專(zhuān)利名稱(chēng)：用于治療阿爾茨海默病的疫苗的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于預(yù)防和治療淀粉狀蛋白生成疾病且特別是阿爾茨海默病的組合 物和方法。
背景技術(shù)：
阿爾茨海默病(AD)的特征在于進(jìn)行性記憶損害和認(rèn)知減退。它的標(biāo)志病理?yè)p害 是特定腦區(qū)域中的淀粉狀蛋白沉積物(老年斑)、神經(jīng)原纖維纏結(jié)和神經(jīng)元喪失。淀粉狀 蛋白沉積物由40-43個(gè)氨基酸殘基的淀粉狀蛋白β肽(Αβ)組成，其是淀粉狀蛋白前體蛋 白質(zhì)(APP)的蛋白水解產(chǎn)物。神經(jīng)原纖維纏結(jié)是高磷酸化τ蛋白質(zhì)的細(xì)胞內(nèi)絲狀聚集物 (Selkoe, Science, 275 :630-631,1997)。AD的發(fā)病機(jī)理仍未完全了解，但它預(yù)期是多因素事件。Αβ在腦組織中的積 累和聚集被認(rèn)為在疾病過(guò)程中起關(guān)鍵作用，也稱(chēng)為淀粉狀蛋白級(jí)聯(lián)假設(shè)(Golde，BrMn Pathol. ,15 :84-87,1995)。根據(jù)這個(gè)假設(shè)，A β，特別是A β 42，易于形成各種形式的聚集 物，范圍從小寡聚物到大的延長(zhǎng)的初原纖維結(jié)構(gòu)。這些聚集物是神經(jīng)毒性的，并且被稱(chēng)為負(fù) 責(zé)與疾病早期階段中的記憶喪失和認(rèn)知減退相關(guān)的突觸病理學(xué)(Klein等人，Neurobiol. Aging, 25 =569-580,2004)。近期出版物暗示三重轉(zhuǎn)基因小鼠模型中A β的減少也阻止細(xì)胞 內(nèi)τ沉積(Oddo等人，Proc. Neuron，43 =321-332, 2004) 0這個(gè)發(fā)現(xiàn)暗示細(xì)胞外淀粉狀蛋白 沉積物可能是后續(xù)神經(jīng)元纖維纏結(jié)形成的成因，這可能依次導(dǎo)致神經(jīng)元喪失。用Αβ抗原免疫APP轉(zhuǎn)基因小鼠可以減少腦Αβ沉積物且緩和疾病進(jìn)展。這首先 由Shenk等人，Nature, 400 173-177，1999報(bào)道，并且目前已由大量研究確證，所述大量研 究涉及不同轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型、各種主動(dòng)疫苗以及用Αβ特異性單克隆抗體被動(dòng)免疫(Bard 等人，Nature Med, 6 :916-919, 2000 Janus 等人，Nature, 408 :979-982, 2000 ；Morgan 等 人，Nature, 408 :982-985,2000 ；DeMattos 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. ,98 :8850-8855, 2001 ；Bacskai 等人，T. Neurosci. , 22 :7873-7878, 2002 ；Wilcock 等人，T. Neurosci. , 23 3745-3751,2003)。與動(dòng)物數(shù)據(jù)一致，來(lái)自先前已接受用預(yù)先聚集的A β 1_42肽作為免疫原 (ΑΝ1792,Betabloc)主動(dòng)免疫的患者的死后人腦組織的3個(gè)公開(kāi)評(píng)估顯示老年斑的局部清 除(Nicoll 等人，Nature Med. ,9 :448-452,2003 ；Ferrer 等人，Brain Pathol. , 14 :11-20, 2004 :Masliah等人，Neurology, 64 :129-131, 2005)。這些數(shù)據(jù)共同表明有效引起對(duì)A β抗 原的抗體應(yīng)答的疫苗對(duì)在AD中發(fā)現(xiàn)的病理老年斑有效。然而，疫苗或抗體功效的機(jī)制仍有 待確定。使用主動(dòng)免疫方法治療AD的最先進(jìn)研究曾經(jīng)是使用與佐劑QS-21TM(AntigeniCS， New York, NY)共同施用的AN1792 (Betabloc)的II期試驗(yàn)。