一種隱形熱敏脂質(zhì)體的制備及其藥物轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)在腫瘤治療藥物中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種隱形熱敏脂質(zhì)體藥物轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)的制備及其在腫瘤治療藥物中的應(yīng)用，可有效解決現(xiàn)有腫瘤治療藥物副作用大、治療效果不佳等問(wèn)題。本發(fā)明技術(shù)方案是由熱敏脂質(zhì)體負(fù)載靶向熱敏劑和化療藥物構(gòu)成，其中，靶向熱敏劑和化療藥物的質(zhì)量比為1:3，其中隱形熱敏脂質(zhì)體是經(jīng)羧基化碳納米管的合成、葉酸靶向的碳納米管-賴氨酸的合成、隱形熱敏脂質(zhì)體的制備或經(jīng)羧基化碳納米管的合成、負(fù)載化療藥物的碳納米管-賴氨酸的合成、隱形熱敏脂質(zhì)體的制備而得。本發(fā)明物理化學(xué)穩(wěn)定性良好，制備條件簡(jiǎn)單可行，原料來(lái)源豐富，成本低，副作用小，能有效抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，從而達(dá)到腫瘤靶向治療的作用，是腫瘤靶向治療中藥物載體上的創(chuàng)新。
【專利說(shuō)明】一種隱形熱敏脂質(zhì)體的制備及其藥物轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)在腫瘤治療藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，特別是一種隱形熱敏脂質(zhì)體的制備及其藥物轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)在腫瘤治療藥物中的應(yīng)用?！颈尘凹夹g(shù)】
[0002]隱形熱敏脂質(zhì)體是一種物理化學(xué)和主動(dòng)靶向的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)載體。在正常體溫下，親水性藥物很難透過(guò)脂質(zhì)體膜而擴(kuò)散出來(lái)，而當(dāng)脂質(zhì)體隨血液循環(huán)經(jīng)過(guò)被加熱的靶器官時(shí)，局部的高溫可促使藥物在靶部位釋放并形成較高的藥物濃度；隱形熱敏脂質(zhì)體具有良好的載藥性、靶向性以及生物相容性而成為生物醫(yī)藥領(lǐng)域中的研究熱點(diǎn)，目前已報(bào)道熱敏脂質(zhì)體局部加熱方法有水浴法、微波法、射頻法等。
[0003]單壁或多壁碳納米管，石墨烯，納米金具有巨大的比表面積(~2600m2/g)、較高的近紅外產(chǎn)熱能力、獨(dú)特的跨膜能力以及大離域n鍵等特性，已廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。碳納米管可以有效攜帶蛋白質(zhì)、抗體、多肽、藥物和核酸等生物活性物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞，從而成為人們關(guān)注的載體。碳納米管對(duì)700~IlOOnm范圍的近紅外光具有高吸收特性，同時(shí)生物系統(tǒng)對(duì)此范圍的近紅外光具有高度透過(guò)性，因此可利用碳納米管的光熱轉(zhuǎn)換特性對(duì)腫瘤進(jìn)行激光熱療。碳納米管是藥物轉(zhuǎn)運(yùn)載體，同時(shí)也是發(fā)揮熱療效應(yīng)的主體，可作為化療藥物增敏劑和靶向熱敏劑。但碳納米管不溶于水和有機(jī)溶劑，且在溶液中易聚集成束，難以分散，嚴(yán)重影響其應(yīng)用。
[0004]DPPC ( 二棕櫚酰磷脂酰膽堿)，C40H80NO8P,分子量734.04,相變溫度41_42°C，可作為熱敏脂質(zhì)體制備的主要材料，當(dāng)溫度達(dá)到其相變溫度時(shí)就可引起熱敏脂質(zhì)體迅速釋放內(nèi)含藥物，實(shí)現(xiàn)靶向治療；DSPE-PEG2000 (二硬脂?；字Ｒ掖及?聚乙二醇2000)具有良好的親水性和柔韌性，可延長(zhǎng)藥物載體在體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間。
[0005]目前，通過(guò)隱形熱敏脂質(zhì)體負(fù)載靶向熱敏劑(如碳納米管)和化療藥物形成藥物轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)，特別是在腫瘤治療藥物中的應(yīng)用尚未見(jiàn)有報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]針對(duì)上述情況，克服現(xiàn)有技術(shù)之缺陷，本發(fā)明之目的就是提供一種隱形熱敏脂質(zhì)體藥物轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)的制備方法及其在腫瘤治療藥物中的應(yīng)用，可有效解決現(xiàn)有腫瘤治療藥物副作用大、治療效果不佳等問(wèn)題。
[0007]本發(fā)明解決的技術(shù)方案是，由隱形熱敏脂質(zhì)體負(fù)載靶向熱敏劑和化療藥物構(gòu)成，其中，靶向熱敏劑和化療藥物的質(zhì)量比為1: 3，所述的靶向熱敏劑為單壁碳納米管及其衍生物、多壁碳納米管及其衍生物、石墨烯及其衍生物、納米金及其衍生物、納米銀及其衍生物、有機(jī)聚合物的一種；所述的化療藥物為鹽酸阿霉素、鹽酸表阿霉素、柔紅霉素、鹽酸米托蒽醌、多西紫杉醇、紫杉醇、順鉬、卡鉬、奧沙利鉬、5-氟尿嘧啶、長(zhǎng)春瑞濱、洛莫司汀、卡莫司汀、地西他賓、甲氨蝶呤、羥基喜樹堿、小核酸類寡義反核苷酸和小干擾RNA的一種或兩種以上的組合物。
[0008]所述的隱形熱敏脂質(zhì)體的制備方法，由以下步驟實(shí)現(xiàn):
