專利名稱：一種從當(dāng)歸中制備高純度阿魏酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從當(dāng)歸中制備高純度阿魏酸的方法。
背景技術(shù)：
當(dāng)歸(學(xué)名Angelica sinensis),多年生草本植物，傘形科植物當(dāng)歸Angelicasinensis (Oliv.) Diels的干燥根。在中國(guó)分布于甘肅、云南、四川、青海、陜西、湖南、湖北、貴州等地，各地均有栽培。當(dāng)歸的根可入藥，是最常用的中藥之一。阿魏酸是一種有機(jī)酸，分子式為CltlHltlO4,平均分子量為194. 19,化學(xué)名稱為
3-(4-羥基-3-甲氧基苯基)-2-丙烯酸。由于阿魏酸中含有碳-碳雙鍵，故阿魏酸有順?lè)串?構(gòu)體，其中順式為黃色油狀液體，反式為正方形結(jié)晶或纖維結(jié)晶，溶點(diǎn)為174°C，微溶于水，可溶于熱水，乙醇和乙酸乙酯，微溶于乙醚，難溶于苯和石油醚。阿魏酸(Ferulic acid)是當(dāng)歸(Angelica sinensis)中的一種有效成分。研究表明，阿魏酸是當(dāng)歸的主要藥效成分之一，具有抗動(dòng)脈粥樣硬化，抗血小板凝集和血栓，清除氧自由基，解除血管平滑肌痙攣以及抗炎、鎮(zhèn)痛、調(diào)節(jié)免疫功能、保肝利膽等藥理作用，可用于治療血栓閉塞性靜脈炎和急性腦血栓等。目前，提取分離阿魏酸的方法有高速逆流萃取、微波輔助提取、超聲波輔助提取、大孔吸附樹(shù)脂吸附、超臨界CO2萃取等方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)行的收率較低，成本較高，市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力弱的制備方法進(jìn)行改進(jìn)，建立一條具有工業(yè)化可操作性的從當(dāng)歸中制備高純度阿魏酸的方法。本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的一種從當(dāng)歸中制備高純度阿魏酸的方法，其特征在于包括以下步驟a、阿魏酸的粗提用NaOH溶液于50 60°C攪拌浸提當(dāng)歸，過(guò)濾，收集濾液，殘?jiān)瓷鲜霾襟E再提取兩遍，過(guò)濾，收集濾液，合并前2次濾液，最后I遍濾液用作為下一批當(dāng)歸的提取溶劑；b、大孔型陰離子交換樹(shù)脂吸附分離大孔型陰離子交換樹(shù)脂經(jīng)過(guò)預(yù)處理后，采用濕法裝柱，上步驟的提取濾液以一定的上樣速度上柱吸附，用HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度，直至樹(shù)脂達(dá)到飽和，停止上樣；吸附飽和的樹(shù)脂先用反滲透水進(jìn)行沖洗除雜，然后用鹽酸溶液進(jìn)行洗脫，HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度，直至洗脫完全；收集洗脫液，調(diào)節(jié)洗脫液的pH 2 3，待上大孔吸附樹(shù)脂柱；C、大孔吸附樹(shù)脂吸附分離大孔吸附樹(shù)脂經(jīng)過(guò)預(yù)處理后，采用濕法裝柱；將上述大孔型陰離子交換樹(shù)脂洗脫液以一定的上樣速度上柱吸附，用HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度，直至樹(shù)脂達(dá)到飽和，停止上樣；吸附飽和的樹(shù)脂先用低濃度的甲醇進(jìn)行除雜；然后用較高濃度的甲醇溶液進(jìn)行洗脫，HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度，直至洗脫完全；收集洗脫液，真空濃縮回收甲醇，干燥得阿魏酸粗品I ;阿魏酸粗品I待采用C18鍵合硅膠柱進(jìn)一步純化；d、中壓C18鍵合硅膠ODS柱層析純化將C18鍵合硅膠濕法裝柱，用加壓裝置進(jìn)行壓縮，并用流動(dòng)相平衡層析柱；將上述的阿魏酸粗品I用流動(dòng)相進(jìn)行溶解，濕法上樣；用甲醇-水-冰醋酸為洗脫劑進(jìn)行等梯度洗脫，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，分步收集色譜峰對(duì)應(yīng)流出液，HPLC檢測(cè)流出液，合并具有相同成份的流出液，回收溶劑，干燥得阿魏酸樣品II ;經(jīng)HPLC檢測(cè)，阿魏酸樣品II的純度可以到達(dá)98%以上。本發(fā)明一種從當(dāng)歸中制備高純度阿魏酸的方法，其特征在于包括以下步驟a、阿魏酸的粗提用NaOH溶液于50 60°C攪拌浸提當(dāng)歸，過(guò)濾，收集濾液，殘?jiān)瓷鲜霾襟E再提取兩遍，過(guò)濾，收集濾 液，合并前2次濾液，最后I遍濾液用作為下一批當(dāng)歸的提取溶劑；b、大孔型陰離子交換樹(shù)脂吸附分離大孔型陰離子交換樹(shù)脂經(jīng)過(guò)預(yù)處理后，采用濕法裝柱，上步驟的提取濾液以一定的上樣速度上柱吸附，用HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度，直至樹(shù)脂達(dá)到飽和，停止上樣；吸附飽和的樹(shù)脂先用反滲透水進(jìn)行沖洗除雜，然后用鹽酸溶液進(jìn)行洗脫，HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度，直至洗脫完全；收集洗脫液，調(diào)節(jié)洗脫液的pH 2 3，待上大孔吸附樹(shù)脂柱；C、大孔吸附樹(shù)脂吸附分離大孔吸附樹(shù)脂經(jīng)過(guò)預(yù)處理后，采用濕法裝柱；將上述大孔型陰離子交換樹(shù)脂洗脫液以一定的上樣速度上柱吸附，用HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度，直至樹(shù)脂達(dá)到飽和，停止上樣；吸附飽和的樹(shù)脂先用低濃度的甲醇進(jìn)行除雜；然后用較高濃度的甲醇溶液進(jìn)行洗脫，HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度，直至洗脫完全；收集洗脫液，真空濃縮回收甲醇，干燥得阿魏酸粗品I ;阿魏酸粗品I待采用C18鍵合硅膠柱進(jìn)一步純化；d、中壓C18鍵合硅膠ODS柱層析純化將C18鍵合硅膠濕法裝柱，用加壓裝置進(jìn)行壓縮，并用流動(dòng)相平衡層析柱；將上述的阿魏酸粗品I用流動(dòng)相進(jìn)行溶解，濕法上樣；用甲醇-水-冰醋酸為洗脫劑進(jìn)行等梯度洗脫，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，分步收集色譜峰對(duì)應(yīng)流出液，HPLC檢測(cè)流出液，合并具有相同成份的流出液，回收溶劑，干燥得阿魏酸樣品II ;經(jīng)HPLC檢測(cè)，阿魏酸樣品II的純度可以到達(dá)98%以上。