一種含瑪咖的植物組合物提取方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種含瑪咖的植物組合物提取方法，由瑪咖100g，黃精80g，當(dāng)歸60g，丹參50g作為原料藥制成，采用微波提取方法制備而成，使得含量有很大提高，用量減少，本發(fā)明還提供了含瑪咖的植物組合物在制備抑制大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
【專利說明】一種含瑪咖的植物組合物提取方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥制劑【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種含瑪咖的植物組合物提取方法及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]含瑪咖的植物組合物由瑪咖100g，黃精80g，當(dāng)歸60g，丹參50g作為原料藥制成，目前的提取方法是加水煎煮二次，每次2-3小時(shí)，合并煎液，濾過，濃縮成稠膏，制粒，干燥，壓制成1000片，包糖衣，即得，能抗疲勞。
[0003]現(xiàn)有技術(shù)中，尚未有含瑪咖的植物組合物在提取制備方面采用微波技術(shù)的報(bào)道，而采用水煎煮的方法，工藝粗糙、落后，雜質(zhì)多，導(dǎo)致患者用量過大，不方便服用，嚴(yán)重影響了本品在臨床上應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]發(fā)明目的:為了解決上述問題，本發(fā)明的目的在于提供一種含瑪咖的植物組合物提取方法。
[0005]本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種含瑪咖的植物組合物在制備抑制大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
[0006]技術(shù)方案:本發(fā)明的目的是通過如下的方案實(shí)現(xiàn)的:
[0007]一種含瑪咖的植物組合物提取方法，植物組合物由瑪咖100g，黃精80g，當(dāng)歸60g，丹參50g作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成:取上述原料藥，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W,萃取2次,每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成片劑、膠囊或顆粒劑。
[0008]上述一種含瑪咖的植物組合物提取方法，制備方法中微波萃取功率為500W，每次萃取6分鐘。
[0009]一種含瑪咖的植物組合物在制備抑制大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，含瑪咖的植物組合物由瑪咖100g，黃精80g，當(dāng)歸60g，丹參50g作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成:取上述原料藥，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成片劑、膠囊或顆粒劑。
[0010]上述一種含瑪咖的植物組合物在制備抑制大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，制備方法中所述微波萃取功率為500W，每次萃取6分鐘。
[0011 ] 現(xiàn)有技術(shù)中，含瑪咖的植物組合物每片0.25g，每次4片，一日3次，采用本發(fā)明制備成的含瑪咖的植物組 合物每片0.25g，但含有的藥材量是原來的2倍，因此每次僅需2片，一日服用3次，在具有更多活性成分的條件下大大減少了服用量。【具體實(shí)施方式】
[0012]以下通過實(shí)施例形式，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
[0013]實(shí)施例1
[0014]取瑪咖100g，黃精80g，當(dāng)歸60g，丹參50g，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成片劑，每片0.25g。
[0015]實(shí)施例2
[0016]取瑪咖100g，黃精80g，當(dāng)歸60g，丹參50g，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成膠囊。 [0017]實(shí)施例3
[0018]取瑪咖100g，黃精80g，當(dāng)歸60g，丹參50g，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成顆粒劑。
[0019]本發(fā)明中瑪咖為十字花科植物瑪卡獨(dú)行菜的地下部分根，其余為藥典品種。
[0020]實(shí)施例4:含瑪咖的植物組合物抑制大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究資料I實(shí)驗(yàn)材料
[0021]1.1實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞株
[0022]大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞，南京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞庫，DMEM+10%FBS常規(guī)培養(yǎng)。
[0023]1.2實(shí)驗(yàn)藥物
[0024]研究藥物:本發(fā)明含瑪咖的植物組合物:按實(shí)施例1方法制備。
[0025]藥液儲(chǔ)液:稱取IOOmg含瑪咖的植物組合物，溶于5ml無水乙醇中，0.2 μ m濾器過濾，500μ1 doff管分裝，-20°c存儲(chǔ)，同時(shí)0.2μπι濾器過濾無水乙醇以備對(duì)照組之用。1.3實(shí)驗(yàn)試劑
[0026]DMEM (GIBC0 公司 Cat.N0.12100_061Lot.N0.758137);胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot.N0.100419)；NaHC03 (上海久億化學(xué)試劑有限公司Cat.N0.11810_033Lot.N0.1088387)；Trypsin (AMRESC0 公司批號(hào):2010/04)；EDTA (AMRESC0 公司批號(hào):2009/10);Penicillin G Sodium Salt(AMRESC0公司批號(hào):2010242);Str印tomycin SulfateCAMRESCO公司批號(hào):2010382);無水乙醇(南京化學(xué)試劑有限公司批號(hào):080310182);MTT(Biosharp批號(hào):0793) ; PBS (實(shí)驗(yàn)室自配)；1.4實(shí)驗(yàn)器材
