本發(fā)明涉及抗腫瘤藥物依魯替尼和CYP3A酶抑制劑的藥物組合物；其中的CYP3A酶抑制劑為利托那韋，酮康唑或可比司他；依魯替尼和利托那韋的重量比為1∶0.5至1∶20，依魯替尼和酮康唑的重量比為1∶2至1∶40，依魯替尼和可比司他的重量比為1∶1至1∶30。
技術(shù)背景：
依魯替尼(Ibrutinib)通過選擇性地抑制布魯頓酪氨酸激酶(BTK)，有效阻止腫瘤從B細胞遷移到適應(yīng)于腫瘤生長環(huán)境的淋巴組織，發(fā)揮靶向抗腫瘤作用；對套細胞淋巴瘤(Mantle Cell Lymphoma)，慢性淋巴細胞白血病(chronic lymphocytic leukemia，CLL)和B-細胞非霍奇金淋巴瘤(B-cell non-Hodgkin lymphoma，B-NHL)具有較好的療效。
依魯替尼主要通過細胞色素P450CYP3A4酶代謝。由于較強的藥物相互作用，導(dǎo)致未知的毒性或副作用。因此，依魯替尼應(yīng)避免與CYP3A4酶抑制劑如利托那韋(ritonavir)、印地那韋(indinavir)、納非那韋(nelfinavir)、沙奎那韋(saquinavir)、波西普韋(boceprevir)及酮康唑(ketoconazole)等同時使用(http：//www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/label/2013/205552lbl.pdf)。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
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本發(fā)明意外發(fā)現(xiàn)，依魯替尼與一定比例的CYP3A酶抑制劑聯(lián)合，不僅能夠 顯著增強依魯替尼的抗腫瘤作用，而且能夠顯著降低其副作用。所說的CYP3A酶抑制劑包括，但不限于利托那韋(ritonavir)，酮康唑(ketoconazole)或可比司他(cobicistat)。
因此，本發(fā)明提供含有有效治療量的依魯替尼及其及其非毒性藥學(xué)上可接受的鹽和利托那韋及其非毒性藥學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物，其特征為依魯替尼和利托那韋的重量比為1∶0.5至1∶20。
優(yōu)選地，本發(fā)明提供含有有效治療量的依魯替尼及其及其非毒性藥學(xué)上可接受的鹽和利托那韋及其非毒性藥學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物，其特征為依魯替尼和利托那韋的重量比為1∶1至1∶20。
更優(yōu)選地，本發(fā)明提供含有有效治療量的依魯替尼及其及其非毒性藥學(xué)上可接受的鹽和利托那韋及其非毒性藥學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物，其特征為依魯替尼和利托那韋的重量比為1∶1至1∶10。
本發(fā)明還提供含有有效治療量的依魯替尼及其及其非毒性藥學(xué)上可接受的鹽和酮康唑及其非毒性藥學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物，其中依魯替尼和酮康唑的重量比為1∶2至1∶40。
優(yōu)選地，本發(fā)明還提供含有有效治療量的依魯替尼及其及其非毒性藥學(xué)上可接受的鹽和酮康唑及其非毒性藥學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物，其中依魯替尼和酮康唑的重量比為1∶4至1∶40。
更優(yōu)選地，本發(fā)明還提供含有有效治療量的依魯替尼及其及其非毒性藥學(xué)上可接受的鹽和酮康唑及其非毒性藥學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物，其中依魯替尼和酮康唑的重量比為1∶4至1∶20。
