專利名稱：羊棲菜硒多糖的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種多糖的制備方法。
背景技術(shù)：
近年來，合成硒多糖的方法主要有以下幾種
(I)將SeO32-取代硫酸酯多糖中的硫酸酯-SO3-把硒加到多糖中，以及其他如SeOCl2與多糖振蕩反應(yīng)等，但這些方法仍存在硒結(jié)構(gòu)相對單一，且硒含量不高等不足。以靈芝硒多糖為例，將吡啶30ml加入附有冷凝管和攪拌裝置的IOOml三頸瓶中，邊攪拌邊加入三氧化硒-吡啶2. 5 3. Og,在熱水浴中加熱至90°C，再加入多糖粉末O. 5g，恒溫攪拌，冷卻至室溫；振蕩反應(yīng)液用3mol/L的NaOH溶液調(diào)至中性，加入95%乙醇，析出靈芝硒多糖。因為吡 啶有強(qiáng)烈刺激性氣味，因此此種方法要求在通風(fēng)條件下進(jìn)行，操作繁瑣。(2)將硼氫化鈉還原硒粉得到Se2_或-SeSe-，然后與鹵代羧酸在堿性條件下振蕩反應(yīng)制備出相應(yīng)的羧酸硒醚和二硒醚，用乙酸硒醚與鄰氨基苯甲酸或水楊酸振蕩反應(yīng)以引入其他基團(tuán)，最后與多糖中的羥基進(jìn)行酰化振蕩反應(yīng)，合成出含硒醚、二硒醚結(jié)構(gòu)新的硒多糖，此方法既可以在多糖中引入不同種類硒的結(jié)構(gòu)。以麒麟菜多糖為例，首先用NaBH4還原硒粉得Se2_或-SeSe _，然后在堿性水溶液中與氯乙酸、3_氯丙酸和對溴甲基苯甲酸在室溫下振蕩反應(yīng)，制得相應(yīng)的羧酸硒醚，收率分別為51. 9 %、62. 6 %和58. 6 %，以及丙酸和對甲基苯甲酸二硒醚，收率67. 8 %和72. I %。用乙酸硒醚分別與鄰氨基苯甲酸和水楊酸振蕩反應(yīng)引入其他基團(tuán)，收率73. 6%和69. 8 %。最后這些合成的化合物通過形成酰氯與麒麟菜多糖中的羥基醚化得到含硒醚或二硒醚結(jié)構(gòu)的新型硒多糖。此方法過程繁瑣，多糖損失大，結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重，所用試劑為有毒試劑，在實際生產(chǎn)應(yīng)用中價值不大。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有合成硒多糖的方法操作繁瑣、有刺激性氣味及所用試劑有毒的技術(shù)問題，提供了一種羊棲菜硒多糖的制備方法。羊棲菜硒多糖的制備方法按照以下步驟進(jìn)行
一、向IOOml體積分?jǐn)?shù)為O.5%的HNO3水溶液中加入Ig羊棲菜多糖，得到多糖溶液；
二、將亞硒酸鈉加入到多糖溶液中，得到混合溶液，混合溶液中亞硒酸鈉與羊棲菜多糖的質(zhì)量比為0.4 I. 2g lg，然后在50°C 90°C水浴的條件下振蕩反應(yīng)6 10h，冷卻，然后加入NaCO3調(diào)節(jié)pH值為5 6，離心，然后透析至透析液加入抗壞血酸檢測后無紅色停止透析，加熱濃縮，冷凍干燥，即得羊棲菜硒多糖。本發(fā)明方法操作簡單、無刺激性氣味，所用試劑無毒環(huán)保，所制備的羊棲菜多糖能明顯抑制S18tl肉瘤在荷瘤小鼠上的生長，顯著提高S18tl荷瘤小鼠胸腺指數(shù)、脾指數(shù)及ConA誘導(dǎo)的脾淋巴細(xì)胞增殖，提高荷瘤小鼠NK細(xì)胞活性及腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬活性。提高機(jī)體免疫功能是羊棲菜多糖抑制腫瘤生長的機(jī)制之一。羊棲菜多糖還可調(diào)節(jié)或恢復(fù)S18tl荷瘤小鼠紅細(xì)胞多種生理生化功能。