在降低氧化應(yīng)激中的dha和epa的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明一般性涉及預(yù)防或治療與氧化應(yīng)激相關(guān)的病癥。例如，本發(fā)明提供了用于預(yù)防或治療在術(shù)后情況下與氧化應(yīng)激相關(guān)的病癥的組合物。本發(fā)明的一項(xiàng)實(shí)施方案是包含DHA和EPA作為活性成分的用于治療或預(yù)防氧化應(yīng)激和/或相關(guān)病癥的組合物。
【專利說明】在降低氧化應(yīng)激中的DHA和EPA
[0001] 本發(fā)明一般性涉及預(yù)防或治療與氧化應(yīng)激相關(guān)的病癥。例如，本發(fā)明提供了用于預(yù)防或治療在術(shù)后情況下與氧化應(yīng)激相關(guān)的病癥的組合物。本發(fā)明的一項(xiàng)實(shí)施方案是包含二十二碳六烯酸(DHA)和二十碳五烯酸(EPA)作為活性成分的用于治療或預(yù)防氧化應(yīng)激和/或相關(guān)病癥的組合物。
[0002]作為缺血和隨后再灌注的后果，腸道損傷在多種成人外科手術(shù)和新生兒臨床病癥，即實(shí)體器官移植、感染性休克和壞死性小腸結(jié)腸炎(NEC)的并發(fā)癥中起重要作用(在 Nowicki PT 等人 Clin.Perinatol.，199421:219-234，Carden DL 等人J.Pathol.，2009190:255-266 和 Cerqueira NF 等人Acta Cir.Bras..200924:290-295 中講行了綜述)。許多證據(jù)提示活性氧物質(zhì)(ROS)的產(chǎn)生和ROS介導(dǎo)的損傷在腸道缺血再灌注損傷中發(fā)揮重要作用。
[0003]除了 ROS的產(chǎn)生增加以外，還沒有較好地了解腸道缺血再灌注導(dǎo)致的ROS依賴性和非依賴性的活化以及復(fù)雜的下游級(jí)聯(lián)反應(yīng)。該活化的后果是嗜中性粒細(xì)胞粘附分子、炎性細(xì)胞因子和衍生自花生四烯酸的脂質(zhì)促炎代謝產(chǎn)物(即，類花生酸類)的表達(dá)增加。這最終導(dǎo)致引起屏障通透性升高的粘膜損傷，其部分地造成遠(yuǎn)距離的器官損傷和手術(shù)并發(fā)癥。
[0004]為了減少缺血再灌注后與氧化應(yīng)激相關(guān)的病癥，例如，作者建議用抗氧化劑例如維生素 C 治療(Lloberas 等人，F(xiàn)ASEB J.April23, 2002，第 908-910 頁(yè))。
[0005]但是，維生素C迅速?gòu)纳眢w中分泌并且不能有效地起作用，除非以可能有副作用的方式反復(fù)和高劑量地使用。
[0006]因此，本領(lǐng)域需要可選的組合物，其在施用時(shí)能夠治療、預(yù)防或緩解與氧化應(yīng)激相關(guān)的特別是缺血再灌注(IR)以后的病癥。
[0007]發(fā)明人滿足了該需求。
[0008]因此，本發(fā)明的目的是向本領(lǐng)域提供能夠用于治療或預(yù)防與氧化應(yīng)激相關(guān)(例如在缺血再灌注以后)的病癥的組合物，其施用容易且安全，并且是天然的且沒有不期望的副作用。
[0009]發(fā)明人驚訝地發(fā)現(xiàn)他們可以通過獨(dú)立權(quán)利要求的主題達(dá)到該目的。從屬權(quán)利要求進(jìn)一步發(fā)展了本發(fā)明的觀點(diǎn)。
[0010]本發(fā)明提供了包含二十二碳六烯酸(DHA)和二十碳五烯酸(EPA)的組合物，其可以成功地用于治療、預(yù)防或緩解氧化應(yīng)激和/或相關(guān)病癥，例如由缺血再灌注誘導(dǎo)的病癥和/或與其相關(guān)的術(shù)后病癥。
[0011]已經(jīng)顯示，用ω-3脂肪酸例如二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)進(jìn)行飲食干預(yù)對(duì)于大腦發(fā)育和減少心血管疾病死亡是重要的。
