一種動(dòng)物雙歧桿菌及其組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種動(dòng)物雙歧桿菌及其組合物，屬于微生物應(yīng)用【技術(shù)領(lǐng)域】。本發(fā)明所提供的動(dòng)物雙歧桿菌的保藏號為CGMCC No.4521，于2010年12月29日，保藏在位于北京的中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心。本發(fā)明所提供的動(dòng)物雙歧桿菌與干酪乳桿菌、糞鏈球菌和蠟樣芽胞桿菌具有協(xié)同生長作用，并且對對喹諾酮類、氨基糖苷類和單環(huán)β-內(nèi)酰胺類抗生素具有耐受性，適用于食品、藥品和/或保健品中。
CGMCC NO.4521
20101229
【專利說明】一種動(dòng)物雙歧桿菌及其組合物

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種動(dòng)物雙歧桿菌及其組合物，屬于微生物應(yīng)用【技術(shù)領(lǐng)域】。 技術(shù)背景
[0002] 動(dòng)物雙歧桿菌是人類最早發(fā)現(xiàn)的生理性細(xì)菌，是人體腸道內(nèi)典型的有益菌。動(dòng)物 雙歧桿菌是定植于人體腸道內(nèi)的益生菌，它的存在可有效降低人體內(nèi)系統(tǒng)的PH，改變腸道 內(nèi)菌群，優(yōu)化腸道微生態(tài)，抑制和殺滅病原菌，從而增強(qiáng)人體免疫力，提高機(jī)體抗病能力，同 時(shí)，動(dòng)物雙歧桿菌在腸道內(nèi)還可合成多種維生素。此外，動(dòng)物雙歧桿菌還具有潤腸通便，降 低膽固醇和甘油三酯，抑制癌細(xì)胞，抗衰老等作用。因此，人體內(nèi)動(dòng)物雙歧桿菌的數(shù)量和質(zhì) 量已成為衡量人體腸道健康的重要標(biāo)準(zhǔn)之一。
[0003] 動(dòng)物雙歧桿菌是一類專性厭氧菌，對氧的環(huán)境及營養(yǎng)要求較高。當(dāng)菌體耐酸，耐膽 鹽能力不足是進(jìn)不到腸道，就會(huì)失去它的作用。因此，要發(fā)揮益生作用，菌體首先應(yīng)能耐受 人體腸道的消化過程，能夠抵御胃酸和膽汁對其的殺滅作用。目前報(bào)道能夠耐受人體胃酸 和膽鹽的動(dòng)物雙歧桿菌的獲取方法主要有三種，分為為從自然界中篩選，從自然發(fā)酵食品 中篩選以及對現(xiàn)有菌種進(jìn)行馴化。但是，現(xiàn)有動(dòng)物雙歧桿菌菌株之間差異較大，往往無法在 具備耐酸耐膽鹽的功能下，能夠長時(shí)間在室溫下存活，同時(shí)具備抑菌并與乳酸菌復(fù)配等多 種優(yōu)點(diǎn)。
[0004] 雙歧桿菌等微生態(tài)制品具有保健以及預(yù)防和治療疾病的作用，主要依賴制品的功 能活菌的存在，而如何提高發(fā)酵生產(chǎn)的活菌數(shù)，以及保持產(chǎn)品的存活穩(wěn)定性，對于制品的作 用效果來說是一個(gè)非常關(guān)鍵的問題。由于雙歧桿菌是專性厭氧菌，對空氣和溫度十分敏感， 因此在實(shí)際應(yīng)用中也出現(xiàn)一些問題。菌種在生產(chǎn)、運(yùn)輸和保藏過程中，容易失活。為了使產(chǎn) 品的活菌數(shù)保持在一定的水平，國內(nèi)外的研究人員做了大量關(guān)于基因改造、微膠囊技術(shù)、菌 體包埋技術(shù)等方面的研究，但從目前來看，產(chǎn)品常常被要求在低溫下保存，絕大多數(shù)含雙歧 桿菌的產(chǎn)品都沒有解決常溫保存的問題。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為解決上述問題，本發(fā)明提供了一種動(dòng)物雙歧桿菌，所采取的技術(shù)方案如下：
