一種利用益生菌炮制的獸用雙黃連口服液制劑及其制備方法
【專利摘要】一種利用益生菌炮制的獸用雙黃連口服液制劑，是將功能微生物的二級(jí)菌種接種于雙黃連組方發(fā)酵液中，利用功能微生物的生命活動(dòng)，在常溫、常壓下進(jìn)行液體深層高密度發(fā)酵，將雙黃連組方中有效成分充分有效地溶出和轉(zhuǎn)化，而制成的雙黃連口服液生物制劑。本發(fā)明同時(shí)也提供了該獸用雙黃連口服液制劑的制備方法。本發(fā)明篩選了雙黃連組方作為中藥組方，并利用功能微生物-嗜酸乳桿菌、產(chǎn)朊假絲酵母將雙黃連組方中所含的抗菌、抗病毒及解熱的活性成分最大限度地提取出來(lái),增強(qiáng)了療效，同時(shí)，嗜酸乳桿菌、產(chǎn)朊假絲酵母能起到維護(hù)和調(diào)整動(dòng)物胃腸道菌群平衡的作用。
【專利說(shuō)明】一種利用益生菌炮制的獸用雙黃連口服液制劑及其制備方 法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及獸用中藥制劑，具體涉及一種利用益生菌炮制的獸用雙黃連口服液制 齊IJ，同時(shí)涉及制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 中草藥飼料添加劑是指根據(jù)我國(guó)傳統(tǒng)的中醫(yī)理論，而在飼料中加入的一些具有益 氣健脾、消食開(kāi)胃、補(bǔ)氣養(yǎng)血的天然中草藥。能夠促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育，提高生產(chǎn)性能，增強(qiáng)機(jī) 體免疫機(jī)能，提高動(dòng)物抗應(yīng)激、抗疾病能力，且具有無(wú)殘留、不易產(chǎn)生耐藥性和毒副作用。
[0003] 雙黃連為純中藥制劑，由黃芩、金銀花、連翹三味中藥組方而成，方中金銀花性甘 寒，芳香疏散，善清肺經(jīng)熱邪，為君藥；黃芩性苦寒，善清肺火及上焦之的實(shí)熱；連翹性苦 微寒，疏散上焦風(fēng)熱，并有清熱解毒功效，為臣藥。三藥共用，共奏辛涼解表、清熱解毒 之功效。雙黃連制劑己被廣泛應(yīng)用于獸醫(yī)臨床上如犬、豬、雞、羊治療各種細(xì)菌性、病毒性疾 病及感冒發(fā)熱等，均取得了明顯的療效。連翹苷和黃芩苷作為其主要有效成分之一。
[0004] 黃芩中抗病毒的活性成分主要是黃酮苷元。金銀花、連翹中含有大量的揮發(fā)油，對(duì) 抗病毒有很好的療效，但是三味中藥的提取工藝都是沿用原地方標(biāo)準(zhǔn)的水煮液再沉淀的方 法，造成大量揮發(fā)性成分以及熱不穩(wěn)定成分的損失。
[0005] 中藥苷類成分因其重要的生理活性越來(lái)越受到重視。苷，又稱配糖體，是由糖或 糖的衍生物的半縮醛羥基與另一非糖物質(zhì)中的羥基以縮醛鍵脫水縮合而成的環(huán)狀縮醛衍 生物，水解后能生成糖與非糖化合物，非糖部分稱為苷元，苷類藥物的藥效是由苷元決定 的。
[0006] 苷類成分在腸道內(nèi)難以吸收、生物利用度低、腸內(nèi)滯留時(shí)間較長(zhǎng)，在動(dòng)物體內(nèi)難 以直接發(fā)揮藥效作用，因此絕大多數(shù)需經(jīng)腸道微生物分解為苷元而發(fā)揮療效。
[0007] 微生物有著非常強(qiáng)大的分解轉(zhuǎn)化物質(zhì)的能力，并能產(chǎn)生豐富的次生代謝產(chǎn)物。微 生物能在常溫、常壓等較為溫和的條件下進(jìn)行苷的轉(zhuǎn)化，可以比一般的物理或化學(xué)的炮制 手段更大幅度地改變藥性，能最大限度保護(hù)中藥化學(xué)成分免遭破壞。同時(shí)，有利于環(huán)境的保 護(hù)，降低生產(chǎn)成本。在發(fā)酵過(guò)程中，植物組織內(nèi)大多數(shù)有效成分也充分有效地溶出和轉(zhuǎn) 化，大幅度提1? 了其含量。
[0008] 但是，現(xiàn)在抗生素的濫用已經(jīng)嚴(yán)重?fù)p害了動(dòng)物體內(nèi)的正常腸道菌群，使腸道菌群 失去平衡，不能正常分泌糖苷酶。因此，不能有效地對(duì)攝入體內(nèi)的糖苷進(jìn)行分解代謝，導(dǎo) 致雙黃連制劑中主要有效成分苷類物質(zhì)的難以有效吸收，最終達(dá)不到其應(yīng)有的療效。
[0009] 目前也有不少采用微生物對(duì)動(dòng)物的飼料進(jìn)行處理的文獻(xiàn)。例如，專利號(hào)為 200810151212. 4、專利名稱為"雙黃連口服液的中藥生物制劑及其制備方法"的中國(guó)專利 中，公開(kāi)了"將EM原露接種到雙黃連口服液中，在10_30°C和光照條件下發(fā)酵1-5個(gè)月，進(jìn) 而對(duì)藥液進(jìn)行分離，提取，精制，滅菌，制成各種劑型"。其中，EM原露包含芽孢桿菌、乳酸桿 菌、酵母菌、光和細(xì)菌。但是，這種方法的缺陷在于：采用的發(fā)酵條件與動(dòng)物消化系統(tǒng)的環(huán)境 相差較大，因此，而且EM原露內(nèi)含有的微生物隨試劑進(jìn)入動(dòng)物消化系統(tǒng)后，會(huì)對(duì)其自身的 發(fā)酵環(huán)境帶來(lái)影響。還有專利申請(qǐng)?zhí)枮?00810230649. 7、專利名稱為"用多菌種發(fā)酵生產(chǎn)畜 禽用微生態(tài)中藥制劑及發(fā)酵方法"，以及專利申請(qǐng)?zhí)枮?00610069628. 2、專利名稱為"飼用 酵解中草藥制劑的制備方法"的中國(guó)專利，也均涉及到了利用微生物對(duì)獸用的中藥制劑進(jìn) 行發(fā)酵。但是，這兩種方法主要是針對(duì)獸用的中藥制劑進(jìn)行，其中的中藥制劑含有多味中草 藥，但是，本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)該知曉，像上述兩種中藥制劑，一方面是成本極高，另一方面 微生物在發(fā)酵時(shí)，除了產(chǎn)生某些有益成分，同時(shí)也會(huì)產(chǎn)生一些不利于動(dòng)物自身消化系統(tǒng)的 成分，例如決明子中就主要含有大黃酚、大黃素等化合物，長(zhǎng)期服用可引起腸道病變；同時(shí)， 以上兩種方法都是利用一級(jí)微生物菌種對(duì)中藥材進(jìn)行發(fā)酵后直接飼養(yǎng)動(dòng)物，一級(jí)微生物菌 種對(duì)動(dòng)物消化系統(tǒng)自身菌落的破壞力極強(qiáng)，很容易導(dǎo)致動(dòng)物消化系統(tǒng)自身菌群失衡。
[0010] 因此，很有必要從中藥材、菌種的篩選、菌種的培養(yǎng)方面入手，創(chuàng)造性的開(kāi)發(fā)一種 在保持并增強(qiáng)原有雙黃連口服液藥效的基礎(chǔ)上兼有維護(hù)和調(diào)整動(dòng)物胃腸道菌群平衡作用 的方法，以解決傳統(tǒng)方法的缺陷。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0011] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種利用益生菌炮制的獸用雙黃連口服液制 劑及其制備方法，其在保持并增強(qiáng)原有雙黃連口服液藥效的基礎(chǔ)上兼有維護(hù)和調(diào)整動(dòng)物胃 腸道菌群平衡的作用，從而消除上述【背景技術(shù)】中缺陷。
[0012] 為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的技術(shù)方案是：
[0013] 一種利用益生菌炮制的獸用雙黃連口服液制劑，是將功能微生物的二級(jí)菌種接種 于雙黃連組方發(fā)酵液中，利用功能微生物的生命活動(dòng)，在常溫、常壓下進(jìn)行液體深層高密度 發(fā)酵，將雙黃連組方中有效成分充分有效地溶出和轉(zhuǎn)化，而制成的雙黃連口服液生物制劑。
[0014] 作為一種優(yōu)選的技術(shù)方案，所述雙黃連組方由重量比為（1-2) : (1-2) : (2-4)的黃 芩、金銀花、連翹組成。
