本公開內(nèi)容涉及石榴提取物、包含所述石榴提取物的健康功能食品或藥物組合物，以及所述石榴提取物緩解婦女的絕經(jīng)期癥狀的作用。
背景技術(shù)：
：雌激素是內(nèi)分泌激素之一，其在體內(nèi)由膽固醇合成并主要由卵泡和黃體分泌。當(dāng)由垂體前葉分泌的促性腺激素傳送信號(hào)給生殖器官時(shí)，調(diào)節(jié)月經(jīng)周期和使能夠妊娠的卵泡刺激激素(folliclestimulatinghormone，F(xiàn)SH)和黃體化激素(luteinizinghormone，LH)被分泌并作用于卵巢，后者分泌雌激素和黃體酮。雌激素是一組激素的總稱，包括雌二醇，雌酮和雌三醇。絕經(jīng)前婦女的卵巢是雌激素的主要來源。當(dāng)婦女達(dá)到絕經(jīng)期，其衰老的卵巢不太會(huì)對(duì)垂體促性腺激素(卵泡刺激激素和黃體化激素)響應(yīng)，導(dǎo)致早期卵泡期的進(jìn)一步縮短。結(jié)果，月經(jīng)周期和排卵期更短，黃體酮的產(chǎn)生降低，而且周期更加不規(guī)律。結(jié)果，卵泡對(duì)垂體促性腺激素不響應(yīng)，因此不能進(jìn)一步產(chǎn)生雌激素。雌激素的分泌降低可能對(duì)婦女的身體(包括泌尿生殖系統(tǒng))產(chǎn)生重大影響。此外，當(dāng)停止排卵時(shí)，這將導(dǎo)致絕經(jīng)，這表示月經(jīng)結(jié)束，或絕經(jīng)前激素降低導(dǎo)致絕經(jīng)期癥狀的發(fā)生。絕經(jīng)后婦女迅速降低的雌激素導(dǎo)致顯著提高的心理和情緒癥狀(例如，疲勞、興奮、失眠、注意力不集中、抑郁、記憶力減退、頭痛、焦慮、以及緊張或心過小(microcardia))的危險(xiǎn)。其他可能的危險(xiǎn)包括由睡眠障礙(由反復(fù)發(fā)作的面部潮紅所致)引起的疲勞和興奮、間歇性頭暈、感覺異常、心動(dòng)過速和心搏過速、惡心、便秘、腹瀉、關(guān)節(jié)痛、肌肉痛、手腳冰涼和體重增加。另外，絕經(jīng)后的婦女易患骨質(zhì)疏松癥和心血管疾病，包括心臟病、高血壓和卒中，這些都與死亡率升高有關(guān)(KalinMF&ZumoffB.Steroids55：330-352，1990)。此外，引起了外皮和泌尿生殖系統(tǒng)的改變，發(fā)生自身免疫病、白內(nèi)障和結(jié)腸直腸癌的可能性升高。用于緩解絕經(jīng)期癥狀(例如面部潮紅)的最有效的已知方法是給需要 補(bǔ)充雌激素的婦女施用雌激素。然而，長期施用合成的雌激素可能會(huì)導(dǎo)致引起嚴(yán)重的問題，例如乳腺癌和子宮癌的發(fā)生(參見TaminiRT等.Archinternmed166：1483-1489，2006，GertigDM.Menopause13：178-184，2006，StromBL等.AmJEpidemiol164：775-586，2006，AraJrNL&AthanazioDA.CadSaudePublica23：2613-2622，2007)。最近許多可靠的報(bào)告宣稱，長期施用作為激素替代治療的合成雌激素提高了誘發(fā)乳腺癌的可能性。這一結(jié)論在社會(huì)的各個(gè)領(lǐng)域以及在研究組中仍然極具爭(zhēng)議。盡管尚未清楚地說明乳腺癌發(fā)生的確切原因，但是已經(jīng)經(jīng)歷合成雌激素替代治療的婦女的乳腺癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)被認(rèn)為與隨時(shí)間的雌激素暴露劑量相關(guān)。因此，相當(dāng)多的研究工作已經(jīng)指向?qū)ふ抑参锎萍に?一類來源于植物的雌激素)作為用于激素替代治療中合成雌激素的更安全的替代物。植物雌激素是指在動(dòng)物體內(nèi)發(fā)揮雌激素作用的非甾體植物化合物，并且大多數(shù)的谷物、水果以及已知具有抗癌活性并可有效對(duì)抗心臟疾病的蔬菜含有少量植物雌激素。也就是說，對(duì)能有效緩解婦女的絕經(jīng)期癥狀而不引起疾病(例如乳腺癌和子宮癌)的安全藥物或健康功能食品的需求日益提高。在這些情況下，本公開內(nèi)容的發(fā)明人開發(fā)了一種健康功能食品，其包含以含有0.8至1.8mg/g鞣花酸為特征的石榴提取物，并且其專利申請(qǐng)?jiān)?013年5月29日被授予韓國專利No.10-1272602的專利權(quán)。但是，由于在所開發(fā)的石榴提取物中包含的鞣花酸的最大濃度僅為1.8mg/g，所以常常施用大量的石榴提取物以期望對(duì)婦女的絕經(jīng)期癥狀顯著緩解的作用，但在這種情況下，包含在石榴提取物中的多酚類物質(zhì)的大量攝取引起繼發(fā)性癥狀(例如，心跳(heartbits)加快)。因此，需要研究開發(fā)具有更高鞣花酸含量的優(yōu)異的石榴提取物，以提供即使在少量時(shí)對(duì)婦女的絕經(jīng)期癥狀的優(yōu)異緩解作用，從而提高對(duì)婦女的絕經(jīng)期癥狀的緩解作用，并且這可以解決由于在天然產(chǎn)物中的獨(dú)特物質(zhì)(尤其是多酚類物質(zhì))而對(duì)某些人限制使用的問題。