南板藍根多糖及其硒化修飾物和制備方法與應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種南板藍根多糖及其硒化修飾物和制備方法與應(yīng)用，所公開的南板藍根多糖，是一種雜多糖，由甘露糖、鼠李糖、木糖、阿拉伯糖、葡萄糖組成，5種單糖的結(jié)構(gòu)單元數(shù)比例為2:3:5:6:1，所公開的硒化修飾物是南板藍根硒多糖，由南板藍根多糖與有機酸硒醚、氯化亞砜反應(yīng)制成。基于本發(fā)明南板藍根多糖制備的南板藍根硒多糖對多種腫瘤細胞株具有明顯的抑制作用，可用于制備治療癌癥的藥物。
【專利說明】南板藍根多糖及其砸化修飾物和制備方法與應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及到具有抑制腫瘤活性的南板藍根硒多糖，屬于藥物化學(xué)領(lǐng)域。

【背景技術(shù)】
[0002]常見的板藍根，即北板藍根，為十字根花科植物菘藍的干燥根，由于北板藍根對多種病菌，包括葡萄球菌、桿菌、鏈球菌、雙球菌均表現(xiàn)出良好的抑制作用，在治療甲型流感病毒、乙型腦炎病毒、腮腺炎病毒、流感病毒等領(lǐng)域取得了廣泛應(yīng)用，尤其是解熱、抗炎效果顯著好于南板藍根。
[0003]南板藍根，為爵床科植物馬藍的干燥根，其中的游離氨基酸成分含量低于板藍根，其在解熱、抗炎、殺菌病毒和病菌方面的活性低于板藍根，因此多年來藥物領(lǐng)域?qū)δ习逅{根的研究資料尚少，近年來雖然有多個報道開始嘗試使用南板藍根作為藥物，但是均是將其做成復(fù)方制劑從而使其具有與板藍根類似的藥理活性。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]在長期對南板藍根進行深入研究的基礎(chǔ)上， 申請人:從南板藍根中獲得了一種南板藍根多糖成分，是一種雜多糖，深入的研究顯示將該雜多糖硒化修飾后的產(chǎn)物具有顯著的抑制腫瘤細胞活性的效果。
[0005]基于上述發(fā)現(xiàn)， 申請人:完成了本發(fā)明。
[0006]首先，本發(fā)明公開了一種南板藍根多糖，是一種雜多糖，由甘露糖、鼠李糖、木糖、阿拉伯糖、葡萄糖組成，5種單糖的結(jié)構(gòu)單元數(shù)比例為2:3:5:6:1。
[0007]進一步的，本發(fā)明公開了上述南板藍根多糖的制備方法，包括下述步驟:1)用有機溶劑或水對南板藍根進行濾提后將提取液減壓濃縮，將濃縮物用有機溶劑沉淀抽濾后洗滌干燥得粗多糖；2)將粗多糖脫蛋白、脫色后用水透析，減壓濃縮后加入有機溶劑沉淀過濾，洗滌沉淀物干燥得半精多糖；3)將半精多糖用氯化鈉水溶液溶解后過葡聚糖凝膠柱洗脫，得到南板藍根多糖。
[0008]其中，上述過濾和洗滌用有機溶劑為有機化學(xué)領(lǐng)域萃取常用有機溶劑，包括但不限于乙醇、丙酮、乙酸乙酯等，考慮到成本和毒性的需要，優(yōu)選采用乙醇。
[0009]其中，為了提高收率，優(yōu)選進行多次濾提，合并提取液；同樣的，為了保證洗滌效果，可以采用不同的有機溶劑進行多次洗滌。
[0010]其中，脫蛋白操作在本領(lǐng)域由多種已有的試劑盒可以實現(xiàn)，具體的操作方法按照相關(guān)試劑盒的使用說明即可。
[0011]其中，脫色操作也是本領(lǐng)域技術(shù)人員廣泛周知的，通常是通過堿性溶液和雙氧水進行脫色。
[0012]在上述南板藍根多糖的基礎(chǔ)上， 申請人:對其各種活性進行了研究，在研究中驚喜的發(fā)現(xiàn)該多糖的硒化修飾物具有良好的抑制腫瘤活性的效果，因此本發(fā)明還公開了一種南板藍根硒多糖，是通過硒化試劑對南板藍根多糖進行結(jié)構(gòu)修飾的產(chǎn)物，具體的說，是由南板藍根多糖與有機酸硒醚、氯化亞砜反應(yīng)制成。
[0013]在上述反應(yīng)中，氯化亞砜將有機酸硒醚酰氯化后與南板藍根多糖反應(yīng)形成穩(wěn)定的酯基和C-Se鍵，從而將硒與多糖有效結(jié)合。
[0014]其中，各成分的用量與具體的有機酸硒醚類型相關(guān)，采用不同的有機酸硒醚可以得到不同的南板藍根硒多糖。
[0015]優(yōu)選的，所述有機酸硒醚為乙酸硒醚、丙酸硒醚，這兩種原料可以通過氯乙酸或3-氯丙酸與硒粉等反應(yīng)得到，制備工藝簡單。