[0012]目前全世界對(duì)EPA和DHA的攝入差異很大，并且與疾病的負(fù)擔(dān)密切相關(guān)，所述疾病可以通過增加EPA和DHA攝入來有效地改善(在Hibbeln JR等人Am.J.Clin.Nutr.,200683:1483-1493中進(jìn)行了綜述)。發(fā)明人報(bào)告了基于脂質(zhì)混合物的飲食干預(yù)，其使得3周后全身和腸道內(nèi)EPA和DHA含量有效升高，并保護(hù)避免由腸系膜動(dòng)脈暫時(shí)閉塞誘導(dǎo)的腸內(nèi)IR損傷后的粘膜損傷。[0013]發(fā)明人證明了增加EPA和DHA的攝取可以阻止粘膜損傷，而對(duì)中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)(ΜΡ0含量)沒有影響，但是，其降低了它們的活性(R0S)。
[0014]為了研究其潛在的機(jī)制，發(fā)明人檢測(cè)了氧化應(yīng)激調(diào)節(jié)因子(CAT和S0D)和細(xì)胞因子的變化。在腸道IR損傷和用EPA和DHA干預(yù)后使用了定量分析方法來表征我們的飲食干預(yù)對(duì)抗炎的類花生酸(例如17，18-EEP和TXB3)產(chǎn)生的影響。
[0015]該研究的結(jié)果顯示了通過減少氧化應(yīng)激對(duì)粘膜損傷的有益效果。
[0016]因此，本發(fā)明涉及包含DHA和EPA作為活性成分的用于治療、預(yù)防或緩解氧化應(yīng)激和/或相關(guān)病癥的組合物。
[0017]本發(fā)明還涉及DHA和EPA作為活性成分在制備用于治療、預(yù)防或緩解氧化應(yīng)激和/或相關(guān)病癥的組合物中的用途。
[0018]本發(fā)明的組合物顯示當(dāng)其用于治療、預(yù)防或緩解在術(shù)后情況下的氧化應(yīng)激和/或相關(guān)病癥中特別有用。
[0019]例如，所述氧化應(yīng)激和/或相關(guān)病癥可以是由缺血再灌注誘發(fā)。
[0020]缺血再灌注損傷可以導(dǎo)致大量的氧自由基產(chǎn)生，其可以氧化細(xì)胞結(jié)構(gòu)。這與治愈過程(例如手術(shù)后)適得其反。本發(fā)明能夠治療、緩解或預(yù)防所造成的氧化應(yīng)激的消極影響。
[0021 ] 因此，該組合物可以在例如住院條件下使用。
[0022]該組合物顯 示當(dāng)其包含EPA和DHA時(shí)特別有效。
[0023]EPA和DHA可以從任何途徑獲得。它們可以合成或者從天然化合物中純化。
[0024]優(yōu)選地，它們可以以天然組合物或以其提取物提供。例如，DHA和EPA可以從包含海產(chǎn)油類例如魚油的脂質(zhì)源或者從微生物中提供。
[0025]由于魚油通常具有在感官上令人厭惡的味道和/或氣味，所以所述魚油或整個(gè)脂質(zhì)源可以以包囊的形式提供。
[0026]例如，可以加入已知能夠阻止產(chǎn)生不期望的不正常味道或氣味的化合物，例如卵磷脂或柑橘類水果的汁。
[0027]該組合物可以包含其它脂質(zhì)。例如，脂質(zhì)源可以包括可可脂、大豆油、魚油和/或葵花籽油。
[0028]例如，可以調(diào)整該脂質(zhì)源以滿足所治療個(gè)體的營(yíng)養(yǎng)需要。例如，該脂質(zhì)源可以對(duì)應(yīng)于組合物的含熱量的約7-13%，例如約10%。
[0029]必需脂肪酸亞油酸和α -亞麻酸可以分別對(duì)應(yīng)于該組合物總含熱量的約3-5.5%、例如約4.4%，和約0.1-0.5%、例如約0.3%。此外，該組合物中可以包含分別對(duì)應(yīng)于攝入總能量的約0.2-0.4%、例如約0.3%的ΕΡΑ，和約0.1-0.3%、例如約0.2%的DHA0
[0030]這可以通過幾種不同的油類混合物來實(shí)現(xiàn)，所述油類混合物全部可以使用并且可以根據(jù)味道或其它特點(diǎn)進(jìn)行選擇。
[0031]例如，該脂質(zhì)源可以包含約5-10重量％的可可脂、約45-55重量％的大豆油、約15-25重量％的魚油和約20-25重量％的葵花籽油。
[0032]該脂質(zhì)源可以包含約7重量％可可脂、約50重量％大豆油、約20重量％魚油和約23重量％葵花籽油。
[0033]通常情況下，該脂質(zhì)源包含飽和脂肪酸、單不飽和脂肪酸和多不飽和脂肪酸的混合物。
[0034]這些脂肪酸的量可以基于所治療個(gè)體的需要進(jìn)行調(diào)整。
[0035]例如，該脂質(zhì)源可以包含約18-22重量％的飽和脂肪酸、約20-25重量％的單不飽和脂肪酸和約50-55重量％的多不飽和脂肪酸。
[0036]氧化損傷通常是由活性氧物質(zhì)介導(dǎo)。該活性氧物質(zhì)可以是例如自由基。
