸檬酸鹽/6.75％蔗糖/0.0505％ps80。表40已詳細(xì)描述本發(fā)明及其實(shí)施方式。然而，本發(fā)明的范疇并不限于說(shuō)明書(shū)中所述的方法、制造、物質(zhì)組成、化合物、方式、方法和/或步驟的具體實(shí)施方式?？蓪?duì)所公開(kāi)材料做出各種修改、替代和變化而不背離本發(fā)明的精神和/或基本特征。因此，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本公開(kāi)將容易地理解，可根據(jù)本發(fā)明的相關(guān)實(shí)施方式運(yùn)用隨后的修改、替代和/或變化，所述修改、替代和/或變化進(jìn)行與本文所述實(shí)施方式實(shí)質(zhì)上相同的功能或達(dá)成與本文所述實(shí)施方式實(shí)質(zhì)上相同的結(jié)果。因此，權(quán)利要求書(shū)在其范疇內(nèi)涵蓋對(duì)本文所公開(kāi)的方法、制造、物質(zhì)組成、化合物、方式和/或步驟的修改、替代和變化。除非對(duì)其作用另有說(shuō)明，否則權(quán)利要求書(shū)不應(yīng)理解為限制所述順序或部件。應(yīng)理解，可對(duì)形式和細(xì)節(jié)做出不同變化而不背離所附權(quán)利要求書(shū)的范疇。當(dāng)前第1頁(yè)12