本發(fā)明涉及一種藥物組合物及其制備方法和用途。

背景技術(shù)：
阿爾茨海默病(Alzheimer'sdisease，AD)，即老年性癡呆，是大腦半球的語言、記憶和推理等智能處于受損狀態(tài)而產(chǎn)生的一種神經(jīng)退行性疾病，是老齡人口中發(fā)病率最高的疾病之一，臨床表現(xiàn)為認(rèn)知和記憶功能不斷惡化，日常生活能力進(jìn)行性減退，并有各種神經(jīng)精神癥狀和行為障礙。國際阿爾茨海默病學(xué)會于2005年12月在《柳葉刀》上發(fā)表了著名的“德爾非研究共識”，指出：全球有2430萬人患癡呆，每年新增癡呆病例460萬(每7秒新增1例患者)?；疾∪藬?shù)每20年癡呆的人數(shù)將增加一倍。到2040年，全球癡呆病例將達(dá)到8110萬。我國2005年首次流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果估計(jì)，65歲以上老年人癡呆患病率為7.8％，其中AD患病率為4.8％，是VD(1.1％)的4.36倍。據(jù)此估計(jì)，我國癡呆人數(shù)已近800萬人，其中AD近600萬。目前癡呆治療方法多樣，包括：藥物治療、免疫治療、基因治療及神經(jīng)心理治療等方法。但藥物治療仍是現(xiàn)今AD治療的主體。近年來針對AD治療藥物療效，除改善認(rèn)知功能外，更加重視癡呆患者的生活質(zhì)量為目標(biāo)。西藥治療AD主要應(yīng)用膽堿酯酶抑制劑、興奮性氨基酸受體拮抗劑、影響自由基代謝的藥物，和腦代謝增強(qiáng)劑等，雖然在臨床上取得了一定的療效，具有一定的優(yōu)勢，但耐受性、毒副反應(yīng)發(fā)生率及價(jià)格不及中醫(yī)中藥。在長期的臨床實(shí)踐中及中醫(yī)理論體系中的整體觀念及辨證論治指導(dǎo)下，中醫(yī)藥在緩解癥狀、改善和提高生活質(zhì)量上有了明顯的不可低估的效果。治療AD的中醫(yī)藥產(chǎn)品開發(fā)，有利于進(jìn)一步提高中藥在AD治療中的臨床價(jià)值,并為研究開發(fā)療效更高、毒性更小的AD治療藥物提供更多思路。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種藥物組合物及其制備方法和用途。本發(fā)明提供了一種藥物組合物，它包含下述配比的原料藥制備而成的制劑：益智1-10重量份、三七1-10重量份、川芎5-20重量份、郁金5-20重量份、梔子5-20重量份、竹瀝5-20體積份。進(jìn)一步優(yōu)選地，它是由下述配比的原料藥制備而成的制劑：益智1-10重量份、三七1-10重量份、川芎5-20重量份、郁金5-20重量份、梔子5-20重量份、竹瀝5-20體積份。進(jìn)一步優(yōu)選地，它是由下述配比的原料藥制備而成的制劑：益智3-7重量份、三七2-5重量份、川芎7-13重量份、郁金7-13重量份、梔子7-13重量份、竹瀝7-13體積份。更進(jìn)一步優(yōu)選地，它是由下述配比的原料藥制備而成的制劑：益智5重量份、三七3重量份、川芎10重量份、郁金10重量份、梔子10重量份、竹瀝10體積份。其中，所述的重量份與體積份的關(guān)系是每g每ml；或每公斤每升。所述藥物組合物是由所述原料藥的水或有機(jī)溶劑提取物為活性成分，加上藥學(xué)上常用的輔料或輔助性成分制備而成的制劑。其中，所述制劑為口服、注射或外用制劑。本發(fā)明還提供了所述的藥物組合物的制備方法，它包括如下操作步驟：a、取原料藥；b、益智、郁金、川芎加水提取揮發(fā)油，藥渣備用；c、將藥渣與三七、梔子混合，水提醇沉，濃縮，加入b步驟的揮發(fā)油、竹瀝，以及藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備成藥學(xué)上常用的制劑。本發(fā)明還提供了所述的藥物組合物在制備治療或/和預(yù)防阿爾茨海默病的藥物或/和保健品中的用途。本發(fā)明還提供了所述的藥物組合物在制備補(bǔ)腎安神、開郁逐痰、活血通絡(luò)的藥物或/和保健品中的用途。本發(fā)明還提供了所述的藥物組合物在制備治療或預(yù)防年老體虛或久病耗損所致的智力減退或輕度認(rèn)知障礙的藥物或/和保健品中的用途。本方主治年老體虛或久病耗損，精氣不足，氣血運(yùn)行不暢兼痰濁阻絡(luò)，以智能減退為主證。屬于腎虛血瘀，痰濁阻絡(luò)者。中醫(yī)理論認(rèn)為：腎位居下焦，為人體陰陽之本，生命之源，稱為“先天之本”。在五行屬水，在五臟中為陰中之陰。與膀胱、骨、髓、腦、發(fā)、耳等構(gòu)成腎系。腎的生理功能主要表現(xiàn)為主藏精，主水液，主納氣等三個方面。腎所藏之精為“先天之精”，需脾胃化生“后天之精”的不斷補(bǔ)充和滋養(yǎng)，而后天之精只有得到先天之精的資助，才能源源不斷的化生，即所謂“先天生后天，后天養(yǎng)先天”。腎主藏精包括促進(jìn)生長發(fā)育，生殖，化生血液和抵御外邪。在生命過程中，從幼年開始，腎精逐漸充盛，出現(xiàn)齒更發(fā)長的生理現(xiàn)象，到了青壯年，腎精進(jìn)一步充盛，，達(dá)到極點(diǎn)，筋骨強(qiáng)勁，此后，腎中精氣逐漸衰少，機(jī)體也逐漸衰弱，出現(xiàn)發(fā)齒脫落、面焦、筋骨軟弱，活動不利。腎主藏精，精能生髓，精髓又可化血。精為人之正氣的一部分，精充則體強(qiáng)，不易生病，固有“藏于精者，春不病溫”之說。腎主水液的功能是靠腎陽對水液的氣化作用來實(shí)現(xiàn)的，分為清濁兩部分，輕者上歸于肺，輸布全身，濁者下輸膀胱，腎保持水液的開闔協(xié)調(diào)。腎主納氣，使呼吸勻暢。腎藏精，心藏神，全神可以益精，積精可以養(yǎng)神。精能化氣生神，為神氣之本；神能駑精益氣，為精氣之主。故神精互用，君相安位。年老體衰，肝腎虧虛，精血不足致髓海空虛，腦神失養(yǎng)出現(xiàn)反應(yīng)遲鈍，智力下降；腎精不足，則腰膝酸軟；波及于心，則神情淡漠，善忘；腎陽無以運(yùn)化水液，則停聚生痰，或先天無以養(yǎng)后天，累及心脾，脾虛生痰，腎不固攝，見痰多吐涎，二便失禁；痰濕阻于脈中，阻礙氣血運(yùn)行，久則成瘀，見面色晦暗或口唇爪甲青紫，舌暗，脈澀等瘀象。因此治宜補(bǔ)腎安神，開郁逐痰，活血通絡(luò)。本發(fā)明藥物原料組方中益智，味辛，性溫，歸腎、脾經(jīng)。