本發(fā)明涉及中醫(yī)藥制品加工技術領域，具體涉及一種從蘘荷中提取活性組分的方法，以及該提取到的活性組分在制備抗腫瘤藥物，鎮(zhèn)痛、抗炎藥物，抗菌藥物中的應用。

背景技術：
蘘荷(Zingibermioga)，姜科姜屬，多年生草本植物，俗稱野姜、茗荷、陽藿等。其嫩芽、花軸和嫩莖味芳香微甘，可涼拌或炒食，也可制作醬菜，是營養(yǎng)價值很高的珍稀蔬菜。蘘荷嫩莖具有特殊氣味，其揮發(fā)油中除具有特殊氣味的揮發(fā)性組分外，還鑒定出許多藥用成分，如烷烴醇類、酮類、醛類、環(huán)氧化合物及醚類、冰片、烯烴、脂肪酸、酯類化合物等多種化合物。隨著科技的進步，關于蘘荷提取物的一種新功能也逐漸被發(fā)現和利用。如公開號為CN103432541A的中國發(fā)明專利“一種蘘荷花苞提取物的降血脂新用途”公開了從蘘荷花苞中提取有效組分用于制備降血脂藥物的方法。又如公開號為CN102940864A的中國發(fā)明專利“一種蘘荷提取物的解酒新用途”公開了一種從蘘荷花苞中提取有效活性組分用于制備解救劑的方法。但到目前位置，對于襄荷提取物的研究中，還未見其抗癌、抗炎、及抗菌功效的報道。

技術實現要素：
本發(fā)明所要解決的技術問題是針對以上現有技術的不足，提供一種蘘荷活性組分的提取方法，該方法操作簡單、過程可控、重復性好，提取得到的蘘荷活性組分被證明具有抗腫瘤，鎮(zhèn)痛、抗炎，抗菌活性。本發(fā)明所采用的技術方案為：一種蘘荷活性組分的提取方法，它包括以下步驟：(1)取烘干的蘘荷根莖為原料，切成0.5-1cm小段后，加入超純水進行浸泡12-24小時，其中超純水的加入量為蘘荷根莖質量的8倍，然后進行煎煮，時間為1小時，煎煮完之后進行過濾；(2)取過濾所得的濾渣，加入濾渣8倍質量的超純水，進行煎煮1小時，煎煮完之后進行過濾，重復以上步驟；(3)將步驟(1)、(2)過濾所得的濾液進行合并，濃縮干燥，得本發(fā)明目的活性組分。本發(fā)明還進一步提供上述從蘘荷提取到的活性組分在制備抗腫瘤藥物中的應用。該活性組分作為有效成分按常規(guī)方法與藥學上可接受的任何載體制成各類藥用制劑。本發(fā)明進一步提供上述從蘘荷提取到的活性組分在制備鎮(zhèn)痛、抗炎藥物中的應用。該活性組分作為有效成分按常規(guī)方法與藥學上可接受的任何載體制成各類藥用制劑。本發(fā)明進一步提供上述從蘘荷提取到的活性組分在制備抗菌藥物中的應用。該活性組分作為有效成分按常規(guī)方法與藥學上可接受的任何載體制成各類藥用制劑。與現有技術相比，本發(fā)明具有以下顯著優(yōu)點和有益效果：1、本發(fā)明先使用超純水對蘘荷根莖進行浸泡，以軟化蘘荷根莖堅硬的細胞壁，然后采用多次煎煮的方法提取活性組分，本操作方法簡單可控，易操作，重復性好，可實施化程度高，可實現工業(yè)化生產；2、發(fā)明提取得到的活性組分原料來源于天然，副作用小或沒有，可進一步開發(fā)出藥效更好、不良反應更小更少的抗癌劑、鎮(zhèn)痛抗炎劑、抗菌劑，用于相關疾病治療，具有明顯的社會效益和經濟效益；3、發(fā)明拓展了藥物或保健食品的原料來源，擴大了蘘荷的應用范圍，使蘘荷成為抗腫瘤藥物、鎮(zhèn)痛抗炎劑、抗菌劑的有效組分原料，顯著提高了蘘荷的附加值。具體實施方式以下結合實施例對本發(fā)明作進一步具體描述。應該指出，以下具體說明都是例示性的，旨在對本發(fā)明提供進一步的說明。