本發(fā)明涉及天然藥物領(lǐng)域，涉及一種異喹啉生物堿的預(yù)防或治療糖尿病腎病的用途，具體涉及黃柏堿的預(yù)防或治療糖尿病腎病的用途。

背景技術(shù)：

糖尿病是一種由于胰島素分泌缺陷及(或)其生物學(xué)作用障礙引起的以高血糖為特征的代謝疾病，是在遺傳基礎(chǔ)上，有環(huán)境因素參與的遺傳易感性疾病，是一種慢性全身性代謝疾病，嚴(yán)重危害人類(lèi)健康，積極開(kāi)展糖尿病的防治工作已成為主要的社會(huì)公共衛(wèi)生問(wèn)題。

I型糖尿病的發(fā)病原因主要是由于胰島素分泌絕對(duì)缺少，II型糖尿病是從胰島素抵抗為主伴胰島素相對(duì)不足到胰島素分泌不足為主伴胰島素抵抗的病理過(guò)程。目前公認(rèn)II型糖尿病是一種在環(huán)境因素、生活方式的改變的作用下由多個(gè)基因分別或相互作用所導(dǎo)致的復(fù)雜遺傳病，但是II型糖尿病的病因尚未完全闡明。

西醫(yī)目前常采用飲食、運(yùn)動(dòng)療法磺酰脲類(lèi)、雙胍類(lèi)、噻唑烷二酮類(lèi)、α-葡萄糖苷酶抑制劑、瑞格列奈、胰島素等來(lái)治療II型糖尿病，僅噻唑烷二酮類(lèi)可改善胰島素抵抗。病人在用西藥治療的同時(shí)，又不斷地出現(xiàn)動(dòng)脈硬化、冠心病和高血壓等并發(fā)癥，II型糖尿病的復(fù)雜機(jī)制及其導(dǎo)致的全身病變是西藥治療的薄弱環(huán)節(jié)。不論是磺脈類(lèi)的促泌劑還是噻唑烷二酮類(lèi)的增敏劑在實(shí)驗(yàn)和臨床研究中都不具備明顯的減肥功效，而肥胖是2型糖尿病乃至代謝綜合征的重要病理基礎(chǔ)。

II型糖尿病不僅是糖代謝紊亂疾病，還是脂肪代謝紊亂疾病。肥胖引起的II型糖尿病患者通常都有高糖和高脂飲食，并常伴有高脂血癥。有研究表明提示血糖“正常”的肥胖患者已有β細(xì)胞分泌功能的異常。但是，大部分的肥胖者并不發(fā)展為糖尿病，說(shuō)明機(jī)體的自身狀況起重要作用。在同樣的毒性作用下，易感人群很容易發(fā)展成II型糖尿病，而不敏感人群可能終身不發(fā)病，或者延遲發(fā)病?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)并不能夠改變機(jī)體的易感性，但可以通過(guò)改變生活方式，減肥等手段來(lái)盡可能地減少早期的誘因，盡量的延長(zhǎng)代償期，從而延遲II型糖尿病 的發(fā)生，甚至避免發(fā)病。

現(xiàn)代II型糖尿病的治療觀點(diǎn)已從已往的單純控制血糖轉(zhuǎn)為降糖、降脂、降壓、改善胰島素抵抗等多環(huán)節(jié)治療。但是，對(duì)于II型糖尿病患者，藥量需逐漸增加，投藥種類(lèi)也常由單一用藥逐漸變?yōu)槁?lián)合用藥，這不可避免地要考慮藥物代謝對(duì)肝腎的副作用。故從傳統(tǒng)中藥中尋找低毒、療效肯定的天然藥物來(lái)治療是目前研糖尿病究熱點(diǎn)之一。

衛(wèi)生部制定頒布的《中藥新藥治療消渴病(糖尿病)的臨床研究指導(dǎo)原則》中所制定的分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)是目前采用最廣泛的分類(lèi)方法，即陰虛熱盛證、氣陰兩虛證、陰陽(yáng)兩虛證和血疲氣滯證四型。

糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病最重要的并發(fā)癥之一，我國(guó)的發(fā)病率亦呈上升趨勢(shì)，目前已成為終末期腎病的第二位，僅次于腎小球腎炎，由于存在復(fù)雜的代謝紊亂，糖尿病發(fā)生腎臟損害，特別是一旦進(jìn)入臨床蛋白尿期，病情一般不可逆轉(zhuǎn)，往往呈進(jìn)行性發(fā)展直至終末期腎病，往往比其他腎臟疾病的治療更加困難，是引起糖尿病患者死亡的主要原因之一，DN的發(fā)病機(jī)制和治療藥物的研制受到了醫(yī)學(xué)界極大的重視?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)上多從飲食控制、血糖控制、降壓、調(diào)整脂代謝等方面著手，或是采用透析、腎移植等治療手段，尚無(wú)療效確切的西藥能阻止DN腎功能損害的進(jìn)程。臨床其主要診斷的特征為白蛋白排泄率，和白蛋白肌酐比值。

糖尿病腎病是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)病名，在古醫(yī)籍中未有與之對(duì)應(yīng)的確切病名，但文獻(xiàn)記載的消渴病日久失治、誤治后所出現(xiàn)尿獨(dú)、水腫、腎消、關(guān)格等與糖尿病腎病的臨床表現(xiàn)十分相似。如《圣濟(jì)總錄》曰：“消渴病久，腎氣受傷，腎主水，腎氣虛衰，氣化失常，開(kāi)闔不利，發(fā)為水腫?！保峨s病源流犀燭.三消源流》記載：“有消渴后身腫者，有消渴面目足膝腫小便少者?！?，因而本病當(dāng)屬中醫(yī)學(xué)中的“消渴”、“水腫”、“虛勞“等范疇。

對(duì)糖尿病腎病病機(jī)的認(rèn)識(shí)，中醫(yī)各家認(rèn)識(shí)較為一致，多立足本虛標(biāo)實(shí)、虛實(shí)夾雜，涉及肝脾肺腎諸臟，糖尿病腎病的病機(jī)特點(diǎn)是：以腎、脾、肝及氣血陰陽(yáng)之虛為本；標(biāo)實(shí)以瘀血、水濕、痰濁最多。中醫(yī)藥在防治糖尿病腎病方面顯示出獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，從中藥中發(fā)現(xiàn)改善臨床癥狀、減輕蛋白尿、降低血糖、保護(hù)腎功能的天然產(chǎn)物是國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。

黃柏為我國(guó)常用的傳統(tǒng)中藥，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，原名“檗木”，列為上品，其性味苦、寒，主歸腎、膀胱經(jīng)，具有清熱燥濕，灣火除蒸，解毒療疫之功效，用于濕熱污痢，黃疸尿赤，帶下陰癢，熱淋淫痛，腳氣痿蹵，骨蒸勞熱，盜汗，遺精，腫毒，濕疹?，F(xiàn)代藥理研究表明，黃柏具有抗菌、抗真菌、抗炎、抗肝炎、抗腎炎、抗?jié)⒉?、抗氧化、抗痛風(fēng)、降血壓、降血糖、抗腫瘤、抗心力衰竭、抑制細(xì)胞免疫等作用。目前黃柏制劑在臨床上已經(jīng)廣泛運(yùn)用，如治療鼻竇炎、急慢性膿耳、急慢性骨髓炎、慢性結(jié)腸炎、皮膚糜爛、膿拖性皮損、濕疫皮炎、潰竊性口腔炎、外痔腫痛、肛痛以及術(shù)后外洗、治療軟組織挫傷、消腫等病癥。(《黃柏中黃柏堿的提取純化工藝研究》，《西南交通大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文》，羅鴻，2012年)。

黃柏堿(Phellodendrine)是從蕓香科植物黃柏(Phelhdendron chinensis Schneid.)、威氏黃柏的莖皮中提取分離出來(lái)的一種異喹啉生物堿，其具有降血壓、抗腎炎、抑制細(xì)胞免疫反應(yīng)、中樞神經(jīng)抑制等作用。

黃柏堿的藥理作用主要有：降壓作用，主要表現(xiàn)為靜注于貓和鼠和犬均可引起降壓，并能增強(qiáng)腎上腺素和去甲腎上腺素的升壓反應(yīng)，抑制人工窒息及刺激迷走神經(jīng)向中端的升壓反應(yīng)，抑制刺激節(jié)前纖維而起的貓瞬膜收縮。隨劑量增大，降壓作用強(qiáng)度及持續(xù)時(shí)間也增加；植物神經(jīng)阻斷作用，表現(xiàn)為黃柏堿對(duì)中樞神經(jīng)有抑制作用，能抑制小鼠的自發(fā)活動(dòng)和各種反射；肌肉松馳作用；對(duì)細(xì)胞免疫應(yīng)答期的誘導(dǎo)期有抑制作用。