在2002年1月，當(dāng)4個(gè)患者顯 示與腦膜腦炎一致的癥狀時(shí)，這個(gè)研究終止(Senior, Lancet Neurol,! :3，2002)。最后，298 個(gè)治療患者中的18個(gè)發(fā)展腦膜腦炎體征(Orgogozo等人，Neurology, 61 =46-54, 2003) 0 在腦炎和抗體滴度之間無(wú)關(guān)聯(lián)，并且已報(bào)道關(guān)于這種效應(yīng)的可能成因機(jī)制是針對(duì)自身免疫 原，特別是A β 42中部和羧基末端部分的T細(xì)胞的激活(Monsonego等人，J. Clin. Invest., 112 :415-422, 2003)。支持這個(gè)結(jié)論，來(lái)自發(fā)展腦炎的兩個(gè)疫苗接受者的腦組織尸體檢查揭示在1個(gè)患者中CD4+T細(xì)胞的大量腦膜浸潤(rùn)(Nicoll等人，NatureMed. ,9 =448-452,2003) 和在另一個(gè)患者中⑶4+、⑶8+、⑶3+、⑶5+、⑶7+T細(xì)胞的大量腦膜浸潤(rùn)O^errer等人， Brain Pathol. ,14 :11-20, 2004)。部分基于這些發(fā)現(xiàn)，基于靶向Aβ的N末端例如Αβ1_7 和Αβ 1-6將提供缺乏T細(xì)胞介導(dǎo)的不利事件的功效的概念，幾個(gè)臨床試驗(yàn)已用主動(dòng)抗Aβ 疫苗起始。發(fā)明概述在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明是治療患有較嚴(yán)重形式的阿爾茨海默病(AD)的患 者的方法，該方法包括(i)確定患者患有較嚴(yán)重形式的ADjP (ii)以有效誘導(dǎo)免疫應(yīng)答 的量施用Αβ的免疫原性片段?；加休^嚴(yán)重形式的AD的患者選自簡(jiǎn)短精神狀態(tài)檢查 (Mini-Mental State Exam) (MMSE)得分為20或更低的個(gè)體、阿爾茨海默病評(píng)定量表認(rèn)知 分量表(Alzheimer' s Disease Assessment Scale-Cognitive) (ADAS-Cog)得分為 35 或 更高的個(gè)體、總體衰退量表(GlcAal Deterioration Scale)(⑶S)得分為5期或更高的個(gè) 體、多套臨床癡呆評(píng)級(jí)總和(ClinicalDementia Rating-Sum of Boxes) (CDR-SB)得分為 2 或更高的個(gè)體、在60-64歲以下且表現(xiàn)AD癥狀的個(gè)體，或在遺傳篩選后診斷患有早發(fā)阿爾 茨海默病(EOAD)或家族型AD的個(gè)體。Αβ的免疫原性片段構(gòu)成多價(jià)疫苗，所述疫苗包括 Αβ的多個(gè)、非鄰接和非等同的免疫原性片段，所述片段各自具有至少一個(gè)抗原決定簇且 缺乏T細(xì)胞表位。在另一個(gè)實(shí)施方案中，多價(jià)疫苗包括通過(guò)賴(lài)氨酸支架連接的Aβ 3-10和 Αβ 21-28。多價(jià)疫苗進(jìn)一步包括與Αβ肽片段綴合的載體，并且可以任選與佐劑一起施用。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明是選擇用作疫苗構(gòu)建體的Αβ的免疫原性片段的方 法，所述疫苗構(gòu)建體適合于治療患有較嚴(yán)重形式的阿爾茨海默病(AD)的患者，所述方法包 括(i)以有效誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的量給動(dòng)物施用Aβ的測(cè)試免疫原性片段；和(ii)評(píng)估來(lái)自被 免疫動(dòng)物的抗血清與Αβ的N末端截短形式的交叉反應(yīng)性；其中合適的疫苗構(gòu)建體將選擇 為能夠誘導(dǎo)抗體形式的免疫應(yīng)答的疫苗構(gòu)建體，所述抗體對(duì)于A β的一種或多種N末端截 短形式是特異性的。Αβ的N末端截短形式選自Αβχ-42、pGlu-A0 3-4O、pGlu-A0 3-42、 pGlu-A β 11-40和pGlu-A β 11-42，其中χ與天然存在的A β的殘基2-17對(duì)應(yīng)。附圖簡(jiǎn)述

