紫珠總苷提取物及其制備方法和用途
【專利摘要】本發(fā)明提供紫珠總苷提取物，以重量計，其含有18％～45％毛蕊花糖苷和15％～40％Arenarioside，所述提取物由華紫珠或杜虹花的葉制備。本發(fā)明還提供該紫珠總苷提取物的制備方法及用途。本發(fā)明紫珠總苷提取物對神經(jīng)細胞具有顯著的保護作用，對帕金森模型小鼠的行為障礙和老年癡呆模型小鼠的記憶獲得性障礙具有明顯的改善作用，可用于治療神經(jīng)退行性疾病。本發(fā)明紫珠總苷提取物還對諸如皮炎或濕疹等皮膚病癥狀具有良好的治療和改善作用。可用于治療皮膚病。
【專利說明】紫珠總苷提取物及其制備方法和用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及紫珠總苷提取物及其制備方法和用途。
【背景技術(shù)】
[0002]紫珠是馬鞭草科紫珠屬植物的通稱，種類繁多，在我國大約有35種，分布較為廣泛。紫珠所含的成分主要為黃酮類、萜類、苯乙醇苷類以及揮發(fā)油類等。其中苯乙醇苷類是其含量較多的化學(xué)成分，因結(jié)構(gòu)中大多含有苯丙?；赵?，因此也被稱為苯丙素苷類化合物。已有文獻報道，苯乙醇苷類成分具有止痛抗菌消炎、抗腫瘤、抗病毒、抗氧化、保肝護肝和堿基修復(fù)作用，對于糖尿病及相關(guān)疾病，學(xué)習(xí)、記憶能力低下等都具有明顯的改善作用。近年來，隨著國內(nèi)外對其研究的深入，越來越多的文獻資料表明苯乙醇苷類化合物具有防治神經(jīng)退行性疾病的作用，尤其是在改善老年癡呆癥、帕金森病上效果明顯。中國專利申請CN200710040195.2報道從肉蓯蓉中制備肉蓯蓉總苷(苯乙醇苷類成分)提取物，并報道了該提取物用于治療帕金森病的用途。中國專利CN201010146367.6公開了從枇杷葉紫珠(Callicarpa kochiana)的地上部分中制備以連翅酯苷B和毛蕊花糖苷為主要特征成分的提取物，并公開了該提取物用于治療老年癡呆藥物中的應(yīng)用。
[0003]然而，肉蓯蓉屬于瀕危名貴中藥材，產(chǎn)量有限，枇杷葉紫珠以野生為主，產(chǎn)量小，并且該兩種藥材中苯乙醇苷類成分含量低，因此以肉蓯蓉和枇杷葉紫珠為原料制備苯乙醇苷類成分,生產(chǎn)成本高,不適合持續(xù)性發(fā)展。因此,用資源豐富、價格便宜、并且苯乙醇苷類物質(zhì)含量高的藥材來制備治療神經(jīng)退行性等疾病的藥物有優(yōu)越性及需求。另外，由于苯乙醇苷類物質(zhì)藥理活性廣泛，苯乙醇苷類物質(zhì)的新藥效及治療作用也值得深入的開發(fā)。

【發(fā)明內(nèi)容】

`[0004]本發(fā)明的目的在`于提供來源于華紫珠(Callicarpa cathayana H.T.Chang)或杜虹花(Callicarpa formosana Rolfe)的紫珠總苷提取物,該提取物以苯乙醇苷類成分毛蕊花糖苷和Arenarioside為特征性活性成分，對于神經(jīng)退行性疾病具有治療功效。另外，該提取物還對濕疹或皮炎具有治療功效。
[0005]本發(fā)明提供以下技術(shù)方案:
[0006]1、紫珠總苷提取物，以重量計，其含有18%~45%毛蕊花糖苷和15%~40%Arenarioside,所述提取物由華紫珠(Callicarpa cathayana H.T.Chang)或杜虹花(Callicarpa formosana Rolfe)的葉(優(yōu)選為干燥葉)制備。
[0007]2、根據(jù)技術(shù)方案I的紫珠總苷提取物，以重量計，其含有28%~45%毛蕊花糖苷。
[0008]3、根據(jù)技術(shù)方案I或2的紫珠總苷提取物，以重量計，其含有28%~38%毛蕊花糖苷。
[0009]4、根據(jù)技術(shù)方案1-3中任一項的紫珠總苷提取物，以重量計，其含有24%~40%Arenarioside0
[0010]5、根據(jù)技術(shù)方案1-4中任一項的紫珠總苷提取物，以重量計，其含有25%~35%Arenarioside。
[0011]6、技術(shù)方案1-5中任一項所述的紫珠總苷提取物的制備方法，其包括以下步驟:
[0012](I)將華紫珠 Callicarpa cathayana H.T.Chang)或杜虹花(Callicarpaformosana Rolfe)的葉(優(yōu)選為干燥葉)粉碎，用溶劑提取I~3次,所述溶劑為水、醇或者水與醇的混合物；
