一種藥物組合物及其在制備治療肝癌藥物中的應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種藥物組合物及其在制備治療肝癌藥物中的應用，該組合物由蘿卜硫素和齊墩果酸組成，在體外培養(yǎng)的人肝癌細胞HepG2和大鼠肝癌細胞RH-35中，蘿卜硫素和齊墩果酸藥物組合可以顯著抑制兩種肝癌細胞的活性，在利用HepG2細胞構建的小鼠轉移瘤中，蘿卜硫素和齊墩果酸藥物組合可以顯著抑制腫瘤的生長，蘿卜硫素和齊墩果酸藥物組合對腫瘤細胞生長的抑制具有一定特異性，在同樣的濃度作用下，藥物組合對正常大鼠肝細胞BRL-3A的生長無明顯影響，因此，蘿卜硫素和齊墩果酸藥物組合可用于治療肝癌的藥物中，即可以發(fā)揮蘿卜硫素和齊墩果酸藥物組合對腫瘤細胞的抑制作用，又可以發(fā)揮二者對正常肝細胞的保護作用。
【專利說明】一種藥物組合物及其在制備治療肝癌藥物中的應用
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及蘿卜硫素和齊墩果酸藥物組合及其在制備治療肝癌藥物中的應用。
【背景技術】
[0002]肝癌是指發(fā)生于肝臟的惡性腫瘤，包括原發(fā)性肝癌和轉移性肝癌兩種，人們日常說的肝癌指的多是原發(fā)性肝癌。原發(fā)性肝癌是臨床上最常見的惡性腫瘤之一，根據最新統(tǒng)計，全世界每年新發(fā)肝癌患者約六十萬，居惡性腫瘤的第五位。原發(fā)性肝癌按細胞分型可分為肝細胞型肝癌、膽管細胞型肝癌及混合型肝癌。中國是乙肝大國，我國的肝癌多在乙肝肝硬化的基礎上發(fā)展而來，丙肝病人也在逐漸增加，乙肝后也會發(fā)展為肝癌。目前我國發(fā)病人數(shù)約占全球的半數(shù)以上，占全球肝癌病人的55%，已經成為嚴重威脅我國人民健康和生命的一大殺手，其危險性不容小視。
[0003]目前國內外對晚期肝癌沒有好的治療方法。傳統(tǒng)的放療、化療對晚期肝癌療效差，而且價格昂貴，如國內外公認的晚期肝癌靶向藥物索拉菲尼一年的單一藥物費用就要10幾萬元，而對患者生命的延長時間只有幾個月，同時可能會伴有腹瀉、皮疹、高血壓、手足綜合征等較嚴重不良反應，效果還需進一步評價。且放療、化療對患者身體損傷很大，病人耐受性不好。對介入治療肝癌和中醫(yī)治療肝癌的研究都沒有取得滿意的效果。
[0004]抗癌藥物的 研發(fā)一直是藥學研究的熱點?？鼓[瘤藥物中有超過70%是天然產物或其衍生物，如紫杉醇及其衍生物就是目前臨床應用效果較好的抗腫瘤藥物之一。因此，從天然植物中尋找抗癌化合物或前體化合物，并將其有效組合對于腫瘤的治療具有重要的意義。
[0005]齊墩果酸(Oleanolic acid, 0A)是一種天然三職系化合物,并且是許多阜苷的苷配基。齊墩果酸大量存在于各種食物(菜子油)中，并且是許多植物葉子和根莖的成分，包括 Olea europaea、Viscum album L.、Aralia chinensis L 和其它超過 120 種天然植物。齊墩果酸作為中藥的有效成分已經有20多年的使用歷史，主要用于治療病毒性肝炎。有研究發(fā)現(xiàn)齊墩果酸可以保護小鼠免受各種肝毒物和親電子物，包括四氯化碳、對乙酰氨基酚、溴化苯和硫代乙酰胺等的損傷。給予齊墩果酸后，齊墩果酸主要分布于肝臟并在肝臟代謝。小鼠預先給予齊墩果酸，可以降低肝毒物引起的轉氨酶的升高并抑制肝小葉中心壞死。此外，有大量的研究報道富含齊墩果酸的天然藥物和齊墩果酸的合成衍生物表現(xiàn)出一系列的藥理學功能，包括抗炎、抗腫瘤、促進凋亡等作用。
