專利名稱：：一種含嗜酸乳桿菌和長雙歧桿菌的組合物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種含有嗜酸乳桿菌和長雙歧桿菌的組合物及其應(yīng)用，該組合物可作為食品或藥物或保健品，適于長期食用，主要用于調(diào)節(jié)腸道菌群和增強免疫力。
背景技術(shù)：
：正常人的腸道菌群極其復(fù)雜，隨著宿主年齡的變化，其菌群的數(shù)量及種類也發(fā)生相應(yīng)的改變。膳食環(huán)境的改變、應(yīng)激、損傷、抗生素的使用等均可導(dǎo)致腸道菌群紊亂，而引發(fā)多種疾病，如肝硬化、膽結(jié)石、動脈硬化、冠心病、心肌梗塞、腦動脈硬化、腦中風(fēng)等。人體免疫是人體對外界的病原微生物等的防御機能，或者說是防御系統(tǒng)，在正常情況下，它能夠保證人體不受外界病原微生物的侵害。免疫功能低下分為原發(fā)性和繼發(fā)性兩類，原發(fā)性是先天發(fā)育不全所致，大多數(shù)與遺傳有關(guān)，多發(fā)生于兒童；繼發(fā)性則由病毒、細菌、真菌等感染或藥物、腫瘤、疲勞、失眠、營養(yǎng)不良等原因引起，可見于各種年齡的人群。免疫功能低下易導(dǎo)致細菌、病毒、真菌感染，如上呼吸道感染、尿路感染、敗血癥、腦膜炎、水痘、麻疹、肺結(jié)核等。乳酸菌作為人體有益菌，在食品和醫(yī)藥上的應(yīng)用非常廣泛，通過補充腸道益生菌，恢復(fù)和保持微生態(tài)平衡，起到調(diào)節(jié)宿主腸道菌群作用。另外，乳酸菌定植于人體腸道，相當(dāng)于自然免疫，能激活機體吞噬活性，作為免疫原誘發(fā)特異性和非特異性免疫反應(yīng)，產(chǎn)生特異性抗體和致敏淋巴細胞，調(diào)節(jié)機體免疫應(yīng)答，增強機體免疫力，提高抗感染的能力。低聚糖(01igosaccharide)或稱寡糖，低聚糖是一種高效雙歧因子，也是一種膳食纖維，是由2-10個單糖通過糖苷鍵連接形成直鏈或支鏈的低聚糖。低聚糖不能被人體直接吸收利用，因此可直接到達腸道，被腸道內(nèi)雙歧扦菌優(yōu)先利用，增殖雙歧桿菌，抑制腸內(nèi)腐敗菌生長，調(diào)節(jié)腸道菌群平衡，增強機體免疫力。因此，針對上述腸道菌群紊亂和免疫力低下所帶來的危害，開發(fā)以乳酸菌和低聚糖為主要原料復(fù)配開發(fā)出的具調(diào)節(jié)腸道菌群和增強免疫力功能的組合物具有十分重要的經(jīng)濟效益和社會效益。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的是提供一種含嗜酸乳桿菌LAll-Onlly和長雙歧桿菌BL88-Onlly的組合物及其應(yīng)用，用于調(diào)節(jié)人體腸道菌群和增強免疫力。該組合物不含任何人工合成色素、激素、甜味素、鮮味素和防腐劑，不含任何違禁藥物，安全無毒。實現(xiàn)上述發(fā)明目的的解決方案是一種嗜酸乳桿菌LAH-Onlly，該菌抹于2007年7月13號在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(地址中國北京市海淀區(qū)中關(guān)村一條13號，中國科學(xué)院微生物研究所)保藏，保藏登記號CGMCCNO.2106。一種長雙歧桿菌BL88-Onlly,該菌抹于2007年7月13號在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(地址中國北京市海淀區(qū)中關(guān)村一條13號，中國科學(xué)院微生物研究所)保藏，保藏登記號CGMCCNO.2107。一種含有嗜酸乳桿菌和長雙歧桿菌的組合物，其特征在于采用嗜酸乳桿菌、長雙歧桿菌、低聚糖、維生素、輔料組成復(fù)合配'方。所述的含有嗜酸乳桿菌和長雙歧桿菌的組合物，其特征在于按照重量百分比計，該組合物中嗜酸乳桿菌LAll-Onlly用量范圍為1~10%,長雙歧桿菌BL88-Onlly用量范圍為110%，'低聚糖用量范圍為10~30%,維生素用量范圍為1~10%,其余為食品輔料。所述的含有嗜酸乳桿菌和長雙歧桿菌的組合物，其特征在于，該組合物中嗜酸乳桿菌為LAll-OnllyCGMCCNO.2106,長雙歧桿菌為BL88-OnllyCGMCCNO.2107。所述的含有嗜酸乳桿菌和長雙歧桿菌的組合物，其特征在于該組合物中低聚糖包括低聚果糖、低聚木糖、低聚異麥芽糖和低聚半乳糖中的一種或多種。所述的含有嗜酸乳桿菌和長雙歧桿菌的組合物，其特征在于該組合物中維生素包括維生素C鈉、維生素維生素B,、B2、B6中的一種或多種。