圖1表示從來(lái)自動(dòng)物的抗血清的連續(xù)稀釋液中檢測(cè)的抗體，所述動(dòng)物用與作為載 體的KLH綴合的A β 1-8 (MoVCl-8)的肽綴合物免疫且與ISCOMATRIX —起施用。圖2表示從來(lái)自動(dòng)物的抗血清的連續(xù)稀釋液中檢測(cè)的抗體，所述動(dòng)物用與作為載 體的OMPC綴合的多價(jià)疫苗(Αβ 3-10/Αβ 21-28) (MVC)免疫且與ISCOMATRIX —起施用。發(fā)明詳述術(shù)語(yǔ)“8聚體”意指與A β片段、天然A β肽類(lèi)似物或肽模擬物對(duì)應(yīng)的8氨基酸肽。 一個(gè)或多個(gè)8聚體可以與至少一個(gè)間隔區(qū)組合，以形成多價(jià)線性肽或形成多價(jià)分支MAP。術(shù)語(yǔ)“Αβ綴合物”意指與載體化學(xué)或生物連接的Aβ的8聚體或免疫原性片段， 所述載體例如匙孔血藍(lán)蛋白或腦膜炎奈瑟氏球菌的外膜蛋白質(zhì)復(fù)合體(OMPC)。術(shù)語(yǔ)“Αβ肽”意指本文在疫苗構(gòu)建體中使用的任何合成(與天然存在的淀粉狀蛋 白β肽(Αβ)比較)Αβ肽，包括但不限于線性8聚體、具有至少一個(gè)間隔區(qū)的多價(jià)線性肽 和多價(jià)分支多抗原肽(MAPs)。
術(shù)語(yǔ)“表位”指抗原上的位點(diǎn)，B和/或T細(xì)胞對(duì)該位點(diǎn)有應(yīng)答。B細(xì)胞表位可以 由鄰接氨基酸或通過(guò)蛋白質(zhì)三級(jí)折疊而并列的非鄰接氨基酸形成。由鄰接氨基酸形成的 表位一般在暴露于變性溶劑后保留，而由三級(jí)折疊形成的表位一般在用變性溶劑處理后喪 失。T細(xì)胞表位由能夠與宿主MHC分子形成復(fù)合體的肽組成。負(fù)責(zé)誘導(dǎo)CD8+T細(xì)胞應(yīng)答的 人MHC I類(lèi)分子的T細(xì)胞表位一般包括9-11個(gè)氨基酸殘基，而負(fù)責(zé)CD4+T細(xì)胞應(yīng)答的人MHC II類(lèi)分子的表位一般包括12個(gè)或更多個(gè)氨基酸殘基(Bjorkman等人Nature329 =506-512, 1987 ；Madden 等人 Cell75 :693-708 ；Batalia 禾口 Collins :Engelhard Annu Rev Immunol.， 12 :181-207-622. 1995 :Madden,Annu Rev Immunol.，13 :587-622. 1995)。與 T 細(xì)胞不同，B 細(xì)胞能夠識(shí)別長(zhǎng)度小至4個(gè)氨基酸的肽。由T細(xì)胞受體識(shí)別的T細(xì)胞表位/MHC復(fù)合體導(dǎo) 致T細(xì)胞激活。術(shù)語(yǔ)“多價(jià)肽”指具有超過(guò)一個(gè)抗原決定簇的肽。術(shù)語(yǔ)“多價(jià)疫苗”或“MVC”意指包含多種A β肽的疫苗構(gòu)建體，所述Αβ肽各自具 有抗原決定簇且缺乏T細(xì)胞表位。在一個(gè)實(shí)施方案中，多價(jià)疫苗包括A β的兩個(gè)非鄰接、非 等同的免疫原性片段，例如Aβ 3-10和Αβ 21-28，它們各自缺乏T細(xì)胞表位。術(shù)語(yǔ)“Αβ的免疫原性片段”或“缺乏T細(xì)胞表位的A β的免疫原性片段”意指能 夠誘導(dǎo)抗Aβ的抗體形式的免疫應(yīng)答的8聚體或Aβ片段，但所述應(yīng)答不包括對(duì)自身抗原 A β的T細(xì)胞應(yīng)答。術(shù)語(yǔ)“免疫學(xué)”或“免疫”或“免疫原性”應(yīng)答指脊椎動(dòng)物個(gè)體中針對(duì)抗原的體液 (抗體介導(dǎo)的)和/或細(xì)胞(由抗原特異性T細(xì)胞或其分泌產(chǎn)物介導(dǎo)的)應(yīng)答的發(fā)展。