一種人干細胞組合物在制備用于治療艾滋病的藥物中的用途
【專利摘要】本發(fā)明為一種人干細胞組合物在制備用于治療艾滋病的藥物中的用途。由包含離體的人干細胞和生理鹽水組成的所述干細胞組合物配置成的體積為10～80ml的干細胞懸液，每份所述干細胞懸液中含有的人干細胞的數(shù)量為1～8×108個。本發(fā)明可通過靜脈注射進行艾滋病的治療。靜脈輸入安全可靠，操作性強，副作用小，干細胞可以通過血液循環(huán)到達細胞受損部位。
【專利說明】一種人干細胞組合物在制備用于治療艾滋病的藥物中的用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種人干細胞組合物在制備用于治療疾病的藥物中的用途，進一步地說，是涉及制備用于抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物中的用途，特別是涉及人干細胞組合物在制備用于艾滋病藥物中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002]艾滋病，即獲得性免疫缺陷綜合癥。是人類因為感染人類免疫缺陷病毒(HIV)后導致免疫缺陷，并發(fā)一系列機會性感染及腫瘤，嚴重者可導致死亡的綜合征。
[0003]據(jù)世界衛(wèi)生組織報告:2010年全世界存活HIV (人類免疫缺陷病毒)攜帶者及艾滋病患者共3400萬，新感染270萬，全年死亡180萬人。每天有超過7000人新發(fā)感染，全世界各地區(qū)均有流行，但97%以上在中、低收入國家，尤以非洲為重。中國疾病預(yù)防控制中心估計，截止至2011年底，中國存活HIV攜帶者及艾滋病患者約78萬人，全年新發(fā)感染者4.8 萬人，死亡2.8萬人。疫情已覆蓋全國所有省、自治區(qū)、直轄市，目前我國面臨艾滋病發(fā)病和死亡的高峰期，且已由吸毒、暗娼等高危人群開始向一般人群擴散。
[0004]艾滋病的傳染源:HIV感染者和艾滋病病人是本病的唯一傳染源。
[0005]艾滋病的傳播途徑:HIV主要存在于感染者和病人的血液、精液、陰道分泌物、乳汁中。①性行為:與已感染的伴侶發(fā)生無保護的性行為，包括同性、異性和雙性性接觸。②靜脈注射吸毒:與他人共用被感染者使用過的、未經(jīng)消毒的注射工具，是一種非常重要的HIV 傳播途徑。③母嬰傳播:在懷孕、生產(chǎn)和母乳喂養(yǎng)過程中，感染HIV的母親可能會傳播給胎兒及嬰兒。④血液及血制品(包括人工受精、皮膚移植和器官移植)也是傳播途徑之一。
[0006]易感人群:人群普遍易感。高危人群包括:男性同性戀者、靜脈吸毒者、與HIV攜帶者經(jīng)常有性接觸者、經(jīng)常輸血及血制品者和HIV感染母親所生嬰兒。
[0007]HIV感染分為急性·期、無癥狀期和艾滋病期。
[0008](一)急性期:通常發(fā)生在初次感染HIV后2-4周左右。臨床主要表現(xiàn)為發(fā)熱、咽痛、盜汗、惡心、嘔吐、腹瀉、皮疹、關(guān)節(jié)痛、淋巴結(jié)腫大及神經(jīng)系統(tǒng)癥狀。多數(shù)患者臨床癥狀輕微，持續(xù)1-3周后緩解。
[0009]此期在血液中可檢出HIV-RNA (艾滋病病毒核酸)和P24抗原，而HIV抗體則在感染后數(shù)周才出現(xiàn)。⑶4+T淋巴細胞計數(shù)一過性減少，⑶4/⑶8比例可倒置。
[0010](二)無癥狀期
[0011]可從急性期進入此期，或無明顯的急性期癥狀而直接進入此期。
[0012]此期持續(xù)時間一般為6-8年。但也有快速進展和長期不進展者。此期的長短與感染病毒的數(shù)量、型別，感染途徑，機體免疫狀況等多種因素有關(guān)。
[0013](三)艾滋病期