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：技術(shù)問題本公開內(nèi)容涉及提供有效地緩解婦女的絕經(jīng)期癥狀并且可以施用于 對(duì)多酚類物質(zhì)敏感之個(gè)體的石榴提取物及其制備方法。技術(shù)方案為了達(dá)到上述目的，本公開內(nèi)容提供了每克石榴提取物總重量含有1.8mg至3.2mg鞣花酸的石榴提取物及其制備方法。優(yōu)選地，本公開內(nèi)容提供了對(duì)婦女的絕經(jīng)期癥狀具有提高的緩解作用的石榴提取物，其中每克石榴提取物總重量含有2.4mg至3.2mg鞣花酸(更優(yōu)選2.7mg至3.2mg的鞣花酸)。當(dāng)鞣花酸的濃度小于1.8mg時(shí)，對(duì)婦女的絕經(jīng)期癥狀的緩解作用低，當(dāng)鞣花酸的濃度高于3.2mg時(shí)，擔(dān)心存在副作用，例如，肝功能谷草轉(zhuǎn)氨酶(glutamicoxaloacetictransminase，GOT)和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(glutamatepyruvatetransaminase，GPT)的指數(shù)超出正常范圍。在一個(gè)方面，本公開內(nèi)容提供了用于緩解婦女的絕經(jīng)期癥狀的健康功能食品，其包含作為有效成分的石榴提取物，所述石榴提取物中每克石榴提取物總重量含有1.8mg至3.2mg鞣花酸，其中該石榴提取物的最大總?cè)談┝啃∮诨虻扔?5ml(優(yōu)選地，小于或等于10ml)。當(dāng)石榴提取物中鞣花酸的含量提高時(shí)，可以提高對(duì)婦女的絕經(jīng)期癥狀的緩解作用，然而在試圖提高石榴提取物中鞣花酸的含量時(shí)，當(dāng)將石榴提取物簡單地濃縮時(shí)，鞣花酸的含量提高到很高，但是同時(shí)，天然產(chǎn)物中的獨(dú)特物質(zhì)(尤其是多酚類物質(zhì))的含量提高，限制了對(duì)多酚類物質(zhì)敏感之個(gè)體的施用。基于這一發(fā)現(xiàn)，本公開內(nèi)容提供具有每克石榴提取物總重量含有1.8mg至3.2mg之高含量鞣花酸的，其中該石榴提取物的最大總?cè)談┝啃∮诨虻扔?5ml(優(yōu)選地，小于或等于10ml)，因此，即使在低劑量下攝取，石榴提取物也能對(duì)婦女的絕經(jīng)期癥狀顯示出充分的緩解作用，并且最小化了多酚含量，因此可以提高對(duì)多酚類物質(zhì)敏感之個(gè)體的耐受性，并提供了用于緩解婦女的絕經(jīng)期癥狀的健康功能食品，其包含具有作為有效成分的每克石榴提取物總重量含有1.8mg至3.2mg之高含量鞣花酸的石榴提取物。在本公開內(nèi)容中，絕經(jīng)期癥狀包括但不限于：面部潮紅、發(fā)汗、失眠、神經(jīng)質(zhì)、抑郁、頭暈、注意力不集中、關(guān)節(jié)痛、頭痛、心動(dòng)過速、陰道干燥、疲勞、興奮、失眠、記憶力減退、焦慮和動(dòng)脈粥樣硬化性血管疾病。在本公開內(nèi)容中，應(yīng)注意，苯酚被定義為用一個(gè)羥基(-OH)取代苯 環(huán)(C6H6)中的一個(gè)氫原子的物質(zhì)，且多酚是具有兩個(gè)或多個(gè)羥基的物質(zhì)，并且已經(jīng)報(bào)道過多酚具有積極的作用，例如抗氧化劑功能，但過多的多酚攝取導(dǎo)致副作用，例如，肝損傷或腎損害的風(fēng)險(xiǎn)。在本公開內(nèi)容中，對(duì)多酚敏感是指攝取多酚后與正常個(gè)體相比具有更高的副作用風(fēng)險(xiǎn)，并且適于具有潛在或持續(xù)的絕經(jīng)期癥狀風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體。根據(jù)本公開內(nèi)容的石榴提取物對(duì)婦女的絕經(jīng)期癥狀具有充分的緩解作用，同時(shí)將每石榴提取物克總重量中的多酚含量最小化至優(yōu)選10mg至14mg，更優(yōu)選10mg至13mg，以及最優(yōu)選10mg至12.5mg。石榴(PunicagranatumL.)是一種天然生長于亞洲西南部、印度的西北地區(qū)和美國加利福尼亞州的植物。石榴在熱帶和亞熱帶地區(qū)廣泛栽培。從古至今，石榴(特別是紅石榴)被認(rèn)為是滋補(bǔ)藥材。特別地，已知石榴能非常有效地預(yù)防高血壓和動(dòng)脈硬化。石榴包含多達(dá)38％至47％量的水溶性碳水化合物以及多種類型的維生素和礦物質(zhì)。雖然所使用的石榴在生產(chǎn)地區(qū)和收獲時(shí)間上存在差異，但是根據(jù)本公開內(nèi)容的用于石榴提取物的石榴包括每克最終石榴提取物總重量含有1.8mg至3.2mg鞣花酸、優(yōu)選2.4mg至3.2mg、并且更優(yōu)選2.7mg至3.2mg鞣花酸的石榴。