步驟a中所述的當(dāng)歸應(yīng)粉碎至20 40目；NaOH濃度為O. 5% 5% (m/m),提取的溫度為50 60°C，提取時(shí)間為2 4 h，料液比為1:6 1:10。步驟b中所述的大孔型陰離子交換樹(shù)脂為D201或D202，采用氯化鈉和酸堿預(yù)處理；樹(shù)脂采用濕法裝柱，樹(shù)脂柱的的徑高比為1:6 1:10 ;步驟b中所述的上樣吸附時(shí)的流速2 4 BV/h，用HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度；當(dāng)流出液的濃度為上樣濃度的O 4%時(shí)，該樹(shù)脂即達(dá)到飽和，并且停止上樣；步驟b中所述的除雜步驟用反滲透水進(jìn)行沖洗，流速為4 BV/h，用量為I 3 BV ；步驟b中所述的洗脫步驟用3% 7%的鹽酸溶液進(jìn)行洗脫，洗脫的速度為2 4BV/h，洗脫體積為3 5 BV ;HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度，直至洗脫完全；步驟b中所述的洗脫液的pH值用鹽酸或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)至pH=2 3。步驟c中所述的大孔吸附樹(shù)脂為HPD-450、AB_8、弱極性或中等極性樹(shù)脂，采用95%乙醇預(yù)處理；樹(shù)脂采用濕法裝柱，樹(shù)脂柱的的徑高比為1:5 1:9 ;步驟c中所述的上樣吸附時(shí)的流速2 4 BV/h,用HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度；當(dāng)流出液的濃度為上樣濃度的O 4%時(shí)，該樹(shù)脂即達(dá)到飽和，并且停止上樣；步驟c中所述的除雜步驟用15% 35% (v/v)的甲醇進(jìn)行除雜，流速為4 BV/h,用量為I 3 BV ;
步驟c中所述的洗脫步驟用50% 80%(v/v)甲醇溶液進(jìn)行洗脫，洗脫速度為2 4 BV/h，洗脫體積為3 5 BV5HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度，直至洗脫完全。步驟d中所述的中壓C18鍵合硅膠柱層析裝柱方法為稱取適量的C18鍵合硅膠用初始流動(dòng)相進(jìn)行浸泡，并且攪拌，待C18鍵合硅膠中沒(méi)有氣泡時(shí)，濕法裝入動(dòng)態(tài)軸向不銹鋼中壓層析柱中；然后用加壓裝置進(jìn)行壓縮，使壓縮后的C18鍵合硅膠柱在正常流速下的工作壓力為5 20 bar,并用流動(dòng)相平衡層析柱；步驟d中所述的上樣量為I 3 g樣品/50 g C18鍵合硅膠，用流動(dòng)相溶解，濕法上樣；步驟d中所述的洗脫劑采用甲醇水冰醋酸為30:68. 5:1. 5 (v/v)；本發(fā)明一種從當(dāng)歸中制備高純度阿魏酸的方法采用當(dāng)歸為原料，通過(guò)堿水提取、大孔型離子交換樹(shù)脂耦合大孔吸附樹(shù)脂吸附分離，以及C18鍵合硅膠純化阿魏酸，制備高純度的阿魏酸。 本發(fā)明的有益效果是由于采用新的提取工藝，通過(guò)簡(jiǎn)化操作、減少損失、提高產(chǎn)率，降低成本，增強(qiáng)產(chǎn)品的市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)能力。


附圖I為阿魏酸制備工藝流程圖。附圖2為E型阿魏酸化學(xué)結(jié)構(gòu)式。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明涉及一種從當(dāng)歸中制備高純度阿魏酸的方法，是利用當(dāng)歸為原料，通過(guò)堿水提取、大孔型離子交換樹(shù)脂耦合大孔吸附樹(shù)脂吸附分離，以及C18鍵合硅膠純化阿魏酸，制備高純度的阿魏酸。整個(gè)工藝提取率達(dá)90%，收率達(dá)70%以上，阿魏酸產(chǎn)品純度達(dá)98%以上，達(dá)到藥用標(biāo)準(zhǔn)。主要發(fā)明內(nèi)容如下I、阿魏酸的粗提以當(dāng)歸為原料，適當(dāng)粉碎至20 40目，用O. 5% 5%(m/m)Na0H溶液于50 60°C攪拌提取2 4 h，料液比為1:6 1:10，過(guò)濾，收集濾液，殘?jiān)瓷鲜霾襟E再提取兩遍，過(guò)濾，收集濾液，合并前2次濾液,最后I遍濾液套用作為下一批當(dāng)歸的提取溶劑。濾液待上大孔型離子交換樹(shù)脂。2、大孔型陰離子交換樹(shù)脂吸附分離2. I大孔型陰離子交換樹(shù)脂的預(yù)處理首先取一定量的樹(shù)脂(D201或D202)于燒杯中，加入純凈水，從上方將樹(shù)脂碎片和其他雜質(zhì)倒出，再加入純凈水直至無(wú)明顯的混濁。然后濕法裝柱，用2 3 BV的7% 8%的氯化鈉溶液以2 BV/h的流速通過(guò)樹(shù)脂層，并且浸泡12 h后用反滲透水將樹(shù)脂中的氯化鈉淋洗干凈。D201或D202樹(shù)脂柱首先用2 4 BV的3 5%的氫氧化鈉溶液以2 BV/h的流速通過(guò)樹(shù)脂層，并且浸泡8 h，然后用水淋洗至接近中性后用2 3 BV的3 5%的鹽酸溶液以2 BV/h的流速通過(guò)樹(shù)脂層，并且浸泡8 h，然后用反滲透水淋洗至接近中性。