[0015] 作為一種更優(yōu)選的技術(shù)方案，所述雙黃連組方由重量比為1:1:2的黃芩、金銀花、 連翹組成。
[0016] 作為一種優(yōu)選的技術(shù)方案，所述每IOOOml雙黃連組方發(fā)酵液中含有黃苳25g、金 銀花25g、連翹50g。
[0017] 作為一種優(yōu)選的技術(shù)方案，所述功能微生物是嗜酸乳桿菌ACCC00160和產(chǎn)朊假絲 酵母ACCC20060,均來(lái)源于中國(guó)農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏中心。
[0018] 以下提及的嗜酸乳桿菌和產(chǎn)朊假絲酵母均優(yōu)選上述兩種。
[0019] 所述獸用雙黃連口服液制劑的制備方法，包括如下步驟：
[0020] (1)雙黃連中藥粉制備：黃芩、金銀花、連翹按雙黃連組方重量比混合均勻，粉碎 過(guò)篩；
[0021] (2)嗜酸乳桿菌一級(jí)菌種制備：將嗜酸乳桿菌液體菌種培養(yǎng)基高溫高壓滅菌；冷 卻后在無(wú)菌條件下接種嗜酸乳桿菌菌種，于搖床中培養(yǎng)，即得嗜酸乳桿菌一級(jí)菌種；
[0022] (3)產(chǎn)朊假絲酵母一級(jí)菌種制備：將產(chǎn)朊假絲酵母液體菌種培養(yǎng)基高溫高壓滅 菌；冷卻至后在無(wú)菌條件下接種產(chǎn)朊假絲酵母菌種，于搖床中培養(yǎng)，即得產(chǎn)朊假絲酵母一級(jí) 菌種；
[0023] (4)嗜酸乳桿菌二級(jí)菌種制備：將嗜酸乳桿菌液體菌種培養(yǎng)基高溫高壓滅菌；冷 卻后在無(wú)菌條件下接種步驟（2)得到的嗜酸乳桿菌一級(jí)菌種，于搖床中培養(yǎng)，即得嗜酸乳 桿菌二級(jí)菌種；
[0024] (5)產(chǎn)朊假絲酵母二級(jí)菌種制備：將產(chǎn)朊假絲酵母液體菌種培養(yǎng)基高溫高壓滅 菌；冷卻至后在無(wú)菌條件下接種步驟（3)得到的產(chǎn)朊假絲酵母一級(jí)菌種，于搖床中培養(yǎng)，即 得產(chǎn)朊假絲酵母二級(jí)菌種；
[0025] (6)益生菌炮制雙黃連復(fù)合液體生物中藥制劑制備：向步驟（1)制備的雙黃連中 藥粉中注入過(guò)濾除菌后的潔凈溫水，制成雙黃連組方發(fā)酵液，并向所述雙黃連組方發(fā)酵液 中分別接種步驟（4)制備的嗜酸乳桿菌二級(jí)菌種和步驟（5)制備的產(chǎn)朊假絲酵母二級(jí)菌 種，培養(yǎng)后，即得到利用益生菌炮制的獸用雙黃連口服液制劑。
[0026] 作為一種優(yōu)選的技術(shù)方案，所述獸用雙黃連口服液制劑的制備方法，詳細(xì)步驟如 下：
[0027] (1)雙黃連中藥粉制備：黃芩、金銀花、連翹按重量比（1-2) : (1-2) : (2-4)混合均 勻，粉碎過(guò)40-80目篩；
[0028] (2)嗜酸乳桿菌一級(jí)菌種制備：將嗜酸乳桿菌液體菌種培養(yǎng)基裝入容器中，并在 120-125°C、7. 84-8. 8MPa滅菌15-25min，冷卻至35-45°C后無(wú)菌條件下接種篩選的嗜酸乳 桿菌試管菌種，于搖床在35_45°C、100-120r/min的條件下培養(yǎng)45_52h，即得嗜酸乳桿菌一 級(jí)菌種；
[0029] (3)產(chǎn)朊假絲酵母一級(jí)菌種制備：將產(chǎn)朊假絲酵母液體菌種培養(yǎng)基裝入容器中， 并在120-125°C、7. 84-8. 8MPa下滅菌15-25min，冷卻至25-35°C后無(wú)菌條件下接種篩選的 產(chǎn)朊假絲酵母試管菌種，于搖床在25-33°C、100-120r/min的條件下，培養(yǎng)45-53h，即得產(chǎn) 朊假絲酵母一級(jí)菌種；
[0030] (4)嗜酸乳桿菌二級(jí)菌種制備：將嗜酸乳桿菌液體菌種培養(yǎng)基裝入容器中，并在 120-125°C、7. 84-8. 8MPa滅菌15-25min，冷卻至40-50°C后無(wú)菌條件下接種步驟（2)得到的 嗜酸乳桿菌一級(jí)菌種，于搖床在35-45°C、100_120r/min的條件下培養(yǎng)35-37h，即得嗜酸乳 桿菌二級(jí)菌種；
[0031] (5)產(chǎn)朊假絲酵母二級(jí)菌種制備：將產(chǎn)朊假絲酵母液體菌種培養(yǎng)基裝入容器中， 并在120-125°C、7. 84-8. 8MPa滅菌15-25min，冷卻至28-32°C后無(wú)菌條件下接種步驟（3) 得到的產(chǎn)朊假絲酵母一級(jí)菌種，于搖床在28-30°C、100_120r/min的條件下培養(yǎng)35-37h，即 得產(chǎn)朊假絲酵母二級(jí)菌種；
[0032] (6)益生菌炮制雙黃連復(fù)合液體生物中藥制劑制備：向步驟（1)制備的雙黃連中 藥粉中注入過(guò)濾除菌后的潔凈溫水，制成雙黃連組方發(fā)酵液，保證每IOOOml雙黃連組方 發(fā)酵液中含有黃芩25g、金銀花25g、連翹50g，并向所述雙黃連組方發(fā)酵液中分別接種步 驟（4)制備的嗜酸乳桿菌二級(jí)菌種和步驟（5)制備的產(chǎn)朊假絲酵母二級(jí)菌種，保證雙黃連 組方發(fā)酵液、嗜酸乳桿菌二級(jí)菌種和產(chǎn)朊假絲酵母二級(jí)菌種的體積比為（33-30) :1:1，在 32-38°C下培養(yǎng)100-150天，即得到利用益生菌炮制的獸用雙黃連口服液制劑，再將得到的 獸用雙黃連口服液制劑過(guò)濾后灌裝。
[0033] 上述制備方法，作為一種優(yōu)選的技術(shù)方案，所述嗜酸乳桿菌液體菌種培養(yǎng)基中，含 雙黃連中藥粉l〇_15g/L、檸檬酸二銨l-3g/L、磷酸氫二鉀l-3g/L、T Ween801-3g/L、三水乙 酸鈉 3-8g/L。
[0034] 上述制備方法，作為一種優(yōu)選的技術(shù)方案，所述產(chǎn)朊假絲酵母液體菌種培養(yǎng)基中， 含雙黃連中藥粉3-5g/L、玉米粉2-4g/L、磷酸氫二鉀l-3g/L、硫酸鎂1-1. 5g/L。
[0035] 作為一種更優(yōu)選的技術(shù)方案，所述獸用雙黃連口服液制劑的制備方法，詳細(xì)步驟 如下：
[0036] (1)雙黃連中藥粉制備：黃芩、金銀花、連翹按重量比1:1:2混合均勻，粉碎過(guò)60 目篩；
[0037] (2)嗜酸乳桿菌液體菌種培養(yǎng)基：雙黃連中藥粉10g/L、檸檬酸二銨2g/L、磷酸氫 二鉀 2g/L、Tween80 2g/L、三水乙酸鈉 5g/L;
[0038] (3)嗜酸乳桿菌一級(jí)菌種制備：500ml三角瓶裝入嗜酸乳桿菌液體菌種培養(yǎng)基 300ml，121°C 8. OMPa滅菌20min ;冷卻至40°C后無(wú)菌條件下接種篩選保存的嗜酸乳桿菌試 管菌種，于搖床40°C、llOr/min培養(yǎng)48h，即得嗜酸乳桿菌一級(jí)菌種；
[0039] (4)產(chǎn)朊假絲酵母液體菌種培養(yǎng)基：雙黃連中藥粉4g/L、玉米粉3g/L、磷酸氫二鉀 2g/L、硫酸鎂 lg/L ;
[0040] (5)產(chǎn)朊假絲酵母一級(jí)菌種制備：500ml三角瓶裝入產(chǎn)朊假絲酵母液體菌種培養(yǎng) 基300ml，121°C 8. OMPa滅菌20min ;冷卻至30°C后無(wú)菌條件下接種篩選保存的產(chǎn)朊假絲酵 母試管菌種，于搖床29°C、110r/min培養(yǎng)48h即得產(chǎn)朊假絲酵母一級(jí)菌種；
[0041] (6)嗜酸乳桿菌二級(jí)菌種制備：500ml三角瓶裝入嗜酸乳桿菌液體菌種培養(yǎng)基 300ml，121 °C 8. OMPa滅菌20min ;冷卻至45°C后無(wú)菌條件下接種步驟（3)得到的嗜酸乳桿 菌一級(jí)菌種，于搖床40°C，llOr/min，培養(yǎng)36h，即得嗜酸乳桿菌二級(jí)菌種；
[0042] (7)產(chǎn)朊假絲酵母二級(jí)菌種制備：500ml三角瓶裝入產(chǎn)朊假絲酵母液體菌種培養(yǎng) 基300ml，121 °C 8. OMPa滅菌20min ;冷卻至30°C后無(wú)菌條件下接種步驟（5)得到的產(chǎn)朊假 絲酵母一級(jí)菌種，于搖床29°C，110r/min，培養(yǎng)36h即得產(chǎn)朊假絲酵母二級(jí)菌種；