辛能發(fā)散、行氣、開竅?？裳a(bǔ)腎陽，固精，縮尿，溫補(bǔ)脾陽，攝唾?！侗静荨吩疲骸爸鬟z精虛漏，小便遺瀝，益氣安神。補(bǔ)不足，安三焦，調(diào)諸氣?！薄侗静萁?jīng)疏》：“益智子仁，…惟辛故所以散結(jié)，惟溫故所以通行，…以其斂攝，故治遺精虛漏，及小便余瀝。此皆腎氣不固之證也。腎主納氣，虛則不能納矣。又主五液，涎乃脾之所統(tǒng)，虛則氣虛，二臟失職，是腎不能納，脾不能攝，故主氣逆上浮，涎穢下行。”《景岳全書》：“…理下焦虛寒，溫腎氣…”?！侗静莘纸?jīng)》：“…開發(fā)郁結(jié)，使氣宣通…”?，F(xiàn)代藥理研究益智甲醇提取物具有強(qiáng)心，抑制前列腺素合成酶活性作用，還可抗癌、抗衰老、改善記憶功能等。綜上可見其即能補(bǔ)腎、溫脾，又可安神、開郁，故其為全方之君藥。川芎，辛、溫，入于肝、心包經(jīng)。本品辛散溫通，具有活血行氣、祛風(fēng)止痛的作用，為“血中之氣藥”。《藥鑒》：“氣溫，味辛，氣厚味薄，升也，陽也。血藥中用之，能助血流行?！w心帥氣而行血，川芎入心，則助心帥氣而行血，氣血行，則心火散，邪氣不留…”?！毒霸廊珪罚骸拔缎廖⒏?，氣溫，升也，陽也。其性善散，又走肝經(jīng)，氣中之血藥也。芎歸俱屬血藥，而芎之散動尤甚于歸，故能散風(fēng)寒，治頭痛，破瘀蓄，通血脈，解結(jié)氣，逐疼痛，排膿消腫，逐血通經(jīng)?！薄侗静輦湟罚骸啊尻柖_諸郁”。丹溪曰：氣升則郁自降，為通陰陽血?dú)庵?。元素曰：…其辛最能散邪，血因風(fēng)郁，得芎入而血自活，血活而風(fēng)自滅。川芎水煎劑對改善大鼠記憶作用較好，還有改善冠脈血流，抗血小板聚集和鎮(zhèn)靜等作用。竹瀝，味甘，性寒。歸心、肺、肝經(jīng)。具有清熱豁痰，清心定驚的作用?！侗静萁?jīng)疏》：“竹瀝，竹之津液也。…性滑流利，走竅逐痰，故為中風(fēng)家要藥?！怂幠鼙樽呓?jīng)絡(luò)，搜剔一切痰結(jié)，兼之甘寒能益陰而除熱，痰熱既祛則氣道通利，經(jīng)脈流轉(zhuǎn)，外證自除矣?！钡は唬骸胺诧L(fēng)痰虛痰在胸膈，使人癲狂，及痰在經(jīng)絡(luò)四肢、皮里膜外者，非此不達(dá)不行”《本草備要》：“瀉火，滑痰潤燥。甘寒而滑。消風(fēng)降火，潤燥行痰，養(yǎng)血益陰，竹之有瀝，猶人之有血也，故能補(bǔ)陰清火。利竅明目。治中風(fēng)口噤，痰迷大熱，風(fēng)痙癲狂?！薄侗静萸笳妗罚骸吧w瀝之出于竹，由血之出于人也。極能補(bǔ)陰，長于清火，補(bǔ)陰亦由火清而致。性滑流利，走竅逐痰，故為中風(fēng)要藥?！爆F(xiàn)代藥理研究竹瀝有鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘等之功效。此二藥，在活血行氣，豁痰定驚同時(shí)增強(qiáng)君藥安神、開郁之功，而竹瀝得川芎行氣活血，則痰更亦排除，川芎的竹瀝之祛痰，則氣血運(yùn)行更暢。二者共為臣藥。郁金，辛、苦，寒。入肝、膽、心經(jīng)。具有活血止痛，行氣解郁之功效?！侗静菥V目》謂其入心去惡血。《本草經(jīng)疏》曰：“其性輕揚(yáng)，能開郁滯，故為調(diào)逆氣，行瘀血之要藥”。《景岳全書》：“味苦辛，氣溫。善下氣，破惡血，去血積”?！侗静輦湟罚骸靶袣饨庥?；瀉，泄血破瘀?！湫暂p揚(yáng)上行，…涼心熱，散肝郁，下氣破血，行滯氣，亦不損正氣；破瘀血，亦能生新血?！庇艚鸺饶茉鰪?qiáng)君藥川芎行氣活血作用，還可加強(qiáng)君藥解郁之功效。三七，甘、微苦，溫。歸肝、胃經(jīng)。具有化瘀止血、活血定痛的功效。功善止血，又能化瘀，有止血不留瘀，化瘀不傷正的特點(diǎn)?！侗静菥V目》：曰其有止血、散血、定痛作用?！夺t(yī)學(xué)衷中參西錄》：“…善化瘀血，又善止血妄行…”。方中三七即可化瘀，又兼有防川芎、郁金活血太過之作用。藥理研究其有促進(jìn)骨髓粒-單系統(tǒng)細(xì)胞團(tuán)(GM-CFU-C)增殖作用，并具有鎮(zhèn)靜、抗炎、抗衰老、提高記憶力及免疫力作用。梔子，味苦，性寒。歸心、肝、肺、胃經(jīng)。具有瀉火除煩，涼血止血，清熱解毒，清利濕熱作用?！端庮惙ㄏ蟆罚骸爸涡臒┌脨?，煩不得眠，心神顛倒欲絕，血帶，小便不利?！薄毒霸廊珪罚骸啊逗駳獗?，氣浮味降，陰中有陽。因其氣浮，故能清心肺之火，解消渴，除熱郁，…因其味降，故能瀉肝腎膀胱之火，通五淋，治大小腸熱秘?zé)峤Y(jié)，五種黃疸”。《本草備要》曰其可瀉心肺三焦之火。梔子在方中意在清瀉三焦之火，輔佐主藥清心安神，又制全方之溫燥。三藥共為佐使。全方三溫，三寒，以益智補(bǔ)腎安神，輔以川芎、郁金活血行氣，三七化瘀兼防行血太過，竹瀝豁痰開竅，與郁金合用又兼開郁化痰，梔子通泄三焦。全方多輕清之品，上行頭目，入于腦絡(luò)。辛開苦降，開郁安神，行氣活血，力能做到活血而不傷正，止血而不留瘀。故對腎虛血瘀，痰濁阻絡(luò)者能全面切中證型，療效可靠。具體實(shí)施方式實(shí)施例1本發(fā)明藥物組合物的制備方法1、處方組成益智5g三七3g川芎10g郁金10g梔子10g竹瀝10ml用法：以上處方量制為20ml；一日2次，一次10ml。2、制備方法：益智、郁金、川芎藥材加6倍量水，提取4小時(shí)，收集揮發(fā)油。再將藥渣與三七、梔子藥材用10倍藥材量的水提取2次，每次2小時(shí)。提取液濃縮至相對密度為1.20左右，加入95％乙醇，使其含醇量為85％，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.25左右，干燥，得中間體。取中間體16g于100ml水中加熱溶解，冷藏過夜，濾過，加入0.5g甜菊素矯味，再加入揮發(fā)油以吐溫-80增溶，冷藏過夜，濾過，灌封，滅菌，即得。3、功能與主治補(bǔ)腎安神，開郁逐痰，活血通絡(luò)。用于年老體虛，久病耗損等引起的神情淡漠，智能減退，反應(yīng)遲鈍，善忘，腰膝酸軟，痰多吐涎，面色晦暗或口唇爪甲青紫，甚則二便失禁，舌暗，脈澀等。屬于輕度認(rèn)知障礙、老年性癡呆而見以上表現(xiàn)者。實(shí)施例2本發(fā)明藥物顆粒劑的制備取益智10kg、三七10kg、川芎20kg、郁金20kg、梔子20kg、竹瀝20升，按實(shí)施例1的方法，濃縮成清膏，制顆粒。