[0009](I)羧基化碳納米管的合成:取95~IlOmg碳納米管，放入250mL燒瓶中，加入120mL的混酸，11~13mL質(zhì)量濃度30%的過(guò)氧化氫溶液，于超聲波清洗器超聲Ih后，加入IL超純水稀釋，用0.22 微孔濾膜和布氏漏斗抽濾，用超純水沖洗至pH為中性，放入烘箱中80°C恒溫干燥，得羧基化的碳納米管(CNTs-COOH);所述混酸為濃硫酸與濃硝酸以體積比3:I所組成的混合酸；
[0010](2)葉酸祀向的碳納米管-賴氨酸的合成:取羧基化的碳納米管45~55mg,加入25mL0.1~0.3M的賴氨酸溶液,再加入葉酸9~IImg, 45~55mgl_乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽(EDC.HCDd~Ilmg N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)，置于燒瓶中，超聲分散2h后，在冰浴下，以100r/min攪拌24h使其充分反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后于透析袋中透析48h，除去未反應(yīng)的EDC ?此1、順3、葉酸和賴氨酸，在601:下真空干燥24h，得葉酸靶向的碳納米管-賴氨酸(FA-Lys/CNTs)；
[0011](3)隱形熱敏脂質(zhì)體的制備:稱取45~55mg 二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)，1~3mg二硬脂?；字Ｒ掖及?聚乙二醇2000 (DSPE-PEG2000)及18~22mg的膽固醇，置于IOOmL爺形燒瓶中，加入乙醚使完全溶解,再加入5mL PBS溶液,超聲乳化40min,形成穩(wěn)定的0/W型乳劑，在45°C減壓旋轉(zhuǎn)下除去乙醚，探超(200W，2min),于透析袋中透析48h后，得隱形熱敏脂質(zhì)體；所述的PBS溶液為IOmg葉酸靶向的碳納米管-賴氨酸和6mg鹽酸阿霉素溶于5mL PBS (pH7.4)形成的溶液。
[0012]也可由以下步驟實(shí)現(xiàn):
[0013](I)羧基化碳納米管的合成:取95~IlOmg碳納米管，放入250mL燒瓶中，加入120mL混酸，11~13mL質(zhì)量濃度30%過(guò)氧化氫溶液，于超聲波清洗器超聲Ih后，加入IL超純水稀釋，用0.22 y m微孔濾膜和布氏漏斗抽濾，用超純水沖洗至pH為中性，放入烘箱中80°C恒溫干燥，得羧基化碳納米管(CNTs-COOH);所述混酸為濃硫酸與濃硝酸以體積比3:
I所組成的混合酸；
[0014](2)負(fù)載化療藥物的碳納米管-賴氨酸的合成:稱取羧基化碳納米管45~55mg,加入25mL0.1~0.3M賴氨酸溶液，45~55mgl_乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽(EDOHCl)和9~Ilmg N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)，置于燒瓶中，超聲分散2h后，在冰浴下，以100r/min攪拌24h，使其充分反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后于透析袋中透析48h，除去未反應(yīng)的EDC-HC1.NHS和賴氨酸，在60°C下真空干燥24h，得碳納米管-賴氨酸(Lys/CNTs);再稱取9~Ilmg碳納米管-賴氨酸,加入IOmL超純水,超聲至全溶,再加入18~22mg化療藥物，超聲4h，于透析袋中透析24h，除去游離的藥物，得負(fù)載藥物的碳納米管-賴氨酸；
[0015](3)隱形熱敏脂質(zhì)體的制備:取45~55mg的二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC), I~3mg的二硬脂?；字Ｒ掖及?聚乙二醇2000 (DSPE-PEG2000)及18~22mg的膽固醇，置于IOOmL爺形燒瓶中，加入乙醚使完全溶解,再加入5mL PBS溶液,超聲乳化40min,形成穩(wěn)定的0/W型乳劑，在45°C減壓旋轉(zhuǎn)下除去乙醚，探超(200W，2min),于透析袋中透析48h，得隱形熱敏脂質(zhì)體；所述PBS溶液為IOmg負(fù)載化療藥物的碳納米管-賴氨酸和6mg鹽酸阿霉素溶于5mL PBS (pH7.4)形成的溶液。
[0016]所述隱形熱敏脂質(zhì)體藥物轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)，可以用于靜脈注射、肌肉注射、瘤內(nèi)注射和皮下注射、透皮給藥、體內(nèi)植入。
[0017]本發(fā)明的隱形熱敏脂質(zhì)體負(fù)載靶向熱敏劑(如碳納米管)和化療藥物，靶向熱敏劑能夠負(fù)載難溶性化療藥物，具有強(qiáng)光熱轉(zhuǎn)換特性和產(chǎn)生活性氧能力，還具有腫瘤靶向性的特點(diǎn)，在腫瘤部位進(jìn)行激光照射，利用熱敏劑在激光照射下產(chǎn)熱導(dǎo)致熱敏材料的熱敏感性使藥物轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)定位釋放藥物，從而達(dá)到腫瘤靶向治療的作用；本發(fā)明體物理化學(xué)穩(wěn)定性良好，制備條件簡(jiǎn)單可行，原料來(lái)源豐富，成本低，副作用小，能有效抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，是腫瘤靶向治療中藥物載體上的創(chuàng)新。
【具體實(shí)施方式】
[0018]以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。
[0019]實(shí)施例1[0020]本發(fā)明制備方法在具體實(shí)施中，可由以下步驟實(shí)現(xiàn):
[0021](I)羧基化碳納米管的合成:稱取IOOmg碳納米管，放入250mL圓底燒瓶中，加入120mL的混酸，12mL質(zhì)量濃度30%的過(guò)氧化氫溶液，于超聲波清洗器超聲Ih后，加入IL超純水稀釋，用0.22 微孔濾膜和布氏漏斗抽濾，用超純水沖洗至pH為中性，放入烘箱中80°C恒溫干燥，得羧基化的碳納米管(CNTs-COOH);所述混酸為濃硫酸與濃硝酸以體積比3: I所組成的混合酸；