[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種動(dòng)物雙歧桿菌，該動(dòng)物雙歧桿菌對喹諾酮類、氨基糖 苷類和單環(huán)內(nèi)酰胺類抗生素具有耐受性。
[0007] 所述動(dòng)物雙歧桿菌的保藏號為CGMCC No. 4521，分類命名為Bifidobacterium animalis，于2010年12月29日，保藏在位于北京的中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通 微生物中心。
[0008] 所述喹諾酮類抗生素為環(huán)丙沙星、氧氟沙星和諾氟沙星。
[0009] 所述氨基糖苷類抗生素為慶大霉素和卡那霉素。
[0010] 所述單環(huán)β -內(nèi)酰胺類抗生素為氨曲南。
[0011] 本發(fā)明的另一目的在于提供一種含有所述動(dòng)物雙歧桿菌的組合物，該組合物含有 動(dòng)物雙歧桿菌和載體。
[0012] 所述載體由脫脂乳、海藻糖、麥芽糖糊精、L-谷氨酸鈉和低聚異麥芽糖組成。
[0013] 所述載體組成如下：10%脫脂乳、4%海藻糖、4%麥芽糖糊精、4% L-谷氨酸鈉和 4%低聚異麥芽糖。
[0014] 所述組合物含有動(dòng)物雙歧桿菌的活菌數(shù)在I X 105CFU/g-l X 10nCFU/g。
[0015] 所述組合物劑型為粉劑，片劑，膠囊或顆粒劑。
[0016] 本發(fā)明有益效果如下：
[0017] 1.本發(fā)明根據(jù)人體腸胃的生理?xiàng)l件，從健康兒童的腸道內(nèi)篩選出一種動(dòng)物雙歧桿 菌，經(jīng)鑒定為動(dòng)物雙歧桿菌動(dòng)物雙歧桿菌乳酸亞種。本發(fā)明所提供的動(dòng)物雙歧桿菌可以在 人體內(nèi)定植，發(fā)揮益生作用。對酶活化劑的利用性很好，更增強(qiáng)機(jī)體免疫力；該菌具有促進(jìn) B細(xì)胞分裂、活化吞噬細(xì)胞的免疫激活作用；對腸道內(nèi)的有害菌群有較好的抑制作用，從而 起到調(diào)節(jié)腸道微生物菌群的作用。
[0018] 2.本發(fā)明所提供的動(dòng)物雙歧桿菌，與其他益生菌具有良好的協(xié)同生長作用，復(fù)配 效果較好。尤其是與干酪乳桿菌、糞鏈球菌和蠟樣芽胞桿菌，適用于制備多聯(lián)益生菌制劑。 所制備的益生菌制劑的活菌數(shù)高，可達(dá)I X l〇nCFU/g。
[0019] 3.本發(fā)明所提供的動(dòng)物雙歧桿菌對對喹諾酮類、氨基糖苷類和單環(huán)β -內(nèi)酰胺類 抗生素具有耐受性。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0020] 圖1為實(shí)施例2中動(dòng)物雙歧桿菌的顯微鏡圖；
[0021] (放大倍數(shù)為100倍）。

【具體實(shí)施方式】
[0022] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步說明，但本發(fā)明不受實(shí)施例的限制。
[0023] 以下實(shí)施例中所述方法，未經(jīng)特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0024] 以下實(shí)施例中所述試劑和儀器，未經(jīng)特殊說明，均為本領(lǐng)域中常規(guī)試劑和儀器可 從商業(yè)渠道獲取。
[0025] 實(shí)施例1菌株的獲得