除非另有說明，本發(fā)明使用的所有科學和技術術語具有與本發(fā)明所屬技術領域人員通常理解的相同含義。實施例1：蘘荷活性組分的提取1、原料、材料：蘘荷根莖采自浙江湖州莫干山。2、試劑：超純水由密立博純水儀生產。3、儀器設備：旋轉蒸發(fā)儀購自上海亞容生化儀器廠。4、提取方法包括以下步驟：(1)取烘干的蘘荷根莖為原料，切成0.5-1cm小段后，加入超純水進行浸泡12-24小時，其中超純水的加入量為蘘荷根莖質量的8倍，然后進行煎煮，時間為1小時，煎煮完之后進行過濾；(2)取過濾所得的濾渣，加入濾渣8倍質量的超純水，進行煎煮1小時，煎煮完之后進行過濾，重復以上步驟；(3)將步驟(1)、(2)過濾所得的濾液進行合并，濃縮干燥成固態(tài)，得本發(fā)明目的組分，將得到的此目的組分進行以下實驗。實施例2：抗腫瘤藥理實驗1、實驗材料1.1動物SPF級昆明種小鼠(KunMingmice，KMmice)，♂，質量18-22g，由沈陽藥科大學實驗動物中心購自長生生物技術有限公司。動物在SPF級層流架中飼養(yǎng)，自由攝食和飲水，環(huán)境溫度23±2℃，濕度30％-70％，照明時間12h/d(7:00～19:00開燈)。飼養(yǎng)3天后進行實驗。1.2藥品與試劑注射用環(huán)磷酰胺購自江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司生產，批號12060625。S180和H22瘤株由沈陽藥科大學藥理教研室提供。2、實驗方法2.1蘘荷水提物對S180荷瘤小鼠的抑瘤作用選接種8天健康狀況良好的S180瘤源小鼠，腹部皮膚消毒后，注射器抽取腹水，離心后棄上清，無菌生理鹽水稀釋至細胞濃度為1×1010L-1，于每只小鼠右側腋皮下接種0.2mL以形成實體瘤。次日將小鼠隨機分為5組，每組10只，分別為模型對照組(生理鹽水)、陽性對照組(環(huán)磷酰胺)、實施例1所得水提物組(1g/kg)、實施例1所得水提物組(2g/kg)、實施例1所得水提物組(4g/kg)，連續(xù)給藥8d，末次給藥24h后頸椎脫臼處死小鼠，稱體重，剝取瘤塊、脾臟和胸腺并稱重。按照下列公式計算抑瘤率、脾指數和胸腺指數。抑瘤率％＝(1-模型對照組平均瘤重/實驗組平均瘤重)×100％脾(胸腺)指數＝[脾(胸腺)重量(mg)/體重(g)]×100％結果如表1所示。表1蘘荷水提物對小鼠S180腫瘤的抑制作用(Mean±S.D.,n＝10)注：*P<0.05，**P<0.01，與模型組相比結果表明，與模型組相比，蘘荷水提物低、中劑量組可顯著降低S180荷瘤小鼠的瘤重，抑瘤率分別為46.15％，52.31％，而且沒有環(huán)磷酰胺的抑制胸腺指數的副作用。2.2蘘荷水提物對H22荷瘤小鼠的抑瘤作用昆明種小鼠50只，按文獻報道方法取傳代第7天的H22小鼠腹水2mL，用生理鹽水調至2×1010L-1，在每只小鼠右腋皮下接種瘤細胞懸液0.2mL。按體重隨機分為5大組(10只/組)，分別為模型對照組(生理鹽水)、陽性對照組(環(huán)磷酰胺)、實施例1所得水提物組(1g/kg)、實施例1所得水提物組(2g/kg)、實施例1所得水提物組(4g/kg)，連續(xù)給藥8d，末次給藥24h后頸椎脫臼處死小鼠，稱體重，剝取瘤塊、脾臟和胸腺并稱重。按照下列公式計算抑瘤率、脾指數和胸腺指數。