[0022](2)葉酸靶向的碳納米管-賴氨酸的合成:稱取羧基化的碳納米管50mg，加入25mL0.2M的賴氨酸溶液，再加入葉酸10mg，50mgl-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽(EDC ? HCl)，IOmg N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)，置于燒瓶中，超聲分散2h后，在冰浴下，以100r/min攪拌24h使其充分反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后于透析袋中透析48h，除去未反應(yīng)的EDC ? HCl、NHS、葉酸和賴氨酸，在60°C下真空干燥24h，得葉酸靶向的碳納米管-賴氨酸(FA-Lys/CNTs)；
[0023](3)隱形熱敏脂質(zhì)體的制備:稱取50mg 二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)，2mg 二硬脂?；字Ｒ掖及?聚乙二醇2000 (DSPE-PEG2000)及20mg的膽固醇，置于IOOmL茄形燒瓶中，加入乙醚使完全溶解，再加入5mL PBS溶液，超聲乳化40min，形成穩(wěn)定的0/W型乳劑，在45°C減壓旋轉(zhuǎn)下除去乙醚，探超(200W，2min)，于透析袋中透析48h后，得隱形熱敏脂質(zhì)體；所述的PBS溶液為IOmg葉酸靶向的碳納米管-賴氨酸和6mg鹽酸阿霉素溶于5mLPBS (pH7.4)形成的溶液。
[0024]實(shí)施例2
[0025]本發(fā)明制備方法在具體實(shí)施中，也可由以下步驟實(shí)現(xiàn):
[0026](I)羧基化碳納米管的合成:稱取105mg碳納米管，放入250mL圓底燒瓶中，加入120mL的混酸，13mL質(zhì)量濃度30%的過(guò)氧化氫溶液，于超聲波清洗器超聲Ih后，加入IL超純水稀釋，用0.22 微孔濾膜和布氏漏斗抽濾，用超純水沖洗至pH為中性，放入烘箱中80°C恒溫干燥，得羧基化的碳納米管(CNTs-COOH)；
[0027](2)葉酸靶向的碳納米管-賴氨酸的合成:稱取羧基化的碳納米管53mg，加入25mL0.2M的賴氨酸溶液，再加入葉酸llmg，53mgl-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽(EDC ? HCl)，llmg N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)，置于燒瓶中，超聲分散2h后，在冰浴下，以100r/min攪拌24h使其充分反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后于透析袋中透析48h，除去未反應(yīng)的EDC ? HCl、NHS、葉酸和賴氨酸，在60°C下真空干燥24h，得葉酸靶向的碳納米管-賴氨酸(FA-Lys/CNTs)；
[0028](3)隱形熱敏脂質(zhì)體的制備:稱取53mg 二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)，3mg 二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000 (DSPE-PEG2000)及22mg的膽固醇，置于IOOmL茄形燒瓶中，加入乙醚使完全溶解，再加入5mL PBS溶液，超聲乳化40min，形成穩(wěn)定的0/W型乳劑，在45°C減壓旋轉(zhuǎn)下除去乙醚，探超(200W，2min),于透析袋中透析48h后，得隱形熱敏脂質(zhì)體；所述的PBS溶液為IOmg葉酸靶向的碳納米管-賴氨酸和6mg鹽酸阿霉素溶于5mLPBS (pH7.4)形成的溶液。
[0029]實(shí)施例3
[0030]本發(fā)明制備方法在具體實(shí)施中，可由以下步驟實(shí)現(xiàn): [0031](I)羧基化碳納米管的合成:稱取IOOmg碳納米管，放入250mL圓底燒瓶中，加入120mL混酸，12mL質(zhì)量濃度30%的過(guò)氧化氫溶液，于超聲波清洗器超聲Ih后，加入IL超純水稀釋，用0.22 微孔濾膜和布氏漏斗抽濾，用超純水沖洗至pH為中性，放入烘箱中80°C恒溫干燥，得羧基化碳納米管(CNTs-COOH)；
[0032](2)負(fù)載鹽酸阿霉素的碳納米管-賴氨酸的合成:稱取羧基化碳納米管50mg，加入25mL0.2M賴氨酸溶液，50mgl-乙基_ (3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽(EDC ? HCl)和IOmg N-羥基琥拍酰亞胺(NHS),置于燒瓶中，超聲分散2h后,在冰浴下，以100r/min攪拌24h，使其充分反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后于透析袋中透析48h，除去未反應(yīng)的EDC -HC1.NHS和賴氨酸，在60°C下真空干燥24h，得碳納米管-賴氨酸(Lys/CNTs);再稱取IOmg碳納米管-賴氨酸，加入IOmL超純水，超聲至全溶，再加入20mg鹽酸阿霉素，超聲4h，于透析袋中透析24h，除去游離的藥物，得負(fù)載鹽酸阿霉素的碳納米管-賴氨酸(Lys/CNTs-DOX)；
[0033](3)隱形熱敏脂質(zhì)體的制備:稱取50mg的二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)，2mg的二硬脂?；字Ｒ掖及?聚乙二醇2000 (DSPE-PEG2000)及20mg的膽固醇，置于IOOmL茄形燒瓶中，加入乙醚使完全溶解，再加入5mL PBS溶液,超聲乳化40min,形成穩(wěn)定的0/W型乳劑，在45°C減壓旋轉(zhuǎn)下除去乙醚，探超(200W，2min)，于透析袋中透析48h，得隱形熱敏脂質(zhì)體；所述PBS溶液為IOmg負(fù)載鹽酸阿霉素的碳納米管-賴氨酸和6mg鹽酸阿霉素溶于5mLPBS (pH7.4)形成的溶液。
[0034]實(shí)施例4
[0035]本發(fā)明制備方法在具體實(shí)施中，也可由以下步驟實(shí)現(xiàn):