優(yōu)選地，在本公開內(nèi)容中可使用來自土耳其或美國的石榴或其混合物，并且例如，土耳其石榴品種包括但不限于：Hicaznar石榴品種、CekirdeksizVI石榴品種、SilifkeAsisi石榴品種、Katirbasi石榴品種和Lefan石榴品種。優(yōu)選地，可用的石榴包括每克最終石榴提取物總重量含有10mg至14mg多酚、更優(yōu)選10mg至13mg、最優(yōu)選10mg至12.5mg多酚的石榴。根據(jù)本公開內(nèi)容用于制備石榴提取物的優(yōu)選的石榴部分是石榴果肉。在根據(jù)本公開內(nèi)容的石榴提取物中，根據(jù)本公開內(nèi)容的石榴提取物與市售產(chǎn)品兩者之間的鞣花酸含量有很大的差別，并且特別是當(dāng)與韓國專利No.10-1272602中公開的石榴提取物相比，不僅石榴提取物的上述代表性成分的含量而且物質(zhì)(例如多酚類物質(zhì))的含量幾乎相同，而且在鞣花酸的含量上有很大的差別。據(jù)推測(cè)，當(dāng)即使以有限的低日劑量施用石榴提取物時(shí)，這種差別導(dǎo)致了對(duì)婦女的絕經(jīng)期癥狀的優(yōu)異的緩解作用。此外，根據(jù)本公開內(nèi)容的石榴提取物中的多酚含量與韓國專利No.10-1272602中公開的石榴提取物中的多酚含量稍有不同，并取得了對(duì)絕經(jīng)期癥狀同等水平的緩解作用，與韓國專利No.10-1272602中公開的石榴提取物相比，根據(jù) 本公開內(nèi)容的石榴提取物可以由更低劑量的施用取得同等的作用，并且進(jìn)而減少了包括在石榴提取物中的多酚的攝取，所以可以推測(cè)石榴提取物可以施用于對(duì)多酚敏感的個(gè)體。因此，本公開內(nèi)容還提供了用于緩解婦女的絕經(jīng)期癥狀的組合物，其包含根據(jù)本公開內(nèi)容的石榴提取物，所述石榴提取物中每克石榴提取物總重量含有1.8mg至3.2mg鞣花酸，優(yōu)選地，用于緩解婦女的絕經(jīng)期癥狀的組合物，其包含每克石榴提取物總重量含有10mg至14mg多酚的石榴提取物，其使得能夠?qū)Χ喾宇愇镔|(zhì)敏感的個(gè)體施用。據(jù)推測(cè)，根據(jù)本公開內(nèi)容的石榴提取物中高含量的鞣花酸是由原料石榴的生產(chǎn)地區(qū)差異、僅使用果肉以及下述的特殊制備方法(例如，石榴萃取的濃縮方法和加熱溫度和壓力)引起的，但是本公開內(nèi)容不限于此。根據(jù)本公開內(nèi)容的石榴提取物可以通過以下方法制備。例如，首先，清洗石榴后，將果皮和種子從石榴中完全除去，隨后在高溫下短時(shí)間滅菌，并且添加淀粉降解酶以降解存在于石榴中的多糖，例如淀粉。接著，任選地，加入添加劑(例如，明膠、二氧化硅、膨潤土、硅溶膠、丹寧、纖維素或酪蛋白酸鉀)以控制石榴提取物的濁度、顏色和粘度，然后通過加熱濃縮，生成具有特定含量鞣花酸的石榴提取物。另外，此方法可能還包括個(gè)別步驟之間的過濾步驟，例如，在去皮和去籽步驟后但在高溫滅菌步驟前、在用淀粉降解酶處理的步驟后但在濃縮步驟前、以及在濃縮步驟后存在至少一個(gè)這種步驟。更具體地，可以通過包括以下步驟的方法制備每克石榴提取物總重量含有1.8mg至3.2mg鞣花酸的石榴提取物：S1)將來自土耳其的石榴、來自美國的石榴或其混合物去皮和去籽以只得到石榴果肉；S2)將石榴果肉在100℃至105℃下滅菌50秒至80秒，并冷卻到48℃至55℃；S3)用淀粉降解酶在48℃至55℃下處理經(jīng)冷卻的石榴果肉；以及S4)將經(jīng)壓碎的石榴果肉按先后順序在70℃至100℃和400毫巴至850毫巴的高溫和高壓下加熱濃縮至少兩次，以及在40℃至80℃和100毫巴至350毫巴的低溫和低壓下加熱濃縮至少一次。任選地，所述制備方法還可以包括在S1之后但在S2之前、S3之后但在S4之前、以及在S4之后的至少一項(xiàng)時(shí)的過濾步驟。以下提供了每一個(gè)步驟更詳細(xì)的描述。S1)將來自土耳其的石榴、來自美國的石榴或其混合物去皮和去籽以只得到石榴果肉；本公開內(nèi)容提供了僅使用石榴果肉而不含石榴果皮和種子的提取物；石榴果皮和種子可能會(huì)引起副作用，例如，包含在石榴果皮中的特殊的生物堿會(huì)使人的身體機(jī)能降低并負(fù)面地影響呼吸系統(tǒng)和肌肉，以及對(duì)生物堿成癮引起癲癇發(fā)作(seizure)、驚厥和麻醉。此外，來自石榴種子的提取物具有副作用，例如，某些人攝取后可出現(xiàn)變態(tài)反應(yīng)(例如，舌腫脹)。S2)將石榴果肉在100℃至105℃下滅菌50秒至80秒，并冷卻到48℃至55℃；使石榴果肉按先后順序經(jīng)過滅菌和冷卻步驟。滅菌優(yōu)選地在100℃至105℃下進(jìn)行50秒至80秒，并且更優(yōu)選地，滅菌在55秒至70秒內(nèi)快速地進(jìn)行，冷卻優(yōu)選地進(jìn)行到48℃至55℃。S3)用淀粉降解酶在48℃至55℃處理經(jīng)冷卻的石榴果肉。使經(jīng)冷卻的石榴果肉經(jīng)過用淀粉降解酶處理。優(yōu)選地，該步驟可以在48℃至55℃進(jìn)行10分鐘至60分鐘，更優(yōu)選地在48℃至55℃進(jìn)行20分鐘至40分鐘?？捎玫牡矸劢到饷覆幌抻谔囟ǖ念愋?