抑瘤率(％)＝對照組(NS)平均瘤重-給藥組平均瘤重/對照組平均瘤重×100％脾(胸腺)指數＝[脾(胸腺)重量(mg)/體重(g)]×100％結果見表2。表2蘘荷水提物對小鼠H22腫瘤的抑制作用(Mean±S.D.,n＝10)注：*P<0.05，**P<0.01，與模型組相比結果表明，與模型組相比，蘘荷水提物低、中劑量組可顯著降低H22荷瘤小鼠的瘤重，抑瘤率分別為34.46％，41.22％，而且沒有環(huán)磷酰胺的抑制胸腺指數的副作用。在上述兩個抗腫瘤實驗中，蘘荷水提物高劑量均沒有降低瘤重的作用，即是說，在服用劑量為1-2g/kg時，按照本實施例1所示方法得到的蘘荷水提物能起到很好的抑制小鼠S180腫瘤和H22腫瘤的作用。所以說，在將蘘荷水提物應用到制備抗腫瘤藥物時，其劑量非常重要。實施例3：鎮(zhèn)痛、抗炎實驗1、實驗材料1.1動物SPF級昆明種小鼠(KunMingmice，KMmice)，♂，質量18-22g，由沈陽藥科大學實驗動物中心購自長生生物技術有限公司。動物在SPF級層流架中飼養(yǎng)，自由攝食和飲水，環(huán)境溫度23±2℃，濕度30％-70％，照明時間12h/d(7:00～19:00開燈)。飼養(yǎng)3天后進行實驗。1.2藥品與試劑阿司匹林購自沈陽奧華制藥有限公司，批號121101；二甲苯購自天津市迪博化工有限公司，批號20090224；冰乙酸購自天津市大茂化學試劑廠，批號20111118。2、實驗方法2.1小鼠扭體反應實驗取雌性KM小鼠50只，體重18-22g，隨機分為5組，每組10只。分別為模型組，陽性藥組(阿司匹林,100mg/kg)，水提物低劑量組(1g/kg)、水提物中劑量組(2g/kg)、水提物高劑量組(4g/kg)。穩(wěn)定2天后，按0.2ml/10g體重灌胃給藥，模型組給以等量的生理鹽水，每天1次，共5天。末次給藥后1h，所有小鼠腹腔注射0.6％冰乙酸0.2ml/只。記錄15min內小鼠扭體的次數。扭體次數減少百分率＝(模型組平均扭體次數—給藥組平均扭體次數)/模型組平均扭體次數×100％。2.2二甲苯致小鼠耳腫脹實驗取KM小鼠50只，♂，體重18-22g，適應飼養(yǎng)3天后，按照體重均衡原則隨機分成5組，每組10只。分別為模型組，陽性對照組(阿司匹林,100mg/kg)，水提物低劑量組(1g/kg)、水提物中劑量組(2g/kg)、水提物高劑量組(4g/kg)。穩(wěn)定2天后，按0.2ml/10g體重灌胃給藥，模型組給以等量的生理鹽水，每天1次，共7天。于末次給藥后1h，將小鼠右耳正反兩面涂20μl二甲苯致炎，左耳不涂作為空白對照。30min后，脫頸處死小鼠，用直徑8mm的打孔器在左右兩耳同一位置打下耳片，精密稱重(mg)記錄。觀察指標：耳腫脹度及耳腫脹抑制率：以左右耳片重量差為腫脹度并計算腫脹抑制率，耳腫脹抑制率％＝(模型組平均耳腫脹度-給藥組平均耳腫脹度)/模型組平均耳腫脹度×100％；3、實驗結果表3水提物對冰醋酸致小鼠扭體反應的影響注：**P<0.01，與模型組相比表4水提物對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響注：*P<0.05，**P<0.01，與模型組相比由表3、表4可知，蘘荷水提物中劑量(2g/kg)具有明顯的鎮(zhèn)痛、消炎作用，而低劑量(1g/kg)和高劑量(4g/kg)不具有鎮(zhèn)痛、消炎作用，這指示本發(fā)明蘘荷水提物在作為應用于制備鎮(zhèn)痛、消炎藥物時，其劑量至關重要。