一種抑制肝癌mhcc-97h細胞增殖的中藥組合物及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種抑制肝癌MHCC-97H細胞增殖的中藥組合物，由以下重量百分含量的各原料組分組成：白花菜子40-80%、仙靈脾1-20%、香菇1-10%、山楂1-10%、山藥多糖1-20%。將中藥組合物中的各組分按照比例混勻，粉碎，熬制，過濾，高壓滅菌、分裝；通過體外培養(yǎng)肝癌MHCC-97H細胞，添加中藥組合物，用MTT檢測癌細胞增殖情況，用Transwell法檢測癌細胞的轉(zhuǎn)移情況。通過細胞實驗驗證本發(fā)明的中藥組合物能明顯抑制肝癌MHCC-97H細胞的增殖，抑制增殖率為86%；本發(fā)明的中藥組合物明顯抑制肝癌MHCC-97H細胞的轉(zhuǎn)移，抑制癌細胞轉(zhuǎn)移率為84%。
【專利說明】一種抑制肝癌MHCC-97H細胞增殖的中藥組合物及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及到一種治療肝癌的中藥組合物，具體說是一種抑制肝癌MHCC-97H細胞增殖的中藥組合物及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]中國是肝癌高發(fā)國，每年新發(fā)病例超過35萬，其中約32萬死亡，原發(fā)性肝癌是臨床上最為常見的惡性腫瘤之一，以肝細胞癌為主(90%)，肝細胞癌(hepatocellularcarcinoma, HCC)是我國常見的惡性腫瘤,其死亡率非常之高，列癌癥死亡的第二位，且發(fā)病率不斷上升。
[0003]目前治療肝癌的常用方法是外科手術(shù)、放療、化療和中藥的保守治療。前幾種方法對于人體損傷較大，治療效果不是很理想；由于肝細胞癌起病隱匿、侵襲性高和生長迅速快，大多數(shù)患者就診時即已達到局部晚期或遠處轉(zhuǎn)移，不適合手術(shù)切除和局部治療，中藥的保守治療能很大的提高腫瘤患者的生存質(zhì)量，這種治療方法已經(jīng)被人們廣泛接受。
[0004]MHCC-97H細胞為人的高致癌高轉(zhuǎn)移性肝癌細胞株，常被用于體外實驗研究藥物的毒理及治療效果。但目前針對肝癌細胞的中藥治療效果仍不理想。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種抑制肝癌MHCC-97H細胞增殖和轉(zhuǎn)移的中藥組合物，選取肝癌MHCC-97H細胞為測試中藥組合物的實驗細胞株，為開發(fā)特效抗癌藥物提供技術(shù)理論和技術(shù)支持。
[0006]本發(fā)明的目的及解決其技術(shù)問題是采用以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的。依據(jù)本發(fā)明提出的一種抑制肝癌MHCC-97H細胞增殖的中藥組合物，由以下重量百分含量的各原料組分組成:
[0007]白花菜子40-80%、仙靈脾1-20%、香菇1_10%、山楂1_10%、山藥多糖1_20%。
[0008]本發(fā)明的中藥組合物，由以下重量百分含量的各原料組分組成:
[0009]白花菜子50-70%、仙靈脾5-10%、香菇5_10%、山楂5_10%、山藥多糖5_10%。
[0010]本發(fā)明的中藥組合物，由以下重量百分含量的各原料組分組成:
[0011]白花菜子60%、仙靈脾10%、香菇10%、山楂10%、山藥多糖10%。
[0012]另外，本發(fā)明抑制肝癌MHCC-97H細胞增殖的中藥組合物的制備方法，包括步驟:
[0013]分別將上述5味中藥按照各原料配方的重量百分比例混勻，粉碎，熬制，過濾，高壓滅菌、分裝。
[0014]進一步而言，本發(fā)明中藥組合物的制備方法，包括步驟:將各原料組分配方分別加水蒸煮，得到提取物，并可加入輔料進行制劑的制備。
[0015]進一步而言，所 述輔料包含水果粉、食用香精、甜味劑、酸味劑、填充劑、潤滑劑、防腐劑、助懸劑、食用色素、稀釋劑及增塑劑，制成口服劑型。[0016]進一步而言，該中藥組合物可制成顆粒劑、片劑、散劑、膠囊劑、蜜丸或貼劑。