，并包括本領(lǐng)域中已知的各種淀粉降解酶，例如，果膠酶、蛋白酶、淀粉酶和纖維素酶，優(yōu)選果膠酶。S4)將經(jīng)壓碎的石榴果肉按先后順序在70℃至100℃和400毫巴至850毫巴的高溫和高壓下加熱濃縮至少兩次，以及在40℃至80℃和100毫巴至350毫巴的低溫和低壓下加熱濃縮至少一次。經(jīng)壓碎的石榴果肉經(jīng)受按先后順序的高溫和高壓下加熱濃縮，以及低溫和低壓下加熱濃縮。優(yōu)選地，加熱濃縮可以包括在高溫和高壓下加熱濃縮至少兩次，更優(yōu)選至少三次，以及低溫和低壓下加熱濃縮至少一次，更優(yōu)選地至少兩次，總計(jì)至少三次。高溫和高壓下的加熱濃縮在70℃至100℃的溫度條件范圍和400毫巴至850毫巴的壓力條件范圍內(nèi)進(jìn)行，每次濃縮時(shí)通過加熱改變溫度和壓力，并且如果高溫和高壓落入上述溫度和壓力范圍內(nèi)，就對(duì)溫度和壓力沒有限制，并且這種變化可以包括在本公開內(nèi)容的范圍內(nèi)。優(yōu)選地，第一次 加熱濃縮可以在70℃至85℃和400毫巴至550毫巴下進(jìn)行，第二次加熱濃縮可以在85℃至92℃和550毫巴至750毫巴下進(jìn)行，以及第三次加熱濃縮可以在92℃至100℃和750毫巴至850毫巴下進(jìn)行。更優(yōu)選地，第一次加熱濃縮可以在78℃至82℃和450毫巴至500毫巴下進(jìn)行，第二次加熱濃縮可以在85℃至90℃和600毫巴至650毫巴下進(jìn)行，以及第三次加熱濃縮可以在92℃至98℃和800毫巴至850毫巴下進(jìn)行。低溫和低壓下的加熱濃縮在40℃至80℃的溫度條件范圍和100毫巴至350毫巴的壓力條件范圍內(nèi)進(jìn)行，每次濃縮時(shí)通過加熱改變溫度和壓力，并且如果低溫和低壓落入上述溫度和壓力范圍內(nèi)，就對(duì)溫度和壓力沒有限制，并且這種變化可以包括在本公開內(nèi)容的范圍內(nèi)。優(yōu)選地，第四次加熱濃縮可以在60℃至80℃和250毫巴至350毫巴下進(jìn)行，以及第五次加熱濃縮可以在40℃至60℃和100毫巴至250毫巴下進(jìn)行。更優(yōu)選地，第四次加熱濃縮可以在65℃至72℃和300毫巴至330毫巴下進(jìn)行，以及第五次加熱濃縮可以在45℃至55℃和100毫巴至150毫巴下進(jìn)行。本公開內(nèi)容還提供了用于緩解婦女的絕經(jīng)期癥狀的組合物，其包含作為有效成分的根據(jù)本公開內(nèi)容的石榴提取物，所述石榴提取物中每克石榴提取物總重量含有1.8mg至3.2mg鞣花酸，其中石榴提取物的最大總?cè)談┝啃∮诨虻扔?5ml(優(yōu)選地，小于或等于10ml)。根據(jù)本公開內(nèi)容的用于緩解婦女的絕經(jīng)期癥狀的組合物具有廣泛的應(yīng)用范圍，例如，藥物組合物或健康功能食品。因此，本公開內(nèi)容提供了用于緩解婦女的絕經(jīng)期癥狀的健康功能食品或藥物組合物，其包含作為有效成分的石榴提取物，所述石榴提取物中每克石榴提取物總重量含有1.8mg至3.2mg鞣花酸，其中石榴提取物的最大總?cè)談┝啃∮诨虻扔?5ml(優(yōu)選地，小于或等于10ml)。根據(jù)本公開內(nèi)容的健康功能食品包含作為有效成分的石榴提取物，與傳統(tǒng)石榴提取物相比，所述石榴提取物含有高濃度的鞣花酸和等量或更少量天然產(chǎn)物中的獨(dú)特物質(zhì)，尤其是多酚類物質(zhì)。因此，當(dāng)石榴提取物的最大總?cè)談┝啃∮诨虻扔?5ml(優(yōu)選地，小于或等于10ml)時(shí)，對(duì)婦女的絕經(jīng)期癥狀提供了顯著優(yōu)異的緩解作用，并且因此其可以施用于對(duì)多酚類物質(zhì)敏感的個(gè)體。此外，在本公開內(nèi)容的一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)將根據(jù)本公開內(nèi)容的石榴果肉提取物以15ml的日劑量施用時(shí)，給藥后的人體健康指數(shù)(例如，紅細(xì)胞(RBC)計(jì)數(shù)、血尿素氮(BUN)水平、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST) 水平、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)水平、肌酸酐水平、葡萄糖水平和S-G值)都在正常范圍內(nèi)，因此在人體中可以以無副作用的安全方式實(shí)現(xiàn)對(duì)絕經(jīng)期癥狀的緩解作用。根據(jù)本公開內(nèi)容的健康功能食品可以以單劑量分裝(fractionallypackaged)在單個(gè)容器中，并且所述單劑量可以包含15ml至1ml的石榴提取物，優(yōu)選15ml、14ml、13ml、12ml、11ml、10ml、5ml、4ml、3ml、2ml和1ml中的任一劑量。