[0043] (8)益生菌炮制雙黃連復(fù)合液體生物中藥制劑制備：1000L全自動(dòng)液體發(fā)酵罐中 加入步驟（1)制備的雙黃連中藥粉，注入940L過(guò)濾除菌后的潔凈溫水，保證每IOOOml雙 黃連組方發(fā)酵液中含有黃芩25g、金銀花25g、連翹50g，然后分別接種嗜酸乳桿菌二級(jí)菌種 30L、產(chǎn)朊假絲酵母二級(jí)菌種30L，35°C培養(yǎng)120天，即得到利用益生菌炮制的獸用雙黃連口 服液制劑；
[0044] (9)將得到的獸用雙黃連口服液制劑過(guò)濾后灌裝，得到每ml液體含以下成分分別 不低于：黃芩苷6. 72mg、黃芩素0· 82mg、漢黃芩素0· 56mg、連翹苷0· 27mg、綠原酸0· 69mg的 獸用雙黃連口服液制劑。
[0045] 本發(fā)明中，采用的中藥組方為雙黃連組方，其中，
[0046] 金銀花中含有忍冬花含綠原酸、異綠原酸、白果醇、β_谷甾醇、豆甾醇、β_谷甾 醇-D-葡萄糖甙、豆留醇-D-葡萄糖甙等成分，主要的藥理作用如下：1.抗病原微生物作 用：體外實(shí)驗(yàn)表明，花和藤對(duì)多種致病菌如金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、大腸桿菌、痢疾 桿菌、霍亂弧菌、傷寒桿菌、副傷寒桿菌等均有一定抑制作用，對(duì)肺炎球菌、腦膜炎雙球菌、 綠膿桿菌，結(jié)核桿菌亦有效。水浸劑比煎劑作用強(qiáng)，葉煎劑比花煎劑作用強(qiáng)。若和連翹合用， 抗菌范圍還可互補(bǔ)；與青霉素合用，能加強(qiáng)青霉素對(duì)耐藥金黃色葡萄球菌的抗菌作用，這可 能是在抑制細(xì)菌體內(nèi)蛋白質(zhì)合成上有協(xié)同的作用。有人認(rèn)為綠原酸和異綠原酸是金銀花主 要的抗菌有效成分。另有實(shí)驗(yàn)證明木犀草素也有較強(qiáng)的抗菌作用。本品水浸劑在體外對(duì)鐵 銹色小芽胞癬菌、星形奴卡氏菌等皮膚真菌有不同程度的抑制作用。金銀花水煎劑（1 :20) 在人胚腎原單層上皮細(xì)胞組織培養(yǎng)上，對(duì)流感病毒、孤兒病毒、皰疹病毒有抑制作用。藤的 水溶液也有延緩孤兒病毒所致的細(xì)胞致病的作用。試管實(shí)驗(yàn)表明金銀花及其藤的煎劑，對(duì) 鉤端螺旋體均有抑制作用。用忍冬藤和千里光配伍，作腹腔注射和皮下注射，據(jù)稱有治療兔 和預(yù)防鉤藤螺旋體病的效果。腹腔注射金銀花注射液7. 5g/kg，能使接受LD90的綠膿桿菌 內(nèi)毒素或綠膿桿菌的小鼠存活半數(shù)以上。靜脈注射金銀花蒸餾液6g/kg，對(duì)綠膿桿菌內(nèi)毒素 中毒的兔有治療作用。未治療的動(dòng)物體溫和白細(xì)胞總數(shù)明顯下降，白細(xì)胞有核左移現(xiàn)象而 給藥組動(dòng)物體溫略有升高，白細(xì)胞雖有增加但分類沒(méi)有明顯變化，且靜脈注射給予金黃注 射液（金銀花黃芩等量制成）7. 5g/kg，對(duì)家兔綠膿桿菌內(nèi)毒素中毒也有一定對(duì)抗作用，可 減輕中毒癥狀和死亡數(shù)。2.抗炎和解熱作用：腹腔注射金銀花提取液0.25g/kg，能抑制大 鼠角叉菜膠性腳腫。另有報(bào)道金銀花注射液30-40g/kg能減輕蛋清性腳腫程度。腹腔注射 金銀花提取液8g/kg，2次/天，連續(xù)6天，對(duì)大鼠巴豆油性肉芽囊，也有明顯抗?jié)B出和抗增 生的作用。早期報(bào)道金銀花具有明顯的解熱作用，但用霍亂菌苗、馬鈴薯?xiàng)U菌、枯草浸液等 給家兔耳靜脈注射，致熱，未證實(shí)金銀花煎劑5g/kg灌胃有退熱作用，認(rèn)為這可能和使用的 金銀花制劑、劑量或家兔的耐受性不同有關(guān)。3.加強(qiáng)防御機(jī)能作用：金銀花煎劑稀釋至1 : 1280的濃度，仍能促進(jìn)白細(xì)胞的吞噬功能。小鼠腹腔注射金銀花注射液，也有明顯促進(jìn)炎性 細(xì)胞吞噬功能的作用。4.中樞興奮作用：經(jīng)電休克、轉(zhuǎn)籠等多種實(shí)驗(yàn)方法證明口服綠原酸 后，可引起大鼠、小鼠等動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮，其作用強(qiáng)度為咖啡因的1/6,二者合用無(wú)相 加及增強(qiáng)作用。5.降血脂作用：大鼠灌胃金銀花2. 5g/kg能減少腸內(nèi)膽固醇吸收，降低血漿 中膽固醇含量。體外實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)金銀花可和膽固醇相結(jié)合，但四妙勇安湯（金銀花、玄參、 當(dāng)歸、甘草）治療家兔實(shí)驗(yàn)性動(dòng)脈粥樣硬化。未觀察到有降血脂和主動(dòng)脈壁膽固醇含量的 作用。6.抗內(nèi)毒素：用鱟試驗(yàn)法測(cè)定內(nèi)毒素含量，300%金銀花（忍冬）注射液以I :2-1 :64 稀釋，體外試驗(yàn)無(wú)論用凹片法或試管法，均明顯降低試液中的內(nèi)毒素含量，其中I :2-1 :8的 稀釋管與陰性對(duì)照管一樣呈液態(tài)，陽(yáng)性對(duì)照呈凝膠狀。金銀花（忍冬）蒸餾液6g/kg靜脈 注射，對(duì)綠膿桿菌內(nèi)毒互2. 8mg/kg靜脈注射引起的兔體溫下降及白細(xì)胞數(shù)下降有對(duì)抗作 用，金銀花（忍冬）蒸饋液7. 5g/kg或注射液2. 5g/kg腹腔注射，對(duì)綠膿桿菌內(nèi)毒素65mg/ kg腹腔注射的小鼠有保護(hù)作用，減少小鼠死亡率。
[0047] 黃芩中含有黃芩素、黃芩新素、黃芩甙、漢黃芩素、漢黃芩甙、木蝴蝶素 A等，主要 有以下藥理作用：1.抗菌作用：黃芩煎劑100%濃度，平板法試驗(yàn)，對(duì)痢疾桿菌、傷寒桿菌、 副傷寒桿菌、霍亂弧菌、大腸桿菌、變形桿菌、綠膿桿菌、葡萄球菌、溶血性璉球菌（a，B)、肺 炎雙球菌、白喉?xiàng)U菌等有抑制作用。黃芩煎劑試管法試驗(yàn)I :1280濃度可抑制傷寒桿菌、溶 血性鏈球菌a，I :640濃度抑制溶血性鏈球菌B，肺炎雙球菌及福氏痢疾桿菌、人結(jié)核桿菌 H37，l :320濃度可抑制霍亂弧菌、志賀氏痢疾桿菌；1 :80濃度時(shí)宋內(nèi)氏痢疾桿菌有抑制作 用。黃芩醇浸液〇. 5g/ml或0. 05g/ml，用瓊脂斜面培養(yǎng)，藥液與培養(yǎng)基1 :1混合，對(duì)綠膿桿 菌有抑制作用。黃苳醇浸液2g/ml濃度，平皿法試驗(yàn)對(duì)大腸桿菌、桔草桿菌、金黃色葡萄球 菌有抑制作用。黃芩煎劑、醇提劑lg/ml濃度，用平板法試驗(yàn)時(shí)對(duì)腦膜炎球菌均有抑作用。 2.抗真菌作用：黃芩煎液，試管斜面法試驗(yàn)4%濃度抑制狗小牙胞菌及堇色毛癬菌，8 %濃 度抑制許蘭氏黃癬菌，10 %濃度抑制許蘭氏黃癬菌蒙古變種，15 %濃度抑制共心性毛癬菌 及鐵銹色毛癬菌。黃芩水浸劑I :3濃度在試管內(nèi)對(duì)堇色毛癬菌、同心性毛癬菌，許蘭氏黃 癬菌、奧杜盎氏小芽胞癬菌、羊毛樣小芽胞癬菌、紅色表皮癬菌、K、W、氏表皮癬菌、星形奴卡 氏菌等有不同程度抑菌作用。3.抗病毒作用：黃芩煎劑25-100%濃度，體外試驗(yàn)對(duì)乙型肝 炎病毒DNA復(fù)制有抑制作用。4.抗炎抗變態(tài)反應(yīng)：黃芩70 %乙醇提取物200, 500mg/kg灌 胃黃芩素、黃芩甙、漢黃芩素50,100mg/kg灌胃，可抑制醋酸引起的小鼠腹腔滲出增加，對(duì) 48/80(-種化合物名稱，Sigma生產(chǎn)）引起的大鼠足腫也有抑制作用，黃芩70%乙醇提取 物500mg/kg灌胃，黃芩素、黃芩甙及漢黃芩素100mg/kg灌胃對(duì)大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎有抑制 作用。黃芩水提物100, 200mg/kg灌胃，對(duì)大鼠被動(dòng)皮膚過(guò)敏反應(yīng)（PCA)有抑制作用，但對(duì) 氯化苦引起的小鼠接觸皮炎（耳腫脹）無(wú)明顯影響。黃芩抑制被動(dòng)皮膚過(guò)敏反應(yīng)（PCA)的 有效成分為黃芩甙及黃芩素。