即，按照本發(fā)明方法從蘘荷中提取得到的抗腫瘤活性組分，應用在制備鎮(zhèn)痛、消炎藥物中，可以起到很好的鎮(zhèn)痛、消炎作用。實施例4：蘘荷水提物體外抗菌試驗研究1、實驗用品1.1材料與試劑牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：牛肉膏3.0g,蛋白胨10.0g,NaCl5.0g,瓊脂20.0g餾水1000ml,pH7.4-7.6。PRMI1640培養(yǎng)基:RPMI1640(Gibco)10g，NaHCO32.0g，三氮嗎啡啉丙磺(segma)34.5g，加三蒸水溶解，1mol/LNaOH調整pH至7.0后，定容至1000mL，0.25μm微孔濾膜過濾除菌后放置4℃保存?zhèn)溆?。蒸餾水由由沈陽藥科大學自制；100％酒精購自天津博迪化工有限公司；二甲基亞砜(DMSO)購自天津市大茂化學試劑廠；氟康唑購自北京鼎國昌盛生物技術公司；氨芐青霉素購自北京鼎國昌盛生物技術公司。1.2儀器紫外分光光度儀購自上海棱光技術有限公司；96孔板購自愛思達醫(yī)用塑料有限公司；凈化工作臺購自沈陽利港凈化設備有限公司；0.25μm微孔濾膜購自萊博科技有限公司。1.3菌株疣狀毛癬菌(Trichophytonverrucosum)、白色念珠菌(Candidaalbicans)參考株(CMCC03382)1株、金黃色葡萄球菌(StaphyloccocusaureusRosenbach)、大腸埃希氏菌(Escherichiacoli)、肺炎克雷伯菌(Klebsiellapneumonia219)、枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)、產氣莢膜桿菌(Clostridiumperfringen)由沈陽藥科大學微生物實驗室提供保存。2.實驗方法2.1藥物原液的配制分別精密稱取實施例1目的活性組分(蘘荷水提物)，氟康唑，青霉素各12.80mg，加DMSO1mL溶解后，在加9mL無菌蒸餾水定溶至10mL，使配制成濃度為1280μg/mL的儲存液，0.25μm微孔濾膜4℃保存?zhèn)溆谩?.2管碟法測定抑制細菌活性下層無菌培養(yǎng)基：將已分裝的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基融化，每皿15mL定量倒入無菌平皿中。至于平的桌面冷凝。上層混菌培養(yǎng)基：取計數后的菌懸液200μL加入40mL融化放溫的沙氏固體培養(yǎng)基中，制成終濃度為0.5～2.5×104cfu/mL的含菌培養(yǎng)基，混合均勻后快速取6-7mL均勻倒在上述凝好的無菌平板上，冷卻至凝固，即得含菌雙層平板。在雙層平板的背面貼好標簽，標注菌株、藥品名稱，用無菌的小鑷子夾取已滅菌的小鋼管，將其放置在雙層平板表面的相應區(qū)域上，每個平皿放四個小鋼管。用移液槍將相應等量200μL的對照品和待測樣品供試液加到小鋼管中，把培養(yǎng)皿的玻璃蓋換成無菌陶土蓋后放入37℃真菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，24h后觀察管碟法抑真菌結果，用直尺測量并記錄抑菌圈直徑(mm)。2.3最低抑菌濃度(MIC)法測定抑真菌、細菌活性。