[0014]為感染HIV后的最終階段。病人⑶4+T淋巴細胞計數(shù)明顯下降，多<200/mm3，HIV 血漿病毒載量明顯升高。此期主要臨床表現(xiàn)為HIV相關(guān)癥狀、各種機會性感染及腫瘤。[0015]HIV相關(guān)癥狀:主要表現(xiàn)為持續(xù)一個月以上的發(fā)熱、盜汗、腹瀉；體重減輕10%以上。部分病人表現(xiàn)為神經(jīng)精神癥狀，如記憶力減退、精神淡漠、性格改變、頭痛、癲癇及癡呆等。另外還可出現(xiàn)持續(xù)性全身性淋巴結(jié)腫大，其特點為①.除腹股溝以外有兩個或兩個以上部位的淋巴結(jié)腫大.淋巴結(jié)直徑≥1cm，無壓痛，無粘連；③持續(xù)時間3個月以上。
[0016]HIV相關(guān)機會性感染及腫瘤的常見癥狀:發(fā)熱、盜汗、淋巴結(jié)腫大、咳嗽咳痰咯血、 呼吸困難、頭痛、嘔吐、腹痛腹瀉、消化道出血、吞咽困難、食欲下降、口腔白斑及潰瘍、各種皮疹、視力下降、失明、癡呆、癲癇、肢體癱瘓、消瘦、貧血、二便失禁、尿儲留、腸梗阻等。
[0017]毫無疑義，艾滋病給患者帶來了極大大的痛苦，現(xiàn)有技術(shù)的治療方法主要包括抗 HIV治療。
[0018]高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療是目前艾滋病的最主要的治療方法。這種治療需要終生服藥。期治療目標是最大限度地抑制病毒的復制，保存和恢復免疫功能，降低病死率和HIV相關(guān)性疾病的發(fā)病率，提高患者的生活質(zhì)量，減少艾滋病的傳播。
[0019]但是，在抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物治療艾滋病的過程中，存在如下缺陷:
[0020]其一，需要把握好治療的指征和時機，且某些特殊人群的抗病毒治療均有其特殊性，應(yīng)具體問題具體分析，不能照搬固有方案； [0021]其二，依從性很也是治療過程的一個重要因素，在實施抗病毒治療前，醫(yī)生應(yīng)與患者有充分的交流，讓他們了解治療的必要性、治療后可能出現(xiàn)的不適、依從性的重要性、 服藥后必須進行定期的檢測，以及在發(fā)生任何不適時 應(yīng)及時與醫(yī)務(wù)人員聯(lián)系。同時要得到其家屬或朋友的支持，以提高患者的依從性?？共《局委熯^程中，應(yīng)監(jiān)測cd4+t淋巴細胞、 HIV-RNA及常規(guī)血液檢測，以評價療效及副作用。
[0022]本世紀，艾滋病已成為嚴重威脅世界人民健康的公共衛(wèi)生問題。因此，如何把艾滋病從一種致死性疾病逐漸變?yōu)橐环N可控的疾病，再進一步徹底治愈，是一個亟待解決的世界性難題，也是擺在全世界醫(yī)務(wù)工作者面前的偉大事業(yè)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0023]本發(fā)明的目的，就是為了彌補現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種人干細胞組合物在制備用于艾滋病藥物中的用途，進而提供一種通過中西醫(yī)結(jié)合及干細胞組合物用于治療艾滋病的綜合療法。
[0024]關(guān)于本文中有關(guān)干細胞的相關(guān)術(shù)語定義如下:
[0025]1.干細胞組合物:為本 申請人:的專利申請(201210017987.9)中提到的2_4mm厚的油狀干細胞層(詳見其說明書中干細胞制備過程);
[0026]2.干細胞懸液:為該油狀干細胞層經(jīng)生理鹽水清洗及稀釋后得到的懸液，定容為 10-80ml ；