激光共聚焦掃描技術(shù)測定荷瘤小鼠紅細(xì)胞內(nèi)[Ca2Ii的變化，運(yùn)用相關(guān)試劑盒測定紅細(xì)胞膜表面唾液酸含量和Na+、K+-ATPase及Ca2+、Mg2+-ATPase活性的變化，用流式細(xì)胞儀分析紅細(xì)胞膜電位水平的變化，采用高效毛細(xì)管電泳法測定紅細(xì)胞電泳合淌度的變化。結(jié)果現(xiàn)實羊棲菜多糖能降低荷瘤小鼠紅細(xì)胞內(nèi)[Ca2Ii，升高膜表面唾液酸的含量，增強(qiáng)膜表面Na+、K+-ATPaSe及Ca2+、Mg2+-ATPase的活性，提高紅細(xì)胞膜電位水平，提高紅細(xì)胞的電泳合淌度。羊棲菜多糖也可通過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡起到抗腫瘤作用。羊棲菜多糖可阻滯MCF7細(xì)胞由GcZG1期進(jìn)入S期，升高細(xì)胞凋亡指數(shù)(APO)，同時上調(diào)Fas、FasLmRNA的表達(dá)。羊棲菜多糖對人胃癌細(xì)胞SGC-7901和人直腸癌C0L0-205有較好的療效。羊棲菜多糖可阻滯SGC-7901人胃癌細(xì)胞內(nèi)GノG1期進(jìn)入S期，升高細(xì)胞凋亡指數(shù)(AP0%)。使SGC-7901細(xì)胞內(nèi)[Ca2Ii先升高然后下降，給予CaCl2后，[Ca2+ L又升高。提示羊棲菜多糖通過升高腫瘤細(xì)胞內(nèi)[Ca2Ii啟動腫瘤細(xì)胞凋亡機(jī)制而達(dá)到抗腫瘤 的作用，[Ca2Ii升高時Ca2+來源于細(xì)胞內(nèi)鈣庫釋放。采用Westernblot法測定P53基因表達(dá)，研究羊棲菜多糖對腫瘤細(xì)胞P53基因表達(dá)的影響。羊棲菜多糖可顯著誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞野生型P53水平的増加，從而達(dá)到抗腫瘤的作用。羊棲菜多糖對HL-60細(xì)胞具有顯著生長抑制作用，并呈量效和時效關(guān)系，藥物濃度為300 mg/L和500 mg/L作用HL-60細(xì)胞后，觀察到典型的細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)特征，DNA凝膠電泳呈現(xiàn)梯狀條帶，DNA直方圖出現(xiàn)IG1峰。在一定濃度范圍內(nèi)，SFPS誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用呈現(xiàn)濃度和時間依賴性，同時G2/M期細(xì)胞比例增多。結(jié)論SFPS抗腫瘤作用與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和G2/M期細(xì)胞阻滯有夫。


圖I是具體實施方式
六中所用羊棲菜多糖放大500倍的掃描電鏡照片；
圖2是具體實施方式
六中所用羊棲菜多糖放大1000倍的掃描電鏡照片；
圖3是具體實施方式
六中所用羊棲菜多糖放大2000倍的掃描電鏡照片；
圖4是具體實施方式
六中所用羊棲菜多糖放大5000倍的掃描電鏡照片；
圖5是具體實施方式
六中所得羊棲菜硒多糖放大2000倍的掃描電鏡照片；
圖6是具體實施方式
六中所得羊棲菜硒多糖放大3000倍的掃描電鏡照片；
圖7是具體實施方式
六中所得羊棲菜硒多糖放大20000倍的掃描電鏡照片；
圖8是具體實施方式
六中所得羊棲菜硒多糖放大5000倍的掃描電鏡照片；
圖9是實驗一中振蕩反應(yīng)時間對羊棲菜硒多糖振蕩反應(yīng)的影響 圖10是實驗ニ中振蕩反應(yīng)溫度對羊棲菜硒多糖振蕩反應(yīng)的影響 圖11是實驗三中亞硒酸鈉與羊棲菜多糖質(zhì)量比對羊棲菜硒多糖振蕩反應(yīng)的影響圖； 圖12是實驗四中固定水平=X3=O振蕩反應(yīng)時間和振蕩反應(yīng)溫度交互作用的響應(yīng)面；