黃芩甙、黃芩素對(duì)實(shí)驗(yàn)性氣喘有效，黃芩甙l(fā)〇_4g/ml濃度可 抑制豚鼠氣管Schult z-Dale反應(yīng)38 %，并有抗組胺，抗膽堿及罌粟堿樣作用。黃芩素不溶 于水，其兩個(gè)水溶性衍生物黃芩素-6-磷酸二鈉（BPS)及黃芩素-6-硫酸二鈉（BSS)于抗 原攻擊前5mg/kg靜脈注射，對(duì)大鼠 PCA有抑制作用；10mg/kg靜脈注射于抗原攻擊前10分 鐘給藥，對(duì)豚鼠過(guò)敏性氣喘有抑制作用；BPS及BSS于10-4g/ml濃度對(duì)離體豚鼠腸管及氣 管Chultz-Dale反應(yīng)均有抑制作用；BPS及BSS 5mg/kg靜脈注射，對(duì)大鼠反向皮膚過(guò)敏反 應(yīng)（RCA)有抑制作用；5-10mg/kg靜脈注射也抑制Forssman皮膚血管炎，但對(duì)Arthus反應(yīng) 無(wú)明顯影響。黃芩素及BPS結(jié)構(gòu)上與抗過(guò)敏藥色甘酸二鈉（DSCG)相類似，但DSCG為雙色 酮類，黃芩素及BPS為單色酮類，DSCG對(duì)反應(yīng)素（Reagin)抗體介導(dǎo)的過(guò)敏反應(yīng)有高度特異 性，而對(duì)非反應(yīng)素（IgG)抗體介導(dǎo)的過(guò)敏反應(yīng)幾無(wú)作用，PBS則不僅抑制反應(yīng)素抗體介導(dǎo)的 過(guò)敏反應(yīng)，如PBS10-6-10-4g/ml抑制抗原引起的猴肺介質(zhì)釋放，PBS 200mg/kg腹腔注射抑 制大鼠同種PCA，10-4g/ml抑制反應(yīng)素抗體介導(dǎo)的大鼠肥大細(xì)胞脫顆粒等，也抑制非反應(yīng) 素抗體介導(dǎo)的反應(yīng)，如BPS10-4g/ml可抑制卵白蛋白致敏豚鼠肺釋放介質(zhì)及抑制抗IgE抗 體引起的人肺釋放過(guò)敏介質(zhì)，認(rèn)為DSCG分子中兩個(gè)色酮核間有一定距離，可結(jié)合于反應(yīng)素 抗體功能位置上，而不適合于非反應(yīng)素抗體，但單色酮的黃芩素或BPS可以兩個(gè)分子結(jié)合 于這兩種抗體上。黃芩素對(duì)大鼠血小板花生四烯酸代謝中環(huán)氧酶與脂氧酶均有抑制作用， 對(duì)脂氧酶更具選擇性，其IC50為0. 12 μ m，而對(duì)環(huán)氧的IC50為6917倍于脂氧酶。黃芩素對(duì) 大鼠白細(xì)胞可抑制花生四烯酸代謝，抑制脂氧酶代謝產(chǎn)物5-羥基二十碳四烯酸（5-HETE) 及環(huán)氧酶代謝產(chǎn)物12-羥基十七碳三烯酸（HHT)的生成，其IC50分別為7. 13±0. 767 μ m 及5. 53 ± 16. 9 μ m ;黃芩甙對(duì)白細(xì)胞5-HETE形成也抑制，但不抑制HHT的形成；漢黃芩素抑 制HHT的形成，IC50為14. 6±3. 51 μ m黃芩成分對(duì)化合物48/80刺激大鼠腹腔肥大細(xì)胞釋 放組胺的抑制作用，黃芩素的IC50為52. Ιμπι，黃芩甙IC50為> 200μπι，漢黃芩素的IC50 為40.(^111，漢黃芩素-7-0-0葡萄糖醛酸的扣50為140.0111〇1/1，（25)2'，5,6'，7-四羥黃 烷酮的 IC50 為 17. 7μπι，（2R，3R)-2'，3,5,6'，7_ 五羥黃烷酮的 IC50 為 15. 5μπι，白楊素 (Chrysin)的 IC50 > 200 μ m，黃尊新素 II (Skullcapflavon II )的 IC50 為 15. 0 μ m。黃 芩甙10,100mg/ml，對(duì)鈣離子載體A23187誘導(dǎo)的大鼠腹腔巨噬細(xì)胞產(chǎn)生PGE2及TXA2均有 明顯抑制作用。5.對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用：黃芩煎劑4g/kg腹腔注射，對(duì)小鼠防御性條件 反射可使陽(yáng)性反射時(shí)延長(zhǎng)，而對(duì)非條件反射及分化無(wú)影響，說(shuō)明黃芩可加強(qiáng)皮層抑制過(guò)程。 黃芩煎劑2g/kg，對(duì)傷寒混合疫苗致熱家兔有解熱作用。但也有報(bào)道黃芩水煎劑或酒浸劑 5_9g/只灌胃，或2g/只im，均不能證明黃芩對(duì)傷寒疫苗致熱家兔有解熱作用。6.對(duì)心血管 的作用：黃芩醇提液lg/kg靜脈注射，可使麻醉犬血壓下降。黃芩煎劑0.06g/kg靜脈注射， 對(duì)麻醉犬有明顯降壓作用。黃芩素20mg/kg靜脈注射，可使麻醉犬血壓下降40-50%。黃 芩浸劑灌胃/kg灌胃，3次/天，連續(xù)4周，使慢性腎性高血壓犬血壓下降，心率變慢。黃芩 甙2X10 Mm〇l/l，在豚鼠離體主動(dòng)脈條、肺動(dòng)脈條、氣管條及右心房均有競(jìng)爭(zhēng)性的拮抗腎 上腺素，去甲腎上腺素及多巴胺引起的收縮作用，也拮抗異丙腎上腺素舒張氣管和增加右 心房自發(fā)頻率作用，提示黃芩甙對(duì)a，Bl，B2受體均有阻斷作用。7.抗血小板聚集及抗凝 ： 黃芩素、漢黃芩素、千層紙素 A、黃芩黃酮II及白楊素（chrysin)于濃度LOmM時(shí)，均可抑制 膠原誘導(dǎo)的大鼠血小板聚集，白楊素對(duì)ADP誘導(dǎo)的血小板聚集也有抑制作用，黃芩素及漢 黃芩素對(duì)花生四烯酸誘導(dǎo)的血小板聚集也有抑制作用，黃芩素及黃芩甙對(duì)凝血酶誘導(dǎo)的纖 維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白也抑制；黃芩素及黃芩甙20,50mg/kg灌胃，對(duì)內(nèi)毒素誘導(dǎo)的大鼠 彌漫性血管內(nèi)凝血，可以防止血小板及纖維蛋白原含量的降低。8.降血脂作用：黃芩水浸 液10% 2ml/只灌胃，連續(xù)給藥7周，可使膽固醇喂飼的家兔血清膽固醇含量下降。黃芩素、 黃芩甙100mg/kg灌胃，可降低實(shí)驗(yàn)性高血脂大鼠玉米油-膽固醇-膽酸喂飼血清游離脂肪 酸、甘油三酯及肝甘油三酯的含量，黃芩黃酮II 100mg/kg灌胃，可降低血清總膽固醇及肝 甘油三酯的含量，增加血清高密度脂蛋白-膽固醇（HDL-ch)的含量，漢黃芩素100mg/kg灌 胃，可防止肝甘油三酯的沉積并增加血清HDL-ch的含量。黃芩素、黃芩甙100mg/kg灌胃， 對(duì)乙醇引起的高血脂大鼠，可降低肝總膽固醇、游離膽固醇及甘油三酯含量，漢黃芩素能降 低血清甘油三酯的水平，黃芩素能增加血清HDL-ch含量。9.保肝、利膽、抗氧化：黃芩甲醇 提取物l〇〇〇mg/kg腹腔注射，對(duì)異硫氰酸萘酯（ANIT)引起的大鼠肝損害有抑制作用，可抑 制血清膽紅素的增加。黃芩醇提物50,100mg/kg，黃芩甙50,100mg/kg灌胃，對(duì)家兔有利膽 作用。漢黃芩素 l〇(_4)-l〇(_6)mol/l濃度體外試驗(yàn)，對(duì)大鼠肝微粒體脂質(zhì)過(guò)氧化有抑制作用， 使丙二醛（MDA)含量下降。黃芩素及黃芩甙Z.SXIOmmol/la.OXIoHVol/l，漢黃芩素 2. 5Χ 10M)mol/l，黃芩黃酮 II 2. 5Χ 10M)mol/l，漢黃芩素-7-0-D 葡萄糖醛酸 2. 5Χ 10(_4) mol/1，I. OX 10(_4)mol/l，對(duì)FeCl2維生素 C-ADP混合物誘導(dǎo)的大鼠肝勻漿脂質(zhì)過(guò)氧化有抑 制作用，使肝MDA的形成顯著下降，對(duì)NADPH-ADP引起的脂質(zhì)過(guò)氧化也抑制。