然后將樹(shù)脂柱進(jìn)行反洗，進(jìn)一步去除預(yù)處理中釋放出來(lái)的低聚物，直至反洗出水澄清為止，待轉(zhuǎn)型再生。樹(shù)脂的初次再生樹(shù)脂柱首先用3. 5 BV的氫氧化鈉溶液以一定的流速淋洗，淋洗的時(shí)間要到達(dá)2 h，然后用反滲透水淋洗至基本呈中性，備用。2. 2大孔型陰離子交換樹(shù)脂吸附分離大孔型陰離子交換樹(shù)脂采用濕法裝柱，樹(shù)脂柱的的徑高比為1:6 1:10。上樣吸附時(shí)的流速2 4 BV/h，用HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度。當(dāng)流出液的濃度為上樣濃度的O 4%時(shí)，該樹(shù)脂即達(dá)到飽和，并且停止上樣。吸附飽和的樹(shù)脂先用反滲透水進(jìn)行沖洗，流速為4 BV/h，用量為I 3 BV，沖洗出來(lái)的是不能被該樹(shù)脂吸附的雜質(zhì)。然后用3% 7%的鹽酸溶液進(jìn)行洗脫，洗脫的速度為2 4 BV/h，洗脫體積為3 5 BV。HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度，直至洗脫完全。收集洗脫液，用鹽酸或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)洗脫液的pH至2 3，待上大孔吸附樹(shù)脂柱。3、大孔吸附樹(shù)脂吸附分離3. I大孔吸附樹(shù)脂的預(yù)處理 首先取一定量的樹(shù)脂(HPD-450、AB_8或其它弱極性和中等極性樹(shù)脂)于燒杯中，力口入純凈水，從上方將樹(shù)脂碎片和其他雜質(zhì)倒出，再加入適量的水直至無(wú)明顯的混濁，然后將樹(shù)脂中的水濾干，轉(zhuǎn)移至另一個(gè)干凈的燒杯中，加入95%乙醇，浸泡12 h，每2 h攪拌一次充分除去氣泡。然后在樹(shù)脂柱內(nèi)加入適量的95%乙醇，將適量的樹(shù)脂轉(zhuǎn)移至樹(shù)脂柱內(nèi)，濕法裝柱，用2 4 BV的95%乙醇以2 BV/h的流速通過(guò)樹(shù)脂層，直至流出液加水后無(wú)混濁現(xiàn)象為止。然后用純凈水沖洗樹(shù)脂柱，直至流出液無(wú)乙醇為止，備用。3. 2大孔吸附樹(shù)脂吸附分離大孔吸附樹(shù)脂采用濕法裝柱，樹(shù)脂柱的的徑高比為1:5 1:9。將上述大孔型陰離子交換樹(shù)脂洗脫液上柱吸附，吸附時(shí)的流速2 4 BV/h,用HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度。當(dāng)流出液的濃度為上樣濃度的O 4%時(shí)，該樹(shù)脂即達(dá)到飽和，并且停止上樣。吸附飽和的樹(shù)脂先用15% 35% (v/v)的甲醇進(jìn)行除雜，除雜流速為4 BV/h，用量為I 3 BV0然后用50% 80% (v/v)的甲醇溶液進(jìn)行洗脫，洗脫的速度為2 4 BV/h，洗脫體積為3 5 BV。HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度，直至洗脫完全。收集洗脫液，真空濃縮回收甲醇，干燥得阿魏酸粗品I。阿魏酸粗品I待采用C18鍵合硅膠柱進(jìn)一步純化。4、中壓C18鍵合硅膠(ODS)柱層析純化阿魏酸4. I濕法裝柱稱取適量的C18鍵合硅膠用流動(dòng)相進(jìn)行浸泡，并且攪拌，待C18鍵合硅膠中沒(méi)有氣泡時(shí)，濕法裝入中壓色譜柱中。然后用加壓裝置進(jìn)行壓縮，使壓縮后的C18鍵合硅膠柱在正常流速下的工作壓力為5 20 bar，并用流動(dòng)相平衡層析柱。4. 2濕法上樣和洗脫將上述的阿魏酸粗品I用流動(dòng)相溶解，濕法上樣，上樣量為I 3 g樣品/50 g C18鍵合硅膠。以甲醇水冰醋酸(30:68. 5:1. 5，v/v)為洗脫劑進(jìn)行等梯度洗脫，洗脫劑的量為3 5 BV，洗脫速度為I 1.5 BV/h。紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，監(jiān)測(cè)波長(zhǎng)為315 316nm,分步收集色譜峰對(duì)應(yīng)流出液，HPLC檢測(cè)流出液，合并具有相同成份的流出液，回收溶劑，干燥得阿魏酸樣品II。經(jīng)HPLC檢測(cè)，阿魏酸樣品II可以到達(dá)98%以上。其它低含量的阿魏酸樣品重新上柱進(jìn)行回收利用。中壓C18鍵合硅膠層析柱經(jīng)甲醇再生后可重復(fù)使用。4、檢測(cè)本發(fā)明中主要使用HPLC法定量分析檢測(cè)阿魏酸。
4. I色譜條件色譜柱KromasilC18(250 mmX4.6 mm, 5 μ m);流動(dòng)相甲醇1% 冰醋酸溶液(35:65, v/v);流速1 mL/min ;檢測(cè)波長(zhǎng)315 nm;柱溫25°C。4.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密稱取阿魏酸對(duì)照品2. 00 mg,置于250 mL容量瓶中，加入流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻即得含阿魏酸8. 00 mg/mL的對(duì)照品溶液。阿魏酸對(duì)照品溶液經(jīng)O. 45 μπι微孔濾膜濾過(guò)，分別精密吸取4、8、12、16、20 μ L注入高效液相色譜儀，測(cè)定阿魏酸峰面積積分值。以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，阿魏酸進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程。4. 3 測(cè)定精密吸取一定量的樣品溶液于量瓶中，流動(dòng)相定容，經(jīng)O. 45 μπι微孔濾膜過(guò)濾，濾液作為供試液，取供試液10 μ L進(jìn)樣，測(cè)定阿魏酸峰面積積分值，代入回歸方程計(jì)算阿魏酸·的質(zhì)量濃度。下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。