N-乙?；?5-甲氧基色胺或其類似物用于促進(jìn)胚胎植入機(jī)制的應(yīng)用、以及相關(guān)組合物和培養(yǎng)基的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及N-乙?；?5-甲氧基色胺(褪黑激素)和/或其類似物的應(yīng)用，以及相關(guān)的組合物、培養(yǎng)基和醫(yī)療器械，所述N-乙?；?5-甲氧基色胺(褪黑激素)和/或其類似物通過(guò)給需要治療的雌性哺乳動(dòng)物受試者進(jìn)行有效量的局部給藥而用于在醫(yī)療或獸醫(yī)領(lǐng)域的輔助生殖中促進(jìn)胚胎植入機(jī)制，特別是用于防止植入子宮失敗。
【專利說(shuō)明】N-乙?；?5-甲氧基色胺或其類似物用于促進(jìn)胚胎植入機(jī) 制的應(yīng)用、以及相關(guān)組合物和培養(yǎng)基

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及N-乙?；?5-甲氧基色胺（褪黑激素）和/或其類似物的應(yīng)用，以及 相關(guān)的組合物、培養(yǎng)基和醫(yī)療器械，所述N-乙?；?5-甲氧基色胺（褪黑激素）和/或其 類似物通過(guò)給需要治療的雌性哺乳動(dòng)物受試者進(jìn)行有效量的局部給藥而用于在醫(yī)療或獸 醫(yī)領(lǐng)域的輔助生殖中促進(jìn)胚胎植入機(jī)制，特別是用于防止植入子宮失敗。

【背景技術(shù)】
[0002] 人類胚胎植入子宮是一個(gè)復(fù)雜的機(jī)制，同時(shí)既涉及到胚胎，又涉及到子宮內(nèi)膜上 皮細(xì)胞。添附（apposition)、粘附和侵入這些階段涉及到多種分子（其在此過(guò)程中發(fā)揮了 獨(dú)特的作用），懷孕和子宮內(nèi)膜之間的分子對(duì)話暗示著細(xì)胞之間以及細(xì)胞和生物化學(xué)因子 之間的相互作用。
[0003] 如果合適地表達(dá)或抑制，這些機(jī)制有助于確定子宮內(nèi)膜對(duì)胚胎的容受性或非容受 性狀態(tài)。
[0004] 子宮內(nèi)膜容受性或非容受性的狀態(tài)盡管是眾所周知的概念，但是在臨床上難以確 定：子宮內(nèi)膜組織學(xué)正常并不一定意味著其功能正常；另一方面，特定的子宮內(nèi)膜結(jié)構(gòu)（稱 為胞飲突）的時(shí)間和空間表達(dá)明確地指示了其本身的容受狀態(tài)。
[0005] 植入是一個(gè)復(fù)雜的信號(hào)級(jí)聯(lián)過(guò)程，它對(duì)于產(chǎn)生懷孕至關(guān)重要。據(jù)推測(cè)，在卵巢信號(hào) 的作用下有大量的分子介體參與了胚胎-子宮內(nèi)膜之間的相互作用。這些介體包括各種分 子，例如激素、細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子、脂質(zhì)，粘附分子及其它（1)。
[0006] 醫(yī)學(xué)輔助生殖（MR)技術(shù)中的植入失敗仍然是一個(gè)懸而未決的問題，它通常被認(rèn) 為是健康女性不孕的主要原因之一。考慮到MR技術(shù)植入胚胎成功率在25%左右，認(rèn)為2/3 的失敗是由于子宮容受性不足而造成（認(rèn)為1/3由胚胎造成）（2)。
[0007] 子宮內(nèi)膜接受胚泡侵入的時(shí)間是有限的，其被定義為"植入窗"。使"排卵-胚胎 生長(zhǎng)的第一階段-用于植入的子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞的細(xì)胞修飾"之間同步化的"對(duì)話"受到一 系列激素和生化信使的控制。
[0008] 在"植入窗"過(guò)程中，子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞通過(guò)激素和生化分子的控制表達(dá)一些被稱 為胞飲突的結(jié)構(gòu)，該結(jié)構(gòu)可以使胚泡粘附和侵入。借助電子顯微鏡，植入窗可以由胞飲突的 最大表達(dá)來(lái)表征。
[0009] 認(rèn)為胞飲突的形成是子宮內(nèi)膜容受性的特異性標(biāo)記，它們約在排卵一周后出現(xiàn) (但是它們的完全表達(dá)在不同病人之間有所改變）并且似乎只保持一天（4)。
[0010] 胞飲突的表達(dá)與孕酮血漿水平的升高直接正相關(guān)（5)。
[0011] 被科學(xué)團(tuán)體一致接受的與胞飲突的表達(dá)相關(guān)的子宮內(nèi)膜容受性或"植入窗"的觀 點(diǎn)幾十年來(lái)都是致力于解決輔助生殖相關(guān)的難題的科學(xué)家的研究主題。
[0012] 總結(jié)：孕前期激素孕酮是主要介體，并且圍繞其作用還有很多其它介體可促進(jìn)植 入的發(fā)生。
[0013] 根據(jù)上文所述可知，通過(guò)輔助生殖技術(shù)受孕的困難主要?dú)w因于我們對(duì)植入現(xiàn)象認(rèn) 識(shí)的不足。
[0014] 由此明顯可知，也鑒于在輔助生殖領(lǐng)域中的許多立法限制，優(yōu)化植入階段是非常 必要的。
[0015] 本發(fā)明的作者發(fā)現(xiàn)N-乙酰基-5-甲氧基色胺（褪黑激素）是與黃體酮一起能夠 在胞飲突的表達(dá)中具有關(guān)鍵作用的介體之一，其對(duì)胚胎著床具有非常積極的作用。
[0016] 褪黑激素由松果體（一種被光控制的神經(jīng)內(nèi)分泌腺）合成；黑暗的環(huán)境會(huì)促進(jìn)其 合成和分泌。
[0017] 褪黑激素的使用不存在副作用或劑量過(guò)量的問題，并且也沒有文獻(xiàn)報(bào)道禁忌癥 (6)。