[0006]蘿卜硫素(1-異硫氰酸-4-甲磺酰基丁烷)(Sulforaphane)，又稱“萊菔硫素”。在西蘭花、芥藍、北方圓紅蘿卜等十字花科植物中含量較豐富，是常見抗氧化劑，是蔬菜中所發(fā)現(xiàn)的抗癌效果最好的植物活性物質。其有獨特的抗癌功效，它可以造成癌細胞的細胞凋亡和細胞阻滯，同時可以誘導人體內的II相解毒酶，同時抑制I型酶的產生，最終通過多種酶體系排出致癌物和自由基等有害成分，同時，該成分不會在人體內殘留，對機體無副作用，是一種新型的抗癌成分。研究發(fā)現(xiàn)，蘿卜硫素對肺癌、食管癌、前胃癌作用明顯。
【發(fā)明內容】

[0007]本發(fā)明的目的在于提供一種藥物組合物及其在制備治療肝癌藥物中的應用。
[0008]為實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用了以下技術方案:
[0009]一種藥物組合物，該藥物組合物由蘿卜硫素和齊墩果酸組成。
[0010]所述蘿卜硫素在藥物組合物中的質量百分比為40-60%，齊墩果酸在藥物組合物中的質量百分比為40-60%。
[0011]所述蘿卜硫素以及齊墩果酸在藥物組合物中的質量百分比均為50%。
[0012]上述藥物組合物在制備用于治療肝癌的藥物中的應用。
[0013]本發(fā)明的有益效果為采用了齊墩果酸和蘿卜硫素的組合物作為治療肝癌的藥物，與現(xiàn)有肝癌治療藥物相比，本發(fā)明所述藥物組合物既保證了抑制腫瘤生長的有效性，又可發(fā)揮保護正常肝細胞效用。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0014]圖1是齊墩果酸結構式。
[0015]圖2是蘿卜硫素結構式。
[0016]圖3是蘿卜硫素和齊墩果酸聯(lián)合抑制HepG2細胞活性的效果。
`[0017]圖4是蘿卜硫素和齊墩果酸聯(lián)合抑制RH-35細胞活性的效果。
[0018]圖5是蘿卜硫素和齊墩果酸聯(lián)合抑制小鼠腫瘤生長的效果。
[0019]圖6是蘿卜硫素和齊墩果酸聯(lián)合對腫瘤細胞RH-35的選擇性抑制效果。
【具體實施方式】
[0020]下面結合附圖對本發(fā)明做進一步說明，其目的在于更好的理解本發(fā)明的內容，而非限制本發(fā)明的保護范圍。
[0021]1.實驗儀器
[0022]精密電子天平、ImL注射器、動物秤等。
[0023]2.實驗動物與材料
[0024]2.1實驗動物和細胞
[0025]BALB/c小鼠，清潔級，雄性，由第四軍醫(yī)大學實驗動物中心提供。
[0026]HepG2和BRL-3A細胞系，購于中科院細胞庫。
[0027]RH-35細胞系，購于上海復祥生物。
[0028]2.2實驗材料
[0029]生理鹽水、MTT (四甲基偶氮唑鹽)、苦味酸、細胞培養(yǎng)液等。
[0030]3.實驗方法
[0031]分別培養(yǎng)H印G2和RH-35細胞系，細胞生長至50_60%融合時，培養(yǎng)液中加入40 μ M齊墩果酸、40 μ M蘿卜硫素或20 μ M齊墩果酸+20 μ M蘿卜硫素，對照組加入溶解化合物所用溶劑DMSO(二甲基亞砜)，培養(yǎng)細胞24小時，使用MTT法測定細胞活力。方法如下:去上清，磷酸鹽緩沖液(PBS)洗2遍，0.5mg/mL MTT、37°C孵育細胞4小時，PBS洗2遍，二甲基亞砜(DMSO)溶解結晶，492nm測定吸光度。
[0032]取45只雄性BALB/c小鼠，取0.2mL對數(shù)生長期的H印G2細胞(I X 107/mL)注射到小鼠的右前腋窩皮下。10天后，腫瘤體積長到足夠測量的程度，將小鼠按腫瘤大小隨機分為4組:對照組(注射等體積給藥溶劑一含2%吐溫80的生理鹽水)、100mg/kg齊墩果酸組、100mg/kg蘿卜硫素組、50mg/kg齊墩果酸+50mg/kg蘿卜硫素組。小鼠腹腔注射給藥4周，處死動物，測量腫瘤體積。