[0048] 連翹中含有連翹甙、連翹甙元、右旋松脂酚、右旋松脂醇葡萄糖甙等，主要的藥理 作用為：1.抗菌、抗病毒作用1. 1.抗細(xì)菌作用：將連翹種子揮發(fā)油乳劑以試管倍量稀釋法 進(jìn)行抗菌試驗(yàn)，結(jié)果顯示該藥除對(duì)綠膿桿菌作用稍低外，對(duì)其它10株革蘭氏陽(yáng)性和陰性細(xì) 菌均有較強(qiáng)的抗菌作用。其中對(duì)金黃色葡萄球菌的作用最強(qiáng)（抗菌效價(jià)為1/1.024);其 次為肺炎球菌；甲、乙型鏈球菌；卡他奈氏球菌；福氏痢疾桿菌；甲型副傷寒桿菌；（抗菌效 價(jià)均為1/512)和大腸桿菌（抗菌效價(jià)為1/256)，對(duì)肺炎桿菌、普通變形桿菌抗菌效價(jià)均為 1/28。選取對(duì)所試菌有抗菌作用之試驗(yàn)液，進(jìn)行再傳代培養(yǎng)試驗(yàn)，結(jié)果顯示連翹種子揮發(fā) 油對(duì)所試細(xì)菌的抗菌作用較為徹底而且穩(wěn)定。連翹濃縮煎劑在體外有抗菌作用，可抑制傷 寒桿菌、副傷寒桿菌、大腸桿菌、痢疾桿菌、白喉?xiàng)U菌及霍亂弧菌、葡萄球菌、鏈球菌等。連 翹在體外的抑菌作用與金銀花大體相似；為銀翹散中抗菌之主要成分。金銀花對(duì)沙門(mén)氏菌 屬，特別是傷寒桿菌以及溶血性鏈球菌的抑制作用似超過(guò)連翹，而對(duì)痢疾桿菌、金黃色葡萄 球菌之抑制則以連翹似較好。二者聯(lián)合使用，在試管中并無(wú)協(xié)同作用，與黃連、黃芩組成的 復(fù)方，體外抑菌作用比單用連翹時(shí)據(jù)云更強(qiáng)。連翹中抗菌的有效成分研究不多，連翹酚在試 營(yíng)中對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌濃度為I :5120 ;對(duì)痢疾桿菌為I :1280 ;對(duì)白喉?xiàng)U菌及副傷 寒（甲）桿菌為1 :640,可能力抗菌有效成分?；▽?duì)小鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)核病有一定療效，對(duì)豚鼠 則無(wú)效。此外，還報(bào)告過(guò)它在試管中及臨床上的抗結(jié)核桿菌的作用。連翹的醇提取物在體 外有抗鉤端螺旋體作用，其強(qiáng)度不及黃連、荔枝草或金銀花、黃芩，而與黃柏、蚤休相似。連 翹水浸劑（1 :5)在試管內(nèi)對(duì)星形奴卡氏菌有些抑制作用。1.2.抗真菌作用：將連翹種子揮 發(fā)油乳劑以試管倍量稀釋法進(jìn)行抗白色和熱帶念珠菌的試驗(yàn)，結(jié)果顯示該藥對(duì)所試的二個(gè) 菌株均有較明顯的抗菌作用，其抗菌效價(jià)分別為1/1. 024和1/512。1.3.抗病毒作用將連 翹種子揮發(fā)油乳劑以雞胚內(nèi)法（藥物濃度為1/32)和雞胚外法進(jìn)行抗亞洲甲型流感病毒和 I型副流感病毒作用試驗(yàn)?？梢?jiàn)連翹種子揮發(fā)油對(duì)京科68-1珠病毒在感染同時(shí)給藥能顯 示作用，仙臺(tái)株病毒在感染同時(shí)給藥和感染前給藥能顯示作用?？梢钥闯鲞B翹種子揮發(fā)油 乳劑在雞胚外對(duì)京科68-1株和仙臺(tái)株病毒均有顯著的抗病毒作用。對(duì)所試兩種病毒的抗 病毒效價(jià)均為1/65, 536。用斑點(diǎn)雜交法試驗(yàn)，連翹煎劑25% -100%濃度，有降低乙型肝炎 病毒脫氧核糖核酸（HBVDNA)含量的作用。2.對(duì)心血管系統(tǒng)的影響2.1.連翹注射液對(duì)中 毒性休克時(shí)在體貓心的影響：實(shí)驗(yàn)用貓3只，腹腔麻醉，頸動(dòng)脈插管測(cè)量血壓，氣管插管，連 電動(dòng)人工呼吸機(jī)，打開(kāi)胸腔及心包，暴露心臟，用絲線將心尖聯(lián)于微拉力傳感儀，用三筆記 錄儀描記心臟舒縮曲線。實(shí)驗(yàn)前，先描記一段心肌舒縮波及血壓曲線作為正常對(duì)照，然后靜 脈注射傷寒菌苗0. 8-2. 5ml/kg待出現(xiàn)較明顯損害的心肌曲線（心肌舒縮波高低不齊，節(jié)律 不整），血壓下降。靜脈注射連翹注射液8g/kg后，心律變齊其中2只貓心肌舒縮波振幅增 大，血壓在30分鐘后上升約40mmHg。提示有強(qiáng)心及升壓作用。2.2.對(duì)毛細(xì)血管通透性的 影響選健康小鼠雌雄不拘，體重18_22g，分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組7只動(dòng)物，由尾靜脈 或皮下注射連翹注射液（60g/kg)，對(duì)照組9只動(dòng)物，用生理鹽水代替藥物（0. 4ml/只）。10 分鐘后經(jīng)尾靜脈注入0. 5 %伊文氏藍(lán)液0. 2ml/只。30分鐘后，腹腔注射0. 4%醋酸0. 4ml/ 只。再30分鐘后將小鼠脫血處死，打開(kāi)腹腔用生理鹽水沖洗腹腔滲出液，將洗出液置于5ml 刻度試管至刻度，以2000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，取上清液測(cè)定其伊文氏藍(lán)濃度。結(jié)果對(duì)照組 腹腔滲出液伊文氏藍(lán)濃度（μ g% )為368. 47±28. 55 (平均值土標(biāo)準(zhǔn)差，下同），而實(shí)驗(yàn)組 為160. 12±28. 37 (P < 0. 01)。表明連翹注射液對(duì)醋酸所致的毛細(xì)血管通透性有明顯抑制 作用。3.對(duì)離體小腸的抑制作用實(shí)驗(yàn)用豚鼠，按Magnur法作離體腸標(biāo)本。離體小腸置于 12 X 10-2連翹營(yíng)養(yǎng)液中，共做10次試驗(yàn)，結(jié)果4次表現(xiàn)為腸張力降低，6次先升后降。收縮 振幅8次減弱，2次無(wú)變化。等容量生理鹽水對(duì)離體腸無(wú)影響。提示連翹對(duì)豚鼠離體小腸有 抑制作用。4.抑制彈性蛋白酶活力作用：連翹等稀釋成每Iml含I. 5g、0. 75g及0. 375g，3 種濃度。豬胰彈性蛋白酶（PPE)稀釋成19u/0. 5mg ·πι1及9. 5u/0. 25mg ·πι1兩種濃度。將 19u/0. 5mg · ml的酶液與上述不同濃度的藥物分別等量混勻后，各取10 μ 1，分別滴入瓊脂 板孔內(nèi)，每一皿內(nèi)均留兩孔各滴1〇μ 1、9. 5u/0. 25mg.ml的酶液作酶溶解平行對(duì)照，37°C溫 育24小時(shí)后測(cè)量溶解環(huán)直徑。（酶活力與溶解環(huán)直徑成線性關(guān)系）。連翹抑制彈性蛋白酶活 力的作用見(jiàn)表5?？梢?jiàn)三種濃度的連翹均可顯著抑制0· 095u的PPE的酶活力（P <0· 001)， 其中在7. 5mg濃度時(shí)完全抑制PPE酶活力。連翹水溶性粗提物10_3g/ml、10_4g/ml對(duì)磷酸二 脂酶有抑制作用。
[0049] 另外，本發(fā)明采用的功能微生物是經(jīng)過(guò)大量反復(fù)的試驗(yàn)，然后篩選出來(lái)的。其中， 乳酸菌屬于厭氧或兼性厭氧菌，是動(dòng)物消化道尤其是家禽腸道的優(yōu)勢(shì)菌群。乳酸菌可利用 糖類發(fā)酵產(chǎn)生大量乳酸，乳酸菌通過(guò)自身以及代謝產(chǎn)物與其他微生物之間的相互作用，調(diào) 整菌群之間的關(guān)系。嗜酸乳桿菌屬于乳桿菌屬，嗜酸乳桿菌不僅在胃中，它還是人體小腸內(nèi) 的主要益生菌。嗜酸乳桿菌在腸道內(nèi)發(fā)酵后，還可產(chǎn)生乳酸，能提高鈣、磷、鐵的利用率，促 進(jìn)鐵和維生素 D的吸收，產(chǎn)生維生素 K及維生素 B，還可以減少膽固醇的吸收，提高動(dòng)物的 免疫力。產(chǎn)朊假絲酵母為兼性厭氧菌，在動(dòng)物體內(nèi)生長(zhǎng)繁殖，能消耗腸道內(nèi)的氧氣形成厭氧 環(huán)境，并代謝產(chǎn)生乳酸等有機(jī)酸，有利于乳酸菌等有益菌的生長(zhǎng)，抑制大腸桿菌、沙門(mén)氏菌 等有害菌的生長(zhǎng)，從而改善胃腸道環(huán)境和菌群結(jié)構(gòu)，促進(jìn)胃腸對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化、吸收和利 用。
[0050] 與傳統(tǒng)雙黃連的口服液不同的是，本發(fā)明利用有益微生物在常溫、常壓等較為溫 和的條件下將植物組織內(nèi)大多數(shù)有效成分也充分有效地溶出和轉(zhuǎn)化，大幅度提高了其含 量。在保持并增強(qiáng)原有雙黃連口服液藥效的基礎(chǔ)上兼有維護(hù)和調(diào)整動(dòng)物胃腸道菌群平衡的 作用，這種是通過(guò)促進(jìn)有益菌的增殖和抑制有害菌的繁殖入侵兩條途徑來(lái)實(shí)現(xiàn)的，而抗生 素則是直接通過(guò)抑菌殺菌來(lái)實(shí)現(xiàn)預(yù)防和治療的，包括對(duì)有益菌的抑制殺滅。本發(fā)明利用功 能微生物將三味中藥中所含的抗菌、抗病毒及解熱的活性成分最大限度地提取出來(lái)，增加 產(chǎn)品中抗菌和抗病毒的成分，提高對(duì)細(xì)菌性和病毒性感染的療效，本發(fā)明還利用微生物的 生長(zhǎng)代謝和生命活動(dòng)，模仿腸道微生物轉(zhuǎn)化苷的過(guò)程，建立體外微生物炮制模型，在體外 把雙黃連口服液制劑中主要藥效成分一苷，轉(zhuǎn)化為能被畜禽迅速吸收的有效成分一苷元。 在體外實(shí)現(xiàn)苷類成分的轉(zhuǎn)化，提高了雙黃連制劑中苷元含量，增強(qiáng)了療效。
