酸棗仁湯多糖提取物、制備方法及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于中藥制藥領(lǐng)域，具體涉及一種酸棗仁湯多糖提取物、制備方法及在制備鎮(zhèn)靜、催眠藥物中的應(yīng)用，該工藝簡(jiǎn)單、成本低廉、適于工業(yè)化制備，可用于分離純化酸棗仁湯多糖，為酸棗仁鎮(zhèn)靜催眠藥物研發(fā)奠定基礎(chǔ)。
【專利說明】酸棗仁湯多糖提取物、制備方法及其應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于中藥制藥領(lǐng)域，具體涉及一種酸棗仁湯多糖提取物制備方法及其在鎮(zhèn) 靜、催眠藥物中的應(yīng)用，該工藝簡(jiǎn)單、成本低廉、適于工業(yè)化制備。

【背景技術(shù)】
[0002] 酸棗仁湯出自《金匱要略》、《中國(guó)藥典》2010年版二部附錄，其由炒酸棗仁（54g)、 獲考 :（18g)、川彎（18g)、知母（18g)、甘草（9g)五味中藥組成。方中酸麥仁養(yǎng)肝血安心神為 君藥；川芎調(diào)血養(yǎng)肝、茯苓寧心安神為臣藥；知母滋陰降火、清熱除煩為佐藥；甘草和中緩 肝為使藥。本方臨床主治肝血不足，虛火內(nèi)擾心神所致的心煩失眠等癥。目前已有文獻(xiàn)報(bào) 道酸棗仁湯中的黃酮、皂苷、油脂和生物堿可能具有鎮(zhèn)靜催眠活性，但對(duì)酸棗仁湯中的多糖 類的鎮(zhèn)靜催眠研究雖有報(bào)道，但并未對(duì)其活性多糖的分子量范圍進(jìn)行研究。
[0003] 多糖的生物活性與其分子量密切相關(guān)，已有文獻(xiàn)報(bào)道不同分子量的多糖具有不同 的生物活性，但具有鎮(zhèn)靜催眠作用的活性多糖的分子量范圍還有待研究。
[0004] 目前多糖提取方法還比較落后，主要采用傳統(tǒng)的水提醇沉法，由于多糖與色素結(jié) 合緊密，并含有少量黏性物質(zhì)，因此在提取分離過程中使成本增加，不易產(chǎn)業(yè)化。膜法作為 一種新型的分離技術(shù)，不但具有能耗低、單級(jí)分離效果高、工藝簡(jiǎn)單，可在室溫或低溫下操 作，而且用于中藥分離、純化時(shí)所得制品收率高、純度好。
[0005] 因此本發(fā)明首先確定具有鎮(zhèn)靜催眠活性的酸棗仁湯多糖的分子量范圍，針對(duì)目前 多糖常規(guī)提取分離方法的缺點(diǎn)，建立一種簡(jiǎn)便高效的酸棗仁湯多糖的制備方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明提供了一種酸棗仁湯多糖提取物，該提取物中多糖分子量小于50kDa，具有 良好的鎮(zhèn)靜、催眠活性。
[0007] 本發(fā)明還提供了制備上述酸棗仁湯多糖提取物的方法，其步驟如下：
[0008] (1)稱取酸棗仁湯各組成藥味。
[0009] (2)用4-40倍量，體積濃度為50-95%乙醇回流提取，棄去乙醇液。
[0010] (3)殘?jiān)?jīng)干燥處理，加5-10倍量水浸提兩次（50?70°C )，每次0· 5-2h。
[0011] (4)提取液靜置過夜后將上清液離心，上清液用截留分子量為50kDa的超濾膜進(jìn) 行超濾處理，得到酸棗仁湯多糖超濾液。
[0012] (5)向多糖超濾液中加入體積濃度為60-90%乙醇，冷藏過夜，離心，沉淀干燥或 凍干后，即得。
[0013] 本發(fā)明還首次將HPLC-ELSD方法應(yīng)用于酸棗仁湯中多糖的含量測(cè)定。采用 Kromasil C18(250mmX4. 6mm，5ym)色譜柱，以甲醇-水（5:95)為流動(dòng)相，ELSD檢測(cè)；將酸 棗仁湯多糖提取物溶于水，水解后作為供試品溶液，由線性方程求出樣品液中葡萄糖的濃 度，再按下式：多糖含量％= fX (CXD)/W，[f為1.032，W為多糖提取物的重量（yg)，C為 多糖中葡萄糖濃度（μ g · mL-1)，D為稀釋體積（mL)]計(jì)算樣品中多糖含量。
[0014] 本發(fā)明以小鼠自主活動(dòng)次數(shù)、閾下劑量戊巴比妥鈉所致小鼠睡眠只數(shù)和閾上劑量 戊巴比妥鈉所致小鼠睡眠時(shí)間為藥理指標(biāo)，確定了酸棗仁湯中具有鎮(zhèn)靜催眠作用多糖分子 量范圍為小于50kDa。