[0027]3.干細胞懸液的稀釋液:由于懸液中的干細胞數(shù)量多，易吸附成團，為了防止靜滴時不能通過濾網(wǎng)，因此靜滴前需再用100ml的生理鹽水進一步稀釋，即得到干細胞懸液的稀釋液，此時的總?cè)萘繛?10_180ml。
[0028]注:自始至終，干細胞的數(shù)量并未發(fā)生變化，即溶質(zhì)為定量，只是增加了生理鹽水的量，即溶劑為變量，因此溶液的量也隨之變化，即有了三種不同的稱呼。若不同，也只是溶液的密度不同，由于起效成分為干細胞，因此生理鹽水的多少并不會影響治療的效果。[0029] 本發(fā)明的人干細胞組合物在制備用于治療艾滋病的藥物中的用途，是這樣實現(xiàn)的:
[0030]所述的人干細胞選自人類骨髓、臍帶血或外周血干細胞；
[0031]所述的干細胞組合物為按照本 申請人:的申請?zhí)枮?01210017987.9、名稱為“一種人類骨髓、臍帶血或外周血干細胞樣本密度分離液及干細胞分離方法”中的干細胞分離方法步驟(3)得到的“存在于整個離心管中間位置的約(2-4) _厚的油狀干細胞層”；
[0032]每份所述干細胞組合物經(jīng)(10-80) ml生理鹽水清洗及定容后，得到含有的人干細胞的數(shù)量為(I~8) X IO8個的干細胞懸液；
[0033]每份所述的干細胞懸液在使用前再用100ml的生理鹽水進一步稀釋，得到干細胞懸液中的個數(shù)密度為(0.125~8) X IO7個/ml、總?cè)萘繛?10_180ml的干細胞懸液的稀釋液。
[0034]在具體實施中，所述的用途采用以下方法實現(xiàn):
[0035]所述的干細胞懸液的稀釋液通過體表淺靜脈進行靜脈點滴法注射到人體。
[0036]所述的靜脈點滴法的步驟為:
[0037](I)先用0.9%的氯化鈉溶液20_30ml沖管；
[0038](2)接著開始靜脈點滴注射輸入干細胞懸液的稀釋液，保持20-30滴/分鐘，半小時后無不良反應(yīng)可增加到30-50滴/分鐘，細胞輸入過程中每15分鐘輕輕晃動裝有所述干細胞懸液的稀釋液的細胞保存袋一次；
[0039](3)細胞輸入完畢后用0.9%的氯化鈉溶液20ml沖入細胞保存袋中輕輕晃動，再用 0.9%的氯化鈉溶液20-30ml沖凈即可將輸液器中細胞沖凈，得到的沖洗液也同樣注入患者體內(nèi)，以保證細胞輸入的數(shù)量；
[0040]靜滴時將細胞液搖勻，避免細胞貼壁。
[0041]所述的人干細胞優(yōu)選為人類臍帶血干細胞。
[0042]另外本發(fā)明所述的用途還可以結(jié)合包括以下兩種藥物的配合實現(xiàn):
[0043]1、抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物治療
[0044]所述的抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物包括以下藥物的至少一種:核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、非核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、蛋白酶抑制劑、整合酶抑制劑、融合酶抑制劑及CCR5抑制劑、立妥威DDI，拉米夫定3TC，齊多夫定AZT，賽瑞特D4T，替諾福韋酯TDF，維樂命NVP，依非韋倫 EFV,克立芝，達魯那韋，拉替拉偉；
[0045]2、中醫(yī)中藥治療
[0046]所述的中藥基礎(chǔ)組方如下:
[0047]黃芪10-15克黨參6-15克白術(shù)6-12克茯苓6_18克
[0048]甘草6-10克黃連3-6克紫花地丁 10-15克蒲公英10_15克
[0049]銀花15-20克板藍根20克白花蛇舌草20_25克虎杖9_15克
[0050]七葉一枝花10-15克淫羊藿20-25克。