[0051] 由于采用了上述技術(shù)方案，本發(fā)明的有益效果是：
[0052] 1、傳統(tǒng)的炮制工藝中需要大量輔料才能成型，而且也造成了造成大量揮發(fā)性成分 以及熱不穩(wěn)定成分的損失，中藥有效利用率低。本發(fā)明利用微生物強(qiáng)大的分解能力，在常 溫、常壓下可以將植物組織內(nèi)大多數(shù)有效成分充分有效地溶出和轉(zhuǎn)化，大幅度提高了其含 量。比一般的物理或化學(xué)的炮制手段更大幅度地改變藥性，能最大限度保護(hù)中藥化學(xué)成分 免遭破壞。同時(shí)，有利于環(huán)境的保護(hù)，降低生產(chǎn)成本。
[0053] 2、苷類成分在腸道內(nèi)難以吸收、生物利用度低、腸內(nèi)滯留時(shí)間較長(zhǎng)，在動(dòng)物體內(nèi) 難以直接發(fā)揮藥效作用。本發(fā)明利用微生物的生長(zhǎng)代謝和生命活動(dòng)，模仿腸道微生物轉(zhuǎn)化 苷的過(guò)程，建立體外微生物炮制模型，在體外把雙黃連口服液制劑中主要藥效成分一苷， 轉(zhuǎn)化為能被畜禽迅速吸收的有效成分一苷元。在體外實(shí)現(xiàn)苷類成分的轉(zhuǎn)化，提高了雙黃連 制劑中苷元含量，增強(qiáng)了療效。
[0054] 3、本發(fā)明選用的有益微生物在以黃芩、金銀花、連翹為底物的發(fā)酵過(guò)程中不僅有 效的溶出和轉(zhuǎn)化雙黃連口服液的中的有效成分，嗜酸乳桿菌和產(chǎn)朊假絲酵母兩種有益菌也 得到大量增殖。嗜酸乳桿菌在腸道內(nèi)定植，與腸粘膜細(xì)胞相互作用，密切結(jié)合構(gòu)成了生物學(xué) 屏障，阻止了致病菌的的侵入和定植，相當(dāng)于自然免疫。
[0055] 4.嗜酸乳桿菌在繁殖過(guò)程中不斷產(chǎn)生乳酸，使發(fā)酵液中的pH值不斷降低，最終達(dá) 至IJ PH3左右，可以有效阻止其它微生物侵入發(fā)酵液中，不加任何防腐劑即可有效保存2年以 上時(shí)間。
[0056] 綜上所述，本發(fā)明篩選了雙黃連組方作為中藥組方，并利用功能微生物-嗜酸乳 桿菌、產(chǎn)朊假絲酵母將雙黃連組方中所含的抗菌、抗病毒及解熱的活性成分最大限度地提 取出來(lái)，增強(qiáng)了療效，同時(shí)，嗜酸乳桿菌、產(chǎn)朊假絲酵母能起到維護(hù)和調(diào)整動(dòng)物胃腸道菌群 平衡的作用。

【具體實(shí)施方式】
[0057] 為了使本發(fā)明實(shí)現(xiàn)的技術(shù)手段、創(chuàng)作特征、達(dá)成目的與功效易于明白了解，下面結(jié) 合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。
[0058] -種利用益生菌炮制的獸用雙黃連口服液制劑，是將功能微生物的二級(jí)菌種接種 于雙黃連組方發(fā)酵液中，利用功能微生物的生命活動(dòng)，在常溫、常壓下進(jìn)行液體深層高密度 發(fā)酵，將雙黃連組方中有效成分充分有效地溶出和轉(zhuǎn)化，而制成的雙黃連口服液生物制劑。
[0059] 其中，所述功能微生物是嗜酸乳桿菌ACCC00160和產(chǎn)朊假絲酵母ACCC20060,均來(lái) 源于中國(guó)農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏中心。
[0060] 上述雙黃連口服液制劑的制備方法如以下若干實(shí)施例。
[0061] 實(shí)施例1
[0062] 上述獸用雙黃連口服液制劑的制備方法，步驟包括以下：
[0063] (1)雙黃連中藥粉制備：黃芩、金銀花、連翹按重量比1:2:4混合均勻，粉碎過(guò)40 目篩；
[0064] (2)嗜酸乳桿菌一級(jí)菌種制備：將嗜酸乳桿菌液體菌種培養(yǎng)基裝入容器中，并在 120°C、7. 84MPa滅菌15min，冷卻至35°C后無(wú)菌條件下接種篩選的嗜酸乳桿菌試管菌種，于 搖床在35°C、lOOr/min的條件下培養(yǎng)45h，即得嗜酸乳桿菌一級(jí)菌種；
[0065] (3)產(chǎn)朊假絲酵母一級(jí)菌種制備：將產(chǎn)朊假絲酵母液體菌種培養(yǎng)基裝入容器中， 并在120°C、7. 84MPa滅菌15min，冷卻至25°C后無(wú)菌條件下接種篩選的產(chǎn)朊假絲酵母試管 菌種，于搖床在25°C、lOOr/min的條件下，培養(yǎng)45h，即得產(chǎn)朊假絲酵母一級(jí)菌種；
[0066] (4)嗜酸乳桿菌二級(jí)菌種制備：將嗜酸乳桿菌液體菌種培養(yǎng)基裝入容器中，并在 120°C、8. SMPa滅菌15min，冷卻至40°C后無(wú)菌條件下接種步驟（2)得到的嗜酸乳桿菌一級(jí) 菌種，于搖床在35°C、100r/min的條件下培養(yǎng)35h，即得嗜酸乳桿菌二級(jí)菌種；
[0067] (5)產(chǎn)朊假絲酵母二級(jí)菌種制備：將產(chǎn)朊假絲酵母液體菌種培養(yǎng)基裝入容器中， 并在120°C、7.9MPa滅菌15min，冷卻至28°C后無(wú)菌條件下接種步驟（3)得到的產(chǎn)朊假絲酵 母一級(jí)菌種，于搖床在28°C、100r/min的條件下培養(yǎng)35h，即得產(chǎn)朊假絲酵母二級(jí)菌種；
[0068] (6)益生菌炮制雙黃連復(fù)合液體生物中藥制劑制備：向步驟（1)制備的雙黃連中 藥粉中注入過(guò)濾除菌后的潔凈溫水，制成雙黃連組方發(fā)酵液，保證每IOOOml雙黃連組方發(fā) 酵液中含有黃芩25g、金銀花50g、連翹100g，并向所述雙黃連組方發(fā)酵液中分別接種步驟 (4)制備的嗜酸乳桿菌二級(jí)菌種和步驟（5)制備的產(chǎn)朊假絲酵母二級(jí)菌種，保證雙黃連組 方發(fā)酵液、嗜酸乳桿菌二級(jí)菌種和產(chǎn)朊假絲酵母二級(jí)菌種的體積比為33 :1 :1，在32°C下培 養(yǎng)100天，即得到利用益生菌炮制的獸用雙黃連口服液制劑，再將得到的獸用雙黃連口服 液制劑過(guò)濾后灌裝。
[0069] 上述制備方法，所述嗜酸乳桿菌液體菌種培養(yǎng)基中，含雙黃連中藥粉10g/L、檸檬 酸二銨lg/L、磷酸氫二鉀lg/L、Tween80 lg/L、三水乙酸鈉3g/L。所述產(chǎn)朊假絲酵母液體 菌種培養(yǎng)基中，含雙黃連中藥粉3g/L、玉米粉2g/L、磷酸氫二鉀lg/L、硫酸鎂lg/L。
[0070] 將得到的獸用雙黃連口服液制劑過(guò)濾后灌裝，得到每ml液體含以下成分分別不 低于：黃芩苷6. 72mg、黃芩素0· 82mg、漢黃芩素0· 56mg、連翹苷0· 27mg、綠原酸0· 69mg的獸 用雙黃連口服液制劑。
[0071] 實(shí)施例2
[0072] 獸用雙黃連口服液制劑的制備方法，詳細(xì)步驟如下：
[0073] (1)雙黃連中藥粉制備：黃芩、金銀花、連翹按重量比1:1:2混合均勻，粉碎過(guò)60 目篩；
[0074] (2)嗜酸乳桿菌液體菌種培養(yǎng)基：雙黃連中藥粉10g/L、檸檬酸二銨2g/L、磷酸氫 二鉀 2g/L、Tween802g/L、三水乙酸鈉 5g/L ;
[0075] (3)嗜酸乳桿菌一級(jí)菌種制備：500ml三角瓶裝入嗜酸乳桿菌液體菌種培養(yǎng)基 300ml，121°C、8. OMPa滅菌20min ;冷卻至40°C后無(wú)菌條件下接種篩選保存的嗜酸乳桿菌試 管菌種，于搖床40°C、IlOr/min培養(yǎng)48h，即得嗜酸乳桿菌一級(jí)菌種；