實(shí)施例3本發(fā)明藥物顆粒劑的制備取益智3kg、三七2kg、川芎7kg、郁金7kg、梔子7kg、竹瀝7L，直接加水提取，濃縮，制備成口服液。實(shí)施例4本發(fā)明藥物膠囊的制備益智7kg、三七5kg、川芎13kg、郁金13kg、梔子13kg、竹瀝13L，直接打粉，制備成散劑。實(shí)施例5本發(fā)明藥物提取工藝參數(shù)篩選試驗(yàn)1、本發(fā)明提取工藝研究根據(jù)藥材有效成分的相似性，考慮將益智、川芎、郁金及三七和梔子分開合并提取。分別采用單因素考察和正交設(shè)計(jì)得出最佳提取工藝。1.1藥材中揮發(fā)油提取參數(shù)的研究益智浸泡3個小時(shí)，郁金浸泡2個小時(shí)，故先加入益智浸泡1個小時(shí)，再加入郁金浸泡2個小時(shí)，最后加入川芎加熱提取。根據(jù)藥材中成分的性質(zhì)，經(jīng)查閱文獻(xiàn)，按下述方法進(jìn)行設(shè)計(jì)和實(shí)驗(yàn)：分別稱取益智50g，75g兩份，倒入電熱套中，并編號。于1號燒瓶中加入1500ml水，2號燒瓶中加入2250ml水。浸泡一小時(shí)后分別加入郁金100g，150g。繼續(xù)浸泡兩小時(shí)后，再分別加入川芎100g，150g。接上冷凝管和揮發(fā)油提取器開始加熱提取，收集揮發(fā)油。并記錄時(shí)間及揮發(fā)油收集的量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1：表1提取溶媒的選擇結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，由于隨著時(shí)間的增加，揮發(fā)油提取量先增加，從第四個小時(shí)開始，隨著時(shí)間的增加，揮發(fā)油的量一直不再增加，故益智、川芎、郁金提取最佳時(shí)間為4個小時(shí)。1.2驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)分別稱取益智50g，75g三份，倒入電熱套中，并編號。于1號燒瓶中加入1500ml水，2號燒瓶中加入1500ml水，3號燒瓶中加入2250ml水。浸泡一小時(shí)后分別加入郁金100g，100g，150g。繼續(xù)浸泡兩小時(shí)后，再分別加入川芎100g，100g，150g。接上冷凝管和揮發(fā)油提取器開始加熱提取4小時(shí)，收集揮發(fā)油。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下表2：表2鹽酸溶液的濃度研究結(jié)果從上表可知，本處方中藥材揮發(fā)油提取4個小時(shí)，可將揮發(fā)油提取完全，提取工藝穩(wěn)定，重復(fù)性較好。1.3水提取工藝參數(shù)研究1.3.1因素水平的確定與考察指標(biāo)由于本處方來源于臨床經(jīng)驗(yàn)方，其服用方法是采用水煎煮的方法，考慮到尊重臨床應(yīng)用實(shí)際，使成藥的功效與湯劑的功效接近，因此，對本處方中的原藥材以水提取為主要工藝路線，并對其工藝參數(shù)進(jìn)行研究。由文獻(xiàn)可知，中藥提取工藝的影響因素有很多，本實(shí)驗(yàn)主要研究藥材的加溶媒量、提取時(shí)間、提取次數(shù)及提取溶媒[8]。以水為提取溶媒，選取加溶媒量(A)、提取時(shí)間(B)、提取次數(shù)(C)為考察因素，以梔子苷含量及固含物量為考察指標(biāo)，采用L9(34)正交表安排試驗(yàn)。提取工藝優(yōu)選因素水平見表3。表3提取工藝因素水平表1.3.2試驗(yàn)方法與結(jié)果分別稱取9份藥材，每份中含三七30g，梔子100g。與提取益智50g、川芎100g、郁金100g4小時(shí)后的藥渣，按表3安排試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后收集提取液，混勻并測定固含物及梔子苷含量測定。1.3.3梔子苷含量測定對照品的制備：精密稱定梔子苷標(biāo)準(zhǔn)品樣品的制備：取供試粹，加入適量加溶劑，定容，超聲使溶解完全并混勻，備用。流動相：C2H3N:H2O＝15：85流速：1ml/min檢測波長：238nm計(jì)算公式,其中，A1：樣品峰面積(mv,sec)C0:對照品濃度(mg/ml)A0：對照品峰面積(mv,sec)V總：提取液總體積(ml)1.3.4固含物測定取適量提取液于恒溫蒸發(fā)皿中，在水浴鍋上蒸至干膏狀，再于105℃烘箱中干燥3小時(shí)。本試驗(yàn)結(jié)果采用加權(quán)評分的方法來評定。由于梔子苷含量為主要指標(biāo)，固含物為此，因此本試驗(yàn)規(guī)定梔子苷含量所占權(quán)重比例為70，固含物所占權(quán)重為30。計(jì)算公式如下：實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表4及表5所示。通過方差分析表可知，各因素影響順序?yàn)锳＞B＞C，其中提加水量對總權(quán)重有顯著性影響，其它因素對總權(quán)重顯著性差異不顯著。根據(jù)正交試驗(yàn)直觀分析，確定藥材的最佳提取工藝為A3B3C3，但考慮到B因素顯著性差異不顯著，實(shí)驗(yàn)時(shí)間過長，故選擇最佳工藝條件為A3B3C3，即加10倍量水，提取2次，每次提取時(shí)間2h。1.3.5驗(yàn)證性試驗(yàn)稱取三七30g，梔子100g。與提取益智50g、川芎100g、郁金100g4小時(shí)后的藥渣一起，按最佳提取工藝參數(shù)即加10倍量水，提取2次，每次提取時(shí)間2h，進(jìn)行重復(fù)驗(yàn)證性試驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表6所示。驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本提取工藝參數(shù)較為穩(wěn)定，可作為Xp-1口服液的提取工藝。表4正交試驗(yàn)安排及結(jié)果表5正交試驗(yàn)方差分析表表6驗(yàn)證性試驗(yàn)結(jié)果1.4結(jié)論與討論1.4.1實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析：驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)序號1揮發(fā)油幾乎全部沉淀在揮發(fā)油提取器下面，造成無法讀取數(shù)據(jù)，可能是由于提取溫度控制不當(dāng)造成。