[0017]借由上述技術(shù)方案，本發(fā)明具有的優(yōu)點和有益效果是:
[0018]1、本發(fā)明的中藥組合物配方具有組方嚴謹、療效確切，不易復(fù)發(fā)。其中的白花菜子是主要藥物，具有祛風散寒，活血止痛功效。仙靈脾，別名:短角淫羊藿、三枝九葉草，具有增強機體免疫功能的作用；香菇、山楂、山藥多糖，具有益氣補脾、滋補作用、能助消化、補虛勞益氣力，并有緩瀉祛痰等作用。
[0019]2、上述五味中藥合用，共奏清熱解毒、活血化瘀、提高機體免疫力之功效，進而達到抑制腫瘤生長，治療肝癌的目的。
[0020]3、本發(fā)明抑制肝癌MHCC-97H細胞增殖和轉(zhuǎn)移的中藥組合物，選取肝癌MHCC-97H細胞為測試中藥組合物的實驗細胞株，為開發(fā)特效抗癌藥物提供技術(shù)理論和技術(shù)支持。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0021]圖1是本發(fā)明的中藥組合物對肝癌MHCC-97H細胞增殖的抑制作用示意圖。
【具體實施方式】
[0022]以下經(jīng)通過具體較佳實施例結(jié)合附圖對本發(fā)明作進一步詳細說明，但本發(fā)明并不僅限于以下的實施例。
[0023]實施例1
[0024]一種抑制肝癌MHCC-97H細胞增殖的中藥組合物，由以下重量百分含量的各原料組分組成:`[0025]白花菜子40%、仙靈脾20%、香菇10%、山楂10%、山藥多糖20%。
[0026]將中藥組合物中的各組分按照比例混勻，粉碎，熬制，過濾，高壓滅菌、分裝；通過體外培養(yǎng)肝癌MHCC-97H細胞，添加中藥組合物，用MTT檢測癌細胞增殖情況，用Transwell法檢測癌細胞的轉(zhuǎn)移情況。
[0027]通過細胞實驗驗證本發(fā)明的中藥組合物能明顯抑制肝癌MHCC-97H細胞的增殖，抑制增殖率為75% ;本發(fā)明的中藥組合物明顯抑制肝癌MHCC-97H細胞的轉(zhuǎn)移，抑制癌細胞轉(zhuǎn)移率為74%。
[0028]實施例2
[0029]一種抑制肝癌MHCC-97H細胞增殖的中藥組合物，由以下重量百分含量的各原料組分組成:
[0030]白花菜子80%、仙靈脾5%、香菇5%、山楂5%、山藥多糖5%。
[0031]將中藥組合物中的各組分按照比例混勻，粉碎，熬制，過濾，高壓滅菌、分裝；通過體外培養(yǎng)肝癌MHCC-97H細胞，添加中藥組合物，用MTT檢測癌細胞增殖情況，用Transwell法檢測癌細胞的轉(zhuǎn)移情況。
[0032]通過細胞實驗驗證本發(fā)明的中藥組合物能明顯抑制肝癌MHCC-97H細胞的增殖，抑制增殖率為80% ;本發(fā)明的中藥組合物明顯抑制肝癌MHCC-97H細胞的轉(zhuǎn)移，抑制癌細胞轉(zhuǎn)移率為75%。
[0033]實施例3
[0034]一種抑制肝癌MHCC-97H細胞增殖的中藥組合物，由以下重量百分含量的各原料組分組成:
[0035]白花菜子70%、仙靈脾10%、香菇5%、山楂5%、山藥多糖10%。
[0036]將中藥組合物中的各組分按照比例混勻，粉碎，熬制，過濾，高壓滅菌、分裝；通過體外培養(yǎng)肝癌MHCC-97H細胞，添加中藥組合物，用MTT檢測癌細胞增殖情況，用Transwell法檢測癌細胞的轉(zhuǎn)移情況。
[0037]通過細胞實驗驗證本發(fā)明的中藥組合物能明顯抑制肝癌MHCC-97H細胞的增殖，抑制增殖率為86% ;本發(fā)明的中藥組合物明顯抑制肝癌MHCC-97H細胞的轉(zhuǎn)移，抑制癌細胞轉(zhuǎn)移率為84%。
[0038]效果應(yīng)用試驗例
[0039]1、一種抑制肝癌MHCC-97H細胞增殖的中藥組合物的制備
[0040]將本發(fā)明中涉及到的中藥組合物的成分按照如下比例混勻:白花菜子60%、仙靈脾10%、香菇10%、山楂10%、山藥多糖10%，最終總重量100g，用粉碎機粉碎，加1.5升水熬制2小時，剩余I升液體時，四層紗布過濾、高壓滅菌、分裝成100毫升/瓶，此時的藥物濃度為100g/升。