[0013](2)將各次提取液合并，減壓濃縮除去步驟⑴所述的有機溶劑；加入0.5倍~2倍體積量的水，靜置過夜，離心或過濾得到上清液；
[0014](3a)使上清液通過裝填有樹脂填料的色譜層析柱，用水和/或稀醇水溶液洗滌，以除去雜質(zhì)，然后以較高濃度的醇水溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，干燥，得到紫珠總苷提取物；或者
[0015](3b)用有機溶劑萃取上清液，將有機相減壓濃縮，干燥，得到紫珠總苷提取物。
[0016]7、根據(jù)技術(shù)方案6所述的制備方法，其中步驟(1)中，提取方法選自閃式提取法、回流提取法、微波提取法、超聲提取法和滲漉提取法。
[0017]8、根據(jù)技術(shù)方案6或7所述的制備方法，其中步驟(3a)中，所述樹脂填料選自大孔吸附樹脂、聚酰胺樹脂和離子交換樹脂。
[0018]9、根據(jù)技術(shù)方案6-8中任一項所述的制備方法，其中步驟(3a)中，所述大孔吸附樹脂填料為HPD100、HPD200、D101、AB-8、SP825、ADS_7型等大孔吸附樹脂。
[0019]10、根據(jù)技術(shù)方案6-9中任一項所述的制備方法，其中步驟(3a)中，所述稀醇水溶液為O~15體積％的稀醇水溶液。
[0020]11、根據(jù)技術(shù)方案6-10中任一項所述的制備方法，其中步驟(3a)中，所述較高濃度的醇水溶液為30%~90體積％的醇水溶液。
[0021]12、據(jù)技術(shù)方案6-11中任一項所述的制備方法，其中步驟(3b)中，所述有機溶劑為正丁醇或乙酸乙酯。
[0022]13、根據(jù)技術(shù)方案6-12中任一項所述的制備方法，其中步驟(3a)中，減壓濃縮洗脫液后，一次或更多次進行以下操作:用水溶解濃縮液，使之通過裝填有樹脂填料的色譜層析柱，用水和/或稀醇水溶液洗滌，以除去雜質(zhì)，然后以較高濃度的醇水溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮。
[0023]14、技術(shù)方案1-5中任一項所述的紫珠總苷提取物在制備用于治療或輔助治療神經(jīng)退行性疾病的食品、保健品或藥品中的用途。
[0024]15、技術(shù)方案1-5中任一項所述的紫珠總苷提取物在制備用于治療或輔助治療皮膚病的化妝品、保健品或藥品中的用途。
[0025]16、技術(shù)方案15所述的用途，其中所述皮膚病為濕疹或皮炎。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0026]圖1為來自華紫珠葉的本發(fā)明紫珠總苷提取物的典型的高效液相色譜(使用DAD檢測器)圖。
[0027]圖2為來自杜虹花葉提取物的本發(fā)明紫珠總苷提取物的典型的高效液相色譜(使用DAD檢測器)圖。
[0028]圖1 和 2 中，線性關(guān)系:Y = 16374 * Χ+18.793，R = 0.9997 ;其中，Y 為峰面積，X為毛蕊花糖苷的濃度(mg/mL), Arenarioside的含量以毛蕊花糖苷為標(biāo)準(zhǔn)計。
[0029]圖3示出動態(tài)軸向壓縮高壓制備液相色譜圖。
[0030]圖4示出毛蕊花糖苷單體的HPLC色譜圖。
[0031]圖5不出Arenarioside單體的HPLC色譜圖。
[0032]圖6示出了不同種類的紫珠葉中苯乙醇苷類含量測定結(jié)果。
[0033]圖7示出了不同濃度的毛蕊花糖苷對MPP+誘導(dǎo)的SH-SY5Y神經(jīng)細胞損傷的保護作用，其中“&&”表示與空白對照組相比P < 0.01，“ * ”表示與模型組相比P < 0.05，“ ”表示與模型組相比P < 0.01。
[0034]圖8示出了不同濃度的Arenarioside對MPP+誘導(dǎo)的SH-SY5Y神經(jīng)細胞損傷的保護作用，其中“腿”表示與空白對照組相比P < 0.01，“*”表示與模型組相比P < 0.05，“*
表示與模型組相比P < 0.01。
[0035]圖9示出了不同濃度的本發(fā)明實施例5制備的紫珠總苷提取物對MPP+誘導(dǎo)的SH-SY5Y神經(jīng)細胞損傷的保護作用，其中“&&”表示與空白對照組相比P < 0.01，“ * ”表示與模型組相比P < 0.05，“* *”表示與模型組相比P < 0.01。