[0018] 褪黑激素的優(yōu)點(diǎn)是已知的，它可以應(yīng)用于不同的過(guò)程，可積極地影響植入。此外， 在這方面，子宮內(nèi)膜癌的風(fēng)險(xiǎn)與具有確定的保護(hù)作用的褪黑激素的血清水平是成反比的。
[0019] 一些研究人員已經(jīng)證明（7)，褪黑激素能抑制子宮內(nèi)膜非典型細(xì)胞的增值，該細(xì)胞 被稱為Ishikawa，可引起子宮內(nèi)膜癌。研究小組通過(guò)褪黑激素的放射性配體和拮抗劑（例 如2-苯基-N-乙酰色胺（Iuzindole))的實(shí)驗(yàn)證明，褪黑激素的抑制作用是通過(guò)存在于 Ishikawa增殖細(xì)胞的細(xì)胞膜中的MT2受體產(chǎn)生的。
[0020] 另一個(gè)需要考慮的決定因素是絕經(jīng)期，在這個(gè)時(shí)期褪黑激素的產(chǎn)生減少，并且的 確，此時(shí)患子宮內(nèi)膜癌的風(fēng)險(xiǎn)較高。
[0021] 例如，體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)（6,8)研究表明，褪黑激素具有很強(qiáng)的抗氧化作用，所述作 用在保護(hù)細(xì)胞免受由于羥基自由基的毒性以及其它代謝細(xì)胞產(chǎn)物（來(lái)源于退化或增殖代 謝中的改變、以及來(lái)源于或?yàn)榱酥|(zhì)氧化）而導(dǎo)致的氧化損傷方面比甘露醇、谷胱甘肽和 維生素 E更高。
[0022] 此外，褪黑激素（9-10)具有更重要的抗雌激素性質(zhì)，并且刺激與雌激素本身的作 用相反的孕酮的產(chǎn)生（高水平的雌激素與輔助生殖技術(shù)最差的結(jié)果相關(guān)）（11)。
[0023] 在這方面，指出在MAR周期中通過(guò)促性腺激素誘導(dǎo)的超排卵使得高雌激素化并造 成子宮內(nèi)膜增生增加，這是上述提到的子宮內(nèi)膜癌的重要風(fēng)險(xiǎn)因素。
[0024] -些研究者（12)認(rèn)為，在人絨毛膜促性腺激素（HCG)和褪黑激素之間存在協(xié)同作 用，的確，在人絨毛膜促性腺激素的排卵高峰后6-7天，通過(guò)特別是增加孕酮的產(chǎn)生（體內(nèi) 和體外）會(huì)提高褪黑激素的水平。
[0025] 在這方面，強(qiáng)調(diào)了褪黑激素的排卵后高峰是如何與子宮內(nèi)膜植入窗以及胚泡的形 成（胚胎生長(zhǎng)的階段，其中發(fā)生著床入子宮）保持完全同步的。褪黑激素與孕酮之間的正 相關(guān)性以及褪黑激素與雌二醇之間的負(fù)相關(guān)性會(huì)被hCG加強(qiáng)。的確，在后者缺乏的情況下， 褪黑激素對(duì)孕酮產(chǎn)生的影響非常弱。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0026] 本發(fā)明的一個(gè)目的是提供N-乙?；?5-甲氧基色胺或其類似物，其通過(guò)給需要治 療的雌性哺乳動(dòng)物受試者進(jìn)行有效量的局部給藥而用于在醫(yī)療或獸醫(yī)領(lǐng)域的輔助生殖中 防止植入子宮失敗。
[0027] 優(yōu)選地，所述N-乙?；?5-甲氧基色胺的類似物選自阿戈美拉汀、6-羥基-褪黑 激素、5-羥色胺、5-羥色氨酸或它們的衍生物。
[0028] 在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述雌性哺乳動(dòng)物受試者為患有不孕或頻繁 流產(chǎn)的女性。
[0029] 根據(jù)另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，N-乙?；?5-甲氧基色胺或其類似物（優(yōu)選N-乙 ?；?5-甲氧基色胺）的局部給藥通過(guò)子宮內(nèi)膜灌洗、或子宮清洗或子宮內(nèi)膜清洗進(jìn)行。
[0030] 根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述局部給藥在取卵時(shí)通過(guò)單次給藥進(jìn) 行。
[0031] 優(yōu)選地，所述活性成分的存在濃度為4X l(T9g/ml至25X l(T9g/ml，優(yōu)選大于或等 于 10 X10 9g/ml。
[0032] 在可供選擇的實(shí)施方案中，可以從取卵之日起基于N-乙?；?5-甲氧基色胺、HCG 或孕酮、或它們的組合進(jìn)行同步系統(tǒng)治療。
[0033] 在本發(fā)明的可供選擇的優(yōu)選實(shí)施方案中，輔助生殖技術(shù)選自基本由或由以下技 術(shù)組成的組中：1級(jí)技術(shù)，其簡(jiǎn)單并且不如目標(biāo)性交或?qū)m腔內(nèi)人工授精那么具有侵入性； 以及更為復(fù)雜和侵入性的II或III級(jí)技術(shù)，選自體外受精（IVF)、體外受精與胚胎移植 (FIVET)、卵胞漿內(nèi)單精子注射（ICSI)、卵胞漿內(nèi)形態(tài)選擇精子注射（IMSI)和Tesa-Tese技 術(shù)（睪丸精子抽吸術(shù)）。
[0034] 人工授精主要是指宮腔內(nèi)人工授精（IUI)技術(shù)，這是一種醫(yī)學(xué)輔助生育技術(shù)，其 中精液被引入子宮腔內(nèi)。它可以在宮頸粘液和精液之間不相容的所有情況中建議使用，在 這個(gè)過(guò)程中其允許超過(guò)宮頸長(zhǎng)度，并將精子直接植入子宮。此外，其用于不明原因的不育、 輕度和中度的男性不育癥、通過(guò)刺激排卵和目標(biāo)性交誘導(dǎo)懷孕反復(fù)失敗、以及不能完成性 交的性障礙的情況中。
