一種板藍(lán)根多糖mpeg-pla聚合物微球制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種板藍(lán)根多糖MPEG-PLA聚合物微球制備方法，采用復(fù)乳法來制備板藍(lán)根多糖MPEG-PLA嵌段共聚物微球，具體步驟為：將多糖溶液加入到MPEG-PLA二氯甲烷溶液的油相中，在高速攪拌下得到乳白色初乳液，將初乳液加入到PVA水溶液中，高速攪拌2-5min，隨后將復(fù)乳液放在磁力攪拌器上以50-200rpm的速度攪拌直至有機(jī)溶劑揮發(fā)完，最后，將所剩乳白液以3000-5000rpm的速度離心15min，棄上清，取沉淀，沉淀經(jīng)三蒸水反復(fù)洗滌3次后，冷凍干燥即得板藍(lán)根多糖MPEG-PLA微球。該方法得到的載藥微球電鏡掃描結(jié)果外形圓滑，顆粒大小均勻，平均粒徑874.3nm，分散系數(shù)為0.749，包封率高達(dá)86%，釋放率高達(dá)79.1%，釋放時間較長，為26天，且緩釋平緩，突釋率較低。
【專利說明】—種板藍(lán)根多糖MPEG-PLA聚合物微球制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種制備載藥微球的方法，特別涉及一種板藍(lán)根多糖MPEG-PLA聚合物微球制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]板藍(lán)根為十字花植物蔣藍(lán)(Isatisindigoticafort)的干燥根，是板藍(lán)根的主要來源。臨床常用中藥，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，味苦，性寒，有清熱解毒，涼血利咽功能。用于溫毒發(fā)斑、舌絳紫暗、痄腮、爛喉丹痧、大頭瘟疫、丹毒、癰腫等癥。
[0003]近年來研究證明板藍(lán)根多糖是板藍(lán)根提取物中含量較多、生物活性較強(qiáng)的一類物質(zhì)。板藍(lán)根多糖具有免疫調(diào)節(jié)功能，對特異性免疫和非特異性免疫、體液免疫或細(xì)胞免疫具有一定的促進(jìn)作用。許益民等已經(jīng)證實腹腔注射板藍(lán)根多糖可顯著促進(jìn)小鼠的免疫功能。同時有報道稱，板藍(lán)根多糖可促進(jìn)小鼠胸腺的發(fā)育和胸腺細(xì)胞的增殖，間接的維持胸腺的微環(huán)境，促進(jìn)T淋巴細(xì)胞、胸腺上皮細(xì)胞分泌胸腺素和細(xì)胞因子，從而提高機(jī)體的免疫力。但板藍(lán)根多糖在動物免疫等實際應(yīng)用方面表現(xiàn)出一定的困難，例如給藥次數(shù)多，費力耗時，多次免疫對機(jī)體造成不良應(yīng)激，免疫增強(qiáng)效果不好等問題，因此迫切需要對多糖的延緩釋放機(jī)制進(jìn)行研究。
[0004]祀向給藥系統(tǒng)(targetingdrugsystem, TDS),是載體將藥物通過局部給藥或全身血液循環(huán)而選擇性地使藥物濃集于靶器官、靶組織、靶細(xì)胞，且療效高、毒副作用小的給藥系統(tǒng)，為第四代藥物劑型，被認(rèn)為是抗癌藥的適宜劑型。該系統(tǒng)所用載體通常是一些高分子材料，有的是天然的，有的是人工合成的。聚乳酸-聚乙二醇共聚物(MPEG-PLA，或PELA)即是常用高分子材料中的一種，它是由聚乳酸(PLA)或其單體經(jīng)一系列反應(yīng)后與聚乙二醇(PEG)反應(yīng)得到的產(chǎn)物。
[0005]聚乳酸(PLA)具有生物無毒、生物可降解性及生物相容性等特點，是近40年來藥物載體研究的熱點之一，已經(jīng)得到美國FDA批準(zhǔn)用于人體，并廣泛地用于組織工程等其他行業(yè)。體內(nèi)代謝研究發(fā)現(xiàn)，PLA在體內(nèi)的中間降解產(chǎn)物為乳酸，經(jīng)三羧酸循環(huán)后降解的終產(chǎn)物為C02和H20，這些產(chǎn)物是人體及動物的正常代謝產(chǎn)物，經(jīng)肺臟和腎臟處理后可以排出到體外。但是，由于PLA是含有大量酯鍵的聚合物，而酯鍵是疏水性基團(tuán)，因此對于親水性藥物的包埋具有很大的難度。為了改變PLA的疏水性性質(zhì)，一方面可以通過改變聚合物表面的電荷來增加其親水性；另一方面也可以通過采用親水性物質(zhì)(如聚乙二醇)對PLA進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，能夠較好的改善PLA的疏水性，增加其對疏水性藥物的負(fù)載。聚乙二醇(PEG)是一種聚醚高分子物質(zhì)除了剛提到的親水性好外，還具有良好的生物相容性。