[0036](I)羧基化碳納米管的合成:稱取105mg碳納米管，放入250mL圓底燒瓶中，加入120mL混酸，13mL質(zhì)量濃度30%的過(guò)氧化氫溶液，于超聲波清洗器超聲Ih后，加入IL超純水稀釋，用0.22 微孔濾膜和布氏漏斗抽濾，用超純水沖洗至pH為中性，放入烘箱中80°C恒溫干燥，得羧基化碳納米管(CNTs-COOH)；
[0037](2)負(fù)載多西紫杉醇的碳納米管-賴氨酸的合成:稱取羧基化碳納米管53mg，加入25mL0.15M賴氨酸溶液，53mgl-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽(EDOHCl)和llmg N-羥基琥拍酰亞胺(NHS),置于燒瓶中，超聲分散2h后,在冰浴下，以100r/min攪拌24h，使其充分反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后于透析袋中透析48h，除去未反應(yīng)的EDOHCl、NHS和賴氨酸，在60°C下真空干燥24h，得碳納米管-賴氨酸(Lys/CNTs);再稱取IOmg碳納米管-賴氨酸，加入IOmL超純水，超聲至全溶，再加入22mg多西紫杉醇，超聲4h，于透析袋中透析24h，除去游離的藥物，得負(fù)載多西紫杉醇的碳納米管-賴氨酸(Lys/CNTs-DOC)；
[0038](3)隱形熱敏脂質(zhì)體的制備:稱取53mg的DPPC，2mg的DSPE-PEG2000及22mg的膽固醇，置于IOOmL茄形燒瓶中，加入乙醚使完全溶解，再加入5mL PBS溶液，超聲乳化40min，形成穩(wěn)定的0/W型乳劑，在45°C減壓旋轉(zhuǎn)下除去乙醚，探超(200W，2min)，于透析袋中透析48h，得隱形熱敏脂質(zhì)體；所述PBS溶液為IOmg負(fù)載多西紫杉醇的碳納米管-賴氨酸和6mg鹽酸阿霉素溶于5mL PBS (pH7.4)形成的溶液。
[0039]本發(fā)明的隱形熱敏脂質(zhì)體的制備方法及其藥物轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)在腫瘤治療藥物中的應(yīng)用分為體外和體內(nèi)兩部分:
[0040](I)體內(nèi):將本發(fā)明的隱形熱敏脂質(zhì)體藥物轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)加入到癌細(xì)胞中進(jìn)行培養(yǎng)，給藥3h后用780~IlOOnm波長(zhǎng)的寬波長(zhǎng)光源或者808nm激光光照，光照時(shí)間I~5min，繼續(xù)培養(yǎng)24h，測(cè)定癌細(xì)胞的存活率。
[0041]上述癌細(xì)胞為:器官表面或者內(nèi)部出現(xiàn)的各種實(shí)體瘤，肺癌，鼻咽癌，食道癌，胃癌，肝癌，大腸癌，乳腺癌，卵巢癌，膀胱癌，白血病，胰腺癌，宮頸癌，喉癌，甲狀腺癌，舌癌，腦瘤(顱內(nèi)腫瘤)，小腸腫瘤，膽囊癌，膽管癌，腎癌，前列腺癌，陰莖癌，睪丸腫瘤，子宮內(nèi)膜癌，絨毛膜癌，陰道惡性腫瘤，外陰惡性腫瘤，霍奇金病，非霍奇金淋巴瘤，皮膚癌，惡性黑色素瘤中的一種。
[0042](2)體外:將本發(fā)明的隱形熱敏脂質(zhì)體藥物轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)靜脈注射到荷瘤小鼠體內(nèi)，給藥3h后用780~IlOOnm波長(zhǎng)的寬波長(zhǎng)光源或者808nm激光光照，光照時(shí)間為I~5min，測(cè)量荷瘤小鼠的腫瘤體積大小。
[0043]上述荷瘤小鼠為:器官表面或者內(nèi)部出現(xiàn)的各種實(shí)體瘤，肺癌，鼻咽癌，食道癌，胃癌，肝癌，大腸癌，乳腺癌，卵巢癌，膀胱癌，白血病，胰腺癌，宮頸癌，喉癌，甲狀腺癌，舌癌，腦瘤(顱內(nèi)腫瘤)，小腸腫瘤，膽囊癌，膽管癌，腎癌，前列腺癌，陰莖癌，睪丸腫瘤，子宮內(nèi)膜癌，絨毛膜癌，陰道惡性腫瘤，外陰惡性腫瘤，霍奇金病，非霍奇金淋巴瘤，皮膚癌，惡性黑色素瘤中的一種。
[0044]本發(fā)明新型靶向熱敏增敏劑介導(dǎo)的隱形熱敏脂質(zhì)體作為熱敏劑可制成多種藥物劑型，如注射劑、注射用無(wú)菌粉針、分散劑、貼劑、凝膠劑、植入劑等。本發(fā)明的制劑可加入各種制劑添加劑，如生理鹽水、葡萄糖、緩沖溶液和防腐劑等。給藥方式可為靜脈注射、肌肉注射、瘤內(nèi)注射和皮下注射、透皮給藥、體內(nèi)植入方式等。
[0045]相關(guān)試驗(yàn)資料如下:
[0046]—、使用光照射本發(fā)明隱形熱敏脂質(zhì)體藥物轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)活性的測(cè)定。
[0047]通過(guò)光照射藥物轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)在體外抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn):將MCF-7乳腺癌細(xì)胞(由上海細(xì)胞庫(kù)提供)用作待考察的癌細(xì)胞。將MCF-7細(xì)胞培養(yǎng)在含胎牛血清(FBS) 10%，青鏈霉素混合液1%的RPMI1640培養(yǎng)基中，培養(yǎng)箱條件為37°C、5%C02，每2~3天傳代一次。收集對(duì)數(shù)期細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度，96孔板每孔加入200 iil，鋪板使待測(cè)細(xì)胞調(diào)密度至6 X IO3個(gè)/孔，(邊緣孔用無(wú)菌PBS填充)。置于5%C02，37°C孵育24h，至細(xì)胞單層鋪滿孔底(96孔平底板)，加入濃度梯度(12.5、25、50、100ii g/ml)的實(shí)施例1中的隱形熱敏脂質(zhì)體，設(shè)置復(fù)孔為4~6個(gè)。光照組放置在808nm近紅外光2W中2min，保持光照過(guò)程中溫度在37°C，光照結(jié)束后用鋁箔包裹細(xì)胞板置于CO2培養(yǎng)箱中孵育24h，對(duì)于無(wú)光照組而言，則直接用鋁箔包裹細(xì)胞板置于CO2培養(yǎng)箱中孵育24h，終止培養(yǎng)，吸出含藥培養(yǎng)基，每孔用150 u I PBS洗2遍，加入預(yù)冷的10%TCA200iil，4°C放置lh。倒掉固定液，每孔用去離子水洗5遍，甩干，空氣干燥。每孔加入100 ill的SRB溶液，靜置放置lOmin，未與蛋白結(jié)合的SRB用1%醋酸洗5遍，空氣干燥。結(jié)合的SRB用150 u 110mmol/L非緩沖Tris堿溶解。在808nm處測(cè)定每孔的OD值。存活率的計(jì)算公式:存活率=實(shí)驗(yàn)組OD值/對(duì)照組OD值，其中實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組均為扣除空白對(duì)照組后的值。