此 應(yīng)答可以是通過(guò)施用免疫原誘導(dǎo)的主動(dòng)應(yīng)答或通過(guò)施用抗體誘導(dǎo)的被動(dòng)應(yīng)答。術(shù)語(yǔ)“較嚴(yán)重形式的AD”指與年齡對(duì)照非AD患者或顯示更晚期臨床病理學(xué)的患 者比較，具有與更晚期形式的神經(jīng)元變性相關(guān)的任何形式AD的患者。此類(lèi)患者包括但不限 于簡(jiǎn)短精神狀態(tài)檢查(MMSE)得分為20或更低的個(gè)體、阿爾茨海默病評(píng)定量表認(rèn)知分量表 (ADAS-Cog)得分為35或更高的個(gè)體、總體衰退量表(GDQ得分為5期或更高的個(gè)體、多套 臨床癡呆評(píng)級(jí)總和(CDR-SB)得分為2或更高的個(gè)體、在60-64歲以下且表現(xiàn)AD癥狀的個(gè) 體，或在遺傳篩選后診斷患有早發(fā)阿爾茨海默病(EOAD)或家族型AD (特別是與PS-I突變 相關(guān)的那些)的個(gè)體，或患有特征在于A β的致病沉積物的AD形式的患者。術(shù)語(yǔ)“淀粉狀蛋白β肽(Αβ)的致病沉積物”或“Αβ的致病沉積物”意指包括 Αβ的神經(jīng)毒性形式例如Aβ 42，或已知與較多神經(jīng)元變性或較嚴(yán)重臨床表型相關(guān)的Aβ的 N末端或C末端截短形式的斑塊沉積物。此類(lèi)Αβ形式包括但不限于4 0 404 0 424 0的N 末端截短形式例如A β χ-42，其中χ與天然存在的A β的殘基2-17對(duì)應(yīng)，和通過(guò)末端氨基酸 環(huán)化，例如N末端谷氨酸的環(huán)化修飾的A β的截短形式，即pGluA β 3-42或pGluA β 11-42。術(shù)語(yǔ)“致病A β沉積物的特異性抗體”指與A β的神經(jīng)毒性形式交叉反應(yīng)的抗體， 所述A β的神經(jīng)毒性形式包括全長(zhǎng)A β 40或Αβ 42、A β的N末端截短形式、或在末端氨基 酸上具有修飾的A β的N末端或C末端截短形式，例如pGluA β 3-42或pGluA β 11-42。術(shù)語(yǔ)“藥物組合物”意指適合施用于哺乳動(dòng)物個(gè)體的化學(xué)或生物組合物。如本文 使用的，它指任選連同或不連同佐劑一起施用的包括本文描述的8聚體、Αβ的免疫原性片 段和Aβ綴合物的組合物。淀粉狀蛋白β肽(Αβ)的致病沉積物
越來(lái)越多的證據(jù)顯示在AD患者腦中沉積的Aβ在結(jié)構(gòu)上不是均質(zhì)的(Saido等 人，Neuroscience Letters, 215 173-176,1996)。除多種形式的全長(zhǎng)淀粉狀蛋白β肽 (Αβ )Αβ 40和Αβ 42外，已檢測(cè)出在肽的N末端和C末端上具有修飾的Aβ的多種截短形 式(Russo 等人，F(xiàn)EBSLetters,409 :411-416,1997 ；Saido 1996)。越來(lái)越多地認(rèn)為這些Αβ 的截短形式在AD發(fā)展中是關(guān)鍵的(Piccini等人，Τ, Biol. Chem. , 280 (40) =34186-34192, 2005)。在這些Αβ的截短形式中，從殘基Glu3或Glull上的焦谷氨酰開(kāi)始的N末端截短 的肽占優(yōu)勢(shì)(Russo，1997)。pGlu3形式(Αβ3(ρΕ)_42)特別普遍，包括總A β的約50% (Youssef 等人，Neurobiol. Aging, 29 1319-1333，2008)。已發(fā)現(xiàn)這些N末端截短形式在診斷患有散發(fā)性AD的患者的腦中、在早發(fā)家族 性AD(EOAD)患者(最特別地具有早老蛋白-I(PS-I)突變的那些)中和在患有唐氏綜合 征(DS)的患者中早期積累(Russo 等人，F(xiàn)EBS Lett. ,409 :411-416，1997 ;Saido 等人， Neurosci, Lett. , 215 173-176,1996 :Tekirian 等 人，J. Neuropathol. Ex. Neurol. , 57 76-94，1998)。