[0035] 體外受精與胚胎移植（FIVET)是一種MAR技術(shù)，其中，提取人的配子，進(jìn)行培養(yǎng)，在 完成受精并產(chǎn)生一個(gè)或多個(gè)胚胎后，這些胚胎被轉(zhuǎn)移到子宮中。這種技術(shù)建議用于以下情 況中：
[0036] -獲得性或先天性輸卵管病變；
[0037]-中度男性不育癥；
[0038] - III或IV級(jí)子宮內(nèi)膜異位癥；
[0039] -不明原因不孕；
[0040] -解凍后而與精液質(zhì)量有關(guān)的冷藏精液；
[0041] -I級(jí)技術(shù)治療失敗；
[0042] 刺激排卵后，在局部麻醉和/或深度鎮(zhèn)靜的狀態(tài)下，經(jīng)回聲探測(cè)控制通過(guò)經(jīng)陰道 手術(shù)提?。ㄊ叭。┞涯讣?xì)胞，進(jìn)行精子的準(zhǔn)備，然后選擇受精的卵母細(xì)胞。接下來(lái)，準(zhǔn)備配 子的體外培養(yǎng)，驗(yàn)證受精成功后，將一定數(shù)量的胚胎轉(zhuǎn)移到子宮中。
[0043] 卵胞漿內(nèi)單精子顯微注射（ICSI)要經(jīng)過(guò)FIVET的各個(gè)步驟。此情況也是體外受 精，但其是通過(guò)對(duì)卵母細(xì)胞胞漿內(nèi)進(jìn)行單精子注射來(lái)實(shí)現(xiàn)的。然后，受精發(fā)生后，將胚胎轉(zhuǎn) 移到子宮中。
[0044] 這項(xiàng)技術(shù)建議用于以下情況：
[0045]-重度男性不育；
[0046]-阻塞性和分泌性無(wú)精子癥（睪丸精子或附睪）；
[0047]-在之前的體外受精（IVF)周期中失敗或受精幾率低；
[0048]-解凍的卵母細(xì)胞；
[0049]-卵母細(xì)胞數(shù)量降低；
[0050] -解凍后而與精液質(zhì)量有關(guān)的冷藏精液。
[0051] 這項(xiàng)技術(shù)還可以在自發(fā)周期下進(jìn)行，或者通過(guò)誘導(dǎo)多個(gè)卵泡生長(zhǎng)而進(jìn)行，在刺激 卵巢產(chǎn)生更多的卵泡并由此得到更多的卵母細(xì)胞之后，通過(guò)陰道手術(shù)進(jìn)行卵母細(xì)胞的提取 (拾取）。拾取和精子的準(zhǔn)備同步進(jìn)行是非常有效的。在無(wú)精子癥的情況中，用于提取精 子的技術(shù)有：睪丸精子經(jīng)皮抽吸術(shù)（TESA)，睪丸取精術(shù)（TESE)，顯微外科附睪精子抽吸術(shù) (MESA)、經(jīng)皮附睪精子抽吸術(shù)（PESA)。
[0052] 隨后，準(zhǔn)備卵母細(xì)胞，通過(guò)卵胞漿內(nèi)單精子顯微注射的方法使卵母細(xì)胞受精。驗(yàn)證 每個(gè)卵母細(xì)胞受精后，將胚胎轉(zhuǎn)移到子宮中。
[0053] 本發(fā)明的另一個(gè)目的涉及一種適合局部給藥的組合物，所述組合物包含對(duì)需要治 療的雌性哺乳動(dòng)物受試者有效量的N-乙?；?5-甲氧基色胺或其類似物、或者它們的組合 作為活性成分、以及一種或多種生理學(xué)可接受的賦形劑或佐劑，所述組合物用于在醫(yī)療或 獸醫(yī)領(lǐng)域的輔助生殖中防止植入子宮失敗。
[0054] 優(yōu)選地，所述組合物中的所述活性成分的存在濃度為4X l(T9g/mL至25 X l(T9g/ml 之間，優(yōu)選大于或等于l〇Xl(T9g/ml。
[0055] 根據(jù)優(yōu)選的實(shí)施方案，上述組合物中的所述活性成分以在細(xì)胞培養(yǎng)基中的子宮內(nèi) 膜/子宮灌洗劑/清洗劑的形式配制，并且終濃度為4X l(T9g/ml至25 X l(T9g/ml之間，優(yōu) 選大于或等于l〇Xl(T9g/ml。
[0056] 這種用于胚泡的培養(yǎng)基可以優(yōu)選包含以下成分：
[0057] -D-葡萄糖源；
[0058] -抗生素，優(yōu)選慶大霉素；
[0059]-人血清白蛋白；
[0060]-必需氨基酸或非必須氨基酸，優(yōu)選L-牛磺酸；
[0061]-緩沖鹽，優(yōu)選選自以下物質(zhì)中：
[0062]-鈣鹽：乳酸I丐，泛酸鈣；
[0063]-鈉鹽：氯化鈉，碳酸氫鈉和丙酮酸鈉；
[0064] -鉀鹽：氯化鉀，磷酸鉀；
[0065] -鎂鹽：氯化鎂，硫酸鎂
[0066] -水：
[0067] pH 在 7. 5 和 7. 8 之間
[0068] 根據(jù)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述培養(yǎng)基可以為Sydney IVF ?,胚泡培養(yǎng)基。
[0069] 根據(jù)本發(fā)明可供選擇的實(shí)施方案，上述組合物中的所述活性成分以在生理溶液中 的子宮內(nèi)膜灌洗劑、子宮內(nèi)膜清洗劑或子宮清洗劑的形式配制，并且終濃度為4Xl(T9g/ml 至25X 10_9g/ml，優(yōu)選大于或等于IOX 10_9g/ml。
[0070] 在女性中，已經(jīng)普遍使用了清洗宮腔的方法，其主要目的是進(jìn)行非侵入性產(chǎn)前診 斷，其相對(duì)于羊膜穿刺術(shù)和絨毛膜絨毛取樣等傳統(tǒng)侵入性方法是革新性的[(13) (14)]。近 幾年，這種技術(shù)已經(jīng)應(yīng)用于在輔助生殖的周期中將胚胎轉(zhuǎn)移之前評(píng)價(jià)宮腔的條件。這種方 法的應(yīng)用在于將緩沖液注入子宮中以達(dá)到收集子宮分泌物并評(píng)價(jià)它們的有機(jī)和無(wú)機(jī)生物 成分的目的。其具有確定可能預(yù)測(cè)植入成功的標(biāo)記物的目的[(15) (16) (17) (18)]。