[0048]實(shí)驗(yàn)證明，當(dāng)用光照射2min，本發(fā)明藥物轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)的加入直接影響MCF-7細(xì)胞的增殖。二、光照射時(shí)，本發(fā)明隱形熱敏脂質(zhì)體藥物轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)體內(nèi)抗腫瘤活性測(cè)定。
[0049]取小鼠S180腹水瘤細(xì)胞，用注射用生理鹽水以3:1比例稀釋后，每只小鼠于腹腔注射0.3ml，小鼠喂養(yǎng)7天后，抽取小鼠S180腹水瘤細(xì)胞，計(jì)數(shù)后以注射用生理鹽水稀釋成濃度為2X IO6個(gè)/ml的細(xì)胞懸液，皮下接種與小鼠右前肢上部。小鼠接種腫瘤7d后，取其中36只腫瘤體積≥IOOmm3昆明小鼠，隨機(jī)分為6組，每組6只。具體分組如下:(I)對(duì)照組(生理鹽水組);(2)生理鹽水激光組；(3)藥物溶液組；(4)藥物溶液激光組；(5)制劑組；(6)制劑激光組。6組均采用靜脈給藥的方式，其中光照組使用的光源為808nm近紅外光源，功率為2W，給藥3h后激光照射腫瘤部位，一次照射時(shí)間為2min。每2d給藥一次，每次注射生理鹽水或者藥物溶液或者lmg/ml的制劑溶液200 U 1，共給藥7次。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中每日觀察小鼠生活狀態(tài)，每2d稱其體重并使用游標(biāo)卡尺測(cè)量小鼠肉瘤的長(zhǎng)徑(A)與短徑
(B)，按公式腫瘤體積計(jì)算腫瘤體積。

2
[0050]實(shí)驗(yàn)證明，在光照射下給藥本發(fā)明的隱形熱敏脂質(zhì)體，可以明顯抑制小鼠腫瘤體積的增加。
[0051]三、本發(fā)明的隱形熱敏脂質(zhì)體藥物轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)載藥量的測(cè)定。
[0052]取本發(fā)明的鹽酸阿霉素隱形熱敏脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)，通過(guò)加入40倍甲醇提取給藥系統(tǒng)中包封的鹽酸阿霉素，紫外分光光度計(jì)測(cè)定載藥量為1.85mg/mL，表明本發(fā)明的鹽酸阿霉素隱形熱敏脂質(zhì)體可以作為抗腫瘤藥物的載體。
[0053]四、本發(fā)明的鹽酸阿霉素隱形熱敏脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)的粒子大小和表面帶電量的確定。
[0054]本發(fā)明中的鹽酸阿霉素隱形熱敏脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)的粒子大小和表面帶電量的確定，使用Nano-ZS90型激光粒度分析儀進(jìn)行測(cè)定，折射率設(shè)置為1.590，吸收系數(shù)設(shè)置為
0.010，溫度設(shè)置為25°C，測(cè)量模式設(shè)置為自動(dòng)，以Z平均統(tǒng)計(jì)值作為測(cè)定結(jié)果。每一水平縮合體均配制3份，每份測(cè)量一次，取三次測(cè)量值的平均值作為測(cè)量結(jié)果。介電常數(shù)設(shè)置為79，黏度系數(shù)設(shè)置為0.8872，溫度設(shè)置為25°C，測(cè)量模式設(shè)置為自動(dòng)。每一水平縮合體均配制3份，每份測(cè)量一次，取三次測(cè)量值的平均值作為測(cè)量結(jié)果。測(cè)得的結(jié)果是粒徑為100~200nm,電位是 _40mV。
[0055]五、本發(fā)明中的鹽酸阿霉素隱形熱敏脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)的體外抗腫瘤活性。
[0056]本發(fā)明中的鹽酸阿霉素隱形熱敏脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)的體外抗腫瘤活性，將MCF-7乳腺癌細(xì)胞(由上海細(xì)胞庫(kù)提供)用作待考察的癌細(xì)胞。將MCF-7細(xì)胞培養(yǎng)在含胎牛血清(FBS) 10%,青鏈霉素混合液1%的RPMI1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)箱條件為37°C、5%C02，每2~3天傳代一次。收集對(duì)數(shù)期細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度，96孔板每孔加入200 u 1，鋪板使待測(cè)細(xì)胞調(diào)密度至6 X IO3個(gè)/孔，(邊緣孔用無(wú)菌PBS填充)。置于5%C02，37°C孵育24h，至細(xì)胞單層鋪滿孔底(96孔平底板)，加入濃度梯度(0、0.5、l、2、4、6、8iig/ml)的實(shí)施例1中的鹽酸阿霉素隱形熱敏脂質(zhì)體，不加入實(shí)施例1中的鹽酸阿霉素隱形熱敏脂質(zhì)體為對(duì)照組，設(shè)置復(fù)孔為4~6個(gè)。光照組放置在808nm近紅外光2W中2min，保持光照過(guò)程中溫度在37°C，光照結(jié)束后用鋁箔包裹細(xì)胞板置于CO2培養(yǎng)箱中孵育24h，對(duì)于不光照組而言，則直接用鋁箔包裹細(xì)胞板置于C02培養(yǎng)箱中孵育24h，終止培養(yǎng)，吸出含藥培養(yǎng)基，每孔用150 u I PBS洗2遍，加入預(yù)冷的10%TCA200 u 1，4°C放置lh。倒掉固定液，每孔用去離子水洗5遍，甩干，空氣干燥。每孔加入100 ill的SRB溶液，靜置放置lOmin，未與蛋白結(jié)合的SRB用1%醋酸洗5遍，空氣干燥。結(jié)合的SRB用150 ill 10mmol/L非緩沖Tris堿溶解。在515nm處測(cè)定每孔的OD值。抑制率的計(jì)算公式:抑制率=1-實(shí)驗(yàn)組OD值/對(duì)照組OD值，其中實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組均為扣除空白對(duì)照組后的值 。