本發(fā)明最后還提供含有有效治療量的依魯替尼及其非毒性藥學(xué)上可接受的 鹽和可比司他及其非毒性藥學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物，其中依魯替尼和可比司他的重量比為1∶1至1∶30。
優(yōu)選地，本發(fā)明最后還提供含有有效治療量的依魯替尼及其非毒性藥學(xué)上可接受的鹽和可比司他及其非毒性藥學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物，其中依魯替尼和可比司他的重量比為1∶1至1∶15。
更優(yōu)選地，本發(fā)明最后還提供含有有效治療量的依魯替尼及其非毒性藥學(xué)上可接受的鹽和可比司他及其非毒性藥學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物，其中依魯替尼和可比司他的重量比為1∶1至1∶7.5。
本發(fā)明還提供含有有效治療量的依魯替尼及其非毒性藥學(xué)上可接受的鹽和細胞色素CYP3A抑制劑及其非毒性藥學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物作為布魯頓酪氨酸激酶抑制劑在制備抗腫瘤藥物中的用途。
本發(fā)明還提供含有有效治療量的依魯替尼及其非毒性藥學(xué)上可接受的鹽和細胞色素CYP3A抑制劑及其非毒性藥學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物作為布魯頓酪氨酸激酶抑制劑在制備抗腫瘤藥物中的用途，其中依魯替尼的日用劑量為每人0.2-2.0mg/kg。
優(yōu)選地，本發(fā)明還提供含有有效治療量的依魯替尼及其非毒性藥學(xué)上可接受的鹽和細胞色素CYP3A抑制劑及其非毒性藥學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物作為布魯頓酪氨酸激酶抑制劑在制備抗腫瘤藥物中的用途，其中依魯替尼的日用劑量為每人0.4-2.0mg/kg。
具體實施方式
下面的實施例可以對本發(fā)明進一步說明；然而，這些實施例并不構(gòu)成對本發(fā)明的范圍的限制。
實施例1依魯替尼和利托那韋的組合物對靶細胞和非靶細胞的抑制作用
以MTT法測試了不同比例的依魯替尼和利托那韋的組合物對Pfeiffer細胞，購自上海酶研生物科技有限公司)，以及非靶細胞HepG2細胞和HEK293細胞(購自上海酶研生物科技有限公司)的抑制作用。
取待測細胞培養(yǎng)，制備濃度大約為2.5×104個/mL的細胞懸液，接種于96孔培養(yǎng)板，100.0uL/孔，置37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中孵育24小時；將不同濃度的受試物加到培養(yǎng)的腫瘤細胞的96孔板中，繼續(xù)培養(yǎng)72小時；棄去培養(yǎng)液，每孔加入0.05％MTT應(yīng)用液100.0μL，培養(yǎng)4小時；棄去培養(yǎng)液，每孔加入100μL DMSO，振蕩5分鐘使溶解，測定在490nm處的吸光度。
對照：具有細胞、MTT溶液而沒有藥物的孔的吸光度
空白：具有培養(yǎng)基和MTT溶液而沒有細胞的孔的吸光度
加藥：具有細胞、MTT溶液和組合物藥物溶液的孔的吸光度
最后由相應(yīng)處理軟件計算各組合物對腫瘤細胞生長的半數(shù)抑制濃度(IC50，以依魯替尼的摩爾濃度計)。結(jié)果見表1：
表1依魯替尼和利托那韋的組合物抗腫瘤活性評價結(jié)果
由表1可知，不同比例的利托那韋的加入，不影響依魯替尼對靶細胞淋巴瘤B淋巴細胞的抑制作用；但是高比例利托那韋的加入，增加了對非靶細胞HepG2細胞(肝源性)和HEK293細胞(腎源性)的抑制作用，提示含有高比例利托那韋的組合物可能具有一定的肝臟和腎臟毒性。