所述的含有嗜酸乳桿菌和長雙歧桿菌的組合物，其特征在于該組合物中食品輔料包括麥芽糊精、山梨醇、乳糖、果粉中的一種或多種。所述的含有嗜酸乳桿菌和長雙歧桿菌的組合物在調(diào)節(jié)腸道菌群和增強免疫力功能食品或藥物或保健品方面的應(yīng)用。具體實施例方式下面結(jié)合實施例進一步說明本發(fā)明實施例1:嗜酸乳桿菌LAll-Onlly生理生化特征本發(fā)明的嗜酸乳桿菌LAll-Onlly直接自健康嬰兒糞便中分離獲得，其形態(tài)為桿狀，革蘭氏染色陽性，不形成芽孢，產(chǎn)生乳酸，兼性厭氣。它能利用半乳糖、葡萄糖、果糖、甘露糖、甘露醇、纖維二糖、麥芽糖、乳糖、蜜二糖、蔗糖、海藻糖、棉子糖、龍膽二糖，不能利用山梨糖、鼠李糖、D-塔格糖、a-曱基-D-葡萄糖甙、淀粉、山梨醇、木糖、阿拉伯糖、赤癬醇。實施例2:嗜酸乳桿菌LAll-Onlly耐酸性能評價將嗜酸乳桿菌LAll-Onlly發(fā)酵液以生理鹽水洗滌兩次，重懸于pH3和pH4的MRS液體培養(yǎng)基中，37。C下分別處理lh、2h，測細胞殘存率，對菌林耐酸性能進行評價。(表l)從表l中可見，嗜酸乳桿菌LAll-Onlly耐酸性能較好，pH4、37。C下處理2h，細胞殘存率大于95%;pH3、37。C下處理2h,細胞殘存率大于50%。表1嗜酸乳桿菌LAll-Onlly耐酸性能評價<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>實施例3:嗜酸乳桿苗LAll-Onlly耐膽汁鹽性能將嗜酸乳桿菌LAll-Onlly發(fā)酵液以生理鹽水洗涂兩次，重懸于含0.5%和1.0%脫氧膽酸鈉濃度的MRS液體培養(yǎng)基中，37。C下分別處理12h、24h，測細胞殘存率，對菌林耐膽汁鹽性能進行評價。(表2)從表2中可見，嗜酸乳桿菌LAll-Onlly耐膽汁鹽性能較好，0.5%膽汁鹽濃度、37。C下處理24h，細胞殘存率大于95%;1.0%膽汁鹽濃度、37'C下處理24h,細胞殘存率大于50%。表2嗜酸乳桿菌LAll-0nlly耐膽汁鹽性能評價<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>實施例4:含嗜酸乳桿菌LAll-Onlly和長M桿苗BL88-Onlly的組合物調(diào)節(jié)場道菌群和改善皮膚水分功能實驗按配方(重量比)嗜酸乳桿菌LAll-Onlly2%、長雙歧桿菌BL88-Onlly2%、低聚木糖20%、維生素C鈉5%、麥芽糊精28%、山梨醇20%、乳糖17%、果粉6%復(fù)配成組合物。上述組合物經(jīng)上海市預(yù)防醫(yī)學(xué)研究院實驗結(jié)果表明具有調(diào)節(jié)腸道菌群和增強免疫力功能，以下為實驗結(jié)果1.調(diào)節(jié)腸遣菌群功能動物實驗該組合物人體推薦量為每日2g/60kg。本次實驗40只正常小鼠，分成四組，設(shè)立低、中、高三個劑量組，分別為0.17、0.33、lg/kg，分別相當(dāng)于人體推薦量的5、10、30倍，另設(shè)蒸餾水對照組。檢測喂養(yǎng)前后小鼠腸道微生物變化情況，應(yīng)用統(tǒng)計軟件SPSS10.0進行t檢驗及相關(guān)分析(表3~7)。從表3~7可見，該組合物能明顯增加小鼠腸道內(nèi)雙歧桿菌和乳桿菌的數(shù)量，對腸桿菌、腸球菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌無明顯影響。這表明該組合物具有調(diào)節(jié)腸道菌群功能。表3樣品對動物腸桿菌的影響(logCFU/gx士SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>表4樣品對動物腸球菌的影響(logCFU/gx士SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>表5樣品對動物雙歧桿菌的影響(logCFU/gx士SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>表6樣品對動物乳桿菌的影響(logCFU/gx±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>表7樣品對動物產(chǎn)氣莢膜梭菌的影響(logCFU/gx±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>2.調(diào)節(jié)麻遣菌群功JJIA群實狳本次試驗采用雙盲對照法，共選100例受試者，隨機分為試食組和對照組(各50例)，分別食用該組合物和安慰劑每日1次，每次l條，2克/條。