[0076] (4)產(chǎn)朊假絲酵母液體菌種培養(yǎng)基：雙黃連中藥粉4g/L、玉米粉3g/L、磷酸氫二鉀 2g/L、硫酸鎂 lg/L ;
[0077] (5)產(chǎn)朊假絲酵母一級(jí)菌種制備：500ml三角瓶裝入產(chǎn)朊假絲酵母液體菌種培養(yǎng) 基300ml，121°C、8. OMPa滅菌20min ;冷卻至30°C后無(wú)菌條件下接種篩選保存的產(chǎn)朊假絲酵 母試管菌種，于搖床29°C、110r/min培養(yǎng)48h即得產(chǎn)朊假絲酵母一級(jí)菌種；
[0078] (6)嗜酸乳桿菌二級(jí)菌種制備：500ml三角瓶裝入嗜酸乳桿菌液體菌種培養(yǎng)基 300ml，121 °C 8. OMPa滅菌20min ;冷卻至45°C后無(wú)菌條件下接種步驟（3)得到的嗜酸乳桿 菌一級(jí)菌種，于搖床40°C，llOr/min，培養(yǎng)36h，即得嗜酸乳桿菌二級(jí)菌種；
[0079] (7)產(chǎn)朊假絲酵母二級(jí)菌種制備：500ml三角瓶裝入產(chǎn)朊假絲酵母液體菌種培養(yǎng) 基300ml，121 °C 8. OMPa滅菌20min ;冷卻至30°C后無(wú)菌條件下接種步驟（5)得到的產(chǎn)朊假 絲酵母一級(jí)菌種，于搖床29°C，llOr/min，培養(yǎng)36h即得產(chǎn)朊假絲酵母二級(jí)菌種；
[0080] (8)益生菌炮制雙黃連復(fù)合液體生物中藥制劑制備：1000L全自動(dòng)液體發(fā)酵罐中 加入步驟（1)制備的雙黃連中藥粉，注入940L過(guò)濾除菌后的潔凈溫水，保證每IOOOml雙 黃連組方發(fā)酵液中含有黃芩25g、金銀花25g、連翹50g，然后分別接種嗜酸乳桿菌二級(jí)菌種 30L、產(chǎn)朊假絲酵母二級(jí)菌種30L，35°C培養(yǎng)120天，即得到利用益生菌炮制的獸用雙黃連口 服液制劑；
[0081] (9)將得到的獸用雙黃連口服液制劑過(guò)濾后灌裝，得到每ml液體含以下成分分別 不低于：黃芩苷6. 72mg、黃芩素0· 82mg、漢黃芩素0· 56mg、連翹苷0· 27mg、綠原酸0· 69mg的 獸用雙黃連口服液制劑。
[0082] 實(shí)施例3
[0083] 獸用雙黃連口服液制劑的制備方法，步驟包括以下：
[0084] (1)雙黃連中藥粉制備：黃芩、金銀花、連翹按重量比2:1:3混合均勻，粉碎過(guò)80 目篩；
[0085] (2)嗜酸乳桿菌一級(jí)菌種制備：將嗜酸乳桿菌液體菌種培養(yǎng)基裝入容器中，并在 125°C、8. SMPa滅菌25min，冷卻至45°C后無(wú)菌條件下接種篩選的嗜酸乳桿菌試管菌種，于 搖床在45°C、120r/min的條件下培養(yǎng)52h，即得嗜酸乳桿菌一級(jí)菌種；
[0086] (3)產(chǎn)朊假絲酵母一級(jí)菌種制備：將產(chǎn)朊假絲酵母液體菌種培養(yǎng)基裝入容器中， 并在125°C、8. SMPa滅菌25min，冷卻至35°C后無(wú)菌條件下接種篩選的產(chǎn)朊假絲酵母試管菌 種，于搖床在33°C、120r/min的條件下，培養(yǎng)53h，即得產(chǎn)朊假絲酵母一級(jí)菌種；
[0087] (4)嗜酸乳桿菌二級(jí)菌種制備：將嗜酸乳桿菌液體菌種培養(yǎng)基裝入容器中，并在 125°C、7. 84MPa滅菌25min，冷卻至50°C后無(wú)菌條件下接種步驟（2)得到的嗜酸乳桿菌一級(jí) 菌種，于搖床在45°C、120r/min的條件下培養(yǎng)37h，即得嗜酸乳桿菌二級(jí)菌種；
[0088] (5)產(chǎn)朊假絲酵母二級(jí)菌種制備：將產(chǎn)朊假絲酵母液體菌種培養(yǎng)基裝入容器中， 并在125°C、8.8MPa滅菌25min，冷卻至32°C后無(wú)菌條件下接種步驟（3)得到的產(chǎn)朊假絲酵 母一級(jí)菌種，于搖床在30°C、120r/min的條件下培養(yǎng)37h，即得產(chǎn)朊假絲酵母二級(jí)菌種；
[0089] (6)益生菌炮制雙黃連復(fù)合液體生物中藥制劑制備：向步驟（1)制備的雙黃連中 藥粉中注入過(guò)濾除菌后的潔凈溫水，制成雙黃連組方發(fā)酵液，保證每IOOOml雙黃連組方發(fā) 酵液中含有黃芩50g、金銀花25g、連翹75g，并向所述雙黃連組方發(fā)酵液中分別接種步驟 (4)制備的嗜酸乳桿菌二級(jí)菌種和步驟（5)制備的產(chǎn)朊假絲酵母二級(jí)菌種，保證雙黃連組 方發(fā)酵液、嗜酸乳桿菌二級(jí)菌種和產(chǎn)朊假絲酵母二級(jí)菌種的體積比為30 :1 :1，在38°C下培 養(yǎng)150天，即得到利用益生菌炮制的獸用雙黃連口服液制劑，再將得到的獸用雙黃連口服 液制劑過(guò)濾后灌裝。
[0090] 上述制備方法，所述嗜酸乳桿菌液體菌種培養(yǎng)基中，含雙黃連中藥粉15g/L、檸檬 酸二銨3g/L、磷酸氫二鉀3g/L、Tween803g/L、三水乙酸鈉8g/L，所述產(chǎn)朊假絲酵母液體菌 種培養(yǎng)基中，含雙黃連中藥粉5g/L、玉米粉4g/L、磷酸氫二鉀3g/L、硫酸鎂I. 5g/L。
[0091] 將得到的獸用雙黃連口服液制劑過(guò)濾后灌裝，得到每ml液體含以下成分分別不 低于：黃芩苷6. 72mg、黃芩素0· 82mg、漢黃芩素0· 56mg、連翹苷0· 27mg、綠原酸0· 69mg的獸 用雙黃連口服液制劑。
[0092] 實(shí)施例4
[0093] 化學(xué)成分研究。
[0094] 利用HPLC(高效液相色譜法）對(duì)以下液體制劑的成分進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)范圍主要是 黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素、連翹苷和綠原酸等對(duì)動(dòng)物有顯著療效的成分，檢測(cè)結(jié)果如下表。
[0095] 下表中，制劑A為本發(fā)明技術(shù)方案制備的雙黃連口服液制劑，制劑B為傳統(tǒng)意義 上的雙黃連組方液體制劑，制劑C為單純利用嗜酸乳桿菌ACCC00160處理的雙黃連口服液 制劑，制劑D為單純利用產(chǎn)朊假絲酵母ACCC20060處理的雙黃連口服液制劑，制劑E為采用 EM原露處理的雙黃連口服液制劑，制劑F為采用嗜酸乳桿菌（非ACCCOO160)、產(chǎn)朊假絲酵 母（非ACCC20060)處理的雙黃連口服液制劑。
[0096]

【權(quán)利要求】
1. 一種利用益生菌炮制的獸用雙黃連口服液制劑，其特征在于：是將功能微生物的二 級(jí)菌種接種于雙黃連組方發(fā)酵液中，利用功能微生物的生命活動(dòng)，在常溫、常壓下進(jìn)行液體 深層高密度發(fā)酵，將雙黃連組方中有效成分充分有效地溶出和轉(zhuǎn)化，而制成的雙黃連口服 液生物制劑。
2. 如權(quán)利要求1所述的一種利用益生菌炮制的獸用雙黃連口服液制劑，其特征在于： 所述雙黃連組方由重量比為（1-2) : (1-2) : (2-4)的黃芩、金銀花、連翹組成。
3. 如權(quán)利要求2所述的一種利用益生菌炮制的獸用雙黃連口服液制劑，其特征在于： 所述雙黃連組方由重量比為1:1:2的黃芩、金銀花、連翹組成。
4. 如權(quán)利要求3所述的一種利用益生菌炮制的獸用雙黃連口服液制劑，其特征在于： 所述每1000ml雙黃連組方發(fā)酵液中含有黃芩25g、金銀花25g、連翹50g。
5. 如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的一種利用益生菌炮制的獸用雙黃連口服液制劑，其特 征在于：所述功能微生物是嗜酸乳桿菌ACCC00160和產(chǎn)朊假絲酵母ACCC20060,均來(lái)源于中 國(guó)農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏中心。