[0071] 還優(yōu)選的是，適合通過(guò)子宮沖洗而局部給藥的所述組合物還包含必需和非必需氨 基酸、以及緩沖鹽。優(yōu)選地，所述緩沖鹽為鈣、鈉、鉀、和鎂的鹽，以及它們的混合物。使用緩 沖鹽和氨基酸是為了使配制物的PH在7和8之間（優(yōu)選在7. 5-7. 8之間），從而復(fù)制適合 胚胎的微環(huán)境（并且與被轉(zhuǎn)移到子宮之前胚胎生長(zhǎng)的培養(yǎng)基的微環(huán)境相似）。
[0072] 根據(jù)可供選擇的實(shí)施方案，本發(fā)明的組合物可配制成適用于子宮給藥的凝膠，更 準(zhǔn)確地說(shuō)為適合宮腔原位給藥的凝膠，并且優(yōu)選用為子宮內(nèi)"T"形器械的醫(yī)療器械進(jìn)行。還 可以預(yù)見用于粘膜給藥的緩釋型凝膠制劑。
[0073] 考慮到上述提到的子宮清洗技術(shù)是一種無(wú)創(chuàng)的操作，并且通過(guò)機(jī)械地去除分泌物 (可能會(huì)改變植入環(huán)境）可以恢復(fù)子宮的生理?xiàng)l件，本發(fā)明的另一個(gè)目的還涉及用于子宮 清洗的醫(yī)療器械，包括預(yù)裝填或待裝填上述組合物的無(wú)菌容器。
[0074] 更確切地說(shuō)，本發(fā)明所用的器械可以在使用時(shí)裝填適用于子宮或子宮內(nèi)膜清洗的 含有本發(fā)明所涉及的褪黑激素或其類似物等活性成分的無(wú)菌溶液，或者可以裝填在使用時(shí) 再添加活性成分的無(wú)菌溶液。
[0075] 根據(jù)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述無(wú)菌容器是一次性的。更優(yōu)選地，所述無(wú)菌容器（優(yōu) 選為一次性無(wú)菌容器）預(yù)裝填有生理溶液，其中添加有褪黑激素（濃度為4Xl(T 9g/mL至 25 X l(T9g/mL，優(yōu)選大于或等于IOX l(T9g/mL)、緩沖鹽和氨基酸以使配制物的pH值介于7-8 之間，優(yōu)選介于7. 5-7. 8之間。
[0076] 在用回聲引導(dǎo)進(jìn)行拾取之后，子宮清洗應(yīng)當(dāng)借助于導(dǎo)管進(jìn)行。接下來(lái)的胚胎轉(zhuǎn)移 或植入應(yīng)當(dāng)平均在子宮清洗后三天進(jìn)行（2-5天）
[0077] 因此，根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，本發(fā)明的醫(yī)療器械還可以包括無(wú)菌柔性導(dǎo)管， 該導(dǎo)管優(yōu)選具有一個(gè)末端孔。
[0078] 醫(yī)療器械部件的無(wú)菌性優(yōu)選通過(guò)無(wú)菌裝填或徹底滅菌（例如加熱處理或Y射線 處理）實(shí)現(xiàn)。
[0079] 另外，所述醫(yī)療器械可以附有用于在各種MAR技術(shù)中使用的說(shuō)明。
[0080] 所述醫(yī)療器械的目的是移除相應(yīng)MAR技術(shù)過(guò)程中的刺激而產(chǎn)生的氧化劑物質(zhì)和 可能的分泌產(chǎn)物，從而恢復(fù)子宮內(nèi)膜滲出物的生理組成。其目的在于避免這些氧化劑物質(zhì) 和分泌產(chǎn)物降低接受MAR的患者的植入百分比。如上文所述，使用緩沖鹽和氨基酸是為了 使PH介于7-8之間，優(yōu)選介于7. 5-7. 8之間，從而復(fù)制適合胚胎的微環(huán)境。除了在本發(fā)明 中示出的效果之外，添加褪黑激素還發(fā)揮很強(qiáng)的抗氧化作用，以及使子宮內(nèi)膜細(xì)胞免受由 于毒性自由基和其它分解代謝產(chǎn)物所引起的氧化損傷的保護(hù)作用。
[0081] 優(yōu)選地，所述一次性無(wú)菌容器選自用于自注射器械/筆的注射器、配送器、藥盒 (cartridge)〇
[0082] 根據(jù)本發(fā)明特別優(yōu)選的實(shí)施方案，注射器為由聚碳酸酯或硼硅酸鹽玻璃制成的 3ml Iuer鎖緊套口（luer-lock)型注射器。當(dāng)使用Iuer鎖緊套口型注射器時(shí)，與本發(fā)明所 提供的醫(yī)療器械連接的子宮內(nèi)導(dǎo)管可以具有用于與所述注射器相配合的Iuer鎖緊套口接 頭。
[0083] 可供選擇地，如果使用自注射系統(tǒng)或筆型注射器（胰島素型），可以使用硼硅酸鹽 玻璃制成的3ml玻璃藥盒。
[0084] 還優(yōu)選地，所述一次性無(wú)菌容器預(yù)裝填有I. 5ml體積的清洗溶液，其包含：
[0085] -10 X l(T9g/ml (10ng/ml)褪黑激素；
[0086] _必需和非必需氛基酸；
[0087] -鈣鹽；
[0088] -鉀鹽；
[0089] -鎂鹽；
[0090] pH介于7. 5-7. 8之間，同滲濃度介于280-290m0sm/kg之間。
[0091] 本發(fā)明的另一個(gè)目的涉及上文所示例的醫(yī)療器械用于在醫(yī)學(xué)輔助生殖流程中的 取卵時(shí)以子宮內(nèi)膜清洗的形式單次給藥。
[0092] 本發(fā)明還涉及用于體外或體內(nèi)的細(xì)胞培養(yǎng)基，包含以下成分：
[0093] -D-葡萄糖源；
[0094]-抗生素，優(yōu)選慶大霉素；
[0095] -人血清白蛋白；
[0096] -必需或非必需氨基酸，優(yōu)選L-?；撬幔?br> [0097] -鈣鹽：乳酸鈣，泛酸鈣；
[0098] -鈉鹽：氯化鈉，碳酸氫鈉和丙酮酸鈉；
[0099] -鉀鹽：氯化鉀，磷酸鉀；
[0100]-鎂鹽：氯化鎂，硫酸鎂；
[0101] -水；