[0057]實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明的鹽酸阿霉素隱形熱敏脂質(zhì)體作為藥物載體時(shí)能裝載藥物進(jìn)入腫瘤細(xì)胞內(nèi)部，更好地發(fā)揮抗腫瘤藥物的療效，而且結(jié)合光照后，能夠更明顯抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。六、本發(fā)明中的鹽酸阿霉素隱形熱敏脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)的體內(nèi)抗腫瘤活性。
[0058]本發(fā)明中的鹽酸阿霉素隱形熱敏脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)的體內(nèi)抗腫瘤活性，取小鼠S180腹水瘤細(xì)胞，用注射用生理鹽水以3:1比例稀釋后，每只小鼠于腹腔注射0.3ml，小鼠喂養(yǎng)7天后，抽取小鼠S180腹水瘤細(xì)胞，計(jì)數(shù)后以注射用生理鹽水稀釋成濃度為2 X IO6個(gè)/ml的細(xì)胞懸液，皮下接種與小鼠右前肢上部。小鼠接種腫瘤7d后，取其中24只腫瘤體積≥IOOmm3昆明小鼠，隨機(jī)分為4組，每組6只。具體分組如下:(I)對(duì)照組(生理鹽水組)；
(2)鹽酸阿霉素注射液組；(3)隱形熱敏脂質(zhì)體組；(4)隱形熱敏脂質(zhì)體激光組。鹽酸阿霉素注射液組、鹽酸阿霉素隱形熱敏脂質(zhì)體組和鹽酸阿霉素隱形熱敏脂質(zhì)體光照組的鹽酸阿霉素給藥劑量相等，均為10.125mg/kg。4組均采用靜脈給藥的方式，其中光照組使用的光源為808nm近紅外光源，功率為2W，給藥3h后激光照射腫瘤部位，一次照射時(shí)間為2min。每2d給藥一次，共給藥7次。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中每日觀察小鼠生活狀態(tài)，每2d稱其體重并使用
游標(biāo)卡尺測(cè)量小鼠肉瘤的長(zhǎng)徑(A)與短徑(B)，按公式腫瘤體積-計(jì)算腫瘤體積。
[0059]當(dāng)給藥予本發(fā)明的鹽酸阿霉素隱形熱敏脂質(zhì)體后，小鼠腫瘤體積的增加比鹽酸阿霉素注射液得到明顯的抑制，結(jié)合激光照射時(shí)，小鼠腫瘤體積的增加得到更加明顯的抑制。
[0060]同時(shí)，還采用了其他光源以及抗腫瘤藥物做了類似的實(shí)驗(yàn)，均取得了相同和相類似的結(jié)果，本發(fā)明分組科學(xué)，方法穩(wěn)定可靠。
[0061]有益技術(shù)效果:
[0062](I)本發(fā)明隱形熱敏脂質(zhì)體不會(huì)對(duì)碳納米管本身的特性進(jìn)行破壞，其水分散性強(qiáng)，對(duì)生物體的毒性很低，物理以及化學(xué)穩(wěn)定性良好，質(zhì)量好，制備條件簡(jiǎn)單可行，原料來(lái)源豐富，成本低。
[0063](2)本發(fā)明隱形熱敏脂質(zhì)體可以作為腫瘤熱敏治療的一種良好的熱敏劑，實(shí)驗(yàn)表明無(wú)論是體外還是體內(nèi)，結(jié)合光照的情況下均可以明顯抑制腫瘤細(xì)胞以及組織的發(fā)生和發(fā)展；而在無(wú)光照的情況下，本發(fā)明對(duì)正常細(xì)胞以及組織毒副作用很小，可以根據(jù)光的聚焦等手段來(lái)選擇性的殺傷腫瘤組織和細(xì)胞。
[0064](3)本發(fā)明隱形熱敏脂質(zhì)體可以作為一種良好的抗腫瘤藥物的載體，具有毒性極小，水溶性較強(qiáng)，生物相容性好，比表面積大，化學(xué)惰性，具有緩釋性和靶向性，且結(jié)合激光照射可發(fā)揮更好的抗腫瘤效果 。
【權(quán)利要求】
1.一種隱形熱敏脂質(zhì)體的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)，其特征在于，由隱形熱敏脂質(zhì)體負(fù)載靶向熱敏劑和化療藥物構(gòu)成，其中，靶向熱敏劑和化療藥物的質(zhì)量比為1:3，所述的靶向熱敏劑為單壁碳納米管及其衍生物、多壁碳納米管及其衍生物、石墨烯及其衍生物、納米金及其衍生物、納米銀及其衍生物、有機(jī)聚合物的一種；所述的化療藥物為鹽酸阿霉素、鹽酸表阿霉素、柔紅霉素、鹽酸米托蒽醌、多西紫杉醇、紫杉醇、順鉬、卡鉬、奧沙利鉬、5-氟尿嘧啶、長(zhǎng)春瑞濱、洛莫司汀、卡莫司汀、地西他賓、甲氨蝶呤、羥基喜樹堿、小核酸類寡義反核苷酸和小干擾RNA的一種或兩種以上的組合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的隱形熱敏脂質(zhì)體的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)，其特征在于，該系統(tǒng)的粒徑為100~200醒。
3.權(quán)利要求1所述的一種隱形熱敏脂質(zhì)體的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)在腫瘤治療藥物中的應(yīng)用。
