自組裝多肽及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種自組裝多肽及其制備方法和應(yīng)用，該多肽的序列為SEQ?ID?NO:1所示的氨基酸序列；所述自組裝多肽通過(guò)化學(xué)合成法合成；及自組裝多肽在藥物自組裝或制備藥物組合物中的應(yīng)用。本發(fā)明的自組裝多肽形成的復(fù)合物能增加藥物的水溶性；采用本發(fā)明的自組裝多肽形成的復(fù)合物制備的藥物組合物有助于減少藥物攝取，從而降低醫(yī)療成本。
【專利說(shuō)明】自組裝多肽及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及藥物輔料領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及一種自組裝多肽及其制備方法和應(yīng)用，該多肽能夠增加藥物的水溶性。
【背景技術(shù)】
[0002]注射藥物的水溶性一直是醫(yī)藥領(lǐng)域難以克服的給藥障礙，限制了許多藥物的臨床使用。自組裝多肽可以自發(fā)的形成納米結(jié)構(gòu)，將藥物包合在其內(nèi)腔后增加其水溶性。自組裝多肽具有不同的極性末端，其結(jié)構(gòu)造成在極性溶液中會(huì)自動(dòng)形成微球結(jié)構(gòu)，自組裝多肽近年來(lái)引起了藥學(xué)領(lǐng)域的普遍關(guān)注，認(rèn)為可以作為脂質(zhì)體的替代產(chǎn)品進(jìn)行開(kāi)發(fā)。
[0003]自組裝多肽源自于自然界中蛋白質(zhì)的自組裝現(xiàn)象，通過(guò)調(diào)節(jié)多肽分子的結(jié)構(gòu)以及改變外部環(huán)境，多肽分子可以利用氫鍵、疏水作用、堆積作用等非共價(jià)鍵力自發(fā)或觸發(fā)的自組裝成形態(tài)與結(jié)構(gòu)特異的組裝體，由于多肽具有良好的生物相容性和可控的降解性能，因此近些年被廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)。[0004]本發(fā)明利用具有新穎結(jié)構(gòu)的自組裝多肽對(duì)藥物進(jìn)行包合，多肽-藥物形成的微球有效的增加了藥物的溶解性，作為臨床給藥的新途徑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]因此，本發(fā)明的目的是針對(duì)目前極性藥物水溶性差的不足，提供一種能夠與其他極性材料形成復(fù)合物的自組裝多肽，能夠有效地提高藥物的水溶性。
[0006]本發(fā)明的一個(gè)目的是針對(duì)某些藥物的水溶性差的特征，提供了一種能與極性藥物形成復(fù)合物的自組裝多肽，以增加藥物的水溶性。
[0007]本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供了自組裝多肽的制備方法。
[0008]本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供了包括所述自組裝多肽的復(fù)合物，及其在制備藥物組合物中的應(yīng)用。
[0009]本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供了自組裝多肽與極性藥物形成的復(fù)合物與藥學(xué)上可接受的輔料(包括:自組裝材料、賦形劑、穩(wěn)定劑或稀釋劑等等)形成的藥物組合物及其制備方法。
[0010]針對(duì)上述目的，本發(fā)明提供的技術(shù)方案如下:
[0011]一方面，本發(fā)明提供一種自組裝多肽，該多肽的序列為下述SEQ IDN0:1所示的氨基酸序列:
[0012]GLffffX1X2WffX3X4WffX5X6X7WffX8X9X10X11X12X13 (X14)n
[0013]其中，X1SLys 或 Arg;
[0014]X2 為 Ala、Val 或 Leu ;
[0015]X3 為 Lys 或 Arg;
[0016]X4 為 Ala、Val 或 Leu ；
[0017]X5 為 Lys 或 Arg ；[0018]X6 為 Ser 或 Thr ;
[0019]X7 為 Leu 或 Val;
[0020]X8 為 Lys 或 Arg ；
[0021]X9 為 Lys 或 Arg ；
[0022]X10 為 Lys 或 Arg ；