[0016]當(dāng)所述有機酸硒醚為乙酸硒醚時，南板藍根多糖與有乙酸硒醚、氯化亞砜的質(zhì)量比為 1:0.05 ~0.2:10 ~30，優(yōu)選為 1:0.1: 15 ~20。
[0017]當(dāng)所述有機酸硒醚為丙酸硒醚時，南板藍根多糖與有丙酸硒醚、氯化亞砜的質(zhì)量比為 1:0.1 ~0.5:10 ~30，優(yōu)選為 1:0.25:15 ~ 20。
[0018]在此基礎(chǔ)上，本發(fā)明公開了上述南板藍根硒多糖的制備方法，包括下述步驟:1)將南板藍根多糖加入到蒸餾水和DMF中，攪拌至充分溶解；2)將有機酸硒醚、氯化亞砜加入到DMF中溶解，在高溫下攪拌反應(yīng)，反應(yīng)產(chǎn)物用DMF溶解，在冰浴中滴加到南板藍根多糖溶液中攪拌反應(yīng)，加入無水乙醇沉淀，靜置，抽濾，沉淀用無水乙醇洗滌并干燥后得到南板藍根硒多糖。
[0019]在上述方法中，使用DMF溶液是一種優(yōu)良的溶劑，能夠使得各成分之間充分發(fā)生反應(yīng)，同時對于化學(xué)反應(yīng)具有一定的催化劑效果。
[0020]進一步的，步驟I)還包括在攪拌溶解后的溶液中滴加吡啶的步驟。
[0021]通過加入少量的吡啶，通常是幾滴即可(0.05~0.2ml)，在化學(xué)反應(yīng)中作為催化劑提聞反應(yīng)速度。
[0022]為了保證反應(yīng)的充分進行，步驟2)還包括將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至高溫下繼續(xù)反應(yīng)完全后冷卻至室溫的步驟。
[0023]在上述方法中，高溫是指有機化學(xué)反應(yīng)中通常所用的溫度，一般是指50~80°C的范圍，通過油浴或水浴提供上述溫度環(huán)境。
[0024]本發(fā)明的南板藍根硒多糖， 申請人:對其藥學(xué)活性進行了充分研究，發(fā)現(xiàn)其在抑制多種腫瘤細胞活性上具有顯著的效果，因此本發(fā)明還公開了所述南板藍根硒多糖在制備治療癌癥藥物中應(yīng)用。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0025]圖1為本發(fā)明南板藍根多糖純化過程的洗脫曲線；
[0026]圖2a、2b為本發(fā)明南板藍根多糖的NBLG1、NBLG2的洗脫曲線；
[0027]圖3a、3b、3c為本發(fā)明南板藍根多糖、南板藍根硒多糖1、南板藍根硒多糖II的紅外譜圖；
[0028]圖4為本發(fā)明南板藍根硒多糖的硒濃度-吸光度標準曲線。

【具體實施方式】
[0029]實施例1:南板藍根多糖的提取、分離、純化
[0030]1.1南板藍根多糖的提取
[0031]將南板藍根洗凈、粉碎后，稱取50.0OOg干粉于索氏提取器中，依次用石油醚回流3h后，乙醇回流4h，晾干，按提取溫度為90°C、料液比1:50 (g/mL)、提取時間為2h的提取條件用水提取三次，過濾，合并提取液，減壓濃縮至50mL，加入四倍95 %乙醇，于冰箱中靜置過夜，抽濾，固體分別用無水乙醇、丙酮洗滌三次，在60°C的烘箱中烘干得粗多糖。
[0032]1.2粗多糖的脫蛋白與脫色
[0033]稱取5.0OOg粗多糖于燒杯中，加200mL的水溶解，加入3% (w/v)的木瓜蛋白酶，調(diào)節(jié)pH為6.5,在39°C下攪拌48h,加入多糖溶液體積1/5的Savage試劑(正丁醇:氯仿=1:4)，攪拌、離心，收集上層清液，重復(fù)操作至無變形蛋白，紫外掃描無蛋白質(zhì)吸收峰為止。
[0034]在200mL的脫蛋白的多糖水溶液中加入5 %的NaOH，調(diào)節(jié)多糖溶液pH為8，然后加入30 %的H2O2溶液，使多糖溶液中過氧化氫的濃度為10 %，室溫下攪拌至無色。
[0035]將上述已脫蛋白的多糖溶液自來水透析48h后，蒸餾水透析12h，減壓濃縮至50mL,加入4倍95 %乙醇沉淀，靜置過夜，過濾，沉淀用無水乙醇、丙酮洗滌，干燥得半精多糖。
[0036]1.3半精多糖的純化
[0037]將0.030g的半精多糖用8mL、0.1moI/L的氯化鈉水溶液溶解，過S印hadex G-75葡聚糖凝膠柱，用0.lmol/L的氯化鈉水溶液洗脫,控制流速為0.5mL/min進行洗脫,并用苯酚硫酸法跟蹤檢測。