[0051]本發(fā)明的干細胞組合物在制備用于治療艾滋病的藥物中的用途具體實施過程進一步詳述如下:
[0052]1、抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物治療
[0053]高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療(HighlyActive Antiretroviral Therapy, HAART)是艾滋病的最根本的治療方法。而且需要終生服藥。治療目標:最大限度地抑制病毒的復制，保存和恢復免疫功能，降低病死率和HIV相關(guān)性疾病的發(fā)病率，提高患者的生活質(zhì)量，減少艾滋病的傳播。
[0054]開始抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療的指征和時機:
[0055]①成人及青少年開始抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療的指征和時機
[0056]下列情況之一建議治療:艾滋病期患者；急性期；無癥狀期CD4+T淋巴細胞〈350/ mm3 ;CD4+T淋巴細胞每年降低大于100/mm3 ；HIV-RNA>105cp/ml ;心血管疾病高風險；合并活動性HBV/HCV感染；HIV相關(guān)腎??；妊娠。開始HAART前，如果存在嚴重的機會性感染或既往慢性疾病急性發(fā)作，應(yīng)控制病情穩(wěn)定后再治療。
[0057]②嬰幼兒和兒童開始抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療的指征和時機
[0058]以下情況之一建議治療:小于12個月的嬰兒；12至35個月的嬰兒，OT4+T淋巴細胞比例〈20%，或總數(shù)〈750/mm3 ；36個月以上的兒童，CD4+T淋巴細胞比例〈15%，或總數(shù)〈350/ mm3。
[0059]抗反轉(zhuǎn)錄病毒(ARV)藥物:
[0060]①國際現(xiàn)有藥物:六大類30多種。核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(NRTIs)、非核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(NNRTIs)、蛋白酶抑制劑(Pis)、整合酶抑制劑(raltegravir)、融合酶抑制劑 (FIs)及 CCR5 抑制劑(maraviroc)。
[0061]②國內(nèi)ARV藥物:有前4類，12種。
[0062]抗艾滋病病毒藥物有:立妥威DDI，拉米夫定3TC，齊多夫定AZT，賽瑞特D4T，替諾福韋酯TDF，維樂命NVP，依非韋倫EFV，克立芝，達魯那韋，拉替拉偉。
[0063]推薦 我國成人及青少年的一線抗病毒方案:齊多夫定/替諾福韋+拉米夫定+依非韋倫/奈韋拉平
[0064]某些特殊人群(如兒童、孕婦、合并結(jié)核、肝炎及靜脈吸毒者)的抗病毒治療均有其特殊性，應(yīng)具體問題具體分析，不能照搬以上方案。
[0065]2、中醫(yī)中藥治療
[0066]中醫(yī)中藥治療艾滋病，又如下五個方面的優(yōu)勢:
[0067](I)中醫(yī)的辨證論治和個體化治療可應(yīng)付艾滋病復雜多變的臨床特點，緩解和減輕癥狀，提聞生存質(zhì)量。
[0068](2)早期發(fā)現(xiàn)，早期治療。由于西藥抗病毒治療需要等到符合合適的治療條件時才能使用，因此，中醫(yī)藥對于無癥狀期HIV感染者的治療具有一定的潛力和優(yōu)勢。
[0069](3)能階段性的穩(wěn)定或改善患者的免疫功能，延緩發(fā)病，使患者帶毒生存。