[0041 ] 2、中藥組合物對肝癌MHCC-97H細胞增殖的抑制作用
[0042]將肝癌MHCC-97H細胞以細胞數(shù)5X 104/mL接種于96孔板，細胞培養(yǎng)24小時后，添加中藥組合物，設(shè)置3個濃度梯度，中藥組合物的最終濃度為:lg/L、0.1g/L、0.01g/L,以生理鹽水作為對照，每組做3個復(fù)孔，細胞培養(yǎng)24小時、48小時、72小時后分別用于MTT測定。MTT檢測前加入5mg/mL MTT溶液，4h后以DMSO溶解MTT，并于492nm處測定吸收度(A)值。
[0043]MTT檢測結(jié)果參見圖1所示，圖1顯示相比對照組，加藥能明顯抑制腫瘤細胞的增殖。
[0044]3、中藥組合物對肝癌MHCC-97H細胞轉(zhuǎn)移的抑制作用
[0045]取對數(shù)生長期細胞，胰酶消化、計數(shù)接種6孔板，每孔接種細胞IXlO5個，待細胞生長至80%融合度進行中藥組合物處理，中藥組合物的最終濃度為:lg/L、0.1g/L、0.01g/L,以生理鹽水作為對照，每組做3個復(fù)孔。
[0046]中藥處理24小時后，取細胞I X IO6個細胞懸液IOOul加入Transwell小室(孔徑8um)，24孔板下室加入600ul完全培養(yǎng)基，培養(yǎng)細胞過夜。然后取出Transwell小室，棄去孔中培養(yǎng)液，用PBS洗2遍，甲醇固定15-30分鐘，0.4%結(jié)晶紫染色20min，用PBS洗3遍，用棉球輕輕擦掉上層未遷移細胞，顯微鏡下隨機五個視野觀察細胞，記數(shù)。
[0047]實驗結(jié)果統(tǒng)計如下表格I所示。
[0048]表1中藥組合物對肝癌MHCC-97H細胞轉(zhuǎn)移的抑制
[0049]
【權(quán)利要求】
1.一種抑制肝癌MHCC-97H細胞增殖的中藥組合物，其特征在于:由以下重量百分含量的各原料組分組成: 白花菜子40-80%、仙靈脾1-20%、香菇1-10%、山楂1-10%、山藥多糖1_20%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抑制肝癌MHCC-97H細胞增殖的中藥組合物，其特征在于:由以下重量百分含量的各原料組分組成: 白花菜子50-70%、仙靈脾5-10%、香菇5-10%、山楂5_10%、山藥多糖5_10%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抑制肝癌MHCC-97H細胞增殖的中藥組合物，其特征在于:由以下重量百分含量的各原料組分組成: 白花菜子60%、仙靈脾10%、香菇10%、山楂10%、山藥多糖10%。
4.權(quán)利要求1-3中任一項所述的抑制肝癌MHCC-97H細胞增殖的中藥組合物的制備方法，其特征在于: 分別將上述5味中藥按照各原料配方的重量百分比例混勻，粉碎，熬制，過濾，高壓滅菌、分裝。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的抑制肝癌MHCC-97H細胞增殖的中藥組合物的制備方法，其特征在于:將各原料組分配方混合粉碎后，加水蒸煮，得到提取物，并可加入輔料進行制劑的制備。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的抑制肝癌MHCC-97H細胞增殖的中藥組合物的制備方法，其特征在于:所述輔料包含水果粉·、食用香精、甜味劑、酸味劑、填充劑、潤滑劑、防腐劑、助懸劑、食用色素、稀釋劑及增塑劑，制成口服劑型。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的抑制肝癌MHCC-97H細胞增殖的中藥組合物的制備方法，其特征在于:該中藥組合物可制成顆粒劑、片劑、散劑、膠囊劑、蜜丸或貼劑。
【文檔編號】A61P35/00GK103816250SQ201410049314
【公開日】2014年5月28日 申請日期:2014年2月12日 優(yōu)先權(quán)日:2014年2月12日
【發(fā)明者】張茂雷, 劉建軍, 朱芳芳 申請人:廣州達恩基因科技有限公司