[0037]因此，所述氧化應(yīng)激相關(guān)的病癥可以與體內(nèi)自由基的存在相關(guān),例如.02_，超氧陰離子；H202,過氧化氫；.0H,輕自由基；R00H,有機(jī)氫過氧化物；R0.,燒氧自由基；R00.,過氧自由基；H0C1，次氯酸;00Ν0_，過氧亞硝酸鹽；和/或N0.。
[0038]許多器官可以直接或者間接地被氧化應(yīng)激損傷。間接損傷通常在再灌注后的遠(yuǎn)距離器官中被發(fā)現(xiàn)。該間接損傷是有問題的，因?yàn)槠淇梢岳缭谀c缺血再灌注后導(dǎo)致多器官障礙綜合征。肺經(jīng)常被間接損傷所影響。
[0039]本發(fā)明的組合物降低了對(duì)器官的直接或間接損傷的風(fēng)險(xiǎn)，并因此用于治療或預(yù)防對(duì)腸、肝臟、肺、心臟、腎臟和/或皮膚的損傷。
[0040]所述氧化應(yīng)激相關(guān)的病癥可以是任何此類病癥。
[0041]例如，所述氧化應(yīng)激相關(guān)的病癥可以選自對(duì)氧化應(yīng)激的炎癥應(yīng)答、視網(wǎng)膜變性、線粒體毒物興奮效應(yīng)(mitohormesis)、動(dòng)脈粥樣硬化、肌萎縮側(cè)索硬化(ALS)、多發(fā)性硬化(MS)、弗里德賴希共濟(jì)失調(diào)、遲發(fā)性運(yùn)動(dòng)障礙、腦損傷例如缺血、皮膚光老化、再灌注損傷或中風(fēng)、心肌梗塞、高血壓、心力衰竭、癲癇、過高半胱氨酸血癥、生理性衰老、敗血癥、器官移植后的應(yīng)激、或其組合。
[0042]發(fā)明人已經(jīng)通過實(shí)施例使用嚙齒類動(dòng)物模型舉例說明了可以非常成功地使用本發(fā)明組合物來限制缺血再灌注(IR)之后例如在內(nèi)臟區(qū)域的腸損傷。因此，特別是內(nèi)臟器官可以通過本發(fā)明的組合物進(jìn)行保護(hù)。
[0043]本發(fā)明組合物的效力符合劑量-效應(yīng)曲線。
[0044]在治療性應(yīng)用中，組合物是以至少足以部分地治愈或阻止疾病癥狀及其并發(fā)癥的量進(jìn)行施用。足以達(dá)到該目的的量被定義為“治療有效劑量”。對(duì)于該目的有效的量將取決于本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的許多因素，例如疾病的嚴(yán)重性和患者的體重及一般狀態(tài)。
[0045]在預(yù)防性應(yīng)用中，本發(fā)明的組合物是以至少足以部分地降低疾病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的量向易患病的患者或其他有特定疾病風(fēng)險(xiǎn)的患者施用。該量被定義為“預(yù)防有效劑量”。同樣，準(zhǔn)確的量取決于多種患者特定因素，例如患者的健康狀態(tài)和體重。
[0046]本發(fā)明的組合物可以以治療有效劑量或預(yù)防有效劑量施用。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠基于本文所提供的信息和患者的狀態(tài)來確定這些劑量。
[0047]例如，該組合物可以以對(duì)應(yīng)于至少400mg的EPA和DHA的組合日劑量的量進(jìn)行施用。
[0048]EPA和DHA可以以任何比例提供，例如以10:1至1:10范圍的重量比，例如7:1至1:1，例如約5:1至1:1。
[0049]優(yōu)選地，EPA和DHA是以約2:1至1:1范圍的重量比包含在該組合物內(nèi)。具有約3:2范圍的EPA和DHA重量比獲得了非常好的結(jié)果。
[0050]在臨床機(jī)構(gòu)中， 該組合物可以以對(duì)應(yīng)于約2_5g (例如，3_4g)的EPA和DHA的組合
日攝取量的量進(jìn)行施用。[0051]為了獲得最好的結(jié)果，連續(xù)地歷經(jīng)幾天的時(shí)期施用本發(fā)明組合物是適當(dāng)?shù)摹?br> [0052]如果計(jì)劃進(jìn)行手術(shù)，并且特別是如果預(yù)見到會(huì)出現(xiàn)缺血再灌注，可以在手術(shù)前例如7天、3天、2天或I天作為預(yù)防措施開始施用。
[0053]例如，該施用可以在干預(yù)前3-7天開始進(jìn)行。
[0054]該施用還可以在手術(shù)和/或缺血再灌注后立即開始。