圖13是實驗四中固定水平=X3=O振蕩反應(yīng)時間和振蕩反應(yīng)溫度交互作用的等值線圖；圖14是實驗四中固定水平=X2=O振蕩反應(yīng)時間和亞硒酸鈉與羊棲菜多糖質(zhì)量比交互作用的響應(yīng)面；
圖15是實驗四中固定水平=X2=O振蕩反應(yīng)時間和亞硒酸鈉與羊棲菜多糖質(zhì)量比交互作用的等值線 圖16是實驗四中固定水平=X1=O振蕩反應(yīng)溫度和亞硒酸鈉與羊棲菜多糖質(zhì)量比交互作用的響應(yīng)面；
圖17是實驗四中固定水平=X1=O振蕩反應(yīng)溫度和亞硒酸鈉與羊棲菜多糖質(zhì)量比交互作用的等值線圖。圖18是濃度為O. 2mg/ml的羊棲菜多糖水溶液中羊棲菜多糖的粒度分布 圖19是濃度為O. 2mg/ml的羊棲菜硒多糖(實驗六制備的)水溶液中的粒度分布 圖20是濃度為O. 02mg/ml的羊棲菜多糖水溶液中羊棲菜多糖的粒度分布 圖21是濃度為O. 02mg/ml的羊棲菜硒多糖(實驗六制備的)水溶液中羊棲菜多糖的粒度分布圖。
具體實施例方式本發(fā)明技術(shù)方案不局限于以下所列舉具體實施方式
，還包括各具體實施方式
間的任意組合。
具體實施方式
一本實施方式羊棲菜硒多糖的制備方法按照以下步驟進(jìn)行
一、向IOOml體積分?jǐn)?shù)為O.5%的HNO3水溶液中加入Ig羊棲菜多糖，得到多糖溶液；
二、將亞硒酸鈉加入到多糖溶液中，得到混合溶液，混合溶液中亞硒酸鈉與羊棲菜多糖的質(zhì)量比為0.4 I. 2g lg，然后在50°C 90°C水浴的條件下振蕩反應(yīng)6 10h，冷卻，然后加入NaCO3調(diào)節(jié)pH值為5 6，離心，然后透析至透析液加入抗壞血酸檢測后無紅色停止透析，加熱濃縮，冷凍干燥，即得羊棲菜硒多糖。
具體實施方式
二 本實施方式與具體實施方式
一不同的是步驟二中所述的混合溶液中亞硒酸鈉與羊棲菜多糖的質(zhì)量比為O. 6g lg。其它與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
三本實施方式與具體實施方式
一不同的是步驟二中所述的混合溶液中亞硒酸鈉與羊棲菜多糖的質(zhì)量比為O. 9g Ig0其它與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
四本實施方式與具體實施方式
一不同的是步驟二中所述的混合溶液中亞硒酸鈉與羊棲菜多糖的質(zhì)量比為Ig Igo其它與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
五本實施方式與具體實施方式
一不同的是步驟二中在60°C水浴的條件下振蕩反應(yīng)。其它與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
六本實施方式與具體實施方式
一不同的是步驟二中在70°C水浴的條件下振蕩反應(yīng)。其它與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
七本實施方式與具體實施方式
一不同的是步驟二中在80°C水浴的條件下振蕩反應(yīng)。其它與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
八本實施方式與具體實施方式
一不同的是步驟二中的振蕩反應(yīng)時間為7h。其它與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
九本實施方式與具體實施方式
一不同的是步驟二中的振蕩反應(yīng)時間為8h。其它與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
十本實施方式與具體實施方式
一不同的是步驟二中的振蕩反應(yīng)時間為9h。其它與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