[0102] 其特征在于還包含N-乙酰基-5-甲氧基色胺或其類似物，或者它們的組合，其中 所述活性成分的存在濃度為4X l(T9g/ml至25X l(T9g/ml，優(yōu)選大于或等于IOX l(T9g/ml。
[0103] 本發(fā)明的另一個(gè)目的涉及一種用于胞飲突生長(zhǎng)和實(shí)現(xiàn)體外模型研究的細(xì)胞培養(yǎng) 基。
[0104] 通過(guò)獲得（例如）用于將胚胎轉(zhuǎn)移至子宮的培養(yǎng)基，所述細(xì)胞培養(yǎng)基還可以用于 胚胎培養(yǎng)，由此所述培養(yǎng)基被注入子宮中。
[0105] 本發(fā)明的應(yīng)用的特別有益的方面涉及所提出的局部給藥途徑（其不抵觸MAR治療 周期），所述途徑的侵入性比已經(jīng)應(yīng)用于接受MAR周期的女性的子宮內(nèi)膜活組織檢查（13) 小的多。
[0106] 最后，由于具有抑制前列腺素類合成（其是褪黑激素的典型性質(zhì)）的性能（14)，所 述清洗減少了子宮收縮并且進(jìn)一步促進(jìn)了植入。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0107] 以下特別參照附圖和兩個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案對(duì)本發(fā)明進(jìn)行示例性的而非限制性的 描述，其中：
[0108] 圖1示出使用本發(fā)明的組合物處理之前的子宮內(nèi)膜，因此其沒有胞飲突；
[0109] 圖2示出使用本發(fā)明的組合物處理后1/2天的子宮內(nèi)膜：開始觀察到胞飲突的形 成；
[0110] 圖3示出使用本發(fā)明的組合物處理后3/4天的子宮內(nèi)膜：胞飲突最大生長(zhǎng)；
[0111] 圖4示出使用本發(fā)明的組合物處理后5/6天的子宮內(nèi)膜：胞飲突開始分裂，看起來(lái) 不規(guī)則（細(xì)胞凋亡）；
[0112] 圖5示出在H2O2濃度為20 μ M和200 μ M條件下，褪黑激素、阿戈美拉汀和6-羥基 褪黑激素（170ηΜ，對(duì)應(yīng)40Χ l(T9g/ml)的抗氧化活性的FACS分析（熒光強(qiáng)度檢測(cè)）結(jié)果；
[0113] 圖6示出在不同濃度的褪黑激素、阿戈美拉汀和6-羥基褪黑激素（80nM，170nM， 340nM，分別對(duì)應(yīng)于18XKT 9g/ml，40Xl(T9g/ml，80Xl(r9g/ml)下進(jìn)行的細(xì)胞凋亡分析 細(xì)胞死亡）的結(jié)果。

【具體實(shí)施方式】
[0114] 以下僅僅是示例而非限制本發(fā)明地描述本發(fā)明的作者所進(jìn)行的比較研究（體外 和體內(nèi)），以評(píng)價(jià)在MAR技術(shù)中使用褪黑激素的不同溶液進(jìn)行人胚胎植入的百分比增長(zhǎng)情 況。
[0115] 實(shí)施您Li:體內(nèi)實(shí)驗(yàn)
[0116] 材料和方法：
[0117] 用于子宮內(nèi)膜清洗的褪黑激素溶液
[0118] 所用的褪黑激素（或N-乙酰基-5-甲氧基色胺；CAS編號(hào)73-31-4)得自 Farmalabor,產(chǎn)品呈粉末狀，標(biāo)明彡99%。
[0119] 進(jìn)行了兩個(gè)臨床試驗(yàn)，其中通過(guò)子宮內(nèi)膜清洗施用了在以下物質(zhì)中的褪黑激素 (濃度 l〇Xl〇_9g/ml):
[0120] 1)培養(yǎng)基Sydney IVRRy呸泡培養(yǎng)基，由Cook Ireland公司提供（貨號(hào)G20722和 G20929)(臨床試驗(yàn)1)。此培養(yǎng)基通常用于體外改善胚泡的分裂、分化和生長(zhǎng)。培養(yǎng)基中含 有D-葡萄糖、所有20種必需L-氨基酸、L-牛磺酸、慶大霉素、人血清白蛋白、乳酸鈣、泛酸 鈣；氯化鈉、碳酸氫鈉和丙酮酸鈉；氯化鉀、磷酸鉀；氯化鎂、硫酸鎂；純水。培養(yǎng)基的其它特 征：
[0121] pH值：7. 5-8. 0(使用碳酸氫鹽緩沖液）
[0122] 同滲濃度：280-290m0sm/kg
[0123] 內(nèi)毒素：< 0· 4EU/ml
[0124] MEA ：^ 80%
[0125] (2)生理溶液（臨床試驗(yàn)2)
[0126] 統(tǒng)計(jì)分析
[0127] 進(jìn)行了多變量線性回歸統(tǒng)計(jì)學(xué)分析（IMPRUN. TXT)。
[0128] 統(tǒng)計(jì)方法
[0129] 通過(guò)非條件Logistic回歸并根據(jù)母體的年齡進(jìn)行校正來(lái)計(jì)算所植入的胚胎的數(shù) 目、質(zhì)量和該胚胎用包含褪黑激素的溶液進(jìn)行清洗的過(guò)程對(duì)懷孕機(jī)率增加的影響。
[0130] 和各程序（胚胎的數(shù)量、質(zhì)量和使用含有褪黑激素的生理鹽水或胚泡培養(yǎng)基的洗 滌過(guò)程）相關(guān)的懷孕機(jī)率與分別參照較低的胚胎數(shù)目（一個(gè)）、低于最佳胚胎質(zhì)量的植入胚 胎、或未進(jìn)行清洗過(guò)程相關(guān)的懷孕幾率之間的比值被定義為優(yōu)勢(shì)比（OR)，其是通過(guò)非條件 Logistic回歸并根據(jù)母體的年齡進(jìn)行校正來(lái)計(jì)算的。
[0131] 在logistic回歸中，OR對(duì)應(yīng)于在與回歸模型中的各共變量相關(guān)的回歸系數(shù)β的 自然基礎(chǔ)上的反對(duì)數(shù)。
[0132] 因此，由此計(jì)算的值表示通過(guò)各程序所獲得的有益效果，而不考慮其它條件。
[0133] 通過(guò)公式聽11(1(6 6±(2[1/2*860))計(jì)算01?的95(%雙尾置信區(qū)間。