[0055]該組合物可以歷經(jīng)至少3天(例如至少一周或至少兩周)的時(shí)期每天施用。
[0056]本發(fā)明的組合物可以向任何患者施用。所述患者可以是人或動(dòng)物患者。所述動(dòng)物可以是伴侶動(dòng)物例如狗或貓。
[0057]該組合物可以經(jīng)局部、口服、腸內(nèi)或胃腸外施用。
[0058]通常情況下，該組合物可以與正常食物攝取一起口服施用。
[0059]如果不能進(jìn)行正常的食物攝取，該組合物可以經(jīng)腸內(nèi)施用，例如通過管飼，或者在嚴(yán)重的情況下不能進(jìn)行腸內(nèi)施用或者不建議腸內(nèi)施用時(shí)進(jìn)行胃腸外施用。
[0060]在胃腸外施用情況中，該組合物通常不包含碳水化合物源，但是碳水化合物可以單獨(dú)施用，例如通過葡萄糖滴注。
[0061]但是，在通常情況下，該組合物可以作為食品或作為可飲用的組合物進(jìn)行施用。
[0062]因此，該組合物可以選自食品、寵物食品、營(yíng)養(yǎng)品、飲料、食物補(bǔ)充劑、在牛奶或水中重構(gòu)的粉末的營(yíng)養(yǎng)配方食品，或藥物。
[0063]本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，在不背離所公開的本發(fā)明范圍的情況下，他們可以自由地組合本文所述的本發(fā)明的全部特征。具體而言，用于描述本發(fā)明用途的特征可以用于本發(fā)明的組合物，反之亦然。
[0064]本發(fā)明的其它優(yōu)點(diǎn)和特征通過以下實(shí)施例是很明顯的。
實(shí)施例:
[0065]使用8周大的雄性斯普拉格-道利大鼠(Charles-River,法國(guó))。動(dòng)物收到后在我們的動(dòng)物設(shè)施中進(jìn)行飲食干預(yù)兩周以適應(yīng)。將全部動(dòng)物在12小時(shí)光/暗周期下在恒定室溫保持在特定的無病原菌環(huán)境中。它們自由進(jìn)食常用的基礎(chǔ)膳食(AIN-93M)和自來水。
[0066]兩周后，將大鼠隨機(jī)分配到三個(gè)不同實(shí)驗(yàn)組其中之一(每組n=8)，即，⑴假組，該組提供對(duì)照膳食3周，進(jìn)行假的手術(shù)程序；(ii) I/R組，該組提供對(duì)照膳食3周，隨后進(jìn)行缺血再灌注手術(shù)程序；(iii)I/R+NRC脂質(zhì)混合物組，該組提供添加了脂質(zhì)混合物(如下所述)的膳食3周，在飲食干預(yù)結(jié)束后進(jìn)行缺血再灌注手術(shù)程序。
[0067]在對(duì)照或添加NRC膳食條件下三周結(jié)束時(shí)，動(dòng)物進(jìn)行假的手術(shù)程序或缺血再灌注手術(shù)程序，后者由30分鐘的缺血期和隨后的3小時(shí)再灌注期組成(如Yoshida N.等人，MolMed R印ort，20114:81-86所述)。在再灌注期結(jié)束時(shí)，將動(dòng)物處死，隨后收集血清和器官。
[0068]維持性AIN-93M膳食包含提供10%的總能量的脂肪。必需脂肪酸亞油酸和α -亞麻酸分別提供約4.4%和0.3%的總能量攝入。在NRC干預(yù)膳食中，我們用下面所述的特定混合物保持這些值盡可能地接近對(duì)照。此外，EPA和DHA在對(duì)照膳食中不存在，而在添加的膳食中所提供的EPA和DHA的量接近魚油，分別為總能量攝入的約0.3%和0.2%。 [0069]使用市售的試劑盒(來自Roche、Sigma或Cayman),測(cè)定總的小腸蛋白質(zhì)、超氧化物歧化酶、過氧化氫酶、硝酸鹽/亞硝酸鹽、MPO的含量和活性。使用標(biāo)準(zhǔn)HPLC方法和適當(dāng)?shù)氖惺蹣?biāo)準(zhǔn)品測(cè)量EPA和DHA的引入。類花生酸類通過HPLC-MS/MS用適當(dāng)?shù)氖惺蹣?biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行定量，如 Pouteau E.等人，Nutr Metab, 20107:8 所述。
[0070]本文提供的所有數(shù)據(jù)表示為平均值土SEM。在適宜時(shí)使用非配對(duì)數(shù)據(jù)的學(xué)生t檢驗(yàn)比較三個(gè)組。P值〈0.05被視為統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的差異。