【具體實(shí)施方式】
[0015] 實(shí)施例1 :精密稱取酸棗仁湯各組成藥味，即酸棗仁（54g)、茯苓（18g)、川芎 (18g)、知母（18g)、甘草（9g)，置100ml圓底燒瓶中，置索氏提取器用10倍石油醚（60? 65°C )脫脂4h，殘?jiān)〕?，干燥、研碎、過40目篩后，用25倍70%的乙醇回流提取3h除去皂 苷、黃酮等雜質(zhì)，殘?jiān)俳?jīng)過干燥等處理，分別加10倍，8倍體積水浸提兩次（60?65°C )， 每次lh。提取液靜置過夜后將上清液離心,上清液依次用50,10kDa的超濾膜進(jìn)行超濾處 理。超濾溫度20?60°C，操作壓力0. 02?0. 2MPa，pHl?13,料液濃度為原始提取液濃 度，所得截留液分別收集，濃縮至一定濃度，得到不同分子量范圍的酸棗仁湯多糖原液。抽 濾，溶液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮（60?65°C )后，加80%乙醇醇沉得到絮狀沉淀，4°C冷藏過 夜，3000r/min離心lOmin得到沉淀，室溫下干燥后溶于水再經(jīng)過三次醇沉，得到M〈10kD、 10kD〈M〈50kD、M>50kD三段不同分子量酸棗仁湯多糖黃褐色多糖樣品，得率分別為5 %， 14. 6%，35· 6%。
[0016] 實(shí)施例2 :精密稱取酸棗仁湯各組成藥味，即酸棗仁（54g)、茯苓（18g)、川芎 (18g)、知母（18g)、甘草（9g)，置100ml圓底燒瓶中，置索氏提取器用10倍石油醚（60? 65°C)脫脂4h，殘?jiān)〕?，干燥、研碎、過40目篩后，用4倍50%的乙醇回流提取3h除去皂 苷、黃酮等雜質(zhì)，殘?jiān)俳?jīng)過干燥等處理，分別加10倍，5倍體積水浸提兩次（60?65°C )， 每次0. 5h。提取液靜置過夜后將上清液離心,上清液依次用50, lOkDa的超濾膜進(jìn)行超濾處 理。超濾溫度20?60°C，操作壓力0. 02?0. 2MPa，pH : 1?13,料液濃度為原始提取液濃度， 所得截留液分別收集，濃縮至一定濃度，得到不同分子量范圍的酸棗仁湯多糖原液。抽濾， 溶液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮后，加90%乙醇醇沉得到絮狀沉淀，4°C冷藏過夜，12000r/min離心 5min得到沉淀，室溫下干燥后溶于水再經(jīng)過三次醇沉，得到M〈10kD、10kD〈M〈50kD、M>50kD 三段不同分子量酸棗仁湯多糖黃褐色多糖樣品，得率分別為4. 1 %，12. 2%，30. 1 %。
[0017] 實(shí)施例3 :采用實(shí)施例1制得的酸棗仁湯多糖提取物，進(jìn)行藥理活性實(shí)驗(yàn)。
[0018] 3. 1對(duì)閾下劑量戊巴比妥鈉致小鼠入睡只數(shù)的影響
[0019] 取小鼠120只，雄性，隨機(jī)分成12組，每組10只。各給藥組分別灌胃給予30、60、 90g/kg的酸麥仁湯多糖M〈10kD、10kD〈M〈50kD、M>50kD及30g/kg的酸麥仁顆粒、4mg/kg的 安定。空白對(duì)照組給予同容積的蒸餾水。每天1次，連續(xù)5d。于末次給藥前8h禁食，前l(fā)h 禁水，給藥30min后，腹腔注射戊巴比妥鈉30mg/kg，觀察并記錄發(fā)生睡眠小鼠的只數(shù)，以注 射戊巴比妥鈉后15min內(nèi)翻正反射消失達(dá)lmin以上者確定為陽性。與空白對(duì)照組比較， M〈10kDa、10kDa〈M〈50kDa、M>50kDa不同分子量酸棗仁湯多糖30g/kg能增加小鼠入睡只數(shù)， 表明酸棗仁湯對(duì)小鼠具有明顯的催眠作用，其中分子量范圍小于50kDa多糖催眠效果顯 著。
[0020] 表1酸棗仁湯多糖提取物對(duì)閾下劑量戊巴比妥鈉致小鼠入睡只數(shù)的影響（η = 10, X 土 s)
[0021]

【權(quán)利要求】
1. 一種具有鎮(zhèn)靜、催眠活性的酸棗仁湯多糖提取物，該提取物分子量小于50kD。
2. 制備如權(quán)利要求1所述的提取物的方法，其步驟如下： (1) 稱取酸棗仁湯各組成藥味； (2) 用4-40倍50-95%乙醇回流提取，棄去乙醇液； (3) 殘?jiān)?jīng)干燥處理，加5-10倍量水浸提兩次（50?70°C )，每次0. 5-2h ; (4) 提取液靜置過夜后將上清液離心，上清液用截留分子量為50kDa的超濾膜進(jìn)行超 濾處理，得到酸棗仁湯多糖超濾液； (5) 向多糖超濾液中加入60-90%乙醇，冷藏過夜，離心，沉淀干燥或凍干后，即得。
3. 如權(quán)利要求1所述的多糖提取物在制備鎮(zhèn)靜、催眠藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61K36/8964GK104189410SQ201410416212
【公開日】2014年12月10日 申請(qǐng)日期:2014年8月22日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月22日
【發(fā)明者】李清, 畢開順, 劉然, 何博賽, 劉宇, 畢文川 申請(qǐng)人:沈陽藥科大學(xué)