4.權(quán)利要求1所述的隱形熱敏脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，由以下步驟實(shí)現(xiàn): (1)羧基化碳納米管的合成:取95~IIOmg碳納米管，放入250mL燒瓶中，加入120mL的混酸，11~13mL質(zhì)量濃度為30%的過(guò)氧化氫溶液，于超聲波清洗器超聲Ih后，加入IL超純水稀釋，用0.22 y m微孔濾膜和布氏漏斗抽濾，用超純水沖洗至pH為中性，放入烘箱中80°C恒溫干燥，得羧基化的碳納米管；所述混酸為濃硫酸與濃硝酸以體積比3: I所組成的混合酸； (2)葉酸祀向的碳納米管-賴氨酸的合成:取羧基化的碳納米管45~55mg,加入25mL0.1~0.3M的賴氨酸溶液,再加入9~Ilmg葉酸,45~55mg 1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽，9~Ilmg N-羥基琥珀酰亞胺，置于燒瓶中，超聲分散2h后，在冰浴下，以100r/min攪拌24h使其充分反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后于透析袋中透析48h，除去未反應(yīng)的1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺、葉酸和賴氨酸，在60°C下真空干燥24h，得葉酸靶向的碳納米管-賴氨酸； (3)隱形熱敏脂質(zhì)體的制備:稱取45~55mg二棕櫚酰磷脂酰膽堿，f 3mg 二硬脂?；字Ｒ掖及?聚乙二醇2000及18~22mg的膽固醇，置于IOOmL茄形燒瓶中，加入乙醚使完全溶解，再加入5mL PBS溶液，超聲乳化40min，形成穩(wěn)定的0/W型乳劑，在45°C減壓旋轉(zhuǎn)下除去乙醚，200W探超2min，于透析袋中透析48h后，得隱形熱敏脂質(zhì)體；所述的PBS溶液為IOmg葉酸祀向的碳納米管-賴氨酸和6mg鹽酸阿霉素溶于5mL PBS、pH7.4形成的溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的隱形熱敏脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，由以下步驟實(shí)現(xiàn): (1)羧基化碳納米管的合成:取IOOmg碳納米管，放入250mL燒瓶中，加入120mL的混酸，12mL質(zhì)量濃度為30%的過(guò)氧化氫溶液，于超聲波清洗器超聲Ih后，加入IL超純水稀釋，用0.22 微孔濾膜和布氏漏斗抽濾，用超純水沖洗至pH為中性，放入烘箱中80°C恒溫干燥，得羧基化的碳納米管； (2)葉酸祀向的碳納米管-賴氨酸的合成:取羧基化的碳納米管50mg,加入25mL0.2M的賴氨酸溶液，再加入IOmg葉酸,50mg 1_乙基_(3_ 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽，IOmg N-羥基琥拍酰亞胺,置于燒瓶中，超聲分散2h后,在冰浴下，以100r/min攪拌24h使其充分反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后于透析袋中透析48h，除去未反應(yīng)的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺、葉酸和賴氨酸，在60°C下真空干燥24h，得葉酸靶向的碳納米管-賴氨酸；(3)隱形熱敏脂質(zhì)體的制備:取50mg 二棕櫚酰磷脂酰膽堿，2mg 二硬脂?；字Ｒ掖及?聚乙二醇2000及20mg的膽固醇，置于IOOmL茄形燒瓶中，加入乙醚使完全溶解，再加入5mL PBS溶液，超聲乳化40min，形成穩(wěn)定的0/W型乳劑，在45°C減壓旋轉(zhuǎn)下除去乙醚，200W探超2min，于透析袋中透析48h后，得隱形熱敏脂質(zhì)體。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的隱形熱敏脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，由以下步驟實(shí)現(xiàn): (1)羧基化碳納米管的合成:取105mg碳納米管,放入250mL燒瓶中，加入12OmL的混酸，13mL質(zhì)量濃度為30%的過(guò)氧化氫溶液，于超聲波清洗器超聲Ih后，加入IL超純水稀釋，用0.22 微孔濾膜和布氏漏斗抽濾，用超純水沖洗至pH為中性，放入烘箱中80°C恒溫干燥，得羧基化的碳納米管； (2)葉酸祀向的碳納米管-賴氨酸的合成:稱取羧基化的碳納米管53mg,加入25mL0.2M的賴氨酸溶液，再加入Ilmg葉酸，53mg 1_乙基_(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽，Ilmg N-羥基琥拍酰亞胺,置于燒瓶中，超聲分散2h后,在冰浴下，以100r/min攪拌24h使其充分反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后于透析袋中透析48h，除去未反應(yīng)的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺、葉酸和賴氨酸，在60°C下真空干燥24h，得葉酸靶向的碳納米管-賴氨酸； (3)隱形熱敏脂質(zhì)體的制備:稱取53mg二棕櫚酰磷脂酰膽堿，3mg 二硬脂?；字Ｒ掖及?聚乙二醇2000及22mg的膽固醇，置于IOOmL茄形燒瓶中，加入乙醚使完全溶解，再加入5mL PBS溶液，超聲乳化40min，形成穩(wěn)定的0/W型乳劑，在45°C減壓旋轉(zhuǎn)下除去乙醚，200W探超2min，于透析袋中透析48h后，得隱形熱敏脂質(zhì)體。