[0023]X11 為 Lys、Arg 或 Leu ；
[0024]X12 為 Lys 或 Arg ；
[0025]X13 為 Lys 或 Arg ；[0026]X14 為 Ala, η=0_1。
[0027]優(yōu)選地，所述該多肽的序列選自SEQ ID NO:2 (GLffffKAffffKAffffKSLffffRKRKRKA)、SEQID NO:3 (GLffffKVffffKLffffKSLffffRKRLRKA),SEQ ID NO:4 (GLffffKLffffKLffffKSLffffRKRKRKA)和 SEQID NO:5 (GLffffKLffffKLffffKSLffffRKRLRK)所示的氨基酸序列。
[0028]另一方面，本發(fā)明提供一種自組裝多肽的制備方法，所述自組裝多肽通過(guò)化學(xué)合成法合成。
[0029]優(yōu)選地，所述自組裝多肽采用Fmoc方法并經(jīng)過(guò)HPLC純化、脫鹽合成固相合成。
[0030]還優(yōu)選地，所述固相合成是以固相載體樹(shù)脂為載體，從C端即羧基端向N端即氨基端逐漸添加氨基酸的過(guò)程。
[0031]本發(fā)明優(yōu)選通過(guò)微波加熱的方法，縮短偶聯(lián)反應(yīng)時(shí)間。
[0032]本發(fā)明中優(yōu)選樹(shù)脂:Fmoc-wang樹(shù)脂、2_cl_trt樹(shù)脂，樹(shù)脂取代度0.22、.34.[0033]本發(fā)明所使用的保護(hù)氨基酸為:Fmoc_Tyr(tBu) -OH, Fmoc-1le-OHFmoc-1eu(tBu)-OH，F(xiàn)moc-Ala-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Lys (Boc) -OH,Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Arg (pbf)-OH, Fmoc-Ser (tBu)-OH, Fmoc-Trp-OH, Fmoc-Cys(Trt) -OH, Fmoc-Gln (Trt) _0H, Fmoc-Asn (trt) _0H, Fmoc-Trp (tBu) _0H, Fmoc-Asp-OH,Fmoc-His (Trt) -OH, Fmoc-Gly-OH,反應(yīng)過(guò)程中保護(hù)氨基酸3~5倍過(guò)量。
[0034]本發(fā)明所使用的脫保護(hù)試劑為:哌啶/N，N-二甲基甲酰胺，比例為10:90-30:70。
[0035]本發(fā)明所使用的偶聯(lián)試劑為:①苯并三氮唑-N，N，N’，N’ -四甲基脲六氟磷酸鹽/1-羥基苯并三唑(HOBT)，②2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N, N’，N’ -四甲基脲六氟磷酸酯/1-羥基苯并三唑(HOBT)，③N，N’-二異丙基碳二亞胺。
[0036]本發(fā)明中，若使用第①或者第②種偶聯(lián)試劑，那么反應(yīng)過(guò)程中應(yīng)添加縛酸劑:DIEA/NMP。
[0037]本發(fā)明中所使用的切割試劑為:TFA/茴香硫醚/水/苯酚/1，2-乙二硫醇，比例為:82.5:5:5:5;2.5或者多肽中若不含有半胱氨酸，甲硫氨酸，精氨酸可選擇TFA/三羥甲基氨基甲烷/水，比例為95:2.5:2.5。
[0038]本發(fā)明中所使用MS-1T-TOF確定分子量，使用HPLC純化粗肽。
[0039]再一方面，本發(fā)明提供一種復(fù)合物，所述復(fù)合物由上述本發(fā)明所述的自組裝多肽和極性藥物組成，所述由自組裝多肽和極性藥物的摩爾比為25:1~1:100。
[0040]優(yōu)選地，所述自組裝多肽和極性藥物的摩爾比為10:1~1:50。
[0041]還優(yōu)選地，所述自組裝多肽與極性藥物的摩爾比為10:1。
[0042]還一方面，本發(fā)明提供一種藥物組合物，所述藥物組合物包括上述本發(fā)明所述的復(fù)合物和藥學(xué)上可接受輔料。
[0043]優(yōu)選地，所述輔料選自自組裝材料、賦形劑和稀釋劑。
[0044]更優(yōu)選地，所述輔料還包括可溶性填充劑、邱調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑和注射用水。