與患有不含突變的散發(fā)性、晚發(fā)AD (LOAD)的患者比較，患有由PS-I突變驅(qū)動(dòng) 的EOAD的個(gè)體一般在60-64歲前發(fā)展疾病癥狀。此外，患有唐氏綜合征(此)的患者由于其 21號(hào)染色體(與某些遺傳形式的AD相關(guān)的基因位于同一染色體)的額外拷貝也發(fā)展E0AD， 導(dǎo)致多30%的APP和增加的Αβ產(chǎn)生。家族性丹麥癡呆是另一種形式的早發(fā)癡呆，其特征在 于大的、幾乎獨(dú)占的pyroGlu(N末端修飾Αβ的)比例CTomidokoro,等人，Τ. Biol. Chem.， 280 (44) =36883-36894,2005) 與LOAD比較，由于PS-I突變或攜帶DS，展示EOAD的個(gè)體 在其腦中攜帶明顯更多的 pGluA β 3-42 (Russo，1997 ；Russo 等人，Nature, 405 :531-532, 2000 ；Russo 等人，Neurobiol. Pis. ,8 173-180，2001 ；Hosoda 等人，J. Neuropathol. Exp. Neurol. ,57 :1089-1095,1998).更重要的是，如尸體組織分析所測(cè)定的，具有更大比例的 N末端截短形式，特別是占優(yōu)勢(shì)的PGluAi3 3-42形式的患者，獲得在神經(jīng)元變性程度和臨床 病理學(xué)嚴(yán)重性方面較嚴(yán)重的疾病(Russo，1997 ;Russo 2000)。評(píng)估個(gè)體的AD或癡呆一般將包括某些形式的精神或認(rèn)知評(píng)估，這可以通過(guò)各種 方法進(jìn)行，包括阿爾茨海默病評(píng)定量表認(rèn)知分量表(ADAS-Cog)、總體衰退量表(GDQ、多套 臨床癡呆評(píng)級(jí)總和(CDR-SB)或更典型地，簡(jiǎn)短精神狀態(tài)檢查(MMSE)。MMSE得分最大值是 30，其中得分一般分類(lèi)為輕度(2146)、中度(15-20)和重度(14或更低)。ADAS-Cog的得 分范圍從O (最可能)到70 (最不可能)，其中23附近的得分是輕度損傷的截止值，并且 約35或更高的得分與中度和更高的損傷相關(guān)。CDR的得分最大值是4，其中得分分類(lèi)為正 常(0)、輕度(0. 5-1)、中度⑵和重度(3-4)。類(lèi)似地，⑶S的得分從1期(最佳)到7期 (最差)，其中4期與輕度損傷的約22. 5的ADAS-Cog得分相似，并且5期與中度損傷的約 35的ADAS-Cog得分相似。關(guān)于與AD和癡呆相關(guān)的匪SE的一般討論，參見(jiàn)，i^olstein等 人，J. Psichiat2 Res.，12 189-198，1975。關(guān)于 ADAS_Cog、MMSE 和 GDS 評(píng)分和有效性的比 較，參見(jiàn) Doraiswamy 等人，Neurology，48 (6) :1511_1517，1997。ADAS-Cog 和 MMSE—般已 被接受用于在臨床試驗(yàn)中評(píng)價(jià)功效中使用。待考慮的另一種因素將是個(gè)體的家族史，即另 一個(gè)(或多個(gè))緊密相關(guān)的家族成員是否具有視為重度的AD形式。為了證實(shí)由于FAD突 變導(dǎo)致的EOAD的存在，可以對(duì)來(lái)自患者的白細(xì)胞的基因組DNA執(zhí)行序列分析(Finclch，等 人，Am. J. Hum. Genet.，66 :110_117，2000)。因此，展示早期、迅速發(fā)展形式的AD或癡呆例 如EOAD或FAD的個(gè)體，特別是在60-64歲以下的個(gè)體，或匪SE評(píng)分20或更低的個(gè)體將被視為患有較嚴(yán)重形式的AD，并且預(yù)期具有特征在于致病性淀粉狀蛋白沉積物的斑塊，包括 N末端截短形式，并且將是本文多價(jià)疫苗的候選人。申請(qǐng)人:在本文中已發(fā)現(xiàn)包括A β的多個(gè)免疫原性片段的疫苗構(gòu)建體提供更有效 方法來(lái)治療AD患者，所述AD患者患有與A β的N末端截短形式相關(guān)的較嚴(yán)重形式的AD。 