i^一 本實施方式羊棲菜硒多糖的制備方法按照以下步驟進(jìn)行
一、向IOOml體積分?jǐn)?shù)為O.5%的HNO3水溶液中加入Ig羊棲菜多糖，得到多糖溶液；
二、將亞硒酸鈉加入到多糖溶液中，得到混合溶液，混合溶液中亞硒酸鈉與羊棲菜多糖的質(zhì)量比為0.8g lg，然后在70°C水浴的條件下振蕩反應(yīng)8h，冷卻，然后加入NaCO3調(diào)節(jié)PH值為5，離心，然后透析至透析液加入抗壞血酸檢測后無紅色停止透析，加熱濃縮，冷凍干燥，即得羊棲菜硒多糖。由圖18-20可知在同一濃度(如都在0. 2mg/ml或都在0. 02mg/ml)下，羊棲菜硒多糖的粒徑要比未硒結(jié)合的羊棲菜多糖的粒徑小，一方面說明經(jīng)過反應(yīng)，羊棲菜多糖部分被水解成單糖或者寡糖，這些單糖或寡糖通過透析膜除去，因此羊棲菜硒多糖粒徑比未結(jié)合的羊棲菜多糖粒徑小；另一方面，一般來說，粒徑變小后更加容易被胃腸道吸收和利用。在不同濃度時羊棲菜硒多糖在兩個濃度項下的粒徑是不一樣的，稀的溶液中粒徑更加小，說明羊棲菜硒多糖在稀溶液中分散的更開，也更加利于吸收。采用下述實驗驗證各因素對制備羊棲菜硒多糖的影響
實驗ー
羊棲菜硒多糖的制備方法按照以下步驟進(jìn)行
一、向IOOml體積分?jǐn)?shù)為0. 5%的HNO3水溶液中加入Ig羊棲菜多糖，得到多糖溶液；
ニ、將亞硒酸鈉加入到多糖溶液中，得到混合溶液，混合溶液中亞硒酸鈉與羊棲菜多糖的質(zhì)量比為0. 8g lg，然后在70°C水浴的條件下分別振蕩反應(yīng)6し711、811、911、1011，冷卻，然后加入NaCO3調(diào)節(jié)pH值為5，離心，然后透析至透析液加入抗壞血酸檢測后無紅色停止透析，加熱濃縮，冷凍干燥，即得羊棲菜硒多糖。由圖9可知隨著振蕩反應(yīng)時間的增加，羊棲菜硒多糖的硒含量不斷提高，但8h之后硒含量降低，主要因為隨著振蕩反應(yīng)時間延長，多糖在酸性環(huán)境下水解，因此選取7 9h為振蕩反應(yīng)優(yōu)化條件。實驗ニ
羊棲菜硒多糖的制備方法按照以下步驟進(jìn)行
一、向IOOml體積分?jǐn)?shù)為0. 5%的HNO3水溶液中加入Ig羊棲菜多糖，得到多糖溶液；
ニ、將亞硒酸鈉加入到多糖溶液中，得到混合溶液，混合溶液中亞硒酸鈉與羊棲菜多糖的質(zhì)量比為0. 8g Ig，然后分別在50°C、60°C、70°C、80°C、90°C水浴的條件下振蕩反應(yīng)8h，冷卻，然后加入NaCO3調(diào)節(jié)pH值為5，離心，然后透析至透析液加入抗壞血酸檢測后無紅色停止透析，加熱濃縮，冷凍干燥，即得羊棲菜硒多糖。由圖10可知，隨著溫度的升高，羊棲菜硒多糖硒含量也隨之増大；但溫度升高到70で之后羊棲菜硒多糖硒含量反而下降，這是因為在高溫下羊棲菜結(jié)構(gòu)被破壞，從而確定提取溫度為70°C 90°C。實驗三
羊棲菜硒多糖的制備方法按照以下步驟進(jìn)行
一、向IOOml體積分?jǐn)?shù)為0. 5%的HNO3水溶液中加入Ig羊棲菜多糖，得到多糖溶液；
ニ、將亞硒酸鈉加入到多糖溶液中，得到混合溶液，混合溶液中亞硒酸鈉與羊棲菜多糖的質(zhì)量比為 0.4 g lg、0.6 g lg、0.8 g lg、1.0 g lg、1.2g lg,然后在 70°C水浴的條件下振蕩反應(yīng)8h，冷卻，然后加入NaCO3調(diào)節(jié)pH值為5，離心，然后透析至透析液加入抗壞血酸檢測后無紅色停止透析，加熱濃縮，冷凍干燥，即得羊棲菜硒多糖。由圖11可知隨著質(zhì)量比増大，羊棲菜硒多糖硒含量也隨之増大；但在亞硒酸鈉與羊棲菜多糖的質(zhì)量比為增至0. Sg Ig之后，羊棲菜硒多糖硒含量上升不明顯，因此確定亞硒酸鈉與羊棲菜多糖的質(zhì)量比為O. 6 l.Og Igo實驗四響應(yīng)曲面實驗