[0026] 動(dòng)物雙歧桿菌，為分離自杭州市江干區(qū)健康人體腸道，篩選出適合人體的菌株，動(dòng) 物雙歧桿菌已于2010年12月29日，在中國科學(xué)院微生物研究所普通微生物中心保藏，保 藏號為 CGMCC No. 4521。
[0027] 動(dòng)物雙歧桿菌采自杭州市江干區(qū)20名2-6歲的健康兒童，男女各10名，均無胃腸 病史，采樣前兩周內(nèi)均未服用任何抗菌類藥物。采樣時(shí)用無菌玻璃棒挑取自然排出的新鮮 糞便4-10g，置于無菌平皿中，迅速放入?yún)捬豕拗?，帶回?shí)驗(yàn)室分離。
[0028] 實(shí)施例2菌株的鑒定和培養(yǎng)
[0029] 2.1采用稀釋涂布的方法，分別對采集的菌株樣品進(jìn)行分離純化。純化培養(yǎng)后觀 察菌落形態(tài)，取新鮮培養(yǎng)物，接種糖發(fā)酵試管，鑒定菌株的生化反應(yīng)特性。同時(shí)取待測菌株 的新鮮培養(yǎng)物，采用法國梅里埃公司的API 20A生化鑒定條，參照梅里埃公司的生化判定 數(shù)據(jù)庫對待測菌株進(jìn)行API生化鑒定。同時(shí)將提取分離純化號菌株的16S rRNA，并測定序 列，并將測序結(jié)果與NCBI的GeneBank已有的序列進(jìn)行比對。分離純化好的菌種于2-8°C下 保存。
[0030] 經(jīng)過鑒定，待測菌株的菌落特征為淡黃色，圓形，邊緣整齊，稍隆起，濕潤。菌株形 態(tài)為：革蘭氏陽性，無芽孢、無莢膜、短桿菌，一端稍膨大或呈Y或V型彎相菌等多形態(tài)，柵欄 狀排列或不規(guī)則單一排列。菌株的生化反應(yīng)特性見表1。
[0031] 表1待測菌株的生化反應(yīng)特性
[0032]

【權(quán)利要求】
1. 一種動(dòng)物雙歧桿菌，其特征在于，對喹諾酮類、氨基糖苷類和單環(huán)3 -內(nèi)酰胺類抗生 素具有耐受性。
2. 權(quán)利要求1所述動(dòng)物雙歧桿菌，其特征在于，保藏號為CGMCC No. 4521，于2010年12 月29日，保藏在位于北京的中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心。
3. 權(quán)利要求1所述動(dòng)物雙歧桿菌，其特征在于，所述喹諾酮類抗生素為環(huán)丙沙星、氧氟 沙星和諾氟沙星。
4. 權(quán)利要求1所述動(dòng)物雙歧桿菌，其特征在于，所述氨基糖苷類抗生素為慶大霉素和 卡那霉素。
5. 權(quán)利要求1所述動(dòng)物雙歧桿菌，其特征在于，所述單環(huán)P -內(nèi)酰胺類抗生素為氨曲 南。
6. -種含有權(quán)利要求1所述動(dòng)物雙歧桿菌的組合物，其特征在于，含有動(dòng)物雙歧桿菌 和載體。
7. 權(quán)利要求你6所述組合物，其特征在于，所述載體由脫脂乳、海藻糖、麥芽糖糊精、 L-谷氨酸鈉和低聚異麥芽糖組成。
8. 權(quán)利要求你6所述組合物，其特征在于，所述載體組成如下：10%脫脂乳、4%海藻 糖、4%麥芽糖糊精、4% L-谷氨酸鈉和4%低聚異麥芽糖。
9. 權(quán)利要求6所述組合物，其特征在于，含有動(dòng)物雙歧桿菌的活菌數(shù)在1 x 10 5CFU/ g-1 x 10nCFU/g。
10. 權(quán)利要求6所述組合物，其特征在于，劑型為粉劑，片劑，膠囊或顆粒劑。
【文檔編號】A61P1/14GK104498401SQ201410789834
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2014年12月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月18日
【發(fā)明者】曹勇, 閆天文 申請人:杭州龍達(dá)新科生物制藥有限公司