除了石榴提取物，根據(jù)本公開內(nèi)容的健康功能食品還可以包含單獨(dú)或組合的山芍藥(Paeoniajaponica)、山茱萸(Cornusofficinalis)、刺五加(Acanthopanaxsenticosus)、靈芝(Ganodermalucidium)、花曲柳(Fraxinusrhynchophylla)的莖皮、杜仲(Eucommiaulmoides)、朝鮮當(dāng)歸(Angelicagigas)、梔子(Gardeniajasminoides)、黃芪(Astragalusmembranaceus)、麥芽、枳(trifoliateorange)、維生素C、低聚果糖、甜菊苷、純化水和麥芽糖糊精，而不脫離本公開內(nèi)容的范圍，但是還包含在本公開內(nèi)容的健康功能食品中的其他藥理學(xué)有效成分和/或添加劑不限于前述實(shí)例。例如，根據(jù)本公開內(nèi)容的健康功能食品可以包含水溶性維生素，例如硫胺素(維生素B1)、核黃素、抗壞血酸、煙酸和維生素B6；脂肪酸，例如肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、油酸和亞油酸；弱酸，例如乙醇酸和乙酸；以及氨基酸，諸如八種必需氨基酸(即蘇氨酸、纈氨酸、甲硫氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和賴氨酸)、天冬氨酸、絲氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、組氨酸和精氨酸。本公開內(nèi)容提供用于改善石榴提取物緩解婦女的絕經(jīng)期癥狀的作用的方法，并且優(yōu)選地，該方法可以包括將鞣花酸含量調(diào)整為每克石榴提取物總重量1.8mg至3.2mg、更優(yōu)選2.4mg至3.2mg、甚至更優(yōu)選2.7mg至3.2mg。優(yōu)選地，該方法可以包括將多酚含量調(diào)整為每克石榴提取物總重量10mg至14mg、更優(yōu)選10mg至13mg、且最優(yōu)選10mg至12.5mg。有益作用根據(jù)本公開內(nèi)容，即使在低的日劑量下攝取，也可以預(yù)期到對(duì)婦女的絕經(jīng)期癥狀的優(yōu)異的緩解作用，因此使得能夠?qū)Χ喾宇愇镔|(zhì)敏感的個(gè)體施用。具體實(shí)施方式本發(fā)明的最佳實(shí)施方案在下文中，將參照實(shí)施例詳細(xì)說明本公開內(nèi)容，以幫助理解本公開內(nèi)容。然而，這些實(shí)施例可以以多種不同的形式呈現(xiàn)，而不應(yīng)理解為限制本公開內(nèi)容的范圍。實(shí)施例向本公開內(nèi)容所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員提供了對(duì)本公開內(nèi)容更充分的解釋。<實(shí)施例1>具有高含量鞣花酸的石榴提取物的制備首先，將1,000kg石榴中的所有異物除去，選擇沒有損傷的水果并清洗。將挑選的水果切開、去皮并且通過壓榨去籽，產(chǎn)生450kg的石榴果肉。過濾后，將石榴果肉在1000至105℃下滅菌60秒，并再次冷卻至48℃至55℃。以每1,000升石榴汁70ml至100ml的量加入果膠酶，允許淀粉降解在48℃至55℃下持續(xù)30分鐘。隨后，為了維持濁度和顏色以及達(dá)到適于施用的粘度，以每10,000升石榴汁900g的量加入膨潤土，隨后在48℃至55℃下攪拌下10分鐘。接著，在1.5mm和1mm真空過濾后，通過加熱進(jìn)行濃縮(按先后順序，在80℃和475毫巴下高達(dá)12白利糖度(brix)，在87℃和626毫巴下高達(dá)17白利糖度，在95℃和847毫巴下高達(dá)31白利糖度，在70℃和312毫巴下高達(dá)43白利糖度，在49℃和118毫巴下高達(dá)65白利糖度)，并且再次進(jìn)行1.5mm過濾以制備含有1.8mg/g至3.2mg/g鞣花酸的石榴提取物。將該石榴提取物進(jìn)行無菌填充并單獨(dú)包裝為10ml。將相同的過程重復(fù)進(jìn)行六次。<實(shí)施例2>評(píng)估石榴提取物中鞣花酸的含量采用高效液相色譜法(HPLC)測(cè)量石榴提取物中的鞣花酸的含量。利用SPC18UG120(4.6mm×50mm，5μm)柱，流動(dòng)相為0.85％磷酸/水和甲醇(6∶4)和純甲醇的混合物，以梯度洗脫方式，利用UV檢測(cè)器在波長為370納米處檢測(cè)鞣花酸。結(jié)果，發(fā)現(xiàn)根據(jù)實(shí)施例1制備的石榴提取物中的鞣花酸的平均含量為1.8mg/g至3.2mg/g。同時(shí)，采用上述方法評(píng)估三種市售產(chǎn)品、根據(jù)韓國專利No.10-1272602制備的石榴提取物以及根據(jù)實(shí)施例1制備的石榴提取物中的鞣花酸的含量，并且其結(jié)果示于表1中。對(duì)于每種產(chǎn)品，各自購買具有不同批號(hào)的六種樣品并進(jìn)行評(píng)估以確定鞣花酸的含量。[表1]在表1中，產(chǎn)品A是可以從ShadaabCo.得到的石榴提取物，產(chǎn)品B是可以從PashapourTradingCo.得到的石榴提取物產(chǎn)品，以及產(chǎn)品C是可以從NooshIranCo.得到的石榴提取物產(chǎn)品。此外，No.10-1272602表示根據(jù)韓國專利No.10-1272602中描述的制備方法制備的石榴提取物。