多價(jià)疫苗是廣譜疫苗，因?yàn)樗軌蛑委熁加泻邏K的AD形式的患者，所述斑塊不僅包含與 AD相關(guān)的Αβ的全長(zhǎng)形式，還包括Αβ的N末端截短形式。本發(fā)明的多價(jià)疫苗能夠與多種 和更多形式的神經(jīng)毒性Aβ (特別是就N末端截短形式而言)交叉反應(yīng)。申請(qǐng)人在本文中 首次顯示包括Αβ的多個(gè)非鄰接、非等同免疫原性片段，缺乏T細(xì)胞表位的多價(jià)疫苗，可以 更有效地用于治療AD，特別是以下那些患者其具有已知與在神經(jīng)元變性和臨床病理學(xué)方 面較嚴(yán)重形式的疾病相關(guān)的Aβ種類(lèi)。治療較嚴(yán)重形式的AD的疫苗構(gòu)建體申請(qǐng)人:在本文中已令人驚訝地發(fā)現(xiàn)包括缺乏T細(xì)胞表位的Αβ的多個(gè)免疫原性 片段的疫苗構(gòu)建體(本文稱(chēng)為多價(jià)疫苗)可以提供廣譜疫苗，以治療患有較嚴(yán)重形式的AD 的患者，且特別是具有Αβ的致病沉積物的患者，所述沉積物包括Aβ的N末端截短形式。 由于在文獻(xiàn)中報(bào)道的其他抗Αβ疫苗構(gòu)建體看起來(lái)針對(duì)Αβ的單個(gè)免疫原性片段，本發(fā)明 提供有利和更有效的疫苗，用于靶向已知與Αβ的N末端截短形式的存在相關(guān)的那些AD形 式。在相關(guān)共同未決的申請(qǐng)中，申請(qǐng)人已描述了肽綴合物的組合物和使用該肽綴合 物來(lái)治療AD的方法，所述肽綴合物包括缺乏T細(xì)胞表位并且能夠誘導(dǎo)抗A β抗體形式 的有益免疫應(yīng)答的Αβ的免疫原性片段(PCT/US 2006/016481、WO 2006/121656 ；USSN 11/919,897、US2009-0098155，其教導(dǎo)引入本文，如同詳盡闡述一樣)。其中的疫苗組合物 包含Αβ的免疫原性片段，所述免疫原性片段的大小限制為8個(gè)氨基酸(8聚體)，并且設(shè)計(jì) 為去除任何潛在的C末端T細(xì)胞表位錨定殘基。Αβ的免疫原性片段可以是8聚體線性肽、 具有至少一個(gè)PEG間隔區(qū)的多價(jià)線性Αβ綴合物或多價(jià)分支多抗原肽(MAP)。在一個(gè)優(yōu)選 實(shí)施方案中，疫苗構(gòu)建體是包括在賴(lài)氨酸支架上連接的Aβ 3-10和Αβ 21- 的分支MAP。其中在主動(dòng)免疫方案中使用以治療AD的疫苗構(gòu)建體可以以藥物組合物形式施 用，其中MAP的免疫原性片段可以與載體化學(xué)或生物連接，所述載體例如血清白蛋白、匙孔 血藍(lán)蛋白(KLH)、免疫球蛋白分子、卵白蛋白、破傷風(fēng)類(lèi)毒素蛋白質(zhì)，或來(lái)自其他致病細(xì)菌例 如白喉、大腸桿菌、霍亂或幽門(mén)螺桿菌(H. pylori)的類(lèi)毒素，或減毒的毒素衍生物。在一個(gè) 優(yōu)選實(shí)施方案中，載體是腦膜炎奈瑟氏球菌的外膜蛋白質(zhì)復(fù)合體(OMPC)。其中在主動(dòng)免疫方案中使用以治療AD的疫苗構(gòu)建體可以與佐劑一起施用，所述 佐劑例如明礬(alum)、脂質(zhì)例如3-脫-0-?；瘑瘟柞Ｖ|(zhì)A(3D-MPL)或基于皂苷的佐劑。 在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，佐劑是基于皂苷的佐劑ISCOMATRIX (CSL Ltd,Parkville, Australia)。申請(qǐng)人:在本文中已令人驚訝地發(fā)現(xiàn)其中肽綴合物的優(yōu)選實(shí)施方案，即包括用賴(lài)氨 酸支架連接的A β 3-10和A β 21-28且與OMPC綴合的分支MAP的多價(jià)疫苗目前提供廣譜主 動(dòng)疫苗用于治療AD。這種多價(jià)疫苗(MVC)的結(jié)構(gòu)如下(SEQ ID NO:l) Ac-EFRHDSGY(Aha)-Lys-Lys-(BrAc)-NH2