1.4.2驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)梔子苷數(shù)據(jù)差異還可能由于梔子藥材的粉碎度不同，藥材前后有些差異，而固含物含量的差異還可能由于提取液中有些藥渣被當(dāng)做固含物測定出來。1.4.3正交試驗(yàn)中，雖然由表6可知，最佳提取工藝為A3B3C3，但考慮到B因素顯著性差異不顯著，實(shí)驗(yàn)時(shí)間過長，最終確定最佳工藝條件為A3B2C3，即加10倍量水，提取2次，每次提取時(shí)間2h。1.4.4驗(yàn)證性試驗(yàn)表明，正交試驗(yàn)優(yōu)選的最佳提取工藝較好，說明此工藝穩(wěn)定可行。1.4.5提取揮發(fā)油時(shí)，主要控制好提取溫度，盡量避免揮發(fā)油收集的損失。2、精制工藝方法與結(jié)果2.1濃縮液及醇沉液的處理2.1.1濃縮液中梔子苷含量測定將濃縮液超聲處理30分鐘，精密稱取濃縮液約0.5g，加水適量超聲使溶解，定容至100ml。取樣品適量過濾，用1ml的注射器吸取溶液使其通過微孔濾膜注射到進(jìn)樣瓶中，用高效液相測定，計(jì)算梔子苷含量。式中，m?。核饪s液質(zhì)量A1：樣品峰面積(mv,sec)C0：對照品濃度(mg/ml)A0：對照品峰面積(mv,sec)V總：提取液總體積(ml)＝100ml2.1.2轉(zhuǎn)移率測定取醇沉液適量(可適當(dāng)稀釋)，過濾，用1ml的注射器吸取溶液使其通過微孔濾膜注射到進(jìn)樣瓶中，用高效液相測定，計(jì)算梔子苷含量。2.1.3醇沉液固含物測定實(shí)驗(yàn)操作與3.2.4.2均相同。2.1.4濃縮液水分測定及醇沉除雜率測定將濃縮液超聲處理30分鐘，精密稱取濃縮液適量于恒重蒸發(fā)皿中。2.2純化工藝研究2.2.1提取液的濃縮將正交試驗(yàn)提取液、驗(yàn)證試驗(yàn)提取液分別濃縮至密度為1.20左右，待冷卻至室溫后測定密度，稱定重量。2.2.2醇沉濃度研究(1)濃縮液的醇沉取試驗(yàn)濃縮液兩份，每份約100g，緩慢加入95％乙醇適量，邊加邊攪拌，使成乙醇濃度為65％、85％。靜置過夜，過濾，量取濾液體積。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表7所示。(2)醇沉轉(zhuǎn)移率測定取各份正交試驗(yàn)醇沉液適量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表7所示。(3)醇沉液固含物及醇沉除雜率測定取醇沉液適量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表7所示。表7正交試驗(yàn)醇沉轉(zhuǎn)移率與醇沉液固含物及醇沉除雜率測定結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，濃縮液的醇沉濃度為85％時(shí)醇沉轉(zhuǎn)移率及醇沉除雜率最高。2.2.3醇沉濃度驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)取濃縮液緩慢加入95％乙醇適量，邊加邊攪拌，使成乙醇濃度為85％。靜置過夜，過濾，量取濾液體積。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表8所示。驗(yàn)證試驗(yàn)醇沉轉(zhuǎn)移率按2.1.3計(jì)算，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表8所示。表8驗(yàn)證試驗(yàn)醇沉轉(zhuǎn)移率及醇沉液固含物測定結(jié)果驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本精制工藝參數(shù)較為穩(wěn)定，口服液提取液的最佳醇沉濃度為85％。2.3醇沉液的濃縮及干燥將驗(yàn)證試驗(yàn)醇沉液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中濃縮至密度1.25左右，鋪展于白瓷盤中，水浴加熱至濃縮液為浸膏狀，于80℃減壓干燥約12小時(shí)，冷卻后稱重，得棕黃色至棕紅色中間體。2.4結(jié)論與討論2.4.1供試品溶液的處理實(shí)驗(yàn)中，濃縮液使用前應(yīng)超聲處理，稱取時(shí)也應(yīng)邊攪拌邊稱取，以免取樣不均影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。2.4.2轉(zhuǎn)移率測定實(shí)驗(yàn)中，醇沉液中由于含有部分水分，不能完全蒸干，蒸至浸膏狀即可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。2.4.3提取液的濃縮實(shí)驗(yàn)中，提取液濃縮時(shí)應(yīng)注意避免起泡，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。2.4.4醇沉液的濃縮及干燥研究中，提取物干燥12h冷卻至室溫后由于吸濕性較強(qiáng)應(yīng)迅速收集，于干燥器中保存。2.4.5濃縮液的醇沉實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)慢加快攪，緩慢倒入乙醇并邊倒邊攪拌。3、成型工藝研究3.1輔料的選擇為了提高感冒清熱口服液的穩(wěn)定性，和改變其口感。增加揮發(fā)油的均勻分散，我們使用了附加劑，首先根據(jù)口服液的穩(wěn)定性，其次還根據(jù)口服液的外觀性狀，氣味、口感來進(jìn)行篩選，同時(shí)還考慮到工廠的生產(chǎn)條件，選擇成本低廉、易得的附加劑，并對輔料的種類、用量、用法等進(jìn)行了篩選?，F(xiàn)分述如下：3.1.1矯味劑的選擇口服液劑應(yīng)具有口感好，易為病人接受。本口服液口味較苦，患者使用時(shí)順應(yīng)性較差，為了矯味以易于臨床患者按受，應(yīng)加入一定量的嬌味劑進(jìn)行嬌味。