7.權(quán)利要求1所述的隱形熱敏脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，由以下步驟實(shí)現(xiàn): (1)羧基化碳納米管的合成:取95~IlOmg碳納米管，放入250mL燒瓶中，加入120mL混酸，11~13mL質(zhì)量濃度為30%的過(guò)氧化氫溶液，于超聲波清洗器超聲Ih后，加入IL超純水稀釋，用0.22 y m微孔濾膜和布氏漏斗抽濾，用超純水沖洗至pH為中性，放入烘箱中80°C恒溫干燥，得羧基化碳納米管；所述混酸為濃硫酸與濃硝酸以體積比3: I所組成的混合酸； (2)負(fù)載化療藥物的碳納米管-賴氨酸的合成:稱取羧基化碳納米管45~55mg,加入25mL 0.1~0.3M賴氨酸溶液，45~55mg 1_乙基_ (3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽和9~Ilmg N-羥基琥拍酰亞胺,置于燒瓶中，超聲分散2h后,在冰浴下，以100r/min攪拌24h，使其充分反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后于透析袋中透析48h，除去未反應(yīng)的1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺和賴氨酸，在60°C下真空干燥24h，得碳納米管-賴氨酸；再稱取9~I Img碳納米管-賴氨酸，加入IOmL超純水，超聲至全溶，再加入18~22mg化療藥物，超聲4h，于透析袋中透析24h，除去游離的藥物，得負(fù)載藥物的碳納米管-賴氨酸； (3)隱形熱敏脂質(zhì)體的制備:取45~55mg二棕櫚酰磷脂酰膽堿，f 3mg 二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000及18~22mg膽固醇，置于IOOmL茄形燒瓶中，加入乙醚使完全溶解，再加入5mL PBS溶液，超聲乳化40min，形成穩(wěn)定的0/W型乳劑，在45°C減壓旋轉(zhuǎn)下除去乙醚，200W探超2min,于透析袋中透析48h,得隱形熱敏脂質(zhì)體；所述PBS溶液為IOmg負(fù)載化療藥物的碳納米管-賴氨酸和6mg鹽酸阿霉素溶于5mL PBS、pH7.4形成的溶液。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的隱形熱敏脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，由以下步驟實(shí)現(xiàn):(1)羧基化碳納米管的合成:取IOOmg碳納米管，放入250mL燒瓶中，加入120mL混酸，12mL質(zhì)量濃度為30%的過(guò)氧化氫溶液，于超聲波清洗器超聲Ih后，加入IL超純水稀釋，用·0.22 微孔濾膜和布氏漏斗抽濾，用超純水沖洗至pH為中性，放入烘箱中80°C恒溫干燥，得羧基化碳納米管； (2)負(fù)載鹽酸阿霉素的碳納米管-賴氨酸的合成:取羧基化碳納米管50mg,加入25mL·0.2M賴氨酸溶液，50mg 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽和IOmg N-羥基琥珀酰亞胺，置于燒瓶中，超聲分散2h后，在冰浴下，以100r/min攪拌24h，使其充分反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后于透析袋中透析48h，除去未反應(yīng)的1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺和賴氨酸，在60°C下真空干燥24h，得碳納米管-賴氨酸；再取IOmg碳納米管-賴氨酸，加入IOmL超純水,超聲至全溶,再加入20mg鹽酸阿霉素,超聲4h,于透析袋中透析24h，除去游離的藥物，得負(fù)載鹽酸阿霉素的碳納米管-賴氨酸； (3)隱形熱敏脂質(zhì)體的制備:稱取50mg二棕櫚酰磷脂酰膽堿，2mg 二硬脂?；字Ｒ掖及?聚乙二醇2000及20mg膽固醇，置于IOOmL茄形燒瓶中，加入乙醚使完全溶解，再加入5mL PBS溶液，超聲乳化40min，形成穩(wěn)定的0/W型乳劑，在45°C減壓旋轉(zhuǎn)下除去乙醚，200W探超2min，于透析袋中透析48h，得隱形熱敏脂質(zhì)體；所述PBS溶液為IOmg負(fù)載鹽酸阿霉素的碳納米管-賴氨酸和6mg鹽酸阿霉素溶于5mL PBS、pH7.4形成的溶液。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的隱形熱敏脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，由以下步驟實(shí)現(xiàn): (1)羧基化碳納米管的合成:取105mg碳納米管,放入250mL圓底燒瓶中，加入120mL混酸，13mL質(zhì)量濃度為3 0%的過(guò)氧化氫溶液，于超聲波清洗器超聲Ih后，加入IL超純水稀釋，用0.22 y m微孔濾膜和布氏漏斗抽濾，用超純水沖洗至pH為中性，放入烘箱中80°C恒溫干燥，得羧基化碳納米管； (2)負(fù)載多西紫杉醇的碳納米管-賴氨酸的合成:稱取羧基化碳納米管53mg，加入25mL·0.15M賴氨酸溶液，53mg 1-乙基_ (3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽和Ilmg N-羥基琥珀酰亞胺，置于燒瓶中，超聲分散2h后，在冰浴下，以lOOr/min攪拌24h，使其充分反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后于透析袋中透析48h，除去未反應(yīng)的1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺和賴氨酸，在60°C下真空干燥24h，得碳納米管-賴氨酸；再稱取IOmg碳納米管-賴氨酸,加入IOmL超純水,超聲至全溶,再加入22mg多西紫杉醇，超聲4h，于透析袋中透析24h，除去游離的藥物，得負(fù)載多西紫杉醇的碳納米管-賴氨酸； (3)隱形熱敏脂質(zhì)體的制備:稱取53mg二棕櫚酰磷脂酰膽堿，3mg 二硬脂?；字Ｒ掖及?聚乙二醇2000及22mg膽固醇，置于IOOmL茄形燒瓶中，加入乙醚使完全溶解，再加入5mL PBS溶液，超聲乳化40min，形成穩(wěn)定的0/W型乳劑，在45°C減壓旋轉(zhuǎn)下除去乙醚，200W探超2min，于透析袋中透析48h，得隱形熱敏脂質(zhì)體；所述PBS溶液為IOmg負(fù)載多西紫杉醇的碳納米管-賴氨酸和6mg鹽酸阿霉素溶于5mL PBS、pH7.4形成的溶液。
【文檔編號(hào)】A61K31/337GK103520726SQ201310494933
【公開日】2014年1月22日 申請(qǐng)日期:2013年10月21日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月21日
【發(fā)明者】祝俠麗, 張振中, 謝瑩霞, 黃勝楠, 侯琳, 張慧娟, 王蕾, 史進(jìn)進(jìn), 張英杰, 黃河清 申請(qǐng)人:鄭州大學(xué)