[0045]又一方面，本發(fā)明提供上述本發(fā)明所述的自組裝多肽、上述本發(fā)明所述的復(fù)合物或藥物組合物在藥物自組裝或制備藥物中的應(yīng)用。[0046]在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，將自組裝多肽能與其他藥物制成不同比例的復(fù)合物，以摩爾計(jì)算，從10:1到1:100，不同的比例得到的復(fù)合物具有不同的釋放特性。按照摩爾比例，稱取適量的藥物，溶于適量的生理鹽水、純水、緩沖液、或含一定比例（20%以下）的有機(jī)溶劑的上述溶液中，稱取適量的自組裝多肽，溶于適量的生理鹽水(或？83、水）中，在0-51溫度下，超聲混合1-15分鐘，或者攪拌1-3小時(shí)，或者放置過(guò)夜，溶液可以直接加輔料做成制劑，也可以冷凍干燥后再與其他輔料一起制成制劑。注為磷酸鹽。
[0047]在本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的方面，所述藥物組合物還包括可溶性填充劑、調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定齊0、注射用水、滲透壓調(diào)節(jié)劑的一種或多種。其中，水溶性填充劑輔料為甘露醇、低分子右旋糖苷、山梨醇、聚乙二醇、葡萄糖、乳糖、半乳糖的一種或多種的組合。邱調(diào)節(jié)劑為非揮發(fā)性的酸，或者生理上可接受的有機(jī)或無(wú)機(jī)酸和堿及鹽，或其組合；優(yōu)選地，其選自櫞酸、磷酸、乳酸、酒石酸、鹽酸、氫氧化鉀、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銨、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸銨、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、碳酸氫銨及其組合。穩(wěn)定劑為201^-2他、硫代硫酸鈉、焦亞硫酸鈉、亞硫酸鈉、磷酸氫二鉀、碳酸氫鈉、碳酸鈉、精氨酸、谷氨酸、聚乙二醇6000、聚乙二醇4000、十二烷基硫酸鈉或三羥甲基氨基甲烷的一種或幾種的組合。優(yōu)選焦亞硫酸鈉、磷酸氫二鉀、精氨酸、聚乙二醇6000、三羥甲基氨基甲烷的一種或多種的組合。滲透壓調(diào)節(jié)劑，是氯化鈉、氯化鉀的一種或兩種的組合。
[0048]優(yōu)選地，所述藥物組合物的劑型為凍干粉或溶液注射劑。
[0049]優(yōu)選地，所述極性藥物為紫杉醇或艾塞那肽。
[0050]在本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了劑型為凍干粉的藥物組合物的制備方法，其包括步驟：
[0051]1)取紫杉醇和自組裝多肽溶液，加入水溶性填充劑、穩(wěn)定劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑等，加入注射用水，調(diào)節(jié)邱值至4-8使其溶解，加水稀釋：2)加入0. 1-0. 5%活性炭，在0-101下攪拌10-20分鐘，過(guò)濾將活性炭除去；3?采用微孔濾膜過(guò)濾除菌，濾液進(jìn)行分裝，采用冷凍干燥法，制得白色疏松塊狀物并封口。
[0052]在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，采取以下的方法制備劑型為凍干粉的藥物組合物：取紫杉醇和自組裝多肽溶液適量，加入水溶性填充劑、穩(wěn)定劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑等，加入注射用水適量，調(diào)節(jié)邱值至4-8使其溶解，加水稀釋至適當(dāng)濃度，加入0. 1-0. 5%活性炭，在0-101下攪拌10-20分鐘，除去活性炭，采用微孔濾膜過(guò)濾除菌，濾液進(jìn)行分裝，采用冷凍干燥法，制得白色疏松塊狀物，封口即得。
[0053]在本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了劑型為溶液注射劑的藥物組合物的制備方法，其包括步驟：
[0054]1)取紫杉醇和自組裝多肽溶液或凍干粉，加入水溶性填充劑、穩(wěn)定劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑等，加入注射用水適量，調(diào)節(jié)邱值至4-8使其溶解，加水稀釋：2)加入0. 1-0. 5%活性炭，在0-10°C下攪拌10-20分鐘，過(guò)濾將活性炭除去；3)采用微孔濾膜過(guò)濾除菌，濾液進(jìn)行分裝并封口。