[0036]圖10示出了不同濃度的本發(fā)明實施例4、6和7制備的紫珠總苷提取物對MPP+誘導(dǎo)的SH-SY5Y神經(jīng)細胞損傷的保護作用，其中“&&”表示與空白對照組相比P < 0.01，“ ~k ”表示與模型組相比P < 0.05，“* *”表示與模型組相比P < 0.01。
[0037]圖11示出 了苯乙醇苷類提取物對MPTP致帕金森小鼠的自主活動的影響，其中1:空白對照組；2:模型組；3:肉蓯蓉總苷組(400mg/kg) ；4:本發(fā)明實施例6紫珠總苷提取物低劑量組(100mg/kg) ；5:本發(fā)明實施例6紫珠總苷提取物高劑量組(300mg/kg) ；6:本發(fā)明實施例7紫珠總苷提取物低劑量組(100mg/kg) ；7:本發(fā)明實施例7紫珠總苷提取物高劑量組(300mg/kg) 表示與空白對照組相比P < 0.01，“ * ”表示與模型組相比P < 0.05，“* *”表示與模型組相比P < 0.01，“#”表示與肉蓯蓉總苷組相比P < 0.05。
[0038]圖12示出了苯乙醇苷類提取物對MPTP致帕金森小鼠的滾筒行為的影響，其中1:空白對照組；2:模型組；3:肉蓯蓉總苷組(400mg/kg) ；4:本發(fā)明實施例6紫珠總苷提取物低劑量組(100mg/kg) ；5:本發(fā)明實施例6紫珠總苷提取物高劑量組(300mg/kg) ；6:本發(fā)明實施例7紫珠總苷提取物低劑量組(100mg/kg) ；7:本發(fā)明實施例7紫珠總苷提取物高劑量組(300mg/kg) 表示與空白對照組相比P < 0.01，“ * ”表示與模型組相比P < 0.05，“* *”表示與模型組相比P < 0.01，“#”表示與肉蓯蓉總苷組相比P < 0.05。
[0039]圖13示出了紫珠總苷提取物對東莨菪堿致小鼠跳臺潛伏期的影響，其中1:空白對照組；2:模型組；3:枇杷葉紫珠總苷組(300mg/kg) ；4:本發(fā)明實施例6紫珠總苷提取物低劑量組(100mg/kg) ；5:本發(fā)明實施例6紫珠總苷提取物高劑量組(300mg/kg) ；6:本發(fā)明實施例7紫珠總苷提取物低劑量組(100mg/kg) ；7:本發(fā)明實施例7紫珠總苷提取物高劑量組(300mg/kg) 表示與空白對照組相比P < 0.01，“ * ”表示與模型組相比P < 0.05，“* *”表示與模型組相比P < 0.01，“#”表示與枇杷葉紫珠總苷組相比P < 0.05。
[0040]圖14示出了紫珠總苷提取物對東莨菪堿致小鼠跳臺錯誤次數(shù)的影響，其中1:空白對照組；2:模型組；3:枇杷葉紫珠總苷組(300mg/kg) ；4:本發(fā)明實施例6紫珠總苷提取物低劑量組(100mg/kg) ；5:本發(fā)明實施例6紫珠總苷提取物高劑量組(300mg/kg) ；6:本發(fā)明實施例7紫珠總苷提取物低劑量組(100mg/kg) ；7:本發(fā)明實施例7紫珠總苷提取物高劑量組(300mg/kg) ;“&&”表示與空白對照組相比？< 0.01，“ * ”表示與模型組相比p < 0.05，“* *”表示與模型組相比P < 0.01，“#”表示與枇杷葉紫珠總苷組相比P < 0.05。
[0041]圖15示出了本發(fā)明紫珠總苷提取物及陽性對照藥在不同給藥時間對DNCB致小鼠背部皮膚皮炎-濕疹模型的治療作用。其中，A:空白對照組；B:模型組；C:999皮炎平陽性對照組(500mg膏/kg,相當(dāng)于醋酸地塞米松0.375mg/kg) ；D:本發(fā)明實施例6紫珠總苷提取物組(250mg/kg) ；E:本發(fā)明實施例8紫珠總苷提物組(250mg/kg)。
[0042]圖16示出了各組小鼠皮膚病理組織照片。其中，A:空白對照組；B:模型組；C:999皮炎平陽性對照組(500mg膏/kg，相當(dāng)于醋酸地塞米松0.375mg/kg) ；D:本發(fā)明實施例6紫珠總苷提取物組(250mg/kg) ；E:本發(fā)明實施例8紫珠總苷提物組(250mg/kg)。
[0043]圖17示出了本發(fā)明紫珠總苷提取物對皮炎-濕疹模型小鼠真皮內(nèi)炎性細胞的影響。其中，A:空白對照組；B:模型組；C:999皮炎平陽性對照組(500mg膏/kg，相當(dāng)于醋酸地塞米松0.375mg/kg) ；D:本發(fā)明實施例6紫珠總苷提取物組(250mg/kg) ；E:本發(fā)明實施例8紫珠總苷提物組(250mg/kg)?！?amp;&”表示與空白對照組相比P < 0.01，“女* ”表示與模型組相比P < 0.01。