[0070](4)中藥可以減輕抗病毒藥物的某些毒副作用，增加患者的依從性。
[0071](5)中醫(yī)藥資源豐富，歷史悠久，能夠被廣大患者接受，有較好的藥物可及性和覆蓋面；此外，在辨證準確的前提下，毒副作用相對較少。
[0072]相關(guān)研究表明，中藥對改善艾滋病的癥狀體征療效確切；可以明顯改善患者的生存質(zhì)量，對HAART (雞尾酒療法)引起的部分不良反應(yīng)具有較好的治療作用，對提高和穩(wěn)定患者的免疫功能具有一定的作用，有些中藥與HAART合用可以提高抗病毒藥的療效。中藥治療雖然起效慢，但作用持久，且不易產(chǎn)生耐藥性，在臨床治療中具有廣泛的應(yīng)用前景。
[0073]中醫(yī)治以扶正祛邪，清熱解毒。在具體實施中，其基礎(chǔ)組方如下:[0074]黃芪10-15克黨參6-15克白術(shù)6-12克茯苓6-18克
[0075]甘草6-10克黃連3-6克紫花地丁 10-15克蒲公英10_15克
[0076]銀花15-20克板藍根20克白花蛇舌草20_25克虎杖9_15克
[0077]七葉一枝花10-15克淫羊藿20-25克
[0078]上方為基礎(chǔ)方，按癥狀不同可臨證加減其方藥及劑量。
[0079]3、生物治療
[0080]干細胞是一類具有自我更新，高度增殖和多向分化潛能的細胞群體，即這些細胞可以通過細胞分裂維持自身細胞群的大小，同時又可以進一步分化成為各種不同的組織細胞，被醫(yī)學界稱為“萬用細胞”。
[0081]本發(fā)明就是基于干細胞具有的細胞替代作用，將干細胞植入體內(nèi)后，能自動識別并移行至細胞損傷部位，然后分裂增殖成新的細胞，替代受損或病變細胞行使其功能。
[0082]艾滋病是人類因為感染人類免疫缺陷病毒后導致免疫缺陷，并發(fā)一系列機會性感染及腫瘤，嚴重者可導致死亡的綜合征。免疫病理主要表現(xiàn)為cd4+t淋巴細胞數(shù)量減少及功能障礙，異常免疫激活及免疫重建。而干細胞具有細胞替代作用，干細胞植入體內(nèi)后，能自動識別并移行至細胞損傷部位，然后分裂增殖成新的細胞，替代壞死的免疫細胞行使其功能。艾滋病是累及全身多器官系統(tǒng)的疾病，如皮膚粘膜、淋巴結(jié)、眼部、呼吸系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、 神經(jīng)系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)等。干細胞可移行至上述病變部位，定向分化為所需的功能細胞，繼而替代失去功能的病變細胞。
[0083]另外，由于干細胞具有增殖和定向分化的能力，當干細胞被趨化至器官損傷局部后，其中部分細胞分泌大量小分子物質(zhì)，趨化受體干細胞，可促進細胞增殖并定向分化，完成各器官功能的修復。而且干細胞能釋放多種生物活性物質(zhì)，如可以釋放膜微粒，趨化并調(diào)節(jié)周圍細胞的功能活性，喚醒處于休眠期的組織細胞，促進其發(fā)揮其生物學特性；另由于其具有的免疫調(diào)節(jié)作用，可增強人體的免疫機能和修復受損的免疫系統(tǒng)，降低機體炎癥反應(yīng)， 從而預(yù)防各種免疫因素及感染所致的相關(guān)疾病。
[0084]當用所述干細胞組合物用于治療艾滋病選擇靜脈輸入治療時，由于干細胞具有增殖和定向分化的能力，當干細胞被趨化至細胞損傷局部后，其中部分細胞分泌大量小分子物質(zhì)，趨化受體干細胞，可促進細胞增殖并定向分化，完成內(nèi)膜結(jié)構(gòu)和功能的修復。而且干細胞能釋放多種生物活性物質(zhì)，如可以釋放膜微粒，趨化并調(diào)節(jié)周圍細胞的功能活性，喚醒處于休眠期的組織細胞，促進其發(fā)揮其生物學特性；另由于其具有的免疫調(diào)節(jié)作用，可增強人體的免疫機能和修復受損的免疫系統(tǒng)，降低機體炎癥反應(yīng)，從而預(yù)防各種免疫因素及感染所致的相關(guān)疾病。同時靜脈輸入安全可靠，操作性強，副作用小，干細胞可以通過血液循環(huán)到達細胞受損部位。