[0033]分別培養(yǎng)相同的細胞數(shù)接種BRL-3A和RH-35細胞系，細胞生長至50_60%融合時，培養(yǎng)液中加入20 μ M齊墩果酸+20 μ M蘿卜硫素，培養(yǎng)細胞24小時，使用MTT法測定細胞活力。方法如下:去上清，磷酸鹽緩沖液(PBS)洗2遍，0.5mg/mL MTT、37°C孵育細胞4小時，PBS洗2遍，二甲基亞砜(DMSO)溶解結晶，492nm測定吸光度。
[0034]4.實驗結果
[0035]4.1如圖3所示，齊墩果酸處理使H印G2細胞活力降低到對照的51.2%±5%，蘿卜硫素使H印G2細胞活力降低到對照的57.0%±9%，齊墩果酸+蘿卜硫素處理使H印G2細胞活力降低到對照的43.6%±3%。相比單獨使用齊墩果酸或蘿卜硫素，聯(lián)合應用齊墩果酸和蘿卜硫素使H印G2細胞活力降低地更為明顯(與單獨使用齊墩果酸或蘿卜硫素相比，p〈0.05)。
[0036]4.2如圖4所示，齊墩果酸處理使RH-35細胞活力降低到對照的55.2%±5%，蘿卜硫素使RH-35細胞活力降低到對照的61.0%±10%，齊墩果酸+蘿卜硫素處理使RH-35
細胞活力降低到對照的40.8%±3%。相比單獨使用齊墩果酸或蘿卜硫素，聯(lián)合應用齊墩果酸和蘿卜硫素使RH-35細胞活力降低地更為明顯(與單獨使用齊墩果酸或蘿卜硫素相比，p〈0.05)。
[0037]4.3如圖5所示,對照組瘤體重量為1.52±0.13g,齊墩果酸治療組瘤體重量為
0.78 ±0.08g,蘿卜硫素治療組瘤體重量為0.86 ±0.09g,齊墩果酸+蘿卜硫素治療組瘤體重量為0.66±0.10g。相比單獨使用齊墩果酸或蘿卜硫素，聯(lián)合應用齊墩果酸和蘿卜硫素使瘤體重量降低地更為明顯，(與單獨使用齊墩果酸或蘿卜硫素相比，p〈0.05)。
[0038]4.4如圖6所示，齊墩果酸+蘿卜硫素處理對大鼠正常肝細胞BRL-3A活性無顯著影響，但使大鼠肝癌細胞RH-35細胞活性顯著降低為對照的56%±8%?？梢?，聯(lián)合應用齊墩果酸和蘿卜硫素對腫瘤細胞的抑制具有特異性。即在不影響正常肝細胞活性的情況下，聯(lián)合應用齊墩果酸和蘿卜硫素可以有效地抑制腫瘤細胞活性(P〈0.05)。
[0039]本發(fā)明的實驗測定結果表明:
[0040]體外培養(yǎng)的人肝癌細胞HepG2和大鼠肝癌細胞RH-35中，蘿卜硫素和齊墩果酸藥物組合可以顯著抑制兩種肝癌細胞的活性。在利用HepG2細胞構建的小鼠轉移瘤中，蘿
卜硫素和齊墩果酸藥物組合可以顯著抑制腫瘤的生長。蘿卜硫素和齊墩果酸藥物組合對腫瘤細胞生長的抑制具有一定特異性，在同樣的濃度作用下，藥物組合對正常大鼠肝細胞BRL-3A的生長無明顯影響。因此，蘿卜硫素和齊墩果酸藥物組合可用于治療肝癌的藥物中，即可以發(fā)揮蘿卜硫素和齊墩果酸藥物組合對腫瘤細胞的抑制作用，又可以發(fā)揮二者對正常肝細胞的保護作用。
[0041]由以上實驗可見，本發(fā)明利用齊墩果酸+蘿卜硫素聯(lián)合用于治療肝癌的藥物中是可行的。
【權利要求】
1.一種藥物組合物，其特征在于:該藥物組合物由蘿卜硫素和齊墩果酸組成。
2.根據權利要求1所述一種藥物組合物，其特征在于:所述蘿卜硫素的質量百分比為40-60%,齊墩果酸的質量百分比為40-60%。
3.根據權利要求1所述一種藥物組合物，其特征在于:所述蘿卜硫素以及齊墩果酸的質量百分比均為50%。
4.一種如權利要求1所述藥物組合物在制備用于治療肝癌的藥物中的應用。
【文檔編號】A61P35/00GK103585158SQ201310512174
【公開日】2014年2月19日 申請日期:2013年10月25日 優(yōu)先權日:2013年10月25日
【發(fā)明者】王欣, 海春旭 申請人:中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學