[0006]微球(microsphere)系指藥物溶解或分散在輔料中形成的微小球狀實體,亦即基質(zhì)骨架微粒。微球的粒徑通常在1_250μπι之間，?；鞈矣谟椭?。藥物制成微球后主要特點是緩釋長效和起靶向作用。一般微球是被動靶向，小于7μπι時一般被肝、脾中巨噬細(xì)胞攝取，大于7-10 μ m的微球通常被肺的最小毛細(xì)管床以機(jī)械濾過的方式截留，被巨噬細(xì)胞攝取進(jìn)入肺組織或肺氣泡中。微球在胃腸道、單核-吞噬細(xì)胞系統(tǒng)或其它管道的運動過程中，可能發(fā)生不均勻分布，包括①不均勻轉(zhuǎn)動不均勻釋放。這就是造成一般的微球載藥體系突釋的原因，而在使用MPEG-PLA共聚物作為藥物載體時，可以有效地減少藥物的突釋現(xiàn)象。
[0007]綜上所述，MPEG-PLA嵌段共聚物以其良好的可生物降解性、生物相容性及兩親性特點，在靶向給藥系統(tǒng)和藥物緩釋系統(tǒng)中有著獨特的優(yōu)勢。我們可以通過改變共聚物中PEG的分子量、含量及共聚物的分子量來調(diào)節(jié)聚合物粒徑大小和分布，從而進(jìn)一步調(diào)節(jié)疏水性藥物或難溶性藥物的釋放速率。再者，對于一些對臟器有毒性的藥物，研究制備出新劑型，在降低其對臟器的毒副作用方面必能起到一定的效果。另外，國內(nèi)外還有學(xué)者將核酸疫苗等包載到MPEG-PLA共聚物內(nèi)，使一些原來因極易被破壞的水溶藥物能夠經(jīng)口腔給藥，而減少藥物對機(jī)體刺激作用。然而要使MPEG-PLA嵌段共聚物得到廣泛應(yīng)用，還必須克服此聚合物制備過程中的難題，目前主要采用的制備方法為開環(huán)聚合法，但此方法步驟中的例如純化過程、催化劑的選用等等都是亟待解決的問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]為解決上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明提出一種板藍(lán)根多糖MPEG-PLA聚合物微球制備方法。
[0009]為達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為:
[0010]一種板藍(lán)根多糖MPEG-PLA聚合物微球制備方法，采用復(fù)乳法來制備板藍(lán)根多糖MPEG-PLA嵌段共聚物微球，其特征在于，具體步驟為:將多糖溶液加入到MPEG-PLA 二氯甲烷溶液的油相中，在高速攪拌下得到乳白色初乳液，將初乳液加入到PVA水溶液中，高速攪拌2—5min，隨后將復(fù)乳 液放在磁力攪拌器上以50—200rpm的速度攪拌直至有機(jī)溶劑揮發(fā)完，最后，將所剩乳白液以3000—5000rpm的速度離心15min，棄上清，取沉淀，沉淀經(jīng)三蒸水反復(fù)洗滌3次后，冷凍干燥即得板藍(lán)根多糖MPEG-PLA微球。
[0011]所述MPEG-PLA嵌段聚合物采用分子量為1000— 5000的MPEG-PLA，MPEG-PLA 二氯甲烷溶液中MPEG-PLA嵌段共聚物濃度為100ug/ml。
[0012]所述板藍(lán)根多糖體水溶液濃度為0.06g/ml ；
[0013]所述PVA水溶液濃度為0.5%。
[0014]所述MPEG-PLA 二氯甲烷溶液:板藍(lán)根多糖水溶液:PVA水溶液體積比為1-10:1-10:1-10。
[0015]所述高速攪拌速度為10000—30000rpm。
[0016]相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的有益效果為:采用復(fù)乳法制備微球:將聚合物溶于與水互不溶的有機(jī)溶劑中，將藥物水溶液(即內(nèi)水相)分散在其中形成水溶性藥物的W/0型乳液，配置含有穩(wěn)定劑和保護(hù)膠的水溶液作為外部水相，將制得W/0型乳液在攪拌的條件下分散到外部水相中形成W/0/W型乳液。經(jīng)蒸發(fā)、過濾、干燥得到載藥微球。該方法得到的載藥微球電鏡掃描結(jié)果外形圓滑，顆粒大小均勻，平均粒徑874.3nm，分散系數(shù)為0.749，包封率高達(dá)86%，釋放率高達(dá)79.1%，釋放時間較長，為26天，且緩釋平緩，突釋率較低。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0017]圖1為板藍(lán)根多糖MPEG-PLA微球累積釋放曲線。[0018]圖2a為實施例中MS2-3微球電鏡。