實施例2依魯替尼和酮康唑的組合物對靶細胞和非靶細胞的抑制作用
參照實施例1的方法，測試了不同比例的依魯替尼和酮康唑的組合物對Pfeiffer細胞、HepG2細胞和HEK293細胞的抑制作用。結(jié)果見表2。
表2依魯替尼和酮康唑的組合物抗腫瘤活性評價結(jié)果
由表2可知，不同比例的酮康唑的加入，不影響依魯替尼對靶細胞淋巴瘤B淋巴細胞的抑制作用；但是高比例酮康唑的加入，增加了對非靶細胞HepG2細胞(肝源性)和HEK293細胞(腎源性)的抑制作用，特別是對HepG2細胞具有顯著的毒性，提示含有高比例酮康唑的組合物可能具有較強的肝臟毒性。
實施例3依魯替尼和可比司他的組合物對靶細胞和非靶細胞的抑制作用
參照實施例1的方法，測試了不同比例的依魯替尼和可比司他的組合物對Pfeiffer細胞、HepG2細胞和HEK293細胞的抑制作用。結(jié)果見表3。
表3依魯替尼和可比司他的組合物抗腫瘤活性評價結(jié)果
由表3可知，不同比例的可比司他的加入，不影響依魯替尼對靶細胞淋巴瘤B淋巴細胞的抑制作用；但是高比例可比司他的加入，增加了對非靶細胞HepG2細胞(肝源性)和HEK293細胞(腎源性)的抑制作用，提示含有高比例可比司他的組合物可能具有一定的肝臟和腎臟毒性。
實施例4組合物對hERG鉀通道阻滯作用的評價
依魯替尼在臨床上顯示出一定的心臟副作用(房顫發(fā)生率6-9％，http：//www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/label/2013/205552lbl.pdf)。因此，通過測定組合物對hERG鉀通道的阻滯作用，評價其潛在的心臟副作用。
使用全自動膜片鉗Qpatch 16X，對不同濃度的組合物，按照由低到高的順序分別作用于穩(wěn)定表達hERG通道的CHO hERG DUO細胞，記錄其對hERG鉀通道電流的影響。通過量效曲線擬合，求得其IC50(以依魯替尼的摩爾濃度計)。結(jié)果見表4。
表4依魯替尼組合物對hERG鉀通道阻滯作用的評價結(jié)果
由表4可知，高比例的CYP3A酶抑制劑的加入，對hERG鉀通道具有一定的阻滯作用，特別是含可比司他的組合物具有較強的hERG鉀通道阻滯作用，提示含有高比例可比司他的組合物具有較高的心臟副作用。
實施例5體內(nèi)抗腫瘤作用
取雌性CB17/SCID小鼠(購自上海富眾生物科技發(fā)展有限公司)，皮下注射接種5×106個母細胞淋巴瘤細胞DoHH2細胞(購自上海拜力生物科技有限公司)。兩周后(腫瘤平均體積150mm3)將動物隨機分組，6只/組。將待測樣品研磨懸浮于0.5％的羧甲基纖維素鈉溶液中，灌胃給予含有一定劑量組合物的羧甲基纖維素鈉懸浮液，給予空白羧甲基纖維素鈉懸浮液作為對照。14天后，測定動物體重和腫瘤大小。按下式計算抑瘤率：
結(jié)果見表5：
表5依魯替尼組合物抗腫瘤活性評價結(jié)果
由表5可知，依魯替尼100mg/kg口服給藥的抑瘤作用不如依魯替尼10 mg/kg靜脈給藥；依魯替尼(10mg/kg)+利托那韋(30mg/kg)、依魯替尼(30mg/kg)+利托那韋(30mg/kg)以及依魯替尼(30mg/kg)+利托那韋(90mg/kg)3種組合物均具有顯著的抑瘤作用；依魯替尼(30mg/kg)+利托那韋(30mg/kg)與依魯替尼(30mg/kg)+利托那韋(90mg/kg)的抑瘤作用相當(dāng)，均顯著高于依魯替尼100mg/kg口服給藥，與依魯替尼10mg/kg靜脈給藥相當(dāng)。
依魯替尼(10mg/kg)+酮康唑(120mg/kg)、依魯替尼(30mg/kg)+酮康唑(120mg/kg)及依魯替尼(30mg/kg)+酮康唑(360mg/kg)3種組合物均具有顯著的抑瘤作用；依魯替尼(30mg/kg)+酮康唑(120mg/kg)與依魯替尼(30mg/kg)+酮康唑(360mg/kg)的抑瘤作用相當(dāng)，均顯著高于依魯替尼100mg/kg口服給藥，與依魯替尼10mg/kg靜脈給藥相當(dāng)。