[0038]洗脫結(jié)果如圖1所示洗脫曲線，分別收集4~7管、9~17管，記為NBLG1、NBLG2。
[0039]實施例2:南板藍根多糖的組成分析
[0040]2.1首先采用凝膠柱層析法分析多糖的純度
[0041]稱取NBLGl、NBLG2各0.01Og,溶于4mL的蒸懼水中，過Sephadex G-75葡聚糖凝膠柱，用0.lmol/L的氯化鈉水溶液進行洗脫，并用苯酚-濃硫酸法檢測。參考圖2a、2b所示的洗脫曲線，多糖NBLGl的洗脫曲線為單一對稱峰，即知其為均一組分的純多糖；多糖NBLG2的洗脫曲線有多個峰，可知其為多組分的混合多糖。
[0042]2.2然后采用比旋光度法重復(fù)驗證多糖的純度
[0043]各稱取0.030g的NBLGl、NBLG2，用蒸餾水配制成15mg/mL的多糖溶液各兩份，分別用4倍75%、95%乙醇進行沉淀，精確稱取干燥后的固體各0.010g，溶于5mL蒸餾水后，用10mL的容量瓶定容，得到0.100g/L的多糖溶液，用旋光儀在25°C、鈉光的D線下分別測其旋光度。
[0044]然后根據(jù)下述公式，計算其比旋光度。結(jié)果見表1及表2
[0045][ α ] λ 1 = a / (c X L)
[0046]表1 NBLGl的比旋光度
[0047]
乙醇濃度旋光度比旋光度75% 1.65 0.825_95%_L70_085_
[0048]表2NBLG2的比旋光度
[0049]

【權(quán)利要求】
1.南板藍根多糖，是一種雜多糖，由甘露糖、鼠李糖、木糖、阿拉伯糖、葡萄糖組成，5種單糖的結(jié)構(gòu)單元數(shù)比例為2:3:5:6:1。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的南板藍根硒多糖，其特征在于由下述方法制成:1)用有機溶劑或水對南板藍根進行濾提后將提取液減壓濃縮，將濃縮物用有機溶劑沉淀抽濾后洗滌干燥得粗多糖；2)將粗多糖脫蛋白、脫色后用水透析，減壓濃縮后加入有機溶劑沉淀過濾，洗滌沉淀物干燥得半精多糖；3)將半精多糖用氯化鈉水溶液溶解后過葡聚糖凝膠柱洗脫，得到南板藍根多糖。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的南板藍根多糖的硒化修飾物，為南板藍根硒多糖，其特征在于由南板藍根多糖與有機酸硒醚、氯化亞砜反應(yīng)制成。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的南板藍根硒多糖，其特征在于所述有機酸硒醚為乙酸硒醚，南板藍根多糖與有乙酸硒醚、氯化亞砜的質(zhì)量比為1:0.05~0.2:10~30。
5.根據(jù)權(quán)利要求3的南板藍根硒多糖，其特征在于所述有機酸硒醚為丙酸硒醚，南板藍根多糖與有丙酸硒醚、氯化亞砜的質(zhì)量比為1: 0.1~0.5:10~30。
6.權(quán)利要求3的南板藍根多糖的硒化修飾物的制備方法，其特征在于包括下述步驟:I)將南板藍根多糖加入到蒸餾水和DMF中，攪拌至充分溶解；2)將有機酸硒醚、氯化亞砜加入到DMF中溶解，在高溫下攪拌反應(yīng)，反應(yīng)產(chǎn)物用DMF溶解，在冰浴中滴加到南板藍根多糖溶液中攪拌反應(yīng)，加入無水乙醇沉淀，靜置，抽濾，沉淀用無水乙醇洗滌并干燥后得到南板藍根硒多糖。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的制備方法，其特征在于步驟I)還包括在攪拌溶解后的溶液中滴加吡啶的步驟。
8.根據(jù)權(quán)利要求6的制備方法，其特征在于步驟2)還包括將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至高溫下繼續(xù)反應(yīng)完全后冷卻至室溫的步驟。
9.權(quán)利要求3的南板藍根硒多糖在制備治療癌癥藥物中應(yīng)用。
【文檔編號】A61P35/00GK104072629SQ201410283798
【公開日】2014年10月1日 申請日期:2014年6月23日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月23日
【發(fā)明者】盛家榮, 李錦金, 黃珊, 肖琦, 鄒修文, 黃初升, 楊啟源 申請人:廣西師范學(xué)院