實(shí)施例I(I)阿魏酸的粗提將當(dāng)歸(其中含水率為2. 0% 3. 0%，阿魏酸含量為O. 050% O. 065%)適當(dāng)粉碎至20 40目，準(zhǔn)確稱取當(dāng)歸粉100 kg于提取罐中，加入600 L O. 5% (m/m)NaOH溶液于50°C攪拌提取2 h，提取完畢，袋式過(guò)濾器過(guò)濾，收集濾液于計(jì)量罐中，殘?jiān)瓷鲜霾襟E再提取兩遍，過(guò)濾收集濾液，合并前2次濾液,最后一次濾液套用作為下一批當(dāng)歸的提取溶劑。濾液待上D201樹(shù)脂柱。共得濾液1050 L，濾液中的阿魏酸濃度為53. 6 mg/L，提取率約為90. 0%。(2)D201陰離子樹(shù)脂吸附分離大孔型陰離子交換樹(shù)脂采用濕法裝柱，樹(shù)脂柱的的徑高比為1:6。陰離子樹(shù)脂床質(zhì)量為當(dāng)歸生藥質(zhì)量的3 3. 5倍(取樹(shù)脂300 kg,按樹(shù)脂的濕視密度O. 7 g/mL計(jì)算樹(shù)脂床體積，即BV為430 L)。上樣吸附時(shí)的流速2 BV/h，用HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度。當(dāng)流出液的濃度為上樣濃度的O 4%時(shí)，該樹(shù)脂即達(dá)到飽和，并且停止上樣。吸附飽和的樹(shù)脂先用反滲透水進(jìn)行沖洗，流速為4 BV/h，用量為I BV，沖洗出來(lái)的是不能被該樹(shù)脂吸附的雜質(zhì)。然后用3%的鹽酸溶液進(jìn)行洗脫，洗脫的速度為2 BV/h，洗脫體積為3 5 BV。HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度，直至洗脫完全。收集洗脫液于計(jì)量罐中，洗脫液的體積約為3. 6 BV,即1550 L0洗脫液于pH調(diào)節(jié)罐中用鹽酸或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)洗脫液的pH至2 3，待上大孔吸附樹(shù)脂柱，體積約為1560 L0(3) HPD-450大孔吸附樹(shù)脂吸附分離大孔吸附樹(shù)脂采用濕法裝柱，樹(shù)脂柱的的徑高比為1:5。大孔吸附樹(shù)脂對(duì)阿魏酸的吸附量按15 18 mg/g樹(shù)脂計(jì)算。將上述大孔型陰離子交換樹(shù)脂洗脫液上柱吸附，吸附時(shí)的流速2 BV/h，用HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度。當(dāng)流出液的濃度為上樣濃度的O 4%時(shí)，該樹(shù)脂即達(dá)到飽和，并且停止上樣。吸附飽和的樹(shù)脂先用15% (v/v)的甲醇進(jìn)行除雜，除雜流速為4 BV/h，用量為I BV。然后用50% (v/v)的甲醇溶液進(jìn)行洗脫，洗脫的速度為
2BV/h，洗脫體積為3 5 BV0 HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度，直至洗脫完全。收集洗脫液，洗脫液的體積約為3 BV，真空濃縮回收甲醇，干燥得阿魏酸粗品I，質(zhì)量為89 g，HPLC檢測(cè)阿魏酸的含量為60. 2%。阿魏酸粗品I待采用C18鍵合硅膠柱進(jìn)一步純化。
(4)中壓C18鍵合硅膠(ODS)柱層析純化阿魏酸稱取4. 45 kg的C18鍵合硅膠用流動(dòng)相進(jìn)行浸泡，并且攪拌，待C18鍵合硅膠中沒(méi)有氣泡時(shí)，濕法裝入動(dòng)態(tài)軸向不銹鋼中壓層析柱中。然后用加壓裝置進(jìn)行壓縮，使壓縮后的C18鍵合硅膠柱在正常流速下的工作壓力為5 20 bar，并用流動(dòng)相平衡層析柱。將上述的阿魏酸粗品I用洗脫劑溶解，濕法上樣，上樣量為I g樣品/50 g C18鍵合硅膠。以甲醇水冰醋酸(30:68. 5:1. 5，v/v)為洗脫劑進(jìn)行等梯度洗脫，洗脫劑的量為3 5 BV，洗脫速度為I BV/h。紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，監(jiān)測(cè)波長(zhǎng)為315 nm，分步收集色譜峰對(duì)應(yīng)流出液，HPLC檢測(cè)流出液，合并具有相同成份的流出液，回收溶劑，干燥得阿魏酸樣品II，質(zhì)量為44 g。經(jīng)HPLC檢測(cè)，阿魏酸樣品II可以到達(dá)98%以上，其它低含量的阿魏酸樣品重新上柱進(jìn)行回收利用。中壓C18鍵合硅膠層析柱經(jīng)甲醇再生后可重復(fù)使用。實(shí)施例2(I)阿魏酸的粗提 將當(dāng)歸(其中含水率為2. 8% 4. 0%，阿魏酸含量為O. 055% O. 065%)適當(dāng)粉碎至20 40目，準(zhǔn)確稱取當(dāng)歸粉100 kg于提取罐中，加入700 L O. 5% (m/m)NaOH溶液于50°C攪拌提取3 h，提取完畢，袋式過(guò)濾器過(guò)濾，收集濾液于計(jì)量罐中，殘?jiān)瓷鲜霾襟E再提取兩遍，過(guò)濾收集濾液，合并前2次濾液,最后一次濾液套用作為下一批當(dāng)歸的提取溶劑。濾液待上D201樹(shù)脂柱。共得濾液1150 L，濾液中的阿魏酸濃度為49. 5 mg/L，提取率約為91. 0%。(2)D201陰離子樹(shù)脂吸附分離大孔型陰離子交換樹(shù)脂采用濕法裝柱，樹(shù)脂柱的的徑高比為1:7。陰離子樹(shù)脂床質(zhì)量為當(dāng)歸生藥質(zhì)量的3 3. 5倍(取樹(shù)脂350 kg,按樹(shù)脂的濕視密度O. 7 g/mL計(jì)算樹(shù)脂床體積，即BV為500 L)。上樣吸附時(shí)的流速3 BV/h，用HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度。當(dāng)流出液的濃度為上樣濃度的O 4%時(shí)，該樹(shù)脂即達(dá)到飽和，并且停止上樣。吸附飽和的樹(shù)脂先用反滲透水進(jìn)行沖洗，流速為4 BV/h，用量為2 BV，沖洗出來(lái)的是不能被該樹(shù)脂吸附的雜質(zhì)。