試驗期間不改變原來的飲食習(xí)慣，正常飲食。14天后結(jié)果表明，試食組雙歧桿菌和乳桿菌明顯增加，與試食前有顯著差異(p<0.05)，產(chǎn)氣莢膜梭菌、擬桿菌、腸桿菌.腸球菌無明顯變化。這說明該組合物具有調(diào)節(jié)腸道菌群功能(表8)。表8人體腸道菌群檢測結(jié)果(logCFU/gx士SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>*:p<0.05與對照組相比#:p<0.05與給樣前3.增強免疫力功能動物實驗該組合物人體推薦量為每日2g/60kg。本次實驗40只正常小鼠，分成四組，設(shè)立低、中、高三個劑量組，分別為0.17、0.33、lg/kg，分別相當(dāng)于人體推薦量的5、10、30倍，另設(shè)蒸餾水對照組。檢測喂養(yǎng)前后小鼠抗體積數(shù)、溶血空斑數(shù)、胸腺指數(shù)、脾指數(shù)、ConA值、DTH、NK細胞活性、吞噬％和吞噬指數(shù)、變化情況，應(yīng)用統(tǒng)計軟件SPSS10.0進行t檢驗及相關(guān)分析(表915)。表9~15結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析可知，樣品0.33g/kg和lg/kg劑量組的小鼠抗體積數(shù)、ConA值、NK細胞活性、吞噬％和吞噬指數(shù)與對照組相比，均有顯著性差異；樣品lg/kg劑量組的小鼠溶血空斑數(shù)和DTH與對照組相比，均有顯著性差異；而樣品各劑量組的小鼠胸腺指數(shù)、脾指數(shù)與對照組相比，均無顯著性差異。這說明該組合物具有增強免疫力功能。表9血清溶血素試驗<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表10抗體生成檢測試驗<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表ll胸腺指數(shù)、脾指數(shù)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表12ConA誘導(dǎo)小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>*:p<O.05與對照組相比表13DTH測定結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>*:p<0.05與對照組相比表14NK細胞活性測定<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>*:p<0.05與對照組相比表15巨噬細胞吞噬試驗<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>*:pO.05與對照組相比4.結(jié)論上述實驗結(jié)果表明，該組合物具有調(diào)節(jié)腸道菌群和增強免疫力功能。另外，根據(jù)相同實驗表明，當(dāng)該組合物中嗜酸乳桿菌LA1l-Onlly用量范圍為1~10%，長雙歧桿菌BL88-Onlly用量范圍為110%,低聚糖(包括低聚果糖、低聚木糖、低聚異麥芽糖和低聚半乳糖中的一種或多種)用量范圍為10~30%,維生素(包括維生素C鈉、維生素B,、B2、B6中的一種或多種)用量范圍為1~10%，其余為食品輔料(包括麥芽糊精、山梨醇、乳糖、果粉中的一種或多種)的情況下，也都具有調(diào)節(jié)腸道菌群和增強免疫力功能，并可用于制作相應(yīng)的食品或藥物或保健品。權(quán)利要求1、一種含有嗜酸乳桿菌和長雙歧桿菌的組合物，其特征在于采用嗜酸乳桿菌、長雙歧桿菌、低聚糖、維生素、輔料組成復(fù)合配方。全文摘要本發(fā)明涉及一種含有嗜酸乳桿菌和長雙歧桿菌的組合物及其應(yīng)用，使用的嗜酸乳桿菌LA-OnllyCGMCCNO.2106，長雙歧桿菌BL88-OnllyCGMCCNO.2107。該組合物中含有嗜酸乳桿菌LA-Onlly、長雙歧桿菌BL88-Onlly，還含有低聚糖和維生素等。該組合物可作為食品、藥物或保健品，適于長期食用，主要用于調(diào)節(jié)腸道菌群和增強免疫力。文檔編號A61K31/51GK101099749SQ20071004417公開日2008年1月9日申請日期2007年7月25日優(yōu)先權(quán)日2007年7月25日發(fā)明者旻張,張和春,國楊,杭曉敏,潘玉輝,范小兵申請人:上海交大昂立股份有限公司