常用的甜味劑有甜菊甙及阿斯巴甜，甜菊甙的甜度是蔗糖的300倍，有一定的清涼感，且甜味持久[13]。阿斯巴甜是受到美國食物藥品局核可使用的糖類代用品，在國內(nèi)也是準(zhǔn)予發(fā)售使用的，而阿斯巴甜的安全劑量為每公斤體重?cái)z取不超過50毫克,一般情況下，用量為0.3％左右，不超過0.5％。每次食用0.02g較合適。考慮到經(jīng)濟(jì)可行性，本試驗(yàn)選擇了甜菊甙和阿斯巴甜分別制成不同濃度來進(jìn)行比較。精密稱定阿斯巴甜及甜菊甙適量，置于100ml容量瓶中溶解，定容，備用。取一定量的備用液加入口服液中，嘗試其口感，結(jié)果如表9表9矯味劑選擇結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，矯味劑的選擇及用量為本品10ml濾液中加入5ml甜菊素溶液，也即1.0020g/100ml*5ml＝0.05g甜菊素，其口感較好，故甜菊素的用量為1000ml濾液中加入5g甜菊素。3.1.2增溶處方中益智、川芎、郁金中均含有揮發(fā)油，難溶于水，需要增溶。由于用吐溫80對其進(jìn)行增溶，不但增加了揮發(fā)油的溶解度，對提高口服液的澄清度也有一定的作用。且吐溫80較為普遍，價(jià)格經(jīng)濟(jì)，并且在溶液中可干擾抑菌劑的作用，綜合考慮本品采用吐溫80為增溶劑。吐溫80在低溫時(shí)成膠狀，受熱后復(fù)原。水溶液加熱后可產(chǎn)生混濁，冷后澄明，不影響質(zhì)量。故采用熱處理冷藏工藝進(jìn)行增溶。取250ml熱水，加熱至沸騰，緩慢加入精密稱定的中間體32.0042g，邊加邊攪拌，加完后再攪拌10-15min，冷至室溫，于冰箱中(0-4℃)冷藏過夜。然后濾過，取濾液測體積、PH、梔子苷含量。取濾液加入1g甜菊素?cái)嚢柚寥芙馔耆?，取溶液測定梔子苷含量。取20％矯味后的濾液(約40ml)，加熱至70℃，加入吐溫80約0.8ml(16滴)，攪拌均勻，冷卻至40-50℃，加入揮發(fā)油0.5ml，攪拌5min，將剩余的濾液加熱至20-30℃，再將加入了吐溫80的濾液緩慢加入剩余的濾液中，邊加邊攪拌，加完再攪拌5min，冷至室溫，冷藏12h，濾過，取濾液測梔子苷含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表10.表10梔子苷含量及轉(zhuǎn)移率計(jì)算結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，增溶前后梔子苷轉(zhuǎn)移率均達(dá)到90％左右，說明增溶工藝可行。3.2滅菌將增溶后濾過后的溶液分裝于10ml口服液瓶中，灌封。批號：20130108.采用蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌30min。測定梔子苷含量、計(jì)算轉(zhuǎn)移率。結(jié)果如表11表11梔子苷含量及轉(zhuǎn)移率計(jì)算結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，口服液滅菌前后梔子苷轉(zhuǎn)移率均達(dá)到90％以上，且放置一段時(shí)間后澄清度較好，說明滅菌工藝可行。3.3驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)根據(jù)以上得出的口服液成型工藝，以相同的方法制備口服液，并測定相關(guān)梔子苷含量，測定數(shù)據(jù)及計(jì)算結(jié)果如下：表12梔子苷含量及轉(zhuǎn)移率計(jì)算結(jié)果(批號：20130110)表13梔子苷含量及轉(zhuǎn)移率計(jì)算結(jié)果表14梔子苷含量及轉(zhuǎn)移率計(jì)算結(jié)果(批號：20130113)表15梔子苷含量及轉(zhuǎn)移率計(jì)算結(jié)果3.4結(jié)果與討論3.4.1在成型工藝中,應(yīng)注意增加溶解度的問題,影響藥物溶解度的因素有溫度、溶解物的密度、晶型、同離子效應(yīng)、藥液的pH值和溶解時(shí)擴(kuò)散的速度,針對上述因素,可采取對吸熱溶解過程加熱升溫或增加藥物與溶液的接觸面(比如揮發(fā)油中,可加滑石粉作為散劑,提高揮發(fā)油溶解達(dá)到飽和的速度等方法)中藥口服液體制劑的成型方法有:溶解法、稀釋法和蒸餾法三種,前兩種最常用,蒸鎦法主要是用于含揮發(fā)性成分的藥材。整個成型過程包括配液、濾過、分裝等三個步驟。3.4.2配液試驗(yàn)時(shí)，由于加熱沸騰導(dǎo)致水分的損失，因此取水加熱時(shí)應(yīng)比實(shí)際理論的量約多25％左右。3.4.3配液試驗(yàn)時(shí)，由于加熱沸騰水分的損失，取得水的量比理論的量多一些，導(dǎo)致得到的濾液體積不是理論的數(shù)值。3.4.4溶液在過濾過程及各個工序中會損失一部分，導(dǎo)致梔子苷轉(zhuǎn)移率有一定的誤差。3.4.5增溶實(shí)驗(yàn)中，揮發(fā)油幾乎不溶于溶液，需要加入吐溫80增溶，吐溫80為粘稠性液體，無法用移液管準(zhǔn)確量取，本實(shí)驗(yàn)采用膠頭滴管加入吐溫80，每20滴為1ml，加入的吐溫80的量有一定的誤差。3.4.6成型工藝研究實(shí)驗(yàn)中，梔子苷轉(zhuǎn)移率均達(dá)到90％及以上，且口服液澄清度比較好，說明成型工藝可行。中藥、天然藥物成分復(fù)雜，為了提高療效、減小劑量、便于制劑，藥材一般需要經(jīng)過提取、純化處理。由于本實(shí)驗(yàn)原處方成分復(fù)雜，考慮各味藥材的相似性及有效成分的相似性，我們在原藥材研究的基礎(chǔ)上，對藥材分兩部分提取，并對提取物的提取工藝及精制工藝進(jìn)行研究，確定了口服液提取物的制備工藝為:藥材用10倍藥材量的水提取2次，每次2小時(shí)。提取液濃縮至相對密度為1.20左右，加入95％乙醇，使其含醇量為85％，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.25左右，干燥，即得。在提取、純化其后續(xù)的制劑過程中，制成口服液。研究其成型工藝，用提取物為原料加入適當(dāng)?shù)妮o料，加入收集的揮發(fā)油，制得口服液。添加的輔料除具有賦予制劑成型的作用外，還可能改變藥物的理化性質(zhì)，調(diào)控藥物在體內(nèi)的釋放過程，影響甚至改變藥物的臨床療效、安全性和穩(wěn)定性等。