然后用4%的鹽酸溶液進(jìn)行洗脫，洗脫的速度為3 BV/h，洗脫體積為3 5 BV。HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度，直至洗脫完全。收集洗脫液于計(jì)量罐中，洗脫液的體積約為4. 5 BV,即2250 L0洗脫液于pH調(diào)節(jié)罐中用鹽酸或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)洗脫液的pH至2 3，待上大孔吸附樹(shù)脂柱，體積約為2260 L0(3) HPD-450大孔吸附樹(shù)脂吸附分離大孔吸附樹(shù)脂采用濕法裝柱，樹(shù)脂柱的的徑高比為1:6。大孔吸附樹(shù)脂對(duì)阿魏酸的吸附量按15 18 mg/g樹(shù)脂計(jì)算。將上述大孔型陰離子交換樹(shù)脂洗脫液上柱吸附，吸附時(shí)的流速3 BV/h，用HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度。當(dāng)流出液的濃度為上樣濃度的O 4%時(shí)，該樹(shù)脂即達(dá)到飽和，并且停止上樣。吸附飽和的樹(shù)脂先用25% (v/v)的甲醇進(jìn)行除雜，除雜流速為4 BV/h，用量為2 BV0然后用60% (v/v)的甲醇溶液進(jìn)行洗脫，洗脫的速度為
3BV/h，洗脫體積為3 5 BV0 HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度，直至洗脫完全。收集洗脫液，洗脫液的體積約為3. 5 BV，真空濃縮回收甲醇，干燥得阿魏酸粗品I，質(zhì)量為90 g，HPLC檢測(cè)阿魏酸的含量為60. 8%。阿魏酸粗品I待采用C18鍵合硅膠柱進(jìn)一步純化。(4)中壓C18鍵合硅膠(ODS)柱層析純化阿魏酸稱取2. 25 kg的C18鍵合硅膠用流動(dòng)相進(jìn)行浸泡，并且攪拌，待C18鍵合硅膠中沒(méi)有氣泡時(shí)，濕法裝入動(dòng)態(tài)軸向不銹鋼中壓層析柱中。然后用加壓裝置進(jìn)行壓縮，使壓縮后的C18鍵合硅膠柱在正常流速下的工作壓力為5 20 bar，并用流動(dòng)相平衡層析柱。將上述的阿魏酸粗品I用洗脫劑溶解，濕法上樣，上樣量為2 g樣品/50 g C18鍵合硅膠。以甲醇水冰醋酸(30:68. 5:1. 5，v/v)為洗脫劑進(jìn)行等梯度洗脫，洗脫劑的量為3 5 BV，洗脫速度為I. 5 BV/h。紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，監(jiān)測(cè)波長(zhǎng)為316 nm，分步收集色譜峰對(duì)應(yīng)流出液，HPLC檢測(cè)流出液，合并具有相同成份的流出液，回收溶劑，干燥得阿魏酸 樣品II，質(zhì)量為45 g。經(jīng)HPLC檢測(cè)，阿魏酸樣品II可以到達(dá)98%以上，其它低含量的阿魏酸樣品重新上柱進(jìn)行回收利用。中壓C18鍵合硅膠層析柱經(jīng)甲醇再生后可重復(fù)使用。實(shí)施例3(I)阿魏酸的粗提將當(dāng)歸(其中含水率為2. 5% 3. 5%，阿魏酸含量為O. 060% O. 070%)適當(dāng)粉碎至20 40目，準(zhǔn)確稱取當(dāng)歸粉100 kg于提取罐中，加入800 L O. 5% (m/m)NaOH溶液于60°C攪拌提取4 h，提取完畢，袋式過(guò)濾器過(guò)濾，收集濾液于計(jì)量罐中，殘?jiān)瓷鲜霾襟E再提取兩遍，過(guò)濾收集濾液，合并前2次濾液,最后一次濾液套用作為下一批當(dāng)歸的提取溶劑。濾液待上D201樹(shù)脂柱。共得濾液1420 L，濾液中的阿魏酸濃度為40. O mg/L，提取率約為90. 8%。(2)D201陰離子樹(shù)脂吸附分離大孔型陰離子交換樹(shù)脂采用濕法裝柱，樹(shù)脂柱的的徑高比為1:8。陰離子樹(shù)脂床質(zhì)量為當(dāng)歸生藥質(zhì)量的3 3. 5倍((取樹(shù)脂320 kg,按樹(shù)脂的濕視密度O. 7 g/mL計(jì)算樹(shù)脂床體積，即BV為460 L)。上樣吸附時(shí)的流速4 BV/h，用HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度。當(dāng)流出液的濃度為上樣濃度的O 4%時(shí)，該樹(shù)脂即達(dá)到飽和，并且停止上樣。吸附飽和的樹(shù)脂先用反滲透水進(jìn)行沖洗，流速為4 BV/h，用量為3 BV，沖洗出來(lái)的是不能被該樹(shù)脂吸附的雜質(zhì)。然后用5%的鹽酸溶液進(jìn)行洗脫，洗脫的速度為4 BV/h，洗脫體積為3 5 BV。HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度，直至洗脫完全。收集洗脫液于計(jì)量罐中，洗脫液的體積約為4. 2 BV,即1940 L0洗脫液于pH調(diào)節(jié)罐中用鹽酸或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)洗脫液的pH至2 3，待上大孔吸附樹(shù)脂柱，體積約為1950 L0(3) HPD-450大孔吸附樹(shù)脂吸附分離大孔吸附樹(shù)脂采用濕法裝柱，樹(shù)脂柱的的徑高比為1:7。大孔吸附樹(shù)脂對(duì)阿魏酸的吸附量按15 18 mg/g樹(shù)脂計(jì)算。將上述大孔型陰離子交換樹(shù)脂洗脫液上柱吸附，吸附時(shí)的流速4 BV/h，用HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度。當(dāng)流出液的濃度為上樣濃度的O 4%時(shí)，該樹(shù)脂即達(dá)到飽和，并且停止上樣。吸附飽和的樹(shù)脂先用35% (v/v)的甲醇進(jìn)行除雜，除雜流速為4 BV/h，用量為3 BV0然后用70% (v/v)的甲醇溶液進(jìn)行洗脫，洗脫的速度為4 BV/h，洗脫體積為3 5 BV0 HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度，直至洗脫完全。收集洗脫液，洗脫液體積約為4. I BV，真空濃縮回收甲醇，干燥得阿魏酸粗品I，質(zhì)量為87 g，HPLC檢測(cè)阿魏酸的含量為61. 5%。阿魏酸粗品I待采用C18鍵合硅膠柱進(jìn)一步純化。(4)中壓C18鍵合硅膠(ODS)柱層析純化阿魏酸稱取I. 45 kg的C18鍵合硅膠用流動(dòng)相進(jìn)行浸泡，并且攪拌，待C18鍵合硅膠中沒(méi)有氣泡時(shí)，濕法裝入動(dòng)態(tài)軸向不銹鋼中壓層析柱中。然后用加壓裝置進(jìn)行壓縮，使壓縮后的C18鍵合硅膠柱在正常流速下的工作壓力為5 20 bar，并用流動(dòng)相平衡層析柱。將上述的阿魏酸粗品I用洗脫劑溶解，濕法上樣，上樣量為3 g樣品/50 g C18鍵合硅膠。以甲醇水冰醋酸(30:68. 5:1. 5，v/v)為洗脫劑進(jìn)行等梯度洗脫，洗脫劑的量