[0071]結(jié)果
[0072]表1a和b給出了脂質(zhì)混合物的描述和所含脂肪酸的性質(zhì)。
[0073]a.[0074]
【權(quán)利要求】
1.包含DHA和EPA作為活性成分的組合物，其用于治療、預(yù)防或緩解由缺血再灌注引起的氧化應(yīng)激和/或相關(guān)病癥。
2.如權(quán)利要求1所述的組合物，其包含重量比約2:1至1:1、優(yōu)選約3:2的EPA和DHA。
3.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的組合物，其中DHA和EPA是從包含海產(chǎn)油類例如魚油的脂質(zhì)源中提供。
4.如權(quán)利要求3所述的組合物，其中脂質(zhì)源包括可可脂、大豆油、魚油和葵花籽油。
5.如權(quán)利要求4所述的組合物，其中脂質(zhì)源包含約5-10重量％的可可脂、約45-55重量％的大豆油、約15-25重量％的魚油和約20-25重量％的葵花籽油。
6.如權(quán)利要求3所述的組合物，其中脂質(zhì)源包含約18-22重量％的飽和脂肪酸、約20-25重量％的單不飽和脂肪酸和約50-55重量％的多不飽和脂肪酸。
7.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的組合物，其中氧化應(yīng)激相關(guān)的病癥與體內(nèi)自由基的存在相關(guān)，所述自由基例如.02_，超氧陰離子;H202，過氧化氫；.0H，羥自由基;ROOH，有機(jī)氫過氧化物；RO ?，烷氧自由基；ROO ?，過氧自由基；H0C1，次氯酸；OONO_，過氧亞硝酸鹽；和/ 或 N0.。
8.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的組合物，其用于治療或預(yù)防對(duì)腸、肝臟、肺、心臟、腎臟和/或皮膚的氧化損傷。
9.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的組合物，其中氧化應(yīng)激相關(guān)的病癥是選自對(duì)氧化應(yīng)激的炎癥應(yīng)答、視網(wǎng)膜變性、線粒體毒物刺激作用、動(dòng)脈粥樣硬化、肌萎縮側(cè)索硬化(ALS)、多發(fā)性硬化(MS)、弗里德賴希共濟(jì)失調(diào)、遲發(fā)性運(yùn)動(dòng)障礙、腦損傷例如缺血、皮膚光老化、再灌注損傷或中風(fēng)、心肌梗塞、高血壓、心力衰竭、癲癇、過高半胱氨酸血癥、生理性衰老、敗血癥、器官移植后的應(yīng)激、或其組合。
10.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的組合物，其限制例如在內(nèi)臟區(qū)域的缺血再灌注(IR)后的腸損傷。
11.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的組合物，其中EPA和DHA以至少400mg的日劑量提供。
12.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的組合物，其中該組合物歷經(jīng)至少3天、例如至少一周或至少兩周的時(shí)期每天施用。
13.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的組合物，其向人或?qū)櫸锸┯?，例如伴侶動(dòng)物如狗或貓。
14.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的組合物，其通過局部、口服、腸內(nèi)或胃腸外施用。
15.如前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的組合物，其中該組合物選自食品、寵物食品、營(yíng)養(yǎng)品、飲料、食物補(bǔ)充劑、在牛奶或水中重構(gòu)的粉末的營(yíng)養(yǎng)配方食品、或藥物。
【文檔編號(hào)】A61P17/00GK103648494SQ201280031582
【公開日】2014年3月19日 申請(qǐng)日期:2012年6月26日 優(yōu)先權(quán)日:2011年6月28日
【發(fā)明者】M·N·博斯科, M·奧利維拉, F·德塔亞, J·本雅各布, V·布拉姆巴特 申請(qǐng)人:雀巢產(chǎn)品技術(shù)援助有限公司