[0019]圖2b為實施例中MS2-3空白微球電鏡。
[0020]圖2c為實施例中MS2-5微球電鏡。
[0021]圖2d為實施例中MS2-5空白微球電鏡。
[0022]圖2e為實施例中MS6-3微球電鏡。
[0023]圖2f為實施例中MS6-3空白微球電鏡。
[0024]圖2g為實施例中MS6-5微球電鏡。
[0025]圖2h為實施例中MS6-5空白微球電鏡。
【具體實施方式】
[0026]以下結(jié)合具體實施例，對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。
[0027]所述原料如無特別說明均能從公開商業(yè)途徑而得。
[0028]試驗例I微球的制備
[0029]1.1復(fù)乳法制備微球
[0030]本試驗采用復(fù)乳法來制備板藍(lán)根多糖MPEG-PLA聚合物微球:精確稱取1.2g烘干至恒重的板藍(lán)根多糖溶解于20ml蒸餾水中，充分?jǐn)嚢枋蛊渫耆芙?，然后取一定體積多糖溶液加入到20ml含一定溶度的MPEG-PLA 二氯甲烷溶液的油相中，在高速攪拌下得到乳白色初乳液，將初乳液加入到100ml含一定比例的PVA水溶液中，高速攪拌3min，隨后將復(fù)乳液放在磁力攪拌器上以IOOrpm的速度攪拌直至有機(jī)溶劑揮發(fā)完，大約需要12h。最后，將所剩乳白液以4500rpm的速度離心15min,棄上清,取沉淀,沉淀經(jīng)三蒸水反復(fù)洗漆3次后,冷凍干燥即得板藍(lán)根多糖MPEG-PLA微球。4°C保存?zhèn)溆谩?br> [0031]1.2正交工藝設(shè)計
[0032]為獲得板藍(lán)根多糖MPEG-PLA聚合物微球制備的最佳工藝，本試驗設(shè)計了MPEG-PLA(2000)聚合物來包被板藍(lán)根多糖，同時按照四因素三水平的正交表進(jìn)行試驗，如表1。
[0033]表1制備板藍(lán)根多糖MPEG-PLA聚合物微球正交工藝
PVA濃ft 攪拌速度 MPEG-PLAIt 內(nèi)水相體積
[0034]
【權(quán)利要求】
1.一種板藍(lán)根多糖MPEG-PLA聚合物微球制備方法，采用復(fù)乳法來制備板藍(lán)根多糖MPEG-PLA嵌段共聚物微球，其特征在于，具體步驟為:將多糖溶液加入到MPEG-PLA 二氯甲烷溶液的油相中，在高速攪拌下得到乳白色初乳液，將初乳液加入到PVA水溶液中，高速攪拌2—5min，隨后將復(fù)乳液放在磁力攪拌器上以50—200rpm的速度攪拌直至有機(jī)溶劑揮發(fā)完，最后，將所剩乳白液以3000—5000rpm的速度離心15min，棄上清，取沉淀，沉淀經(jīng)三蒸水反復(fù)洗滌3次后，冷凍干燥即得板藍(lán)根多糖MPEG-PLA微球。
2.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述MPEG-PLA嵌段聚合物采用分子量為1000—5000的MPEG-PLA，MPEG-PLA 二氯甲烷溶液中MPEG-PLA嵌段共聚物濃度為IOOug/ml ο
3.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述板藍(lán)根多糖體水溶液濃度為0.06g/ml。
4.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述PVA水溶液濃度為0.5%。
5.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述MPEG-PLA二氯甲烷溶液:板藍(lán)根多糖水溶液:PVA水溶液體積比為1-10:1-10:1-10。
6.如權(quán)利要求1 所述的制備方法，其特征在于，所述高速攪拌速度為10000—30000rpm。
【文檔編號】A61K31/715GK103784410SQ201410038940
【公開日】2014年5月14日 申請日期:2014年1月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月27日
【發(fā)明者】張紅英, 王學(xué)兵, 鄒政耀, 姜濤, 杜芳芳 申請人:河南農(nóng)業(yè)大學(xué)