同樣地，依魯替尼(10mg/kg)+可比司他(40mg/kg)、依魯替尼(30mg/kg)+可比司他(40mg/kg)及依魯替尼(30mg/kg)+可比司他(120mg/kg)3種組合物均具有顯著的抑瘤作用；依魯替尼(30mg/kg)+可比司他(40mg/kg)與依魯替尼(30mg/kg)+可比司他(120mg/kg)的抑瘤作用相當(dāng)，均顯著高于依魯替尼100mg/kg口服給藥，與依魯替尼10mg/kg靜脈給藥相當(dāng)。
實施例6組合物對大鼠的亞急性毒性評價
取雄性wistar大鼠隨機分組，10只一組，稱重。將一定濃度的待測樣品研磨懸浮于0.5％的羧甲基纖維素鈉溶液中，灌胃給予含有一定劑量組合物的羧甲基纖維素鈉懸浮液，給予空白羧甲基纖維素鈉懸浮液作為對照，每天1次，連續(xù)14天。末次給藥后，禁食不禁水12小時，麻醉，腹主動脈取血，按國家北京藥物安全評價研究中心SOPB093《血清制備標(biāo)準操作規(guī)程》，制備血清， 供血液生化指標(biāo)和免疫學(xué)指標(biāo)測定；按SOPB032《真空管EDTA抗凝血的制備》，制備EDTA抗凝血，供一般血常規(guī)測定。動物存活及體重數(shù)據(jù)見表6，血液學(xué)指標(biāo)評價結(jié)果見表7，血液生化指標(biāo)評價結(jié)果見表8。
表6依魯替尼組合物亞急毒動物存活及體重結(jié)果
由表6可知，大鼠口服100mg/kg的依魯替尼，動物體重增長顯著低于正常組，且出現(xiàn)1只動物死亡，表明該劑量的依魯替尼具有顯著的毒副作用；依魯替尼(30mg/kg)+利托那韋(30mg/kg)、依魯替尼(30mg/kg)+利托那韋(90mg/kg)、依魯替尼(30mg/kg)+酮康唑(120mg/kg)及依魯替尼(10mg/kg)+可比司他(40mg/kg)組動物生長情況良好，體重與正常對照組相當(dāng)；依魯替尼(30mg/kg)+酮康唑(360mg/kg)組動物體重增長顯著低于正常組，且出現(xiàn)3只動物死亡，表明該組合物具有顯著的毒副作用；依魯替尼(30mg/kg)+可比司他(120mg/kg)組動物體重增長與正常組相當(dāng)，但是出現(xiàn)4只動物猝死，可能為心臟副作用。
表7依魯替尼組合物亞急毒血液學(xué)指標(biāo)評價結(jié)果
由表7可知，大鼠口服100mg/kg的依魯替尼，動物的血液學(xué)指標(biāo)顯著低于正常組，表明該劑量的依魯替尼具有顯著的血液毒性；依魯替尼(30mg/kg)+利托那韋(30mg/kg)、依魯替尼(30mg/kg)+利托那韋(90mg/kg)、依魯替尼(30mg/kg)+酮康唑(120mg/kg)及依魯替尼(30mg/kg)+可比司他(40mg/kg)4種組合物的動物的血液學(xué)指標(biāo)均均顯著高于依魯替尼100mg/kg口服，略低于正常對照組相當(dāng)；依魯替尼(30mg/kg)+酮康唑(360mg/kg)和依魯替尼(30mg/kg)+可比司他(120mg/kg)組動物的血液學(xué)指標(biāo)均低于正常組，但是均高于口服100mg/kg的依魯替尼的大鼠。
表8依魯替尼組合物亞急毒血液生化指標(biāo)評價結(jié)果
由表8可知，大鼠口服100mg/kg的依魯替尼，動物的尿素氮水平和肌酐水平顯著高于正常組相當(dāng)，表明其具有一定的腎臟毒性；依魯替尼(30mg/kg)+酮康唑(120mg/kg)和依魯替尼(10mg/kg)+酮康唑(360mg/kg)動物的轉(zhuǎn)氨酶水平顯著高于正常組，表明其具有顯著的肝臟毒性；依魯替尼(30mg/kg)+可比司他(40mg/kg)組和依魯替尼(30mg/kg)+可比司他(120mg/kg)組動物的尿素氮水平和肌酐水平顯著高于正常組相當(dāng)，表明其具有一定的腎臟毒性；依魯替尼(30mg/kg)+利托那韋(30mg/kg)和依魯替尼(30mg/kg)+利托那韋(90mg/kg)組血液生化指標(biāo)與正常組相當(dāng)。