[0085]綜上所述，本發(fā)明的優(yōu)點在于:
[0086]1.臨床使用安全，內(nèi)毒素< 1EU,符合國家藥典規(guī)定的注射用標準。
[0087]2.獲取的細胞懸液體積小，可按醫(yī)生的需求配成臨床治療所需劑量。
[0088]3.靜脈輸入安全可靠，操作性強，治療損傷小，副作用小，干細胞可以通過血液循環(huán)到達細胞受損部位。
[0089]4.另外使用本 申請人:的申請?zhí)枮?01210017987.9、名稱為“一種人類骨髓、臍帶
血或外周血干細胞樣本密度分離液及干細胞分離方法”的方法制得的人造血干細胞，還具備以下優(yōu)勢
[0090](I)含有多種細胞因子，能夠使干細胞快速準確的到達受損部位，并輔助其發(fā)揮生物學活性；
[0091](2)細胞數(shù)量大，特別是由人臍帶血分離提取的純化干細胞，每份臍帶血(80ml左右)分離出的干細胞數(shù)量皆可達到IO8以上；
[0092](3)細胞種類全，分離全部的紅細胞，血小板，血漿物質(zhì)，去除部分成熟白細胞，淋巴細胞，純化有核細胞，保留所有干細胞；
[0093](4)細胞活性強，采自人體新鮮活細胞，經(jīng)分離純化后獲取干細胞。細胞活性達96% 以上。
【具體實施方式】
[0094]下面結(jié)合實施例，進一步說明本發(fā)明。
[0095]實施例1
[0096]用于治療艾滋病的干細胞懸液的制備。
[0097]無菌紗布蘸75%的酒精，擦拭所有操作過程中所需物品及操作臺。(本操作中所涉及消毒步驟皆用75%酒精的無菌紗布擦拭，以下簡稱消毒)
[0098]1，將50mL含有枸櫞酸鈉的臍帶血血袋消毒，導入50mLl號液瓶中。將50mL2號液全部倒入I號液瓶中，蓋緊瓶蓋，充分搖勻。將I號液瓶置于超凈臺，松動瓶蓋后靜置 20-30min，待分層。12支離心管拆封，備用。
[0099]2，取3號液，消毒外壁，開蓋，用新移液管取25mL3號液置于50mL新離心管中，一共移取3次，得到3支有試劑3號液的離心管，備用。
·[0100]3,取步驟I靜置20_30min后的試劑I號液瓶中的上層液,用移液管移取分別置于離心管中每只45mL,蓋緊蓋置于離心機中設(shè)置速度為2500轉(zhuǎn)時間為5分鐘溫度為5°C。從離心機中取出離心管，消毒，開蓋，棄上清液。
[0101]4，取新移液管，移取0.9%NaCl分別加入到離心管中至IOmL處，搖勻，得細胞混合液備用。取步驟2下裝有3號液的離心管，緩慢加入剛剛制備的細胞混合液，保持細胞混合液懸浮于3號液表面，加至45ml，輕放至試管架，即得到3支具有分層液的離心管，置于離心機中，設(shè)置速度為1800轉(zhuǎn)，時間為30分鐘，溫度為5°C。
[0102]5，從離心機中輕取出離心管，保持液面平穩(wěn)，消毒，開蓋，用一次性膠頭滴管吸取離心管中間的絮狀液體，收集置三支新離心管中，用移液管加入0.9%NaCl至45ml處，搖勻， 配平，離心，設(shè)置速度為2000轉(zhuǎn)時間為5分鐘溫度為5°C (注:第一次清洗)。
[0103]6，取出具有細胞液的離心管，消毒，開蓋，棄上清液后，用注射器先加入少量 0.9%NaCl，搖勻后吸取至一支試管內(nèi)，加入0.9%NaCl至45ml處，再搖勻，配平，離心，速度為 1800轉(zhuǎn)，時間為5分鐘溫度為5°C (注:第二次清洗)。