《黃柏中幾種生物堿的分離、鑒定及促胰島素分泌活性篩選》(《中國(guó)醫(yī)藥指南》，2011年3月，第9卷，第7期，第54-55頁(yè)，周明偉、范明松、季宇斌、唐意紅)記載了：從黃柏的生物堿部分分離得到3個(gè)化合物，分別為小檗堿、藥根堿、黃柏堿。研究發(fā)現(xiàn)，在葡萄糖濃度為5.6mmol/L時(shí)，黃柏總堿中的3種生物堿對(duì)胰島素的分泌均無(wú)明顯的促進(jìn)作用；而當(dāng)葡萄糖濃度為16.7mmol/L時(shí)，小檗堿能夠明顯的促進(jìn)細(xì)胞的胰島素分泌。陽(yáng)性藥格列美脲在低糖濃度和高糖濃度時(shí)，都能夠促進(jìn)胰島素分泌。

至今未見(jiàn)有關(guān)黃柏堿糖尿病腎病治療作用的報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明公開(kāi)一種異喹啉生物堿的預(yù)防或治療糖尿病腎病的用途；具體是黃柏堿治療糖尿病腎病的作用新用途，

本發(fā)明公開(kāi)異喹啉生物堿用于制備治療或預(yù)防糖尿病腎病的組合物。

本發(fā)明公開(kāi)的組合物，異喹啉生物堿為黃柏堿。

本發(fā)明公開(kāi)的組合物，為市售或按已知方法制備的黃柏堿或其藥用鹽、水合物或無(wú)水物。

本發(fā)明公開(kāi)的組合物，其中黃柏堿藥用鹽包括：無(wú)機(jī)酸鹽例如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽和磷酸鹽；有機(jī)酸鹽例如乙酸鹽，苯甲酸鹽，馬來(lái)酸鹽，富馬酸鹽，蘋(píng)果酸鹽，檸檬酸鹽，草酸鹽，乳酸鹽，琥珀酸鹽，酒石酸鹽，烷基磺酸鹽或芳基磺酸鹽，半胱氨酸鹽或其它氨基酸鹽。還包括堿式鹽如鈉鹽、鉀鹽和鈣鹽。

水合物包括含n個(gè)結(jié)晶水，n＝1-12。

本發(fā)明公開(kāi)的組合物，為：藥物、保健品、或功能性食品，賦形劑或載體為制藥或食品領(lǐng)域中常用的賦形劑或載體，如稀釋劑，崩解劑，潤(rùn)滑劑等。

本發(fā)明中所述黃柏堿的有效量可是目前黃柏堿應(yīng)用領(lǐng)域中的常用量或劑量。

本發(fā)明的黃柏堿可通過(guò)口服或注射形式使用。

本發(fā)明的異喹啉生物堿用于預(yù)防或治療I型糖尿病。

本發(fā)明的異喹啉生物堿用于預(yù)防或治療II型糖尿病。

本發(fā)明的異喹啉生物堿用于制備保護(hù)糖尿病腎病人的腎臟組織、或、修復(fù)糖尿病腎病人的受損的腎臟組織的組合物。

本發(fā)明所述的黃柏堿(Phellodendrine)，CAS號(hào)為6873-13-18，其分子式是C₂₀H₂₄NO₄，相對(duì)分子質(zhì)量342，具有式如下的結(jié)構(gòu)：

發(fā)明人在黃柏堿的藥理活性研究中，意外地發(fā)現(xiàn)黃柏堿具有顯著的治療糖尿病腎病作用。

本發(fā)明通過(guò)(1)STZ造模的糖尿病小鼠，經(jīng)過(guò)14周，發(fā)展成為糖尿病腎病，灌胃給藥12周，結(jié)果表明治療作用效果明顯，具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異

為了便于理解，下面通過(guò)附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的黃柏堿在治療糖尿病腎病的用途進(jìn)行詳細(xì)的描述。需要特別指出的是，具體實(shí)施例和附圖僅是為了說(shuō)明，顯然本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以根據(jù)本文說(shuō)明，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行各種修正或改變，這些修正和改變也將納入本發(fā)明范圍之內(nèi)。