最后制備的口服液，其成型工藝研究過程中采用熱處理冷藏的方法，不僅使口服液的澄明度達(dá)到要求，而且使揮發(fā)油增溶效果更好。在配液、矯味、增溶及滅菌過程中，測定的梔子苷轉(zhuǎn)移率均達(dá)到90％,且口服液澄清度比較好，成型工藝可行。綜上，本發(fā)明口服液的制備方法為：益智、郁金、川芎藥材加6倍量水，提取4小時(shí)，收集揮發(fā)油。再將藥渣與三七梔子藥材用10倍藥材量的水提取2次，每次2小時(shí)。提取液濃縮至相對密度為1.20左右，加入95％乙醇，使其含醇量為85％，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.25左右，干燥，得中間體。取中間體16g于100ml水中加熱溶解，冷藏過夜，濾過，加入0.5g甜菊素矯味，再加入揮發(fā)油以吐溫80增溶，冷藏過夜，濾過，灌封，滅菌，即得。以下通過具體藥效學(xué)試驗(yàn)證明本發(fā)明的有效性。試驗(yàn)例1本發(fā)明藥物口服液對記憶獲得性障礙小鼠學(xué)習(xí)記憶能力和腦內(nèi)膽堿能系統(tǒng)的影響阿爾茨海默病(AD)，是多發(fā)于老年前期或老年期的一種以進(jìn)行性智能減退為特征的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。隨著人口老齡化的加劇，AD的發(fā)病率不斷升高，給社會和患者家庭帶來沉重負(fù)擔(dān)。因此，如何防治AD日益成為研究熱點(diǎn)，由于AD的病因病機(jī)尚未明確，所以目前臨床尚缺乏特異性治療方藥，因此從傳統(tǒng)中醫(yī)藥中開發(fā)抗老年癡呆藥物具有十分重要的意義?！氨景l(fā)明藥物口服液”系本課題組依據(jù)中醫(yī)理論、經(jīng)長期臨床實(shí)踐，由益智、川芎、郁金、三七、梔子、竹瀝六味中藥組成，具有補(bǔ)腎安神、豁痰開竅，行氣活血作用。本實(shí)驗(yàn)以東莨菪堿腹腔注射致記憶獲得性障礙為AD模型，觀察本發(fā)明藥物口服液對模型小鼠學(xué)習(xí)記憶能力及腦內(nèi)膽堿能系統(tǒng)功能的影響。1、材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)動物健康昆明種小鼠60只，SPF級，雌雄各半，體重(20±2)g，由成都達(dá)碩生物科技有限公司提供，動物生產(chǎn)許可證號SCXK(川)2008-24。1.2藥物與試劑本發(fā)明藥物口服液(由實(shí)施例1制備而成)：由成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科提供，加工制成含生藥0.76g/ml濃縮液，按照體型系數(shù)公式確定。本發(fā)明藥物口服液揮發(fā)油制備：益智、郁金、川芎藥材加6倍量水，提取4小時(shí)，收集揮發(fā)油。再將藥渣與三七、梔子藥材用10倍藥材量的水提取2次，每次2小時(shí)。提取液濃縮至相對密度為1.20左右，加入95％乙醇，使其含醇量為85％，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.25左右，干燥，得中間體。取中間體16g于100ml水中加熱溶解，冷藏過夜，濾過，加入0.5g甜菊素矯味，再加入揮發(fā)油以吐溫80增溶，冷藏過夜，濾過，灌封，滅菌，即得。實(shí)驗(yàn)中給藥劑量以水提液中所含生藥的量計(jì)算。氫溴酸東莨菪堿，徐州萊恩藥業(yè)有限公司。乙酰膽堿酯酶(AchE)試劑盒、乙酰膽堿(CAh)試劑盒、膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(ChAT)測試盒考馬斯亮藍(lán)蛋白試劑盒(購自南京建成生物工程研究所)；鹽酸多奈派齊(10mg)，批號110807A，衛(wèi)材(中國)藥業(yè)有限公司1.3主要儀器和設(shè)備VARIOSKANFLASH3001全波長讀數(shù)儀，美國Thermo公司，日本日立公司20PR-5型高速冷凍離心機(jī)，HH-S型恒溫水浴箱，德國Sartorius公司，WMT-100Morris水迷宮裝置、XCS2小鼠跳臺儀購于成都泰盟科技有限公司。2方法2.1動物分組及給藥將動物按體重、性別隨機(jī)分成6個組，分別是空白對照組，模型組，陽性對照藥組，本發(fā)明藥物口服液低劑量組、中劑量組、高劑量組。每組10只小鼠，分籠適應(yīng)性喂養(yǎng)1w。在測試前連續(xù)給藥7d，按照高劑量組(0.76g/ml)，中劑量組(0.38g/ml)，低劑量組(0.19g/ml)，每天灌胃1次。正常組、模型組用生理鹽水灌胃。陽性組給予安理申，灌胃1w后對小鼠進(jìn)行水迷宮和跳臺法測試。2.1.1水迷宮實(shí)驗(yàn)在測試的第4天造模，除空白組外各組給予腹腔注射氫溴酸東莨菪堿(3mg/kg)后30min進(jìn)行水迷宮實(shí)驗(yàn)。2.1.2跳臺實(shí)驗(yàn)水迷宮試驗(yàn)測試第5天，水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，對小鼠進(jìn)行跳臺法訓(xùn)練，第2天造模，除空白組外各組給予腹腔注射氫溴酸東莨菪堿(3mg/kg)后30min進(jìn)行跳臺實(shí)驗(yàn)。2.2行為學(xué)測試2.2.1水迷宮實(shí)驗(yàn)在給藥結(jié)束后的第1天，各組小鼠開始在Morris水迷宮中進(jìn)行行為學(xué)測試，測試前，讓鼠自由游泳以熟悉環(huán)境。將小鼠分別從三個象限面對池壁放入水池，記錄90s內(nèi)該鼠找到平臺所用的時(shí)間(逃避潛伏期)。如果超過90s還未找到平臺，則由實(shí)驗(yàn)者用手引致平臺，并在平臺上停留20s，逃避潛伏期記為90s，連續(xù)6天，第7天，撤除平臺，使小鼠在無平臺情況下尋找記憶中的平臺，游泳90s。記錄小鼠的運(yùn)動軌跡，觀察小鼠穿越原平臺位置的次數(shù)，并匯總其停留在原平臺象限的總時(shí)間。2.2.2跳臺實(shí)驗(yàn)測試周期2天，訓(xùn)練與測試期間繼續(xù)給予受試藥物。于給藥1h后開始訓(xùn)練，將動物放入反應(yīng)箱內(nèi)適應(yīng)3min，立即通以36V交流電刺激小鼠。