真菌MIC法：第一步，加培養(yǎng)基：每行的第1孔加入180μLPRMI1640培養(yǎng)基，2-11孔加入100μLRPMI1640培養(yǎng)基，12孔加入200μLRPMI1640培養(yǎng)基。第二步，加藥：向第1孔中加入20μL氨芐青霉素，用移液槍混勻后吸取100μL至2孔，依次進行2倍稀釋至第10孔后混勻棄去100μL。第三步，加菌：向1～11孔中各加100μL接種菌懸液。第11孔為生長對照，第12孔為空白培養(yǎng)基對照。陽性對照藥物不設空白對照，即從第1孔開始做倍比梯度稀釋直至第10孔，測試濃度(μg/mL)范圍為128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25。96孔板置于小塑料盒內，向每個盒中加入1mL蒸餾水，28℃培養(yǎng)，每天觀察生長情況。以空白對照無菌生長，陰性對照生長良好作為判斷試驗操作是否合格的標準。細菌MIC法流程同真菌，培養(yǎng)基換成牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。37℃培養(yǎng)一天觀察。3.實驗結果蘘荷水提物在640～1280μg/mL濃度時能顯著抑制金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、大腸埃希氏菌3種測試菌株的生長繁殖，形成抑菌圈，濃度越大抑菌圈直徑越大；但對產氣莢膜桿菌和枯草芽孢桿菌抑菌作用不明顯。蘘荷水提物對疣狀毛癬菌和白色念珠菌的MIC均為0.25μg/mL，對金色葡萄球菌的MIC為0.5μg/mL。實施例5：具體實施病例1、張XX，男，46歲，確診患肺癌兩年余，經取蘘荷根80克水煎，大火燒開后文火煎約20分鐘，共反復三次，將藥液混合，每日分三次服用，每次80毫升，連續(xù)服用一個月后，自感不適癥狀基本消失，經CT檢查發(fā)現腫瘤組織未見增大，現仍在繼續(xù)服用。2、于X，男，62歲，醫(yī)院診斷為肺癌晚期，出院后在家自行蘘荷根水煎劑三個月后，咳嗽、咯血、胸痛癥狀明顯減輕，無任何不良反應，現仍在繼續(xù)服用。3、王XX，女，12歲，上呼吸道感染導致咳嗽、咯痰，服用蘘荷根水煎劑3天，癥狀明顯減輕；服用6天后癥狀基本消失。本研究發(fā)現蘘荷水提物具有抗腫瘤、鎮(zhèn)痛抗炎及特定菌的抗菌活性，提示蘘荷根莖具有很好的開發(fā)利用價值。接下來我們將對實施例1所得的活性組分進行成份、純度等進一步鑒定，以期望于能獲得高純度的活性單體。本項研究的目的就是在總結臨床經驗和初步試驗證明蘘荷提取物有抗癌、鎮(zhèn)痛抗炎、抗菌作用的基礎上，力爭為臨床奉獻一個低毒有效的新型中藥制劑。為了保障我們的科研成果，也為鼓勵我們進一步深入研究，我們特先申請此專利，希望獲批。本發(fā)明實施例涉及到的材料、試劑和實驗設備，如無特別說明，均為符合中藥制品加工的普通市售產品。以上所述，僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施例，應當指出，對于本技術領域的普通技術人員來說，在不脫離本發(fā)明的核心技術的前提下，還可以做出改進和潤飾，這些改進和潤飾也應屬于本發(fā)明的專利保護范圍。與本發(fā)明的權利要求書相當的含義和范圍內的任何改變，都應認為是包括在權利要求書的范圍內。