附圖說(shuō)明

圖1：腎臟HE染色

圖2：腎臟PAS染色

圖1的詳細(xì)說(shuō)明

圖1通過(guò)上中下三個(gè)部分展示腎臟HE染色；

圖1的上部展示正常組小鼠腎臟組織；

圖1的中部展示STZ組小鼠腎臟組織；

圖1的下部展示STZ+黃柏堿組小鼠腎臟組織。

圖2的詳細(xì)說(shuō)明

圖2通過(guò)上中下三個(gè)部分展示腎臟PAS染色；

圖2的上部展示正常組小鼠腎臟組織；

圖2的中部展示STZ組小鼠腎臟組織；

圖2的下部展示STZ+黃柏堿組小鼠腎臟組織。

本發(fā)明涉及如下表

表1.黃柏堿對(duì)STZ造模的糖尿病腎病的血糖的影響

表2.黃柏堿對(duì)STZ造模的糖尿病腎病的尿量的影響

表3.黃柏堿對(duì)STZ造模的糖尿病腎病的UAE(24h尿白蛋白排泄率)的影響.

表4.黃柏堿對(duì)STZ造模的糖尿病腎病的UACR(ug尿白蛋白/mg肌酐比值)的影響.

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

為了研究黃柏堿對(duì)糖尿病腎病血糖影響，使用C57BL小鼠隨機(jī)分為3組，正常對(duì)照組(10只)，STZ組(20只)。STZ組連續(xù)腹腔注射STZ(50mg/Kg)5天，兩周后測(cè)定禁食血糖，血糖大于等于13.8mM為糖尿病造模成功。然后將STZ組隨機(jī)分為STZ組和黃柏堿治療組，STZ組僅正常飼養(yǎng)，黃柏堿治療組采用口服灌胃(15mg/kg)，12周后，將小鼠放入小鼠代謝籠中，自由飲食飲水，將尿液用于分析，所測(cè)指標(biāo)均為臨床上糖尿病腎病的檢測(cè)的經(jīng)典指標(biāo)，如表2、3、4所示STZ組相比空白對(duì)照組，顯著升高均在10倍以上，說(shuō)明糖尿病小鼠腎功能出現(xiàn)嚴(yán)重?fù)p傷，如圖1、2所示STZ組相比正常組器官損傷明顯。綜合以上表圖可以得出糖尿病腎病造模成功。

表1.結(jié)果表明黃柏堿能夠有效的降低STZ造成的血糖升高，逆轉(zhuǎn)由糖尿病腎病引起的尿量增加(表2)，有效的降低糖尿病腎病引起的24h蛋白排泄率升高(表3)。臨床上常用尿液中白蛋白和肌酐的比值評(píng)估腎功能，黃柏堿的有效的降低糖尿腎病引起的白蛋白和肌酐的比值升高(表4)。尿量、24h蛋白排泄率白蛋白和肌酐的比值的結(jié)果表明黃柏堿治療很好的改善了腎功能。

為了更進(jìn)一步的評(píng)估腎臟器官性損傷的改變，本發(fā)明對(duì)腎臟進(jìn)行PAS染色和HE染色。圖1，2顯示：黃柏堿能夠有效的修復(fù)糖尿病腎病的器官性損傷逆轉(zhuǎn)，如圖所示STZ組腎小球系膜區(qū)增寬，基質(zhì)增加，腎小球基膜增厚，腎小管基膜增厚及分裂，呈現(xiàn)出極為典型的糖尿病腎病特征，顯示造模良好，而黃柏堿在一定程度上修復(fù)，系膜區(qū)相對(duì)縮小，改善了基質(zhì)增生以及腎小管基膜增厚，說(shuō)明治療作用明顯效果顯著。

表1.黃柏堿對(duì)STZ造模的糖尿病腎病的血糖的影響(單位：mM).

注：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001，與STZ組相比。

表2.黃柏堿對(duì)STZ造模的糖尿病腎病的尿量的影響(單位：g).

表3.黃柏堿對(duì)STZ造模的糖尿病腎病的UAE(24h尿白蛋白排泄率，單位：μg)的影響.

表4.黃柏堿對(duì)STZ造模的糖尿病腎病的UACR(μg尿白蛋白/mg肌酐比值)的影響.