[0055]在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，采取以下的方法制備劑型為溶液注射劑的藥物組合物:取多肽藥物和自組裝多肽溶液或凍干粉適量，加入水溶性填充劑、穩(wěn)定劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑等，加入注射用水適量，調(diào)節(jié)PH值至4-8使其溶解，加水稀釋至適當(dāng)濃度，加入0.1-0.5%活性炭，在0-10°C下攪拌10-20分鐘，脫碳，采用微孔濾膜過(guò)濾除菌，濾液進(jìn)行分裝，封口即得。
[0056]本發(fā)明的藥物組合物可以用在制備治療藥物方面，治療的方向依據(jù)藥物原來(lái)治療方向一致，通常能夠減少給藥次數(shù)，提高依從性。具體地，本發(fā)明的組合物可以靜脈、肌肉或皮下注射劑形式給藥。雖然劑量依治療對(duì)象、給藥方式、癥狀及其它因素而改變，本發(fā)明的藥物組合物在相當(dāng)寬的劑量范圍內(nèi)是有效的。實(shí)際劑量應(yīng)該由醫(yī)生根據(jù)有關(guān)的情況來(lái)決定，這些情況包括被治療者的身體狀態(tài)、給藥途徑、年齡、體重、患者對(duì)藥物的個(gè)體反應(yīng)，患者癥狀的嚴(yán)重程度等等，因此上述劑量范圍并不是以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
[0057]本發(fā)明具有以下的優(yōu)點(diǎn):[0058]1，本發(fā)明的自組裝多肽能增加藥物的水溶性；
[0059]2，采用本發(fā)明的自組裝多肽制備的藥物組合物有助于減少藥物攝取，從而降低醫(yī)療成本。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0060]以下，結(jié)合附圖來(lái)詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施方案，其中:
[0061]圖1為本發(fā)明所述的自組裝多肽與紫杉醇可形成類似脂質(zhì)體的復(fù)合物示意圖；
[0062]圖2為紫三醇單體、自組裝多肽及自組裝多肽與紫杉醇形成的復(fù)合物的HPLC圖譜；其中，圖2A為紫三醇單體圖譜；圖2B為自組裝多肽的HPLC圖譜；圖2C為自組裝多肽與紫杉醇形成的復(fù)合物的HPLC圖譜；
[0063]圖3為紫杉醇與自組裝多肽組合后溶解性增加的試驗(yàn)結(jié)果；圖中，I為紫杉醇的溶解結(jié)果；2為紫杉醇:多肽的摩爾比為1:5的溶解結(jié)果；3為紫杉醇:多肽的摩爾比為1:10的溶解結(jié)果；
[0064]圖4為本發(fā)明所述的自組裝多肽與艾塞那肽單體形成組裝多肽能夠提高降血糖作用的試驗(yàn)結(jié)果，圖中，SEQ ID N0:2表示SEQ ID NO:2與艾塞那肽形成的組裝多肽、SEQ IDNO: 3表示SEQ ID NO: 3與艾塞那肽形成的組裝多肽、SEQ ID NO:4表示SEQ ID NO:4與艾塞那肽形成的組裝多肽、SEQ ID N0:5表示SEQ ID NO:5與艾塞那肽單體形成的組裝多肽。
【具體實(shí)施方式】
[0065]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明。實(shí)施例僅為解釋性的內(nèi)容，決不意味著它以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
[0066]實(shí)施例1多肽的制備