一、3響應(yīng)曲面實驗設(shè)計
通過單因素實驗確定出不同提取溫度、提取時間及液料比時羊棲菜多糖提取的較優(yōu)范圍，利用Box-Behnken中心組合設(shè)計,設(shè)計3因素3水平的響應(yīng)曲面實驗。振蕩反應(yīng)時間(h)、振蕩反應(yīng)溫度(°C)、亞硒酸鈉與羊棲菜多糖質(zhì)量比(g/g)及提取次數(shù)，分別用X1^X 2、X3表示，并以-1、0、+ I代表變量的水平，按方程Xi =( Xi - X。)/ ΛΧ對自變量進(jìn)行編碼，其中，X i為變量的編碼值，Xi為變量的真實值，Xtl為實驗中心點(diǎn)變量的真實值，ΛΧ為變量的變化步長，響應(yīng)值Y為黃芪多糖提取率，實驗因素與水平見表I (中心組合實驗Box Behnken方案設(shè)計的因素及水平編碼)。表I - V V i ； J- p .；
糊_ X!靈蕩歡 時 >0 mmRmmf X3 Ha2Seo3.多糖
__議 ___Cgg1)_
-I76006
O8700.3
+1930U
二、響應(yīng)面實驗結(jié)果及分析
I、實驗結(jié)果
響應(yīng)實驗結(jié)果見表2(羊棲菜硒多糖響應(yīng)曲面方案及結(jié)果)。表2共有17個實驗點(diǎn)，其中的12個為析因點(diǎn)，另5個為零點(diǎn)，自變量取值在Xp X2、X3所構(gòu)成的頂點(diǎn)即為析因點(diǎn)；區(qū)域的中心點(diǎn)為零點(diǎn)，其中零點(diǎn)實驗重復(fù)做5次，用以估算實驗的誤差。表 2
序號卜振蕩反應(yīng)時間/h IX,振蕩反應(yīng)時間/°C|X,Na,SeO,:多糖/(g ·g—1) |硒含量/(mg/g)—
1-I (7) '-I (60)_0 (0.8)2. 1007
2'l (9) '-I (60)_0 (0.8)2.6787
3-I (7) ' I (80)~0 (0.8)2.7755
4'l (9) ■ I (80)_0 (0.8)2.6281
5-I (7) _0 (70)1 (0.6)2.6735
6·1 (9) ~0 (70)1 (0.6)3.0104
7-I (7) ~0 (70)~ I (I. O)2.8999
8·1 (9) ~0 (70)~ I (I. O)3.0398
9O (8) '-I (60)~-1 (0.6)2.3591
10O (8) ' I (80)1 (0.6)2.9632
11O (8) '-I (60)— 1 (1.0)2.7944
12O (8) ' I (80)~ I (I. O)3. 0563
13O (8) 'O (70)~ 0 (0.8)3.2837
14O (8) ~0 (70)~ 0 (0.8)3.2276
15O (8) ~0 (70)~0 (0.8)3.2163
16O (8) 'O (70)_0 (0.8)3.2392
17|θ (8) |θ (70)|θ (0.8)丨3.32852、擬合模型的建立及顯著性分析
利用Design Expert 7. O軟件對表2實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行多元回歸擬合，得羊棲菜硒多糖硒含量(Y)對振蕩反應(yīng)時間(X1)、振蕩反應(yīng)溫度(X2)、亞硒酸鈉與羊棲菜多糖質(zhì)量比(X3)的二次多項回歸模型方程為
Y=3. 26 + 0. IlX1 + 0. 19X2 + 0. 098X3 — 0. ISX1X2 — 0. 049XA — 0. 086X2X3 — 0. SOX12 —0. 4IX22 - 0. 053XS2
對該模型進(jìn)行顯著性檢驗結(jié)果及回歸模型系數(shù)顯著性檢驗結(jié)果見表3 (回歸方程的方差分析結(jié)果)。從表3中可知該模型極顯著(P < 0. 0001) ；C. V. %為2. 08，R2和AdjR2分別為