注：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001，與STZ組相比。

實(shí)施例2

黃柏堿的制劑

黃柏堿片劑

黃柏堿10mg，淀粉88g，硬脂酸鎂3g

制備工藝：取黃柏堿過(guò)100目篩，加淀粉、硬脂酸鎂混合均勻，制成顆粒，干燥，壓片，即得。

黃柏堿膠囊

黃柏堿10mg，淀粉88g，硬脂酸鎂3g

制備工藝：取黃柏堿過(guò)100目篩，加淀粉、硬脂酸鎂混合均勻，制成顆粒，干燥，裝膠囊，即得。

黃柏堿注射液

黃柏堿47mg，注射用氯化鈉7mg

制備工藝：取黃柏堿過(guò)100目篩，加1.9mL注射用水溶解，加入注射用氯化鈉至等滲，調(diào)節(jié)pH值至7～7.1，濾過(guò)，冷藏24小時(shí)，加注射用水至規(guī)定量，濾過(guò)，灌封，滅菌，即得。

實(shí)施例3

黃柏堿的食品制劑

干酵母5g、溫水90ml、水少許、面粉150g、黃柏堿5mg，植物油10g、低鈉鹽少許

餅干做法：把酵母撒在溫水里攪拌倒溶化，加入黃柏堿。加入面粉攪拌，再加入植物油，揉成光滑的面團(tuán)；面團(tuán)制成0.2cm厚的薄片；壓出造型，刺洞，表面撒上水，撒上一點(diǎn)低鈉鹽，室溫發(fā)酵10分鐘；烤箱預(yù)熱120度，放在上層，烤約10分鐘，得到含黃柏堿的食品。

實(shí)施例4

黃柏堿單體(純度在91％～92％)100mg，先用10ml氯仿溶解，加入10mL 0.1M HCL氯仿溶液，析出沉淀，過(guò)濾干燥，得到鹽酸黃柏堿單體，用1ml乙醇溶解，置冰箱4℃條件下放置24h，析晶，過(guò)濾干燥，得到鹽酸黃柏 堿單體，純度達(dá)到98％以上。

黃柏堿單體(純度在91％～92％)100mg，先用10ml氯仿溶解，加入10mL0.1M H₂SO₄氯仿溶液，析出沉淀，過(guò)濾干燥，得到硫酸黃柏堿單體，用1ml乙醇溶解，過(guò)濾，濾液置冰箱4℃條件下放置24h，析晶，過(guò)濾干燥，得到硫酸黃柏堿單體，純度達(dá)到98％以上。

黃柏堿單體(純度在91％～92％)100mg，先用10ml氯仿溶解，加入10mL 0.1M磷酸氯仿溶液，析出沉淀，過(guò)濾干燥，得到磷酸黃柏堿單體，用1ml乙醇溶解，過(guò)濾，濾液置冰箱4℃條件下放置24h，析晶，過(guò)濾干燥，得到磷酸黃柏堿單體，純度達(dá)到98％以上。

黃柏堿單體(純度在91％～92％)100mg，先用10ml氯仿溶解，加入10mL 0.1M果酸氯仿溶液，析出沉淀，過(guò)濾干燥，得到果酸黃柏堿單體，用1ml乙醇溶解，過(guò)濾，濾液置冰箱4℃條件下放置24h，析晶，過(guò)濾干燥，得到果酸黃柏堿單體，純度達(dá)到98％以上。

黃柏堿單體(純度在91％～92％)100mg，先用10ml氯仿溶解，加入10mL 0.1M草酸氯仿溶液，析出沉淀，過(guò)濾干燥，得到草酸黃柏堿單體，用1ml乙醇溶解，過(guò)濾，濾液置冰箱4℃條件下放置24h，析晶，過(guò)濾干燥，得到草酸黃柏堿單體，純度達(dá)到98％以上。

黃柏堿單體(純度在91％～92％)100mg，先用10ml氯仿溶解，加入10mL 0.1M琥珀酸氯仿溶液，析出沉淀，過(guò)濾干燥，得到琥珀酸黃柏堿單體，用1ml乙醇溶解，過(guò)濾，濾液置冰箱4℃條件下放置24h，析晶，過(guò)濾干燥，得到琥珀酸黃柏堿單體，純度達(dá)到98％以上。

黃柏堿單體(純度在91％～92％)100mg，先用10ml氯仿溶解，加入10mL 0.1M醋酸氯仿溶液，析出沉淀，過(guò)濾干燥，得到醋酸黃柏堿單體，用1ml乙醇溶解，過(guò)濾，濾液置冰箱4℃條件下放置24h，析晶，過(guò)濾干燥，得到醋酸黃柏堿單體，純度達(dá)到98％以上。

黃柏堿單體(純度在91％～92％)100mg，先用10ml氯仿溶解，加入10mL 0.1M丙酸氯仿溶液，析出沉淀，過(guò)濾干燥，得到丙酸黃柏堿單體，用1ml乙醇溶解，過(guò)濾，濾液置冰箱4℃條件下放置24h，析晶，過(guò)濾干燥，得到丙酸黃柏堿單體，純度達(dá)到98％以上。