然后將小鼠放在絕緣平臺上(計(jì)時(shí)開始)，記錄各鼠第1次跳下平臺的潛伏期、5min內(nèi)每小鼠受到電擊的次數(shù)(跳下平臺的錯誤次數(shù))，第2天進(jìn)行測驗(yàn)，將小鼠放在絕緣平臺上(計(jì)時(shí)開始)，記錄第1次跳下平臺的潛伏期、5min內(nèi)的跳下平臺的錯誤次數(shù)，以此作為學(xué)習(xí)成績。2.2.3腦組織指標(biāo)檢測行為學(xué)指標(biāo)測試結(jié)束后，快速處死動物，迅速取出腦組織，放在冰冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，用吸水紙吸干，稱重，按照勻漿介質(zhì)體積的總量為組織塊重量的9倍，用移液管量取生理鹽水總量的2/3(預(yù)冷的0.9％)于小燒杯中，用眼科小剪盡快剪碎組織塊，將剪碎的組織倒入玻璃勻漿器中，用剩余的1/3的生理鹽水沖洗殘留在燒杯中的組織塊，一起倒入勻漿管中進(jìn)行低溫勻漿，用力柔和且充分研碎，將制備好的10％勻漿用低溫離心機(jī)3000r/min，離15min，吸取上清液備用，以測定AchE、ChAT、Ach含量，具體操作步驟按說明書進(jìn)行。2.2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)用SPSS17.0軟件處理，數(shù)據(jù)以表示。組間均數(shù)比較采用單因素方差分析(ANOVA)檢驗(yàn)，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3、結(jié)果3.1行為學(xué)試驗(yàn)3.1.1Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M小鼠逃避潛伏期明顯高于空白組(P＜0.01)，安理申陽性對照組可縮短小鼠逃避潛伏期(P＜0.05)。本發(fā)明藥物口服液低、中、高劑量組均可縮短小鼠逃避潛伏期(P＜0.05)；此外本發(fā)明藥物口服液低、中、高劑量組均能使小鼠由于學(xué)習(xí)記憶能力下降引起的穿越平臺次數(shù)增多(P＜0.05)。但本發(fā)明藥物口服液組間比較無差異(P＞0.05)。(見表16)表16：本發(fā)明藥物口服液對癡呆模型小鼠(Morris水迷宮)潛伏時(shí)間的影響與模型組比較：*P＜0.05，**P＜0.01，下同。模型組小鼠有效區(qū)域停留時(shí)間、有效區(qū)游泳路程，與空白組相比明顯減少(P＜0.01)。與模型組比較，本發(fā)明藥物口服液低、中、高劑量組均能延長小鼠效區(qū)域停留時(shí)間、有效區(qū)游泳路程(P＜0.05)。組間比較無差異(P＞0.05)。(見表17)表17本發(fā)明藥物口服液對癡呆模型小鼠(Morris水迷宮)穿越平臺次數(shù)、有效區(qū)域停留時(shí)間和游泳路程的影響3.1.2跳臺實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M小鼠潛伏期明顯高于空白組(P＜0.05)，安理申陽性對照組可縮短小鼠潛伏期(P＜0.05)。本發(fā)明藥物口服液低、中、高劑量組均可延長小鼠潛伏期(P＜0.05)；此外本發(fā)明藥物口服液低、中、高劑量組均能使小鼠由于學(xué)習(xí)記憶能力下降引起的錯誤次數(shù)減少(P＜0.05)。(見表18)表18：本發(fā)明藥物口服液對癡呆模型小鼠(跳臺)潛伏時(shí)間和錯誤次數(shù)的影響3.2腦組織生化指標(biāo)與模型組比較，陽性藥、低、中、高劑量中藥組小鼠海馬中AchE活性顯著降低(P＜0.05)，ChAT活性升高(P＜0.05)，增加Ach含量(P＜0.05)。陽性藥組與本發(fā)明藥物口服液低劑量與高劑量組組間比較，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。(見表19)表19：本發(fā)明藥物口服液對AD模型小鼠Ach、AChE、ChAT的影響4、討論本發(fā)明藥物口服液灌胃給藥能夠提高東莨菪堿模型小鼠學(xué)習(xí)記憶能力，縮短Morris水迷宮游泳時(shí)間，延長有效區(qū)域停留時(shí)間及游泳路程，延長跳臺實(shí)驗(yàn)的潛伏期，減少錯誤次數(shù)(P<0.05)；并能降低模型小鼠腦內(nèi)AChE活性，提高ChAT活性，增強(qiáng)ACh活性，(P<0.05)。結(jié)論本發(fā)明藥物口服液可以改善東莨菪堿模型小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，其機(jī)制可能與提高ACh含量、增強(qiáng)ChAT活性、抑制AChE活性有關(guān)。試驗(yàn)例2本發(fā)明藥物口服液對記憶保持障礙小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響本實(shí)驗(yàn)以亞硝酸鈉致小鼠記憶障保持礙模型為病理模型，觀察本發(fā)明藥物口服液對動物學(xué)習(xí)記憶能力的影響。1、材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)動物健康昆明種小鼠60只，SPF級，雌雄各半，體重(20±2)g，由成都達(dá)碩生物科技有限公司提供，動物生產(chǎn)許可證號SCXK(川)2008-24。1.2藥物與試劑本發(fā)明藥物口服液(由實(shí)施例1制備而成)：由成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科提供，加工制成含生藥0.76g/ml濃縮液，按照體型系數(shù)公式確定。本發(fā)明藥物口服液揮發(fā)油制備：益智、郁金、川芎藥材加6倍量水，提取4小時(shí)，收集揮發(fā)油。再將藥渣與三七、梔子藥材用10倍藥材量的水提取2次，每次2小時(shí)。提取液濃縮至相對密度為1.20左右，加入95％乙醇，使其含醇量為85％，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.25左右，干燥，得中間體。取中間體16g于100ml水中加熱溶解，冷藏過夜，濾過，加入0.5g甜菊素矯味，再加入揮發(fā)油以吐溫80增溶，冷藏過夜，濾過，灌封，滅菌，即得。