(SEQ ID NO:2) Ac-AEDVGSNK(Aha)J其中“Aha”表示6-氨基己酸，并且“BrAc”表示溴乙酰。申請(qǐng)人:在本文中已顯示這種廣譜MVC提供相對(duì)于目前正在進(jìn)行臨床評(píng)價(jià)的其他 主動(dòng)疫苗方法的優(yōu)點(diǎn)。這種多價(jià)疫苗不僅已顯示提供與Aβ的多種形式(且特別是與較嚴(yán) 重形式的AD相關(guān)的A β的N末端截短形式)特異性交叉反應(yīng)的抗體形式的免疫應(yīng)答，它還 提供更強(qiáng)的免疫應(yīng)答，因?yàn)楫?dāng)χ彡3時(shí)，Aβ 1-8疫苗不產(chǎn)生對(duì)Αβ χ-42的任何免疫應(yīng)答。因 此，本文中的多價(jià)疫苗能夠提供比在臨床考慮下的其他主動(dòng)疫苗更佳的、對(duì)Αβ的N末端截 短形式的免疫原性，即更廣譜的應(yīng)答。用于治療較嚴(yán)重形式的AD的治療劑申請(qǐng)人:用多價(jià)疫苗構(gòu)建體免疫豚鼠，所述構(gòu)建體即包括經(jīng)由賴(lài)氨酸支架連接的 A β 3-10和A β 21-28的分支MAP (本文稱(chēng)為多價(jià)疫苗構(gòu)建體-MVC)，其與載體(OMPC)綴合 且與基于皂苷的佐劑ISCOMATRIX —起施用。免疫的動(dòng)物產(chǎn)生多克隆抗體形式的免 疫應(yīng)答。從動(dòng)物中抽取血清，并且使抗血清系列稀釋且測(cè)試對(duì)A β的眾多形式的交叉反應(yīng) 性，所述Αβ的眾多形式包括全長(zhǎng)Αβ40和Αβ42、和表1中列出的Αβ的N末端截短形式。類(lèi)似地，申請(qǐng)人用與天然存在的A β的氨基酸殘基1-8對(duì)應(yīng)的合成的單價(jià)A β肽 (本文稱(chēng)為單價(jià)疫苗構(gòu)建體-MoVC 1-8)免疫豚鼠，所述合成的單價(jià)A β肽與載體(KLH)綴 合且與基于皂苷的佐劑ISCOMATRIX —起施用。依據(jù)信息和信心，認(rèn)為目前正在進(jìn)行 臨床評(píng)估的其他主動(dòng)疫苗采用與分別綴合于CRM197或VLP的Αβ 1-7和Αβ 1-6對(duì)應(yīng)的類(lèi) 似單價(jià)疫苗構(gòu)建體。A β 1-7/CRM197疫苗構(gòu)建體被認(rèn)為與基于皂苷的佐劑QS-21—起施用， 而A β 1-6/VLP構(gòu)建體不與佐劑一起施用。目前在用于AD的臨床試驗(yàn)中的主動(dòng)疫苗包括Αβ序列的N末端殘基1，并且長(zhǎng)度 為6-7個(gè)氨基酸。與之形成對(duì)比，由申請(qǐng)人利用的MVC包括與Αβ殘基3對(duì)應(yīng)且在殘基10 處終止的Αβ的免疫原性片段，和與殘基21對(duì)應(yīng)且在殘基觀處終止的Αβ的第二個(gè)免疫原 性片段。如本文證實(shí)的，與采用從Αβ殘基1開(kāi)始的肽的其他主動(dòng)疫苗方法比較，這種MVC 識(shí)別更多A β的N末端截短形式。不希望受任何理論束縛，認(rèn)為在WO 2006/121656中描述 的其他多價(jià)疫苗構(gòu)建體將以相似特異性執(zhí)行。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到且理解多價(jià)8 聚體抗原的使用將產(chǎn)生代表可以摻入如本文描述的疫苗構(gòu)建體內(nèi)的任何片段長(zhǎng)度的應(yīng)答， 條件是該片段長(zhǎng)度能夠產(chǎn)生所需多克隆免疫應(yīng)答，而不刺激針對(duì)T細(xì)胞應(yīng)答的抗原。因此， 在備選實(shí)施方案中，本文描述的本發(fā)明可以包括Αβ片段，包括但不限于7聚體、6聚體、5 聚體和4聚體。在進(jìn)行本文實(shí)驗(yàn)前，申請(qǐng)人尋求基于疫苗構(gòu)建體的組合物預(yù)測(cè)，來(lái)自接種的動(dòng)物 的抗血清將與A β的何種形式交叉反應(yīng)，即全長(zhǎng)或N末端截短形式。與來(lái)自多價(jià)疫苗構(gòu)建 體(Αβ 3-10/Αβ 21-28) (MVC)和單價(jià)疫苗構(gòu)建體A β 1-8 (MoVCl-8)所交叉反應(yīng)的抗血清的 實(shí)際種類(lèi)比較，這些預(yù)測(cè)在表1中顯示。