10為3 5 BV，洗脫速度為I BV/h。紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，監(jiān)測(cè)波長(zhǎng)為315 nm，分步收集色譜峰對(duì)應(yīng)流出液，HPLC檢測(cè)流出液，合并具有相同成份的流出液，回收溶劑，干燥得阿魏酸樣品II，質(zhì)量為45 g。經(jīng)HPLC檢測(cè)，阿魏酸樣品II可以到達(dá)98%以上，其它低含量的阿魏酸樣品重新上柱進(jìn)行回收利用。中壓C18鍵合硅膠層析柱經(jīng)甲醇再生后可重復(fù)使用。實(shí)施例4(I)阿魏酸的粗提·將當(dāng)歸(其中含水率為2. 0% 3. 5%，阿魏酸含量為O. 055% O. 070%)適當(dāng)粉碎至20 40目，準(zhǔn)確稱取當(dāng)歸粉100 kg于提取罐中，加入1000 L 0.5% (m/m) NaOH溶液于50°C攪拌提取3 h，提取完畢，袋式過(guò)濾器過(guò)濾，收集濾液于計(jì)量罐中，殘?jiān)瓷鲜霾襟E再提取兩遍，過(guò)濾收集濾液，合并前2次濾液，最后一次濾液套用作為下一批當(dāng)歸的提取溶劑。濾液待上D201樹(shù)脂柱。共得濾液1860 L，濾液中的阿魏酸濃度為30. 7 mg/L，提取率約為91. 4% ο(2)D201陰離子樹(shù)脂吸附分離大孔型陰離子交換樹(shù)脂采用濕法裝柱，樹(shù)脂柱的的徑高比為1:10。陰離子樹(shù)脂床質(zhì)量為當(dāng)歸生藥質(zhì)量的3 3. 5倍((取樹(shù)脂330 kg,按樹(shù)脂的濕視密度O. 7 g/mL計(jì)算樹(shù)脂床體積，即BV為470 L)。上樣吸附時(shí)的流速3 BV/h，用HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度。當(dāng)流出液的濃度為上樣濃度的O 4%時(shí)，該樹(shù)脂即達(dá)到飽和，并且停止上樣。吸附飽和的樹(shù)脂先用反滲透水進(jìn)行沖洗，流速為4 BV/h，用量為3 BV，沖洗出來(lái)的是不能被該樹(shù)脂吸附的雜質(zhì)。然后用7%的鹽酸溶液進(jìn)行洗脫，洗脫的速度為3 BV/h，洗脫體積為3 5 BV。HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度，直至洗脫完全。收集洗脫液于計(jì)量罐中，洗脫液的體積約為4. 8 BV,即2260 L0洗脫液于pH調(diào)節(jié)罐中用鹽酸或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)洗脫液的pH至2 3，待上大孔吸附樹(shù)脂柱，體積約為2270 L0(3) HPD-450大孔吸附樹(shù)脂吸附分離大孔吸附樹(shù)脂采用濕法裝柱，樹(shù)脂柱的的徑高比為1:9。大孔吸附樹(shù)脂對(duì)阿魏酸的吸附量按15 18 mg/g樹(shù)脂計(jì)算。將上述大孔型陰離子交換樹(shù)脂洗脫液上柱吸附，吸附時(shí)的流速3 BV/h，用HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度。當(dāng)流出液的濃度為上樣濃度的O 4%時(shí)，該樹(shù)脂即達(dá)到飽和，并且停止上樣。吸附飽和的樹(shù)脂先用30% (v/v)的甲醇進(jìn)行除雜，除雜流速為4 BV/h，用量為2 BV0然后用80% (v/v)的甲醇溶液進(jìn)行洗脫，洗脫的速度為3 BV/h，洗脫體積為3 5 BV0 HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度，直至洗脫完全。收集洗脫液，洗脫液約為4. 6 BV，真空濃縮回收甲醇，干燥得阿魏酸粗品I，質(zhì)量為88 g，HPLC檢測(cè)阿魏酸的含量為60. 5%。阿魏酸粗品I待采用C18鍵合硅膠柱進(jìn)一步純化。(4)中壓C18鍵合硅膠(ODS)柱層析純化阿魏酸稱取I. 76 kg的C18鍵合硅膠用流動(dòng)相進(jìn)行浸泡，并且攪拌，待C18鍵合硅膠中沒(méi)有氣泡時(shí)，濕法裝入動(dòng)態(tài)軸向不銹鋼中壓層析柱中。然后用加壓裝置進(jìn)行壓縮，使壓縮后的C18鍵合硅膠柱在正常流速下的工作壓力為5 20 bar，并用流動(dòng)相平衡層析柱。將上述的阿魏酸粗品I用洗脫劑溶解，濕法上樣，上樣量為2. 5 g樣品/50 g C18鍵合硅膠。以甲醇水冰醋酸(30:68. 5:1. 5，v/v)為洗脫劑進(jìn)行等梯度洗脫，洗脫劑的量為3 5 BV，洗脫速度為I. 5 BV/h。紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，監(jiān)測(cè)波長(zhǎng)為316 nm，分步收集色譜峰對(duì)應(yīng)流出液，HPLC檢測(cè)流出液，合并具有相同成份的流出液，回收溶劑，干燥得阿魏酸樣品II，質(zhì)量為46 g。經(jīng)HPLC檢測(cè)，阿魏酸樣品II可以到達(dá)98%以上，其它低含量的阿魏酸樣品重新上柱進(jìn)行回收利用。中壓C18鍵合硅膠層析柱經(jīng)甲醇再生后可重復(fù)使用。實(shí)施例5(I)阿魏酸的粗提將當(dāng)歸(其中含水率為3. 