實(shí)驗(yàn)中給藥劑量以水提液中所含生藥的量計(jì)算。亞硝酸鈉，天津市北辰驊躍化學(xué)試劑廠；鹽酸多奈派齊，衛(wèi)材(中國)藥業(yè)有限公司。1.3主要儀器和設(shè)備HH-S型恒溫水浴箱，德國Sartorius公司，WMT-100Morris水迷宮裝置和XCS2小鼠跳臺儀購于成都泰盟科技有限公司。2、方法2.1動物分組及給藥將動物按體重、性別隨機(jī)分成6個組，分別是正常空白對照組，模型組，陽性對照藥組，本發(fā)明藥物口服液低劑量組，本發(fā)明藥物口服液中劑量組，本發(fā)明藥物口服液高劑量組。每組10只小鼠，分籠適應(yīng)性喂養(yǎng)1w。在測試前連續(xù)給藥7d，按照高劑量組(0.76g/ml)，中劑量組(0.38g/ml)，低劑量組(0.19g/ml)每天灌胃1次。正常組、模型組用生理鹽水灌胃。陽性組給予安理申，灌胃1w后造模，對小鼠進(jìn)行水迷宮和跳臺法測試。2.1.1水迷宮實(shí)驗(yàn)在測試的第5天造模，除空白組外各組給予腹腔注射亞硝酸鈉(120mg/kg)，24h后進(jìn)行水迷宮實(shí)驗(yàn)。2.1.2跳臺實(shí)驗(yàn)水迷宮試驗(yàn)測試第6天，水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，對小鼠進(jìn)行跳臺法訓(xùn)練，第6天造模，除空白組外各組給予腹腔注射亞硝酸鈉(120mg/kg)，24h后進(jìn)行跳臺實(shí)驗(yàn)。2.2行為學(xué)測試2.2.1Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)在給藥結(jié)束后的第1天，各組小鼠開始在Morris水迷宮中進(jìn)行行為學(xué)測試，測試前，讓鼠自由游泳以熟悉環(huán)境。將小鼠分別從三個象限面對池壁放入水池，記錄90s內(nèi)該鼠找到平臺所用的時(shí)間(逃避潛伏期)。如果超過90s還未找到平臺，則由實(shí)驗(yàn)者用手引致平臺，并在平臺上停留20s，逃避潛伏期記為90s，連續(xù)5天，第5天，撤除平臺，使小鼠在無平臺情況下尋找記憶中的平臺，游泳90s。記錄小鼠的運(yùn)動軌跡，觀察小鼠穿越原平臺位置的次數(shù)，并匯總其停留在原平臺象限的總時(shí)間。2.2.2跳臺實(shí)驗(yàn)測試周期2天，訓(xùn)練與測試期間繼續(xù)給予受試藥物。訓(xùn)練時(shí)，將動物放入反應(yīng)箱內(nèi)適應(yīng)3min，立即通以36V交流電刺激小鼠。然后將小鼠放在絕緣平臺上(計(jì)時(shí)開始)，記錄各鼠第1次跳下平臺的潛伏期、5min內(nèi)每小鼠受到電擊的次數(shù)(跳下平臺的錯誤次數(shù))，第2天進(jìn)行測驗(yàn)，將小鼠放在絕緣平臺上(計(jì)時(shí)開始)，記錄第1次跳下平臺的潛伏期、5min內(nèi)的跳下平臺的錯誤次數(shù)，以此作為學(xué)習(xí)成績。2.2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)用SPSS17.0軟件處理，數(shù)據(jù)以表示。組間均數(shù)比較采用單因素方差分析(ANOVA)檢驗(yàn)，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3、結(jié)果3.1行為學(xué)試驗(yàn)3.1.1Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M小鼠逃避潛伏期明顯高于對照組和中藥組(P＜0.05)，安理申陽性對照組可縮短小鼠逃避潛伏期(P＜0.05)。本發(fā)明藥物口服液低、中、高劑量組均可縮短小鼠逃避潛伏期(P＜0.05)，此外本發(fā)明藥物口服液低、中、高劑量組均能使小鼠由于學(xué)習(xí)記憶能力下降引起的穿越平臺次數(shù)增多(P＜0.05)，組間比較無差異(P＞0.05)。(見表20)表20本發(fā)明藥物口服液對癡呆模型小鼠(Morris水迷宮)潛伏時(shí)間的影響模型組小鼠有效區(qū)域停留時(shí)間、有效區(qū)游泳路程，與空白組相比明顯減少(P＜0.01)；與模型組比較，本發(fā)明藥物口服液低、中、高劑量組均能延長小鼠效區(qū)域停留時(shí)間、有效區(qū)游泳路程(P＜0.05)，組間比較無差異(P＞0.05)。(見表21)表21本發(fā)明藥物口服液對癡呆模型小鼠有效區(qū)域停留時(shí)間和游泳路程的影響3.1.2跳臺實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M小鼠潛伏期明顯高于對照組(P＜0.05)，安理申陽性對照組可延長小鼠潛伏期(P＜0.05)。本發(fā)明藥物口服液低、中、高劑量組均可延長小鼠潛伏期(P＜0.05)；此外本發(fā)明藥物口服液低、中、高劑量組均能使小鼠由于學(xué)習(xí)記憶能力下降引起的錯誤次數(shù)次數(shù)減少(P＜0.05)，組間比較無差異(P＞0.05)。(見表22)表22本發(fā)明藥物口服液對癡呆模型小鼠(跳臺)潛伏時(shí)間和錯誤次數(shù)的影響4、討論本發(fā)明藥物口服液灌胃給藥能夠提高記憶保持障礙小鼠學(xué)習(xí)記憶能力，縮短Morris水迷宮潛伏期，增加平臺穿越次數(shù)，延長有效區(qū)域停留時(shí)間及游泳路程，延長跳臺實(shí)驗(yàn)的潛伏期，減少錯誤次數(shù)(P<0.05)；結(jié)論本發(fā)明藥物口服液能夠改善腹腔注射亞硝酸鈉致記憶保持障礙模型小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明藥物口服液低、中、高劑量均能夠改善AD小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。提示本發(fā)明藥物口服液可能是一種具有較好前景的促進(jìn)學(xué)習(xí)記憶能力的藥物。綜上所述，本發(fā)明藥物組合物能補(bǔ)腎安神，開郁逐痰，活血通絡(luò)；可用于年老體虛，久病耗損等引起的神情淡漠，智能減退，反應(yīng)遲鈍，善忘，腰膝酸軟，痰多吐涎，面色晦暗或口唇爪甲青紫，甚則二便失禁，舌暗，脈澀等。治療輕度認(rèn)知障礙、老年性癡呆有以上表現(xiàn)者。