如表1所示，可以看出，與其他市售產(chǎn)品以及根據(jù)韓國專利No.10-1272602的石榴提取物(含糖量：65白利糖度)相比，根據(jù)本公開內(nèi)容的石榴提取物中的鞣花酸含量非常高。特別地，當(dāng)基于鞣花酸的含量比較時(shí)，以石榴提取物的形式施用相同量的鞣花酸，根據(jù)韓國專利No.10-1272602的石榴提取物的劑量約為本公開內(nèi)容的石榴提取物劑量的兩倍高。<實(shí)施例3>評(píng)估石榴提取物中的總多酚通過將樣品溶解在蒸餾水中，進(jìn)行超聲提取，引起與顯色劑反應(yīng)，并用分光光度計(jì)測(cè)量來計(jì)算石榴提取物中的多酚含量。精確計(jì)量10mg的鞣酸，并將其放入到100ml的容量瓶中，加入蒸餾水直至標(biāo)線，并且用蒸餾水將該標(biāo)準(zhǔn)的未稀釋溶液蒸餾至最佳濃度以制備標(biāo)準(zhǔn)溶液。受試溶液通過以下方法來制備：通過計(jì)量100mg的根據(jù)實(shí)施例1制備的石榴提取物，并將其放入到100ml的容量瓶中，引入蒸餾水至標(biāo)線，接著進(jìn)行超聲處理以使其溶解。將7.5ml的蒸餾水倒入試管后，并將1ml的各標(biāo)準(zhǔn)溶液和受試溶液倒入相同的試管中，按先后順序確定地加入0.5ml的Folin-denis試劑和1ml的35％的碳酸鈉溶液并使其彼此 混合，且在黑暗中放置一小時(shí)后，使用紫外/可見分光光度計(jì)在760nm處測(cè)定吸光度。利用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在每個(gè)濃度的吸光度與每個(gè)空白試驗(yàn)的吸光度之間的差來繪制標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的校正曲線，并通過應(yīng)用校正曲線，根據(jù)實(shí)施例1制備的石榴提取物的吸光度與根據(jù)實(shí)施例1制備的石榴提取物的空白試驗(yàn)地吸光度之間的差，計(jì)算樣品中的總多酚含量。總多酚含量(mg/g)＝(A×B×C)/DA：受試溶液的總量(ml)B：稀釋因子C：受試溶液中的總多酚濃度(mg/ml)D：試樣量(g或ml)以與上述的方法相同的方式評(píng)估根據(jù)韓國專利No.10-1272602制備的石榴提取物中的總多酚含量。評(píng)估結(jié)果示于表2中。[表2](單位：mg/g)No.10-1272602本發(fā)明提取物樣品No.111.7912.59樣品No.210.5912.67樣品No.312.3511.72樣品No.412.8913.21樣品No.513.1211.03樣品No.611.0210.89總多酚的平均值11.96±1.0112.01±0.94如表2所示，發(fā)現(xiàn)本公開內(nèi)容的石榴提取物中的總多酚含量與根據(jù)韓國專利No.10-1272602制備的石榴提取物中的總多酚含量相似。通過這些結(jié)果與表1中的鞣花酸含量結(jié)果的結(jié)合，具有高含量鞣花酸(在本公開內(nèi)容的石榴提取物中鞣花酸的含量高達(dá)1.80mg/g至3.20mg/g)的石榴提取物的作用不僅僅是由石榴提取物更大量的濃度造成的。<實(shí)施例4>絕經(jīng)期癥狀和更年期癥狀緩解程度的評(píng)估通過以下方法評(píng)估根據(jù)本公開內(nèi)容的具有高含量鞣花酸的石榴果肉提取物緩解婦女的絕經(jīng)期癥狀的程度。受試者對(duì)于篩選試驗(yàn)，從40-60歲，有12個(gè)月或以上閉經(jīng)并且FSH值小于或等于40mlU/ml以及Kupperman指數(shù)高于或等于20的婦女中公開地選擇志愿者，將測(cè)試的細(xì)節(jié)進(jìn)行了通知，并在被充分理解后，志愿者們確定參加測(cè)試并作出了書面同意以遵循指示，并且然后進(jìn)行測(cè)試。在施用測(cè)試提取物一周之前，記錄志愿者的基本信息，例如人口統(tǒng)計(jì)資料和過去的病史，并在營養(yǎng)條件、外皮/粘膜系統(tǒng)、耳鼻喉科系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、泌尿生殖系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)后、代謝/內(nèi)分泌系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、肌肉骨骼系統(tǒng)、神經(jīng)/精神系統(tǒng)以及其他身體條件被醫(yī)學(xué)檢查后，將正常和不正常的結(jié)果記錄下來。根據(jù)Kupperman測(cè)試的一般排除標(biāo)準(zhǔn)，將排除下面的受試者：遭受心因性絕經(jīng)期障礙的受試者；在測(cè)試前至少6個(gè)月經(jīng)歷激素替代治療或在測(cè)試時(shí)正在接受激素替代治療的受試者；在過去的12個(gè)月內(nèi)經(jīng)過雙側(cè)卵巢切除術(shù)或子宮切除術(shù)后閉經(jīng)的受試者；遭受心臟疾病(例如，心力衰竭，心絞痛和心肌梗塞)的受試者；遭受無法控制的高血壓的受試者；遭受惡性腫瘤、窄角型青光眼或肺部疾病的受試者；以及患有嚴(yán)重的腎或肝功能障礙的受試者。