0% 4. 5%，阿魏酸含量為O. 055% O. 068%)適當(dāng)粉碎至20 40目，準(zhǔn)確稱取當(dāng)歸粉100 kg于提取罐中，加入1000 L 0.5% (m/m) NaOH溶液于50°C攪拌提取4 h，提取完畢，袋式過(guò)濾器過(guò)濾，收集濾液于計(jì)量罐中，殘?jiān)瓷鲜霾襟E再提取兩遍，過(guò)濾收集濾液，合并前2次濾液，最后一次濾液套用作為下一批當(dāng)歸的提取溶劑。濾液待上D201樹(shù)脂柱。共得濾液1840 L，濾液中的阿魏酸濃度為30.9 mg/L，提取率約為91. 0%。(2)D202陰離子樹(shù)脂吸附分離大孔型陰離子交換樹(shù)脂采用濕法裝柱，樹(shù)脂柱的的徑高比為1:9。陰離子樹(shù)脂床質(zhì)量為當(dāng)歸生藥質(zhì)量的3 3. 5倍(取樹(shù)脂340 kg,按樹(shù)脂的濕視密度O. 7 g/mL計(jì)算樹(shù)脂床體積，即BV為490 L)。上樣吸附時(shí)的流速3 BV/h，用HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度。當(dāng)流出液的濃度為上樣濃度的O 4%時(shí)，該樹(shù)脂即達(dá)到飽和，并且停止上樣。吸附飽和的樹(shù)脂先用反滲透水進(jìn)行沖洗，流速為4 BV/h，用量為3 BV，沖洗出來(lái)的是不能被該樹(shù)脂吸附的雜質(zhì)。然后用7%的鹽酸溶液進(jìn)行洗脫，洗脫的速度為3 BV/h，洗脫體積為3 5 BV。HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度，直至洗脫完全。收集洗脫液于計(jì)量罐中，洗脫液的體積約為4. 8 BV,即2350 L0洗脫液于pH調(diào)節(jié)罐中用鹽酸或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)洗脫液的pH至2 3，待上大孔吸附樹(shù)脂柱，體積約為2360 L0(3) AB-8大孔吸附樹(shù)脂吸附分離大孔吸附樹(shù)脂采用濕法裝柱，樹(shù)脂柱的的徑高比為1:9。大孔吸附樹(shù)脂對(duì)阿魏酸的吸附量按14 17 mg/g樹(shù)脂計(jì)算。將上述大孔型陰離子交換樹(shù)脂洗脫液上柱吸附，吸附時(shí)的流速3 BV/h，用HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度。當(dāng)流出液的濃度為上樣濃度的O 4%時(shí)，該樹(shù)脂即達(dá)到飽和，并且停止上樣。吸附飽和的樹(shù)脂先用30% (v/v)的甲醇進(jìn)行除雜，除雜流速為4 BV/h，用量為2 BV0然后用80% (v/v)的甲醇溶液進(jìn)行洗脫，洗脫的速度為3 BV/h，洗脫體積為3 5 BV0 HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度，直至洗脫完全。收集洗脫液，洗脫液約為4. 6 BV，真空濃縮回收甲醇，干燥得阿魏酸粗品I，質(zhì)量為86 g，HPLC檢測(cè)阿魏酸的含量為60. 0%。阿魏酸粗品I待采用C18鍵合硅膠柱進(jìn)一步純化。(4)中壓C18鍵合硅膠(ODS)柱層析純化阿魏酸稱取I. 72 kg的C18鍵合硅膠用流動(dòng)相進(jìn)行浸泡，并且攪拌，待C18鍵合硅膠中沒(méi)有氣泡時(shí)，濕法裝入動(dòng)態(tài)軸向不銹鋼中壓層析柱中。然后用加壓裝置進(jìn)行壓縮，使壓縮后的C18鍵合硅膠柱在正常流速下的工作壓力為5 20 bar，并用流動(dòng)相平衡層析柱。將上述的阿魏酸粗品I用洗脫劑溶解，濕法上樣，上樣量為2. 5 g樣品/50 g C18鍵合硅膠。以甲醇水冰醋酸(30:68. 5:1. 5，v/v)為洗脫劑進(jìn)行等梯度洗脫，洗脫劑的量為3 5 BV，洗脫速度為I. 5 BV/h。紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，監(jiān)測(cè)波長(zhǎng)為316 nm，分步收集色譜峰對(duì)應(yīng)流出液，HPLC檢測(cè)流出液，合并具有相同成份的流出液，回收溶劑，干燥得阿魏酸樣品II，質(zhì)量為43 g。經(jīng)HPLC檢測(cè)，阿魏酸樣品II可以到達(dá)98%以上，其它低含量的阿魏酸樣品重新上柱進(jìn)行回收利用。中壓C18鍵合硅膠層析柱經(jīng)甲醇再生后可重復(fù)使用。
權(quán)利要求
1.一種從當(dāng)歸中制備高純度阿魏酸的方法，其特征在于包括以下步驟 a、阿魏酸的粗提用NaOH溶液于50 60°C攪拌浸提當(dāng)歸，過(guò)濾，收集濾液，殘?jiān)瓷鲜霾襟E再提取兩遍，過(guò)濾，收集濾液，合并前2次濾液，最后I遍濾液用作為下一批當(dāng)歸的提取溶劑； b、大孔型陰離子交換樹(shù)脂吸附分離大孔型陰離子交換樹(shù)脂經(jīng)過(guò)預(yù)處理后，采用濕法裝柱，上步驟的提取濾液以一定的上樣速度上柱吸附，用HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度，直至樹(shù)脂達(dá)到飽和，停止上樣；吸附飽和的樹(shù)脂先用反滲透水進(jìn)行沖洗除雜，然后用鹽酸溶液進(jìn)行洗脫，HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度，直至洗脫完全；收集洗脫液，調(diào)節(jié)洗脫液的pH 2 3，待上大孔吸附樹(shù)脂柱； C、大孔吸附樹(shù)脂吸附分離大孔吸附樹(shù)脂經(jīng)過(guò)預(yù)處理后，采用濕法裝柱；將上述大孔型陰離子交換樹(shù)脂洗脫液以一定的上樣速度上柱吸附，用HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度，直至樹(shù)脂達(dá)到飽和，停止上樣；吸附飽和的樹(shù)脂先用低濃度的甲醇進(jìn)行除雜；然后用較高濃度的甲醇溶液進(jìn)行洗脫，HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度，直至洗脫完全；收集洗脫液，真空濃縮回收甲醇，干燥得阿魏酸粗品I ;阿魏酸粗品I待采用C18鍵合硅膠柱進(jìn)一步純化； d、中壓C18鍵合硅膠ODS柱層析純化將C18鍵合硅膠濕法裝柱，用加壓裝置進(jìn)行壓縮，并用流動(dòng)相平衡層析柱；將上述的阿魏酸粗品I用流動(dòng)相進(jìn)行溶解，濕法上樣；用甲醇-水-冰醋酸為洗脫劑進(jìn)行等梯度洗脫，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，分步收集色譜峰對(duì)應(yīng)流出液，HPLC檢測(cè)流出液，合并具有相同成份的流出液，回收溶劑，干燥得阿魏酸樣品II ;經(jīng)HPLC檢測(cè)，阿魏酸樣品II的純度可以到達(dá)98%以上。