[0134] 無(wú)菌控制（培養(yǎng)基）
[0135] 為了對(duì)添加有褪黑激素的培養(yǎng)基進(jìn)行無(wú)菌控制，使用BACT/ALERT 3D-60設(shè)備 (BI0MERIEUX)。將BACT/ALERT培養(yǎng)的瓶子用于定性回收和檢測(cè)血液和其它體液（在本實(shí) 驗(yàn)中常規(guī)滅菌并用作胚泡培養(yǎng)基）中的任選厭氧和好氧（細(xì)菌）的微生物檢測(cè)系統(tǒng)。
[0136] 微生物檢測(cè)的BACT/ALERT系統(tǒng)用于檢測(cè)懷疑菌血癥的血液樣品或其它液體樣品 (在本發(fā)明中常規(guī)滅菌并用作胚泡培養(yǎng)基）中是否存在微生物。BACT/ALERT系統(tǒng)和培養(yǎng)瓶 提供了微生物檢測(cè)系統(tǒng)以及具有適合于普遍存在于常規(guī)滅菌的血液感染和其它液體中的 微生物的環(huán)境和營(yíng)養(yǎng)條件的培養(yǎng)基。
[0137] 接種瓶（最小5ml到最大IOml)在所述設(shè)備中孵育，并且進(jìn)行連續(xù)監(jiān)測(cè)以檢測(cè) BACT/ALERT瓶中微生物可能生長(zhǎng)的情況。
[0138] 微生物檢測(cè)BACT/ALERT系統(tǒng)采用比色傳感器和反射光監(jiān)測(cè)溶解在培養(yǎng)基中二氧 化碳（CO 2)的存在和產(chǎn)生。
[0139] 可能存在于樣品中的微生物代謝培養(yǎng)基中的底物而產(chǎn)生二氧化碳。微生物的生長(zhǎng) 所產(chǎn)生的CO 2導(dǎo)致位于各培養(yǎng)瓶底之上的氣體滲透性藍(lán)綠色傳感器變?yōu)辄S色。
[0140] 較淺的顏色表示系統(tǒng)的監(jiān)測(cè)反射率的單位增加。
[0141] 所述設(shè)備每十分鐘監(jiān)測(cè)并追蹤瓶子的反射率。
[0142] 經(jīng)過(guò)6天的孵育之后，通過(guò)微生物檢測(cè)系統(tǒng)Bact/ALER的處理軟件將培養(yǎng)瓶定為 陽(yáng)性或陰性。
[0143] 直到Bact/ALER設(shè)備報(bào)告培養(yǎng)瓶為陽(yáng)性或陰性，否則不需要進(jìn)行干涉。
[0144] 在進(jìn)行任何子宮內(nèi)膜灌洗液之前，都進(jìn)行了 2-4-6天的培養(yǎng)測(cè)試以檢測(cè)無(wú)菌狀 態(tài)，一旦發(fā)現(xiàn)陰性培養(yǎng)物，則將其用于子宮。
[0145] 內(nèi)容標(biāo)準(zhǔn)
[0146] 使用嚴(yán)格的內(nèi)容標(biāo)準(zhǔn)選擇參與研究的患者人群：
[0147] 3)年齡彡20且<44歲
[0148] 4)體質(zhì)指數(shù)（BMI)彡 20 且彡 28kg/m2
[0149] 5)基礎(chǔ) FSH 彡 19H/L
[0150] 6)男性和女性因素
[0151] 患者
[0152] 在知情同意之后，對(duì)參與所有兩個(gè)臨床研究的患者進(jìn)行輔助生殖。
[0153] 在該第一兩組隨機(jī)多中心臨床研究（對(duì)照組和研究組）中，每組包括約430個(gè)患 者。
[0154] 接受輔助受精的患者在取卵時(shí)被隨機(jī)分成三組：
[0155] A組：430例患者進(jìn)行I. 5ml生理溶液的子宮內(nèi)膜灌洗（對(duì)照組）。
[0156] B組：436例患者進(jìn)行I. 5ml添加有終濃度為10xl0_9g/ml的褪黑激素的培養(yǎng)基溶 液的子宮內(nèi)膜灌洗。
[0157] C組：患者不進(jìn)行子宮內(nèi)膜灌洗。
[0158] 患者參與的該項(xiàng)研究在幾個(gè)專攻MAR的私人中心進(jìn)行，例如BRA中心、都靈和卡利 亞里的Promea中心、佩魯賈的Genera中心和巴里的綜合公共中心。已經(jīng)把經(jīng)過(guò)無(wú)菌測(cè)試 的含有褪黑激素的培養(yǎng)基送到了這些中心以用于以后的治療流程。
[0159] 在通過(guò)在取卵時(shí)使用已知濃度的褪黑激素（終濃度為10xl(T9g/mL)進(jìn)行子宮內(nèi)膜 灌洗液以進(jìn)行輔助受精的體內(nèi)準(zhǔn)備之后，對(duì)患者進(jìn)行相關(guān)的超聲引導(dǎo)以使其子宮底部形成 的液體層的直徑可視化。
[0160] 涉及單預(yù)期中心的第二臨床研究包括對(duì)照組的64例患者和實(shí)驗(yàn)組的92例患者。
[0161] 在所述研究中，在取卵之后，通過(guò)在患者的子宮腔內(nèi)進(jìn)行子宮內(nèi)膜清洗而施用褪 黑激素的無(wú)菌生理溶液。
[0162] 子宮內(nèi)膜清洗
[0163] 簡(jiǎn)單來(lái)講，這種處理涉及使用混有終濃度為10xl(T9g/ml的褪黑激素的生理溶液 或培養(yǎng)基在宮腔內(nèi)進(jìn)行無(wú)細(xì)胞共培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜灌洗（之前的研究以1/3和1/2的終濃度 進(jìn)行，但沒有給出相同的結(jié)果-數(shù)據(jù)中未顯示）。
[0164] 取卵之后（時(shí)間對(duì)應(yīng)于MAR流程中HCG處理后的排卵期），在陰道止血后，將2. 5ml 的無(wú)菌注射器連接到具有頂端開口的單腔宮內(nèi)導(dǎo)管，并且吸入培養(yǎng)基（胚泡培養(yǎng)基）或生 理溶液，通過(guò)調(diào)節(jié)褪黑激素的添加使體積達(dá)到I. 5ml。