測(cè)試方法測(cè)試總共進(jìn)行8周?？偣?0位受試者分為對(duì)照組(純化水中含6.5g低聚果糖、1g果糖、0.4g紫甘藍(lán)色素、0.5g檸檬酸以及0.1g的石榴香料)和根據(jù)本公開內(nèi)容的石榴提取物的實(shí)驗(yàn)組(1.8mg/g至3.2mg/g的鞣花酸)(每組30名受試者)。完成基線測(cè)試后，將總共60位受試者隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。首先，向所有的受試者提供4周量的測(cè)試產(chǎn)品。實(shí)驗(yàn)組被要求按日劑量10ml/天服用石榴提取物。施用4周后，志愿者被教導(dǎo)存儲(chǔ)和返還施用后的小袋，以確認(rèn)它們是否準(zhǔn)確地施用，并檢查了志愿者的生命體征、不良事件以及伴隨藥物，以及進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)室檢查(下表中示出“第二次訪視”的測(cè)試結(jié)果)。其次，向所有的受試者提供4周量的受試產(chǎn)品。實(shí)驗(yàn)組被要求以日劑量10ml/天服用石榴提取物。同樣，經(jīng)過4周后進(jìn)行檢查(下表中示出“第三次訪視”的測(cè)試結(jié)果)。Kupperman指數(shù)、更年期評(píng)分量表(menopauseratingscale，MRS)、FSH和雌二醇(E2)的結(jié)果與評(píng)估對(duì)于第一次有效性評(píng)估，檢查了通常用來評(píng)估絕經(jīng)期癥狀和更年期癥狀的Kupperman指數(shù)。施用之前和之后，調(diào)查員立即直接檢查受試者，共同地評(píng)估對(duì)于Kupperman指數(shù)參數(shù)癥狀的發(fā)生、強(qiáng)度和頻率，并將得分記錄在問卷上，并通過此，評(píng)估了根據(jù)本公開內(nèi)容的具有高含量鞣花酸的石榴提取物的作用。對(duì)于第二次有效性評(píng)估，對(duì)MRS、FSH和雌二醇(E2)的方差進(jìn)行了檢查。在施用前/后以及每次訪視進(jìn)行了有效性評(píng)估，并通過獨(dú)立的t檢驗(yàn)分析了同質(zhì)性測(cè)試，在顯著性水平為5％或更低時(shí)通過獨(dú)立的t檢驗(yàn)分析了施用前/后的效應(yīng)測(cè)試，并且作為同質(zhì)性測(cè)試的結(jié)果，將不相等的方差調(diào)整為協(xié)變量，并使用協(xié)方差分析(ANCOVA)進(jìn)行分析。此外，在顯著性水平為5％或更低時(shí)利用重復(fù)測(cè)量方差分析(repeatedmeasuresANOVA，RMANOVA)分析每次訪視的效應(yīng)測(cè)試，并作為同質(zhì)性測(cè)試的結(jié)果，利用重復(fù)測(cè)量ANOVA(RMANOVA)分析不相等的方差。[表3]值以平均±SD或數(shù)字顯示1)對(duì)于重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)通過線性混合模型分析[表4]值以平均±SD或數(shù)字顯示1)通過成對(duì)t檢驗(yàn)分析2)通過獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)(independentt-test)分析[表5]值以平均±SD或數(shù)字顯示1)對(duì)于重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)通過線性混合模型分析2)通過重復(fù)測(cè)量ANOVA分析[表6]值以平均±SD或數(shù)顯示1)通過成對(duì)t檢驗(yàn)分析2)通過獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)分析如表3-6的結(jié)果所示，根據(jù)本公開內(nèi)容的具有高含量鞣花酸的石榴果肉提取物對(duì)絕經(jīng)期癥狀的緩解作用遠(yuǎn)好于對(duì)照組。更具體地，如表3-4所示，可以看出，經(jīng)過8周后受試者的Kupperman指數(shù)減小了50％或更多。此外，如表5-6所示，可以看出，經(jīng)過8周后， MRS也顯著地降低，且FSH和雌二醇濃度也顯著地降低。<對(duì)比例1>與韓國專利No.10-1272602的石榴提取物的比較根據(jù)韓國專利No.10-1272602中描述的方法制備了石榴提取物(糖含量：65白利糖度，鞣花酸：0.80～1.40mg/g)，將其用作實(shí)驗(yàn)組，按照如實(shí)施例3所描述的相同方法進(jìn)行Kupperman指數(shù)評(píng)估，石榴提取物的攝取按照日劑量40ml/天。