6. -種制備如權(quán)利要求5所述制劑的方法，其特征在于：包括如下步驟： (1) 雙黃連中藥粉制備：黃芩、金銀花、連翹按雙黃連組方重量比混合均勻，粉碎過(guò)篩； (2) 嗜酸乳桿菌一級(jí)菌種制備：將嗜酸乳桿菌液體菌種培養(yǎng)基高溫高壓滅菌；冷卻后 在無(wú)菌條件下接種嗜酸乳桿菌菌種，于搖床中培養(yǎng)，即得嗜酸乳桿菌一級(jí)菌種； (3) 產(chǎn)朊假絲酵母一級(jí)菌種制備：將產(chǎn)朊假絲酵母液體菌種培養(yǎng)基高溫高壓滅菌；冷 卻至后在無(wú)菌條件下接種產(chǎn)朊假絲酵母菌種，于搖床中培養(yǎng)，即得產(chǎn)朊假絲酵母一級(jí)菌 種； (4) 嗜酸乳桿菌二級(jí)菌種制備：將嗜酸乳桿菌液體菌種培養(yǎng)基高溫高壓滅菌；冷卻后 在無(wú)菌條件下接種步驟（2)得到的嗜酸乳桿菌一級(jí)菌種，于搖床中培養(yǎng)，即得嗜酸乳桿菌 二級(jí)菌種； (5) 產(chǎn)朊假絲酵母二級(jí)菌種制備：將產(chǎn)朊假絲酵母液體菌種培養(yǎng)基高溫高壓滅菌；冷 卻至后在無(wú)菌條件下接種步驟（3)得到的產(chǎn)朊假絲酵母一級(jí)菌種，于搖床中培養(yǎng)，即得產(chǎn) 朊假絲酵母二級(jí)菌種； (6) 益生菌炮制雙黃連復(fù)合液體生物中藥制劑制備：向步驟（1)制備的雙黃連中藥粉 中注入過(guò)濾除菌后的潔凈溫水，制成雙黃連組方發(fā)酵液，并向所述雙黃連組方發(fā)酵液中分 別接種步驟（4)制備的嗜酸乳桿菌二級(jí)菌種和步驟（5)制備的產(chǎn)朊假絲酵母二級(jí)菌種，培 養(yǎng)后，即得到利用益生菌炮制的獸用雙黃連口服液制劑。
7. -種如權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于：步驟如下： (1) 雙黃連中藥粉制備：黃芩、金銀花、連翹按重量比（1-2) : (1-2) : (2-4)混合均勻，粉 碎過(guò)40-80目篩； (2) 嗜酸乳桿菌一級(jí)菌種制備：將嗜酸乳桿菌液體菌種培養(yǎng)基裝入容器中，并在 120-125°C、7. 84-8. 8MPa滅菌15-25min，冷卻至35-45°C后無(wú)菌條件下接種篩選的嗜酸乳 桿菌試管菌種，于搖床在35_45°C、100-120r/min的條件下培養(yǎng)45_52h，即得嗜酸乳桿菌一 級(jí)菌種； (3) 產(chǎn)朊假絲酵母一級(jí)菌種制備：將產(chǎn)朊假絲酵母液體菌種培養(yǎng)基裝入容器中，并在 120-125°C、7. 84-8. 8MPa下滅菌15-25min，冷卻至25-35°C后無(wú)菌條件下接種篩選的產(chǎn)朊 假絲酵母試管菌種，于搖床在25-33°C、100-120r/min的條件下，培養(yǎng)45-53h，即得產(chǎn)朊假 絲酵母一級(jí)菌種； (4) 嗜酸乳桿菌二級(jí)菌種制備：將嗜酸乳桿菌液體菌種培養(yǎng)基裝入容器中，并在 120-125°C、7. 84-8. 8MPa滅菌15-25min，冷卻至40-50°C后無(wú)菌條件下接種步驟（2)得到的 嗜酸乳桿菌一級(jí)菌種，于搖床在35-45°C、100_120r/min的條件下培養(yǎng)35-37h，即得嗜酸乳 桿菌二級(jí)菌種； (5) 產(chǎn)朊假絲酵母二級(jí)菌種制備：將產(chǎn)朊假絲酵母液體菌種培養(yǎng)基裝入容器中，并在 120-125°C、7. 84-8. 8MPa滅菌15-25min，冷卻至28-32°C后無(wú)菌條件下接種步驟（3)得到的 產(chǎn)朊假絲酵母一級(jí)菌種，于搖床在28-30°C、l(K)-12()r/min的條件下培養(yǎng)35-37h，即得產(chǎn)朊 假絲酵母二級(jí)菌種； (6) 益生菌炮制雙黃連復(fù)合液體生物中藥制劑制備：向步驟（1)制備的雙黃連中藥粉 中注入過(guò)濾除菌后的潔凈溫水，制成雙黃連組方發(fā)酵液，保證每1000ml雙黃連組方發(fā)酵液 中含有黃芩25g、金銀花25g、連翹50g，并向所述雙黃連組方發(fā)酵液中分別接種步驟（4)制 備的嗜酸乳桿菌二級(jí)菌種和步驟（5)制備的產(chǎn)朊假絲酵母二級(jí)菌種，保證雙黃連組方發(fā)酵 液、嗜酸乳桿菌二級(jí)菌種和產(chǎn)朊假絲酵母二級(jí)菌種的體積比為（33-30) :1 :1，在32-38°C下 培養(yǎng)100-150天，即得到利用益生菌炮制的獸用雙黃連口服液制劑，再將得到的獸用雙黃 連口服液制劑過(guò)濾后灌裝。
8. -種如權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于：步驟如下：所述嗜酸乳桿菌液 體菌種培養(yǎng)基中，含雙黃連中藥粉10-15g/L、檸檬酸二銨l-3g/L、磷酸氫二鉀l-3g/L、 Tween801-3g/L、三水乙酸鈉 3-8g/L。
9. 一種如權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于：步驟如下：所述產(chǎn)朊假絲酵母 液體菌種培養(yǎng)基中，含雙黃連中藥粉3-5g/L、玉米粉2-4g/L、磷酸氫二鉀l-3g/L、硫酸鎂 1-1. 5g/L。
10. -種如權(quán)利要求9所述的制備方法，其特征在于：步驟如下： (1) 雙黃連中藥粉制備：黃芩、金銀花、連翹按重量比1:1:2混合均勻，粉碎過(guò)60目篩； (2) 嗜酸乳桿菌液體菌種培養(yǎng)基：雙黃連中藥粉10g/L、檸檬酸二銨2g/L、磷酸氫二鉀 2g/L、Tween802g/L、三水乙酸鈉 5g/L ; (3) 嗜酸乳桿菌一級(jí)菌種制備：500ml三角瓶裝入嗜酸乳桿菌液體菌種培養(yǎng)基300ml， 121°C、8. OMPa滅菌20min ;冷卻至40°C后無(wú)菌條件下接種篩選保存的嗜酸乳桿菌試管菌 種，于搖床40°C、llOr/min培養(yǎng)48h，即得嗜酸乳桿菌一級(jí)菌種； (4) 產(chǎn)朊假絲酵母液體菌種培養(yǎng)基：雙黃連中藥粉4g/L、玉米粉3g/L、磷酸氫二鉀2g/ L、硫酸鎂lg/L ; (5) 產(chǎn)朊假絲酵母一級(jí)菌種制備：500ml三角瓶裝入產(chǎn)朊假絲酵母液體菌種培養(yǎng)基 300ml，121°C、8. OMPa滅菌20min ;冷卻至30°C后無(wú)菌條件下接種篩選保存的產(chǎn)朊假絲酵母 試管菌種，于搖床29°C、110r/min培養(yǎng)48h即得產(chǎn)朊假絲酵母一級(jí)菌種； (6) 嗜酸乳桿菌二級(jí)菌種制備：500ml三角瓶裝入嗜酸乳桿菌液體菌種培養(yǎng)基300ml， 121°C、8. OMPa滅菌20min ;冷卻至45°C后無(wú)菌條件下接種步驟（3)得到的嗜酸乳桿菌一級(jí) 菌種，于搖床40°C，llOr/min，培養(yǎng)36h，即得嗜酸乳桿菌二級(jí)菌種； (7) 產(chǎn)朊假絲酵母二級(jí)菌種制備：500ml三角瓶裝入產(chǎn)朊假絲酵母液體菌種培養(yǎng)基 300ml，121°C、8. OMPa滅菌20min ;冷卻至30°C后無(wú)菌條件下接種步驟（5)得到的產(chǎn)朊假絲 酵母一級(jí)菌種，于搖床29°C，110r/min，培養(yǎng)36h即得產(chǎn)朊假絲酵母二級(jí)菌種； (8) 益生菌炮制雙黃連復(fù)合液體生物中藥制劑制備：1000L全自動(dòng)液體發(fā)酵罐中加入 步驟（1)制備的雙黃連中藥粉，注入940L過(guò)濾除菌后的潔凈溫水，保證每1000ml雙黃連組 方發(fā)酵液中含有黃芩25g、金銀花25g、連翹50g，然后分別接種嗜酸乳桿菌二級(jí)菌種30L、產(chǎn) 朊假絲酵母二級(jí)菌種30L，35°C培養(yǎng)120天，即得到利用益生菌炮制的獸用雙黃連口服液制 劑； (9) 將得到的獸用雙黃連口服液制劑過(guò)濾后灌裝，得到每ml液體含以下成分分別不低 于：黃芩苷6. 72mg、黃芩素0· 82mg、漢黃芩素0· 56mg、連翹苷0· 27mg、綠原酸0· 69mg的獸用 雙黃連口服液制劑。
【文檔編號(hào)】A61P31/04GK104288236SQ201410536082
【公開(kāi)日】2015年1月21日 申請(qǐng)日期:2014年10月11日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月11日
【發(fā)明者】任夕德, 趙方圓 申請(qǐng)人:任夕德