[0104]7，取出具有細胞液的離心管，消毒，開蓋，棄上清液，用注射器先加入少量 0.9%NaCl，搖勻后加入0.9%NaCl至45ml處，再搖勻，配平，離心，設(shè)置速度為1600轉(zhuǎn)時間為 5分鐘溫度為5°C (第三次清洗)。
[0105]8,取出具有細胞液的離心管，消毒，開蓋,棄上清液后加入0.9%NaCl至所需要稀釋刻度處搖勻，用微量定量移液器取IOul用于細胞計數(shù)，其余細胞液密封，置于冰桶內(nèi)待用。
[0106]實施例2
[0107]藥理實驗，臍帶血干細胞懸液的一般藥理學實驗
[0108]I 材料
[0109]1.1動物:KM小鼠體質(zhì)量18~22g，雌雄各半。健康雜種家犬，體重12~18kg，雌雄皆用。動物飼養(yǎng)于SPF級實驗動物實驗室條件下，室內(nèi)溫度19~22°C，相對濕度40%~ 50%，給予全價顆粒飼料，自由攝食、飲水。
[0110]1.2藥物:人類臍帶血干細胞懸液，其中干細胞含量為8X IO7個/ml。
[0111]1.3上海欣曼公司SYS-G型小鼠自主活動測頻儀，美國BIOPAC公司RM-6000型多導生理記錄儀。
[0112]2試驗方法
[0113]2.1對精神神經(jīng)系統(tǒng)的影響
[0114]2.1.1對小鼠一般外觀行為的影響:取小鼠80只，隨機分為四組，每組20只，雌雄各半，給藥組分設(shè)0.5、1.0,2.0ul/kg三個劑量組，對照組給予5%葡萄糖注射液，均按
0.lml/10g體重尾靜脈注射給藥，給藥后lOmin，觀察小鼠的一般行為表現(xiàn)，步態(tài)、姿勢、肌肉緊張度、瞳孔變化、流涎、二便、皮毛等，同對照組比較，了解受試藥對動物的影響。
[0115]2.1.2對小鼠協(xié)調(diào)運動的影響:分組及給藥同前，采用傾斜板法，于給藥前及給藥后10min、30min及60min各進行一次測定，計算各組小鼠從木板上跌落的百分率，按簡化直接法統(tǒng)計。
[0116]2.1.3對小鼠自主活動的影響:小鼠80只，分組及給藥同前，于尾靜脈注射給藥后 IOmin,置小鼠于自發(fā)活動測定儀中，穩(wěn)定5min后,測定IOmin 內(nèi)自主活動次數(shù),用組間t檢驗進行統(tǒng)計處理。
[0117]2.2對呼吸系統(tǒng)及心血管系統(tǒng)的影響
[0118]家犬6只，雌雄各半，用戊巴比妥鈉30mg/kg，靜脈注射麻醉后，背位固定，分離右頸總動脈，插管連接TP —101型壓力轉(zhuǎn)換能以多導生理記錄儀記錄收縮壓，舒張壓及平均動脈壓；以針形電極刺入四肢皮下記錄II導聯(lián)心電圖，以立位轉(zhuǎn)換能器連接胸骨記錄呼吸頻率及幅度。實驗設(shè)0.5、1.0、2.0ul/kg三個劑量組，對照組用5%葡萄糖注射液，給藥容積為lml/kg，由股靜脈插管給藥，注射速度為30s，分別在靜脈注射給藥后1、2、5、10、15、20及 30min時記錄上述各項指標,觀察臍帶血干細胞懸液對呼吸,心電及血壓的作用，用t檢驗法進行用藥前后顯著性檢驗分析。
[0119]3 結(jié)論
[0120]3.1對小鼠一般行為表現(xiàn)的影響:實驗各組動物在用藥后60min內(nèi)的一般行為，步態(tài)、肌緊張度、活動、飲食、皮毛及二便，均無顯著變化，未見有瞳孔大小改變，豎毛、倦伏、流涎等異常癥狀，同對照組相比，差異無統(tǒng)計學意義。
[0121]3.2對協(xié)調(diào)運動的影響:各組動物于給藥前及給藥后各觀測點的跌落率均為0，表明在實驗所用0.5,1.0,2.0ul/kg劑量下對小鼠協(xié)調(diào)運動無明顯影響。
[0122]3.3對小鼠自主活動的影響:臍帶血干細胞懸液各劑量組對小鼠自主活動的影響見表1。
[0123]表1對小鼠自主活動的影響[0124]
【權(quán)利要求】