經(jīng)過8周后，評(píng)估攝取石榴提取物之前和之后的總Kupperman指數(shù)得分的變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)KI(總得分)為約15.08。結(jié)果，發(fā)現(xiàn)在施用根據(jù)實(shí)施例1的石榴提取物和韓國專利No.10-1272602的石榴提取物之后相同的時(shí)間所評(píng)估的Kupperman指數(shù)顯示相似的水平，但是當(dāng)考慮到根據(jù)實(shí)施例1的石榴提取物的日劑量為10ml/天，而韓國專利No.10-1272602的石榴提取物的日劑量為40ml/天，則需要每日施用四倍量的石榴提取物以達(dá)到同等水平的絕經(jīng)期癥狀緩解作用。將實(shí)施例3和對(duì)比例1的結(jié)果與表2相結(jié)合顯示了多酚含量的評(píng)估結(jié)果，由于本公開內(nèi)容的石榴提取物和根據(jù)韓國專利No.10-1272602制備的石榴提取物包含相似重量的多酚，當(dāng)根據(jù)韓國專利No.10-1272602制備的石榴提取物以40ml/天的劑量施用時(shí)，與本公開內(nèi)容的石榴提取物以10ml/天的劑量施用相同的時(shí)間相比，為了達(dá)到同等水平的絕經(jīng)期癥狀緩解作用而一起施用的多酚總量約為四倍。結(jié)果，與包括韓國專利No.10-1272602的石榴提取物在內(nèi)的現(xiàn)有石榴提取物相比，為了達(dá)到同等水平的絕經(jīng)期癥狀緩解作用，根據(jù)本公開內(nèi)容的石榴提取物可從較低劑量的施用實(shí)現(xiàn)同等的作用，進(jìn)而，包含在石榴提取物中的多酚的攝取降低，因此發(fā)現(xiàn)該石榴提取物可施用于對(duì)多酚敏感的個(gè)體。本發(fā)明的實(shí)施方式在下文中，應(yīng)當(dāng)理解的是，本公開內(nèi)容的范圍不應(yīng)理解為僅限于以下的描述。本公開內(nèi)容涉及用于緩解婦女的絕經(jīng)期癥狀的健康功能食品，其包含作為有效成分的石榴提取物，所述石榴提取物中每克石榴提取物總重量含 有1.8mg至3.2mg鞣花酸。本公開內(nèi)容涉及用于緩解婦女的絕經(jīng)期癥狀的健康功能食品，其包含作為有效成分的石榴提取物，所述石榴提取物中每克石榴提取物總重量含有1.8mg至3.2mg鞣花酸，其中該石榴提取物的最大總?cè)談┝啃∮诨虻扔?5ml。更具體地，該健康功能食品可以按照以下任一石榴提取物單劑量分裝在單個(gè)容器中：15ml、14ml、13ml、12ml、11ml、10ml、5ml、4ml、3ml、2ml和1ml。石榴可以來自于土耳其、美國或者是其混合物。該健康功能食品可以施用于對(duì)多酚類物質(zhì)敏感的個(gè)體。石榴提取物可以是石榴果肉的提取物。該石榴提取物可每克石榴提取物總重量含有10mg至14mg多酚。本公開內(nèi)容提供了每克石榴提取物總重量含有1.8mg至3.2mg鞣花酸的石榴提取物的制備方法，該方法包括以下步驟：S1)將來自于土耳其的石榴、來自美國的石榴，或其混合物去皮和去籽以僅得到石榴果肉；S2)將該石榴果肉在100℃至105℃下滅菌50秒至80秒，并冷卻到48℃至55℃；S3)用淀粉降解酶在48℃至55℃下處理經(jīng)冷卻的石榴果肉；以及S4)將該經(jīng)壓碎的石榴果肉按先后順序在70℃至100℃和400毫巴至850毫巴的高溫和高壓下加熱濃縮至少兩次，以及在40℃至80℃和100毫巴至350毫巴的低溫和低壓下加熱濃縮至少一次。更具體地，所述制備方法還可以包括以下至少一項(xiàng)時(shí)進(jìn)行過濾：在S1之后但在S2之前、在S3之后但在S4之前、以及在S4S1之后。該石榴提取物可以施用于對(duì)多酚類物質(zhì)敏感的個(gè)體。S4可以包括在400毫巴至550毫巴和70℃至85℃下加熱濃縮，在550毫巴至750毫巴和85℃至92℃下加熱濃縮，在750毫巴至850毫巴和92℃至100℃下加熱濃縮，在250毫巴至350毫巴和60℃至80℃下加熱濃縮，以及在100毫巴至250毫巴在40℃至60℃下加熱濃縮。石榴提取物可每克石榴提取物總重量含有10mg至14mg多酚。此外，本公開內(nèi)容涉及用于緩解婦女的絕經(jīng)期癥狀的健康功能食品，其包含作為有效成分的由上述制備方法制備的石榴提取物，其中該石榴提取物的最大總?cè)談┝啃∮诨虻扔?5ml。此外，本公開內(nèi)容涉及用于緩解婦女絕經(jīng)期癥狀的藥物組合物，其包含作為有效成分的石榴提取物，所述石榴提取物中每克石榴提取物總重量含有1.8mg至3.2mg鞣花酸。此外，本公開內(nèi)容涉及用于緩解婦女的絕經(jīng)期癥狀的藥物組合物，其包含作為有效成分的石榴提取物，所述石榴提取物中每克石榴提取物總重量含有1.8mg至3.2mg鞣花酸，其中該石榴提取物的最大總?cè)談┝啃∮诨虻扔?5ml。工業(yè)實(shí)用性根據(jù)本公開內(nèi)容，預(yù)期在即使低日劑量的攝取時(shí)對(duì)緩解婦女的絕經(jīng)期癥狀的優(yōu)異作用，因此使得能夠施用于對(duì)多酚類物質(zhì)敏感的個(gè)體。當(dāng)前第1頁1 2 3