每種Αβ形式的交叉反應(yīng)性程度也顯示于圖1和 2中。如由圖1和2顯而易見(jiàn)的，與MoVCl-8構(gòu)建體比較，本文描述的MVC不僅識(shí)別更大量 的N末端修飾的A β肽，它還與和最嚴(yán)重形式的疾病最相關(guān)的形式且特別是PGlu3Ai3 3-42 具有更大的交叉反應(yīng)性。最簡(jiǎn)潔地，這個(gè)數(shù)據(jù)證實(shí)與包括等于或少于8個(gè)氨基酸的肽的疫苗比較，多價(jià)疫苗可能誘導(dǎo)能夠與從游離N末端開(kāi)始的截短形式(Αβ -χ)結(jié)合的抗體。表 權(quán)利要求
1.治療患有較嚴(yán)重形式的阿爾茨海默病(AD)的患者的方法，該方法包括(i)確定患者 患有較嚴(yán)重形式的ADdP (ii)以有效誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的量施用A β的免疫原性片段。
2.權(quán)利要求1的方法，其中患有較嚴(yán)重形式的AD的患者選自簡(jiǎn)短精神狀態(tài)檢查 (MMSE)得分為20或更低的個(gè)體、阿爾茨海默病評(píng)定量表認(rèn)知分量表(ADAS-Cog)得分為 35或更高的個(gè)體、總體衰退量表(GDQ得分為5期或更高的個(gè)體、多套臨床癡呆評(píng)級(jí)總和 (CDR-SB)得分為2或更高的個(gè)體、在60-64歲以下且表現(xiàn)AD癥狀的個(gè)體，或在遺傳篩選后 診斷患有早發(fā)阿爾茨海默病(EOAD)或家族型AD的個(gè)體。
3.權(quán)利要求2的方法，其中所述Αβ的免疫原性片段構(gòu)成多價(jià)疫苗，所述疫苗包括Αβ 的多個(gè)非鄰接的免疫原性片段，所述片段各自缺乏T細(xì)胞表位。
4.權(quán)利要求3的方法，其中所述多價(jià)疫苗包括通過(guò)賴(lài)氨酸支架連接的Αβ3-10和 Αβ 21-28ο
5.權(quán)利要求4的方法，其中所述多價(jià)疫苗進(jìn)一步包括與所述Aβ免疫原性片段綴合的 載體。
6.權(quán)利要求5的方法，其中所述多價(jià)疫苗與佐劑一起施用。
7.選擇用作疫苗構(gòu)建體的Αβ的免疫原性片段的方法，所述疫苗構(gòu)建體適合于治療患 有較嚴(yán)重形式的阿爾茨海默病(AD)的患者，所述方法包括(i)以有效誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的量給動(dòng)物施用A β的測(cè)試免疫原性片段；和( )評(píng)估來(lái)自被免疫動(dòng)物的抗血清與Αβ的N末端截短形式的交叉反應(yīng)性；其中合適的疫苗構(gòu)建體將選擇為能夠誘導(dǎo)抗體形式的免疫應(yīng)答的疫苗構(gòu)建體，所述抗 體對(duì)于Αβ的一種或多種N末端截短形式是特異性的。
8.權(quán)利要求7的方法，其中所述Aβ的N末端截短形式選自Ai3x-42、pGlu-Ai33-40、 pGlu-Αβ 3-42、pGlu-A3 11-40 和 pGlu-A β 11-42，其中 χ 與天然存在的 A β 的殘基 2-17 對(duì) 應(yīng)。
全文摘要
本發(fā)明提供了用于治療患有較嚴(yán)重形式的阿爾茨海默病(AD)的患者的方法，其中嚴(yán)重形式的AD的特征在于淀粉狀蛋白β肽(Aβ)的致病沉積物，所述方法包括施用能夠誘導(dǎo)抗體形式的免疫應(yīng)答的Aβ的免疫原性片段，所述抗體對(duì)于Aβ的致病沉積物，且特別對(duì)于Aβ的神經(jīng)毒性形式，包括Aβ的N末端截短形式是特異性的。本發(fā)明進(jìn)一步提供了用于選擇Aβ的合適免疫原性片段的方法，所述片段用于治療較嚴(yán)重形式的AD。
文檔編號(hào)G01N33/50GK102089000SQ200980126533
公開(kāi)日2011年6月8日 申請(qǐng)日期2009年7月2日 優(yōu)先權(quán)日2008年7月8日
發(fā)明者G·G·金尼, L·B·羅森, M·J·薩瓦奇, M·奇特倫, 梁小平 申請(qǐng)人:默沙東公司