[0027]萊卡倒置顯微鏡(德國Leica型號(hào):DM1L);可見-紫外光微孔板檢測儀(美國MD公司型號(hào):SPECTRA MAX190) ；C02培養(yǎng)箱(FORMA型號(hào):3111);超凈臺(tái)(蘇凈集團(tuán)安泰公司制造型號(hào):SW-CJ-ZFD);純水儀(美國Spring公司型號(hào):S/N020579);精密移液器(法國吉爾森公司型號(hào):P2);電子天平(德國賽多利斯有限公司型號(hào):BT323S);全自動(dòng)高壓滅菌鍋(日本SANYO公司型號(hào):MLS-3020);臺(tái)式電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海精密實(shí)驗(yàn)設(shè)備公司型號(hào):DHG9123A);冰箱(西門子公司型號(hào):KG18V21TI);液氮罐(CBS型號(hào):2001);低速離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠型號(hào):ΚΑ-1000) ;0.2μπι濾器(MILLIPORE型號(hào):SLGP033RB) ;10cm培養(yǎng)皿(NEST公司)、96孔培養(yǎng)板(NEST公司)；細(xì)胞計(jì)數(shù)板；離心管、移液管、Tips若干。
[0028]2實(shí)驗(yàn)方法
[0029]I)大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞用DMEM+10%FBS于37°C、5%C02進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)(10cm培養(yǎng)皿)，當(dāng)細(xì)胞生長至對(duì)數(shù)期時(shí)，收集細(xì)胞，棄去培養(yǎng)液，PBS輕洗3遍，加入3ml0.25%胰蛋白酶-0.049ffiDTA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培養(yǎng)基中和反應(yīng)，吹打細(xì)胞后將其轉(zhuǎn)入離心管中，1000rpm離心5min，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度3X 104個(gè)/ml。2)將細(xì)胞種入96孔培養(yǎng)板中，每孔加入細(xì)胞懸液180 μ 1，培養(yǎng)板放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中(37°C，5%C02)常規(guī)培養(yǎng)。
[0030]3)根據(jù)細(xì)胞生長情況，一般長至50%_70%，加入含瑪咖的植物組合物溶液，繼續(xù)培養(yǎng) 24h。
[0031]4) 24h 后加入 20 μ I MTT 溶液(5mg/ml，即 0.5%MTT)，繼續(xù)培養(yǎng) 4h。
[0032]5) 4h后扣板法倒去上清，用吸水紙輕輕拍干，每孔加入200 μ I 二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩lOmin，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀490nm處測量各孔的吸光值。6)同時(shí)設(shè)置本底(不加細(xì)胞，只加培養(yǎng)液)，對(duì)照孔(細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜)，每組設(shè)定6個(gè)復(fù)孔。
[0033]7)結(jié)果以藥物對(duì) 細(xì)胞的抑制率表示:
[0034]細(xì)胞增值抑制率(％)=(對(duì)照孔OD值-給藥孔OD值)/對(duì)照孔OD值X 100%。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。
[0035]3統(tǒng)計(jì)處理
[0036]采用Microsoft Excel2003軟件中的相關(guān)分析和Student t檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)以mean+ S.D.表不。
[0037]4實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0038]MTT法實(shí)驗(yàn)后統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，當(dāng)劑量達(dá)到5mg/ml時(shí)，對(duì)大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞增殖抑制有差異(P〈0.05)，劑量在10mg/ml時(shí)該差異具有顯著性(P〈0.01)，當(dāng)劑量達(dá)到15-20mg/ml時(shí)有極顯著性差異(Ρ〈0.001)。
[0039]表1含瑪咖的植物組合物對(duì)大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞增殖抑制影響研究
[0040]這土 SI〕)[0041]
【權(quán)利要求】
1.一種含瑪咖的植物組合物提取方法，其特征在于植物組合物由瑪咖100g，黃精80g，當(dāng)歸60g,丹參50g作為原料藥制成,制備方法由下列步驟組成:取上述原料藥,粉碎,加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成片劑、膠囊或顆粒劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種含瑪咖的植物組合物提取方法，其特征在于制備方法中微波萃取功率為500W，每次萃取6分鐘。
3.一種含瑪咖的植物組合物在制備抑制大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，其特征在于含瑪咖的植物組合物由瑪咖100g，黃精80g，當(dāng)歸60g，丹參50g作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成:取上述原料藥，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提 取物，加常規(guī)輔料制備成片劑、膠囊或顆粒劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述一種含瑪咖的植物組合物在制備抑制大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，其特征在于制備方法中所述微波萃取功率為500W，每次萃取6分鐘。
【文檔編號(hào)】A61K36/8969GK103784738SQ201410084330
【公開日】2014年5月14日 申請(qǐng)日期:2014年3月10日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月10日
【發(fā)明者】李正梅 申請(qǐng)人:李正梅