1.一種人干細胞組合物在制備用于治療艾滋病的藥物中的用途，其特征在于:所述的人干細胞選自人類骨髓、臍帶血或外周血干細胞；所述的干細胞組合物為按照本 申請人:的申請?zhí)枮?01210017987.9、名稱為“一種人類骨髓、臍帶血或外周血干細胞樣本密度分離液及干細胞分離方法”中的干細胞分離方法步驟(3)得到的“存在于整個離心管中間位置的約(2-4) mm厚的油狀干細胞層”；每份干細胞組合物經(jīng)(10-80) ml生理鹽水清洗及定容后，得到含有的人干細胞的數(shù)量為(I~8) X IO8個的干細胞懸液； 每份所述的干細胞懸液在使用前再用100ml的生理鹽水進一步稀釋，得到干細胞懸液中的個數(shù)密度為(0.125~8) X IO7個/ml、總?cè)萘繛?10_180ml的干細胞懸液的稀釋液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的在制備用于治療艾滋病的藥物中的用途，其特征在于，所述的用途采用以下方法實現(xiàn):所述的干細胞懸液的稀釋液通過體表淺靜脈進行靜脈點滴法注射到人體。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的在制備用于治療艾滋病的藥物中的用途，其特征在于，所述的靜脈輸入法的步驟為:(1)先用0.9%的氯化鈉溶液20-30ml沖管；(2)接著開始靜脈點滴注射輸入干細胞懸液的稀釋液，保持20-30滴/分鐘，半小時后無不良反應(yīng)可增加到30-50滴/分鐘，細胞輸入過程中每15分鐘輕輕晃動裝有所述干細胞懸液的稀釋液的細胞保存袋一次；(3)細胞輸入完畢后用0.9%的氯化鈉溶液20ml沖入細胞保存袋中輕輕晃動，輸入完畢后再用0.9%的氯化鈉溶液將輸液器中細胞沖凈，得到的沖洗液也同樣注入患者體內(nèi)，以保證細胞輸入數(shù)量；靜滴時將細胞液搖勻，避免細胞貼壁。
4.根據(jù)權(quán)利要求1~3的人干細胞組合物在制備用于治療艾滋病的藥物中的用途，其特征在于:所述的人干細胞為臍帶血干細胞。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的人干細胞組合物在制備用于治療艾滋病的藥物中的用途，其特征在于，所述的用途結(jié)合包括以下兩種藥物的配合實現(xiàn):1)、抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物治療所述的抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物包括以下藥物的至少一種:核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、非核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、蛋白酶抑制劑、整合酶抑制劑、融合酶抑制劑及CCR5抑制劑、立妥威 DDI，拉米夫定3TC，齊多夫定AZT，賽瑞特D4T，替諾福韋酯TDF，維樂命NVP，依非韋倫EFV， 克立芝，達魯那韋，拉替拉偉；2)、中醫(yī)中藥治療所述的中藥基礎(chǔ)組方如下:黃芪10-15克黨參6-15克白術(shù)6-12克茯苓6-18克甘草6-10克黃連3-6克紫花地丁 10-15克蒲公英10-15克銀花15-20克板藍根20克白花蛇舌草20-25克虎杖9_15克七葉一枝花10-15克淫羊藿20-25克。
【文檔編號】A61K35/14GK103585178SQ201310549262
【公開日】2014年2月19日 申請日期:2013年11月7日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月7日
【發(fā)明者】唐明淇, 劉春彥 申請人:唐明淇