[0067]氯甲基聚苯乙烯樹(shù)脂作為不溶性的固相自組裝，首先將氨基被封閉基團(tuán)(G)保護(hù)的氨基酸共價(jià)連接在固相自組裝上。在三氟乙酸的作用下，脫掉氨基的保護(hù)基，這樣第一個(gè)氨基酸就接到了固相自組裝上了。然后氨基被封閉的第二個(gè)氨基酸的羧基通過(guò)N，N 二環(huán)己基碳二亞胺(DCC, Dicyclohexylcarbodiimide)活化,羧基被DCC活化的第二個(gè)氨基酸(L)再與已接在固相自組裝的第一個(gè)氨基酸的氨基反應(yīng)形成肽鍵，這樣在固相自組裝上就生成了一個(gè)帶有保護(hù)基的二肽。重復(fù)上述肽鍵形成反應(yīng)，使肽鏈從C端向N端生長(zhǎng)，直至達(dá)到所需要的肽鏈長(zhǎng)度。使用Fmoc策略的固相多肽合成方法，使用CSBio公司生產(chǎn)的CS336X型儀器進(jìn)行本發(fā)明的多肽的合成。合成的方法按照生產(chǎn)商的儀器說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。
[0068]具體的，所述采用Fmoc固相多肽合成法是以固相載體樹(shù)脂為載體，從C端即羧基端向N端即氨基端逐漸添加氨基酸的過(guò)程，并且通過(guò)微波加熱的方法，縮短偶聯(lián)反應(yīng)時(shí)間。
[0069]本發(fā)明中樹(shù)脂為Fmoc-wang樹(shù)脂(還可以為2_cl_trt樹(shù)脂)，樹(shù)脂取代度
0.10~0.34。
[0070]所使用的保護(hù)氨基酸為:Fmoc_Tyr(tBu)-OH,Fmoc-1Ie-OH Fmoc-1eu (tBu)-OH,Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Lys (Boc) _0H，F(xiàn)moc-Phe-OH,Fmoc-Arg (pbf)-OH, Fmoc-Ser (tBu) -OH, Fmoc-Trp-OH, Fmoc-Cys (Trt) -OH, Fmoc-Gln(Trt) -OH, Fmoc-Asn (trt) -OH, Fmoc-Trp (tBu) -OH, Fmoc-Asp-OH 和 Fmoc-His (Trt) -OH,Fmoc-Gly-OH,反應(yīng)過(guò)程中保護(hù)氨基酸3飛倍過(guò)量。[0071 ] 本發(fā)明所使用的脫保護(hù)試劑哌啶/N，N- 二甲基甲酰胺的比例為10:90-30:70。
[0072]本發(fā)明所使用的偶聯(lián)試劑為:①苯并三氮唑-N，N，N’，N’ -四甲基脲六氟磷酸鹽/1-羥基苯并三唑(HOBT)(還可為:②2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N’，N’ -四甲基脲六氟磷酸酯/1-羥基苯并三唑(HOBT)，③N，N’-二異丙基碳二亞胺)，并且添加了縛酸劑:DIEA/NMP0
[0073]所使用的切割試劑為:TFA/茴香硫醚/水/苯酚/1，2-乙二硫醇，比例為:82.5:5:5:5:2.5。
[0074]將制得的多肽使用HPLC C18半制備柱進(jìn)行純化，流動(dòng)相為乙腈。經(jīng)脫鹽及冷凍干燥得到多肽凍干粉，得到多肽1，即SEQ ID N0:2所示的氨基酸序列的自組裝多肽。
[0075]再按照與上述操作步驟相同的方法制得SEQ ID NO:3, SEQ ID N0:4和SEQ IDNO: 5所示的氨基酸序列的自組裝多肽。
[0076]實(shí)施例2紫杉醇與自組裝多肽的復(fù)合物
[0077]紫杉醇(購(gòu)自上海德默化學(xué)有限公司)與實(shí)施例1制得的自組裝多肽I分別按照25:1、1:100、10:1、1:25和1:50 (以下比例沒(méi)有注明同為摩爾比)，溶于適量的生理鹽水中，充分混勻后，在4°C下，超聲混合5分鐘，得到復(fù)合物溶液，將單體與復(fù)合物分別以HPLC法來(lái)衡量，具體的HPLC的儀器為(Agilent 1100)，流動(dòng)相為A乙腈(千分之一的三氟乙酸)，流動(dòng)相B水(千分之一的三氟乙酸)，填充劑十八烷基硅烷鍵合硅膠，檢測(cè)條件為:檢測(cè)波長(zhǎng):214nm,洗脫的梯度條件為:50分鐘內(nèi)流動(dòng)相A由35體積％變?yōu)?0體積％，流動(dòng)相B由65體積％變?yōu)?0體積％。
[0078]紫三醇單體見(jiàn)圖2A，多肽的單體見(jiàn)圖2B ;選取比例為1:25的復(fù)合物結(jié)果見(jiàn)圖2C(摩爾比為1:100、10:1、1:25和1:50的復(fù)合物的結(jié)果未示出)，從圖中結(jié)果可以看出紫杉醇與自組裝多肽I的出峰位置發(fā)生了改變，即紫杉醇與自組裝多肽I形成了復(fù)合物。
[0079]實(shí)施例3藥物組合物的制備