[0044]圖18示出了本發(fā)明紫珠總苷提取物對皮炎-濕疹模型小鼠血清中IL_2(a)及TNF-a (b)的影響。其中，A:空白對照組；B:模型組；C:999皮炎平陽性對照組(500mg膏/kg,相當(dāng)于醋酸地塞米松0.375mg/kg) ；D:本發(fā)明實施例6紫珠總苷提取物組(250mg/kg)；E:本發(fā)明實施例8紫珠總苷提物組(250mg/kg)?！?amp;”表示與空白對照組相比P < 0.05，“&&”表示與空白對照組相比P < 0.01，“ * ”表示與模型組相比P < 0.05，“ * * ”表示與模型組相比P < 0.01。
【具體實施方式】`
[0045]一方面，本發(fā)明提供紫珠總苷提取物，以重量計，其含有18%~45%毛蕊花糖苷和 15%~40% Arenarioside。本發(fā)明提取物由華紫珠(Callicarpacathayana H.T.Chang)或杜虹花(Callicarpa formosana Rolfe)的葉(優(yōu)選干燥葉)制備。
[0046]毛蕊花糖苷和Arenarioside的結(jié)構(gòu)式如下:
【權(quán)利要求】
1.紫珠總苷提取物，以重量計，其含有18%~45%毛蕊花糖苷和15%~40%Arenarioside,所述提取物由華紫珠(Callicarpa cathayana H.T.Chang)或杜虹花(Callicarpa formosana Rolfe)的葉制備。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的紫珠總苷提取物，以重量計，其含有28%~45%毛蕊花糖苷。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的紫珠總苷提取物，以重量計，其含有24%~40%Arenarioside0
4.權(quán)利要求1-3中任一項所述的紫珠總苷提取物的制備方法，其包括以下步驟: (1)將華紫珠Callicarpa cathayana H.T.Chang)或杜虹花(CallicarpaformosanaRolfe)的葉粉碎，用溶劑提取I~3次，所述溶劑為水、醇或者水與醇的混合物； (2)將各次提取液合并，減壓濃縮除去步驟(1)所述的有機溶劑；加入0.5倍~2倍體積量的水，靜置過夜，離心或過濾得到上清液； (3a)使上清液通過裝填有樹脂填料的色譜層析柱，用水和/或稀醇水溶液洗滌，以除去雜質(zhì)，然后以較高濃度的醇水溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，干燥，得到紫珠總苷提取物；或者 (3b)用有機溶劑萃取上清液，將有機相減壓濃縮，干燥，得到紫珠總苷提取物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其中步驟(1)中，提取方法選自閃式提取法、回流提取法、微波提取法、超聲提取法和滲漉提取法。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的制備方法，其中步驟(3a)中，所述樹脂填料選自大孔吸附樹脂、聚酰胺樹脂和離子交換樹脂。
7.根據(jù)權(quán)利要求4-6中任一項所述的制備方法，其中步驟(3a)中，所述稀醇水溶液為O~15體積％的稀醇水溶液，所述較高濃度的醇水溶液為30%~90體積％的醇水溶液。
8.據(jù)權(quán)利要求4-7中任一項所述的制備方法，其中步驟(3b)中，所述有機溶劑為正丁醇或乙酸乙酯。
9.根據(jù)權(quán)利要求4-8中任一項所述的制備方法，其中步驟(3a)中，減壓濃縮洗脫液后，一次或更多次進行以下操作:用水溶解濃縮液，使之通過層析柱，用水和/或稀醇水溶液洗滌，以除去雜質(zhì)，然后以較高濃度的醇水溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮。
10.權(quán)利要求1-3中任一項所述的紫珠總苷提取物在制備用于治療或輔助治療神經(jīng)退行性疾病的食品、保健品或藥品或用于治療皮膚病的化妝品、保健品或藥品中的用途。
【文檔編號】A61K127/00GK103816296SQ201210468493
【公開日】2014年5月28日 申請日期:2012年11月19日 優(yōu)先權(quán)日:2012年11月19日
【發(fā)明者】劉敬閣, 程屹俊, 曹進國, 朱永亮, 錢向平 申請人:蘇州潤新生物科技有限公司