0.9862和0. 9684，因此說明該模型的擬合度良好。方程中X1J2 J3J1X2 J2X3J12J22對響應(yīng)值的影響非常的顯著，其他因素間的交互影響相對較小。表權(quán)利要求
1.羊棲菜硒多糖的制備方法，其特征在于羊棲菜硒多糖的制備方法按照以下步驟進(jìn)行 一、向IOOml體積分?jǐn)?shù)為0.5%的HNO3水溶液中加入Ig羊棲菜多糖，得到多糖溶液； 二、將亞硒酸鈉加入到多糖溶液中，得到混合溶液，混合溶液中亞硒酸鈉與羊棲菜多糖的質(zhì)量比為0.4 I. 2g lg，然后在50°C 90°C水浴的條件下振蕩反應(yīng)6 10h，冷卻，然后加入NaCO3調(diào)節(jié)pH值為5 6，離心，然后透析至透析液加入抗壞血酸檢測后無紅色停止透析，加熱濃縮，冷凍干燥，即得羊棲菜硒多糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述羊棲菜硒多糖的制備方法，其特征在于步驟二中所述的混合溶液中亞硒酸鈉與羊棲菜多糖的質(zhì)量比為0.6g lg。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述羊棲菜硒多糖的制備方法，其特征在于步驟二中所述的混合溶 液中亞硒酸鈉與羊棲菜多糖的質(zhì)量比為0. Sg Igo
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述羊棲菜硒多糖的制備方法，其特征在于步驟二中所述的混合溶液中亞硒酸鈉與羊棲菜多糖的質(zhì)量比為0.9g lg。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述羊棲菜硒多糖的制備方法，其特征在于步驟二中所述的混合溶液中亞硒酸鈉與羊棲菜多糖的質(zhì)量比為Ig Igo
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述羊棲菜硒多糖的制備方法，其特征在于步驟二中在6(T80°C水浴的條件下振蕩反應(yīng)。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述羊棲菜硒多糖的制備方法，其特征在于步驟二中在70°C水浴的條件下振蕩反應(yīng)。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述羊棲菜硒多糖的制備方法，其特征在于步驟二中的振蕩反應(yīng)時間為7 9h。
9.根據(jù)權(quán)利要求I所述羊棲菜硒多糖的制備方法，其特征在于步驟二中的振蕩反應(yīng)時間為8h。
全文摘要
羊棲菜硒多糖的制備方法，它涉及一種多糖的制備方法。本發(fā)明為了解決解決現(xiàn)有合成硒多糖的方法操作繁瑣、有刺激性氣味及所用試劑有毒的技術(shù)問題。本方法如下一、向100ml體積分?jǐn)?shù)為0.5%的HNO3水溶液中加入1g羊棲菜多糖，得到多糖溶液；二、將亞硒酸鈉加入到多糖溶液中，得到混合溶液，混合溶液中亞硒酸鈉與羊棲菜多糖的質(zhì)量比為0.4～1.2g﹕1g，然后在50℃～90℃的條件下反應(yīng)6～10h，冷卻，然后加入NaCO3調(diào)節(jié)pH值為5～6，離心，然后透析至透析液加入抗壞血酸檢測后無紅色停止透析，加熱濃縮，冷凍干燥，即得羊棲菜硒多糖。本發(fā)明方法操作簡單、無刺激性氣味，所用試劑無毒環(huán)保。
文檔編號C08B37/00GK102850465SQ20121038356
公開日2013年1月2日 申請日期2012年10月11日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月11日
發(fā)明者季宇彬, 于淼, 東方 申請人:哈爾濱商業(yè)大學(xué), 季宇彬