[0080]將加泊洛沙姆0.05g,甘露醇0.2g、乳糖0.lg、注射用水3mL置于IOmL的容器中，攪拌使溶解，加lmol/L的枸櫞酸調(diào)節(jié)pH至6.0，冷卻致5°C，再取實(shí)施例2方法制備的含有3即10顯：2所示的氨基酸序列的自組裝多肽的復(fù)合物溶液5此加入其中，繼續(xù)調(diào)補(bǔ)邱至
6.0，加水至10此。加入1008活性碳，在51下攪拌20分鐘，過(guò)濾除去活性炭，采用微孔濾膜（111111)016, 1110)過(guò)濾除菌，濾液按每支0. 21111進(jìn)行分裝，預(yù)凍2小時(shí)后，冷凍下減壓干燥12小時(shí)，至樣品溫度到51后，再干燥2小時(shí)，制得白色疏松塊狀物，封口即得復(fù)合物的藥物組合物，置于預(yù)充式的注射器中，規(guī)格為1009 8/支，41以下保存，注射前以2009 [注射用水溶解，后給藥。
[0081]再按照與上述操作步驟相同的方法制得含有3即10勵(lì)：3、3即10勵(lì)：4和3即10顯:5所示的氨基酸序列的自組裝多肽的藥物組合物。
[0082]實(shí)施例4藥物組合物的制備
[0083]^01 20呢，枸櫞酸10呢，注射用水7此置于10此的容器中，攪拌使其溶解，加111101/1的或氫氧化鈉調(diào)節(jié)邱至6. 5，冷卻至01，取以實(shí)施例3的方法制得的含有3即10顯：2所示的氨基酸序列的自組裝多肽的藥物組合物粉末加入其中，繼續(xù)攪拌溶解，調(diào)補(bǔ)邱至6. 5，加水至10此。加入10呢活性碳，在0-41下攪拌20分鐘，過(guò)濾除去活性炭，采用微孔濾膜過(guò)濾除菌，濾液按每支100 9 I分裝入預(yù)充式注射器，樣品溫度到51以下保存，規(guī)格為50化/支。[0084]再按照與上述操作步驟相同的方法制得含有3即10 ^0:3,8^ 10勵(lì)：4和3即10顯:5所示的氨基酸序列的自組裝多肽的藥物組合物。
[0085]實(shí)施例5藥物纟目合物的水溶件
[0086]紫杉醇在？83溶液中的溶解度測(cè)定為0. 0017^/1111,經(jīng)過(guò)與實(shí)施例1制得的自組裝多肽1 (卿10勵(lì):2)分別按摩爾比為1 ：5和1 ：10復(fù)合后，其溶解度均可增加至0. 02^/III[，結(jié)果如圖3所示，從圖中可以看出，紫杉醇經(jīng)過(guò)自組裝多肽1按照摩爾比例為1 ：10的包合后，紫杉醇的溶解性提高了 10倍。
[0087]實(shí)施例6艾寒那肽的自組裝多肽的降血糖作用
[0088]本實(shí)施例中，使用3即10勵(lì)：2、820 10勵(lì)：3、820 10勵(lì)：4、82011)勵(lì)：5分別與上市降糖藥物艾塞那肽單體(購(gòu)自上海德默醫(yī)藥技術(shù)有限公司）形成組裝多肽，研究組合物的降糖效果。
[0089]本實(shí)施例中選取艾塞那肽單體與自組裝多肽的比例為1 ：10。
[0090]本實(shí)施例中選取昆明小鼠(購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院31^動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室)作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，以生理鹽水溶解藥品，給藥劑量為300呢八8，241！后測(cè)量血糖值，結(jié)果見(jiàn)圖3，表明本發(fā)明的自組裝多肽與艾塞那肽組裝后，其降血糖作用增強(qiáng)。
【權(quán)利要求】
1.一種自組裝多肽，該多肽的序列為下述SEQ ID N0:1所示的氨基酸序列: GLffffX1X2WffX3X4WffX5X6X7WffX8X9X10X11X12X13 (X14)n 其中，Xi為L(zhǎng)ys或Arg ；
X2 為 Ala、Val 或 Leu ；
X3 為 Lys 或 Arg ；
X4 為 Ala、Val 或 Leu ；
X5 為 Lys 或 Arg ；
X6 為 Ser 或 Thr ；
X7 為 Leu 或 Val ；
X8 為 Lys 或 Arg ；
X9 為 Lys 或 Arg ；
X10 為 Lys 或 Arg ；
Xn 為 Lys、Arg 或 Leu ；
Xi2 為 Lys 或 Arg ；
Xi3 為 Lys 或 Arg ；