[0165] 在生理溶液的情況中，導(dǎo)管可以預(yù)先裝填添加有褪黑激素的生理溶液。
[0166] 按照常規(guī)的胚胎轉(zhuǎn)移（ET)操作的相同步驟將導(dǎo)管引入子宮口內(nèi)。
[0167] 然后，將添加有褪黑激素的鹽溶液或改良的培養(yǎng)基緩慢注入，在灌洗結(jié)束時(shí)，宮腔 內(nèi)液體層的厚度通過(guò)經(jīng)腹部回聲測(cè)量（清洗和超聲檢測(cè)必須同步進(jìn)行，液體層到達(dá)約10毫 米，然后又很快消失）
[0168] 結(jié)果
[0169] 臨床研究1
[0170] 多中心體內(nèi)研究涉及863例患者，她們接受輔助受精和褪黑激素子宮內(nèi)膜灌洗液 (回聲測(cè)量液體層），在3-4天后，進(jìn)行胚胎轉(zhuǎn)移。
[0171] 隨后，通過(guò)95%多變量線性回歸統(tǒng)計(jì)分析（IMPRUN. TXT)計(jì)算CI (置信區(qū)間或信任 區(qū)間）。
[0172] 單變量分析顯示，植入3個(gè)胚胎暗示顯著增加，等于大約3倍的懷孕幾率（0R = 2. 8, IF 95% L 7-4. 4)。
[0173] 2個(gè)胚胎的數(shù)目似乎不足以提高懷孕的幾率（OR= 1.0, IF 95% 1.7-4. 4)。
[0174] 另一方面，植入胚胎的最佳質(zhì)量似乎也是一個(gè)增加懷孕幾率的重要因素（0R = 2. 9, IF 95% 1. 8-4. 7)。在單變量分析中，相同的關(guān)聯(lián)率似乎與所使用灌洗程序相關(guān)（OR = 2. 2, IF 95% L 6-2. 9)。
[0175] 多變量分析可以控制每個(gè)變量的獨(dú)立影響，因此完全排除其它所用程序的影響和 母親年齡的影響。在這種情況下，使用清洗程序可以使懷孕成功率變?yōu)?倍（0R =2. 2, IF 95% 1. 6-3. 0)。
[0176] 類似的改善似乎與植入3個(gè)胚胎相關(guān)，而不是植入單一的胚胎（0R = 2. 1，IF 95% I. 2-3. 7)，還與使用質(zhì)量最優(yōu)的胚胎相關(guān)（OR = I. 9, IF95% I. 1-3. 3)。
[0177] 因此，使用上文所述的所有三個(gè)程序似乎是輔助受精過(guò)程的最佳選擇。
[0178] 總之，體內(nèi)研究已經(jīng)證明了，與沒有顯著差異的其它兩組相比，使用褪黑激素進(jìn)行 子宮內(nèi)膜細(xì)胞的灌洗或清洗可以使懷孕的數(shù)目加倍。
[0179] 臨床研究2
[0180] 單中心研究包括對(duì)照組64例患者和實(shí)驗(yàn)組92例患者。
[0181] 患者接受輔助生殖，并且用褪黑激素的無(wú)菌鹽溶液進(jìn)行子宮內(nèi)膜清洗（回聲檢測(cè) 液體層），3-4天之后進(jìn)行胚胎轉(zhuǎn)移。
[0182] 該研究的主要目的是由于胚胎轉(zhuǎn)移（ET)的臨床妊娠率（胎心）；次要目的是繼續(xù) 妊娠率和流產(chǎn)率。
[0183] 實(shí)驗(yàn)組的臨床妊娠率等于37%而對(duì)照組的是17.2% ;實(shí)驗(yàn)組繼續(xù)妊娠率是 32. 6%，對(duì)照組的是14. 1%。
[0184] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下表所示：
[0185] 表1:
[0186]

【權(quán)利要求】
1. N-乙酰基-5-甲氧基色胺或其類似物，其通過(guò)給需要治療的雌性哺乳動(dòng)物受試者進(jìn) 行有效量的局部給藥而用于在醫(yī)療或獸醫(yī)領(lǐng)域的輔助生殖中防止植入子宮失敗。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的N-乙酰基-5-甲氧基色胺或其類似物，其中所述類似物選自 阿戈美拉汀、6-羥基-褪黑激素、5-羥色胺、5-羥色氨酸或它們的衍生物。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1-2中任意一項(xiàng)所述的N-乙?；?5-甲氧基色胺或其類似物，其中所 述雌性哺乳動(dòng)物受試者為患有不孕或頻繁流產(chǎn)的女性。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任意一項(xiàng)所述的N-乙?；?5-甲氧基色胺或其類似物，其中所 述局部給藥通過(guò)子宮內(nèi)膜灌洗、或子宮清洗或子宮內(nèi)膜清洗進(jìn)行。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)所述的N-乙?；?5-甲氧基色胺或其類似物，其中所 述局部給藥在取卵時(shí)通過(guò)單次給藥進(jìn)行。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1-5中任意一項(xiàng)所述的N-乙?；?5-甲氧基色胺或其類似物，其中所 述N-乙?；?5-甲氧基色胺或其類似物的存在濃度為4 X l(T9g/ml至25 X l(T9g/ml，優(yōu)選 大于或等于l〇Xl(T9g/ml。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1-6中任意一項(xiàng)所述的N-乙?；?5-甲氧基色胺或其類似物，其用于 從取卵之日起將N-乙?；?5-甲氧基色胺、HCG或孕酮、或它們的組合進(jìn)行同步系統(tǒng)給藥。