2.按照權(quán)利要I所述的一種從當(dāng)歸中制備高純度阿魏酸的方法，其特征在于 步驟a中所述的當(dāng)歸應(yīng)粉碎至20 40目；NaOH濃度為O. 5% 5% (m/m),提取的溫度為50 60°C，提取時(shí)間為2 4 h，料液比為1:6 1:10。
3.按照權(quán)利要I所述的一種從當(dāng)歸中制備高純度阿魏酸的方法，其特征在于 步驟b中所述的大孔型陰離子交換樹(shù)脂為D201或D202，采用氯化鈉和酸堿預(yù)處理；樹(shù)脂采用濕法裝柱，樹(shù)脂柱的的徑高比為1:6 1:10 ; 步驟b中所述的上樣吸附時(shí)的流速2 4 BV/h，用HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度；當(dāng)流出液的濃度為上樣濃度的O 4%時(shí)，該樹(shù)脂即達(dá)到飽和，并且停止上樣； 步驟b中所述的除雜步驟用反滲透水進(jìn)行沖洗，流速為4 BV/h，用量為I 3 BV ; 步驟b中所述的洗脫步驟用3% 7%的鹽酸溶液進(jìn)行洗脫，洗脫的速度為2 4 BV/h,洗脫體積為3 5 BV ；HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度，直至洗脫完全； 步驟b中所述的洗脫液的pH值用鹽酸或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)至pH=2 3。
4.按照權(quán)利要I所述的一種從當(dāng)歸中制備高純度阿魏酸的方法，其特征在于 步驟c中所述的大孔吸附樹(shù)脂為HPD-450、AB-8、弱極性或中等極性樹(shù)脂，采用95%乙醇預(yù)處理；樹(shù)脂采用濕法裝柱，樹(shù)脂柱的的徑高比為1:5 1:9 ; 步驟c中所述的上樣吸附時(shí)的流速2 4 BV/h，用HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度；當(dāng)流出液的濃度為上樣濃度的O 4%時(shí)，該樹(shù)脂即達(dá)到飽和，并且停止上樣； 步驟c中所述的除雜步驟用15% 35% (v/v)的甲醇進(jìn)行除雜，流速為4 BV/h，用量為I 3 BV ； 步驟c中所述的洗脫步驟用50% 80% (v/v)甲醇溶液進(jìn)行洗脫，洗脫速度為2 4BV/h，洗脫體積為3 5 BV ;HPLC跟蹤檢測(cè)流出液的濃度，直至洗脫完全。
5.按照權(quán)利要I所述的一種從當(dāng)歸中制備高純度阿魏酸的方法，其特征在于 步驟d中所述的中壓C18鍵合硅膠柱層析裝柱方法為稱取適量的C18鍵合硅膠用初始流動(dòng)相進(jìn)行浸泡，并且攪拌，待C18鍵合硅膠中沒(méi)有氣泡時(shí)，濕法裝入動(dòng)態(tài)軸向不銹鋼中壓層析柱中；然后用加壓裝置進(jìn)行壓縮，使壓縮后的C18鍵合硅膠柱在正常流速下的工作壓力為5 20 bar,并用流動(dòng)相平衡層析柱； 步驟d中所述的上樣量為I 3 g樣品/50 g C18鍵合硅膠，用流動(dòng)相溶解，濕法上樣； 步驟d中所述的洗脫劑采用甲醇水冰醋酸為30:68. 5:1. 5 (v/v)； 步驟d中所述的洗脫步驟用洗脫劑等梯度洗脫，洗脫劑的量為3 5 BV，洗脫速度為I I. 5 BV/h ;紫外檢測(cè)器的監(jiān)測(cè)波長(zhǎng)為315 316 nm，分步收集色譜峰對(duì)應(yīng)流出液，HPLC檢測(cè)流出液，合并具有相同成份的流出液，回收溶劑，干燥得阿魏酸樣品，經(jīng)HPLC檢測(cè)，阿魏酸樣品II可以到達(dá)98%以上。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從當(dāng)歸中制備高純度阿魏酸的方法。本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)行的收率較低，成本較高，市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力弱進(jìn)行改進(jìn)，其特征在于包括如下操作步驟a)阿魏酸的粗提以當(dāng)歸為原料，用NaOH溶液進(jìn)行提??；b)大孔型陰離子交換樹(shù)脂吸附分離采用濕法裝柱，然后用鹽酸溶液進(jìn)行洗脫；c)大孔吸附樹(shù)脂吸附分離采用濕法裝柱，上柱飽和后先用低濃度的甲醇進(jìn)行除雜，然后用較高濃度的甲醇溶液進(jìn)行洗脫；d)中壓C18鍵合硅膠(ODS)柱層析純化濕法上樣，以甲醇-水-冰醋酸為洗脫劑進(jìn)行等梯度洗脫，回收溶劑，干燥得阿魏酸樣品。經(jīng)HPLC檢測(cè)，阿魏酸樣品的純度可以到達(dá)98%以上。該工藝生產(chǎn)成本低，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)A61K36/232GK102908371SQ20121042850
公開(kāi)日2013年2月6日 申請(qǐng)日期2012年11月1日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月1日
發(fā)明者向極釬, 楊永康, 程新華, 殷紅清, 覃大吉, 張亮, 龍瀾, 李紅英, 李亞杰 申請(qǐng)人:恩施清江生物工程有限公司