X14 為 Ala, η=0-1。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的自組裝多肽，其特征在于，所述該多肽的序列選自SEQIDNO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO:4 和 SEQ ID NO: 5 所示的氨基酸序列。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的自組裝多肽的制備方法，所述自組裝多肽通過(guò)化學(xué)合成法合成；優(yōu)選地，所述自組裝多肽采用Fmoc方法或者Boc方法并經(jīng)過(guò)HPLC純化、脫鹽合成； 更優(yōu)選地，所述HPLC純化為使用HPLC C18半制備柱進(jìn)行純化，流動(dòng)相為乙腈。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的自組裝多肽的制備方法，其特征在于，所述固相合成是以固相載體樹(shù)脂為載體，從C端即羧基端向N端即氨基端逐漸添加氨基酸的過(guò)程，所述樹(shù)脂優(yōu)選為Fmoc-wang樹(shù)脂或2-cl-trt樹(shù)脂； 優(yōu)選地，所述固相合成中使用的脫保護(hù)試劑為:哌啶/N，N-二甲基甲酰胺，其比例為10:90^30:70 ;或優(yōu)選地，所述固相合成中使用的偶聯(lián)試劑為苯并三氮唑-N，N，N’，N’ -四甲基脲六氟磷酸鹽/1-羥基苯并三唑(HOBT)、2_ (7-偶氮苯并三氮唑)-N, N，N’，N’ -四甲基脲六氟磷酸酯/1-羥基苯并三唑(HOBT)或N，N’ - 二異丙基碳二亞胺； 還優(yōu)選地，當(dāng)使用苯并三氮唑-N，N, N’，N’ -四甲基脲六氟磷酸鹽/1-羥基苯并三唑(HOBT)或2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N, N’，N’ -四甲基脲六氟磷酸酯/1-羥基苯并三唑(HOBT)時(shí)，所述反應(yīng)中過(guò)程中還添加縛酸劑:DIEA/NMP ； 進(jìn)一步優(yōu)選地，所述反應(yīng)中所使用的切割試劑為:TFA/茴香硫醚/水/苯酚/1，2-乙二硫醇，其比例為=82.5:5:5:5:2.5 ;或當(dāng)多肽中若不含有半胱氨酸，甲硫氨酸，精氨酸時(shí)，所述反應(yīng)中所使用的切割試劑為=TFA/三羥甲基氨基甲烷/水，比例為95:2.5:2.5。
5.一種復(fù)合物，所述復(fù)合物由權(quán)利要求1或2所述的自組裝多肽和極性藥物組成，所述自組裝多肽和極性藥物的摩爾比為25:1~1:100，優(yōu)選地，所述自組裝多肽和極性藥物的摩爾比為10:1~1:50，所述自組裝多肽和極性藥物的摩爾比為10:1。
6.一種藥物組合物，所述藥物組合物包括權(quán)利要求5所述的復(fù)合物和藥學(xué)上可接受輔料。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其特征在于，所述輔料選自自組裝材料、賦形劑和稀釋劑，優(yōu)選地，所述輔料還包括可溶性填充劑、PH調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑和注射用水。
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物的劑型為凍干粉或溶液注射劑。
9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的藥物組合物，其特征在于，所述極性藥物為紫杉醇或艾塞那肽。
10.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的自組裝多肽、權(quán)利要求5所述的復(fù)合物或權(quán)利要求6至9中任一項(xiàng)所述的藥物組合物在藥物自組裝或制備藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61K47/48GK103833833SQ201210468509
【公開(kāi)日】2014年6月4日 申請(qǐng)日期:2012年11月20日 優(yōu)先權(quán)日:2012年11月20日
【發(fā)明者】王玉麗, 鄭學(xué)敏, 黃長(zhǎng)江, 龔珉, 徐為人, 湯立達(dá) 申請(qǐng)人:天津藥物研究院