8. 根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)所述的N-乙?；?5-甲氧基色胺或其類似物，其中所 述輔助生殖技術(shù)選自由計(jì)劃性交、宮腔內(nèi)人工授精（IUI)、體外受精與胚胎移植（FIVET)、 體外受精（IVF)、卵胞漿內(nèi)單精子注射（ICSI)、卵胞漿內(nèi)形態(tài)選擇單精子注射（IMSI)技術(shù) 和Tesa-Tese (睪丸精子抽吸術(shù)）組成的組中。
9. 一種適合局部給藥的組合物，所述組合物包含對(duì)需要治療的雌性哺乳動(dòng)物受試者 有效量的N-乙?；?5-甲氧基色胺或其類似物、或者它們的組合作為活性成分，優(yōu)選包含 N-乙?；?5-甲氧基色胺作為活性成分，以及一種或多種生理學(xué)可接受的賦形劑或佐劑， 所述組合物用于在醫(yī)療或獸醫(yī)領(lǐng)域的輔助生殖中防止植入子宮失敗。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的組合物，其中所述活性成分的存在濃度為4X l(T9g/ml至 25X 10_9g/ml，優(yōu)選大于或等于 IOX 10_9g/ml。
11. 根據(jù)權(quán)利要求9-10中任意一項(xiàng)所述的組合物，其中所述活性成分以在細(xì)胞培 養(yǎng)基中的子宮內(nèi)膜灌洗劑、或子宮清洗劑或子宮內(nèi)膜清洗劑的形式配制，并且終濃度為 4X 10_9g/ml 至 25X 10_9g/ml，優(yōu)選大于或等于 IOX 10_9g/ml。
12. 根據(jù)權(quán)利要求11所述的組合物，其中用于胚泡的培養(yǎng)基包含以下成分： -D-葡萄糖源； -抗生素，優(yōu)選慶大霉素； -人血清白蛋白； -必需氨基酸和非必須氨基酸，優(yōu)選L-牛磺酸； -緩沖鹽，優(yōu)選選自以下物質(zhì)中： -鈣鹽：乳酸鈣，泛酸鈣； -鈉鹽：氯化鈉，碳酸氫鈉和丙酮酸鈉； -鉀鹽：氯化鉀，磷酸鉀； -鎂鹽：氯化鎂，硫酸鎂； -水：并且 pH在7. 5和7. 8之間。
13. 根據(jù)權(quán)利要求12所述的組合物，其中所述培養(yǎng)基為Sydney ]VF 胚泡培養(yǎng)基。
14. 根據(jù)權(quán)利要求9-10中任意一項(xiàng)所述的組合物，其中上述組合物中的所述活性成分 以在生理溶液中的子宮內(nèi)膜灌洗劑、或子宮清洗劑或子宮內(nèi)膜清洗劑的形式配制。
15. 根據(jù)權(quán)利要求14所述的組合物，其特征在于，還包含必需氨基酸、非必需氨基酸和 緩沖鹽以將pH保持在7-8之間，優(yōu)選7. 5-7. 8。
16. -種用于子宮清洗的醫(yī)療器械，包括預(yù)裝填或待裝填根據(jù)權(quán)利要求9-15中任意一 項(xiàng)所述的組合物的無(wú)菌容器。
17. 根據(jù)權(quán)利要求16所述的醫(yī)療器械，其中所述無(wú)菌容器是一次性的。
18. 根據(jù)權(quán)利要求16或17所述的醫(yī)療器械，其中所述無(wú)菌容器為用于自注射器械的注 射器、配送器或藥盒。
19. 根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)所述的醫(yī)療器械，還包括無(wú)菌的子宮內(nèi)導(dǎo)管。
20. 根據(jù)權(quán)利要求16-19中任意一項(xiàng)所述的醫(yī)療器械，包括預(yù)裝填有基于生理溶液的 配制物的一次性無(wú)菌容器，所述生理溶液補(bǔ)充有褪黑激素、氨基酸和緩沖鹽以將PH保持在 7-8之間，優(yōu)選7. 5-7. 8。
21. 根據(jù)權(quán)利要求20所述的醫(yī)療器械，其中所述配制物包含必需氨基酸、非必需氨基 酸和優(yōu)選選自鈣、鉀、鎂鹽及其混合物的緩沖鹽。
22. 根據(jù)權(quán)利要求16-21中任意一項(xiàng)所述的醫(yī)療器械，其中所包含的褪黑激素的濃度 介于4X 10_9g/ml和25X 10_9g/ml之間，優(yōu)選大于或等于IOX 10_9g/ml。
23. 根據(jù)權(quán)利要求16-22中任意一項(xiàng)所述的醫(yī)療器械，其中所述一次性無(wú)菌容器預(yù)裝 填有I. 5ml體積的生理溶液，該生理溶液包含： -10Xl(T9g/ml的褪黑激素； -必需和非必需氨基酸； -鈣鹽； -鉀鹽； -緩鹽。
24. 根據(jù)權(quán)利要求16-23中任意一項(xiàng)所述的醫(yī)療器械，其用于在醫(yī)療或獸醫(yī)領(lǐng)域的輔 助生殖中防止植入子宮失敗。
25. -種體外或體內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)基，包含： -D-葡萄糖源； -抗生素，優(yōu)選慶大霉素； -人血清白蛋白； -必需氨基酸和非必須氨基酸，優(yōu)選L-?；撬?； -選自以下的緩沖鹽： -鈣鹽：乳酸鈣，泛酸鈣； -鈉鹽：氯化鈉，碳酸氫鈉和丙酮酸鈉； -鉀鹽：氯化鉀，磷酸鉀； -鎂鹽：氯化鎂，硫酸鎂； 及其混合物； _水： 其特征在于，所述細(xì)胞培養(yǎng)基還包含N-乙?；?5-甲氧基色胺或其類似物，或者 它們的組合，其中活性成分的存在濃度為4Xl(T9g/ml至25Xl(T9g/ml，優(yōu)選大于或等于 10 X 10 9g/ml 〇
26.根據(jù)權(quán)利要求25所述的細(xì)胞培養(yǎng)基的應(yīng)用，其用于胞飲突的生長(zhǎng)和獲得體外模型 研究。
【文檔編號(hào)】A61K31/165GK104334167SQ201380028656
【公開日】2015年2月4日 申請(qǐng)日期:2013年5月27日 優(yōu)先權(quán)日:2012年5月28日
【發(fā)明者】尼科萊塔·馬克西亞 申請(qǐng)人:艾爾瑞斯貿(mào)易公司