專利名稱：紫杉醇磁性納米粒及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種紫杉醇磁性納米粒及其制備方法及用途。
背景技術(shù)：
紫杉醇(Palitaxel，PTX)具有抗腫瘤血管生成作用，在以纖維蛋白凝血酶為載體的血管新模型發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)組經(jīng)小劑量紫杉醇處理后，血管初始形成、血管增長(zhǎng)、總體血管生成較對(duì)照組分別減少69%，81%和94%，并且血管生成的抑制程度與藥物作用時(shí)間呈時(shí)效關(guān)系。紫杉醇抗血管生成的作用機(jī)制是促進(jìn)癌細(xì)胞分裂過程中微管蛋白的聚集，從而造成癌細(xì)胞凋亡。紫杉醇水溶性差(溶解度僅為O. 006mg/ml),生物利用度低，臨床上主要用紫杉醇注射液。目前紫杉醇注射劑使用的助溶劑主要是聚羥乙基蓖麻油與乙醇的混合溶劑，具
有心臟毒性、刺激血管、過敏等不良反應(yīng)。因此，尋找新型的紫杉醇制劑是目前國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)之一。磁性納米材料粒徑小，比表面積大，被用于靶向藥物載體。它能夠通過增強(qiáng)的通透作用將藥物靶向輸送。由于腫瘤組織中的微血管通透性增加，故癌變組織的滲透性及滯留效應(yīng)增強(qiáng)，磁性納米粒能在腫瘤特異性的淋巴外排作用下，選擇性地聚集在腫瘤組織，從而達(dá)到被動(dòng)靶向的目的。磁性納米氧化鐵具有良好的生物相容性、可降解性和特殊活性功能集團(tuán)使其在生物醫(yī)學(xué)方面具有廣泛的應(yīng)用，主要包括以下幾個(gè)方面(I)磁致腫瘤熱療(2)磁性藥物靶向載體(3)生物分離與提純(4)磁共振成像造影劑。磁性納米氧化鐵穩(wěn)定、靶向性強(qiáng)和釋放速度可控等，可作為靶向藥物治療有效載體。磁性納米氧化鐵的制備方法很多。物理方法有真空冷凝法、物理粉碎法、機(jī)械球磨法等。但是物理方法制備的樣品一般純度低、顆粒分布不均、易被氧化，所以在工業(yè)生產(chǎn)和試驗(yàn)中很少被采用?；瘜W(xué)方法主要有共沉淀法、溶膠-凝膠法、微乳液法、水熱法和高溫?zé)峤夥ǖ?。用化學(xué)方法制備的納米粒子一般質(zhì)量較好，顆粒度小，操作方法較為容易，生產(chǎn)成本低。

發(fā)明內(nèi)容
技術(shù)問題本發(fā)明的目的是提供一種紫杉醇磁性納米粒及其制備方法及用途。技術(shù)方案本發(fā)明的紫杉醇磁性納米粒，其形態(tài)為球形，粒徑在50到200nm，包括如下組分紫杉醇、四氧化三鐵、表面活性劑和凍干保護(hù)劑；按重量百分比計(jì)算如下四氧化三鐵納米粒O. 5-20%
表面活性劑45-65%
凍干保護(hù)劑25-45%
紫杉醇O. 1-10%。本發(fā)明的紫杉醇磁性納米粒的制備方法包括以下步驟I).取保存在正己烷中的油酸包裹的四氧化三鐵，磁吸附分離除去正己烷；加有機(jī)溶劑，使其分散均勻得溶液A ；2).另取表面活性劑溶于有機(jī)溶劑，至完全溶解得溶液B ；
3).將溶液B加入溶液A中，然后加入紫杉醇，使其溶解；4).將上述步驟3)得到的有機(jī)相溶液緩慢滴入水中，探頭超聲；5).透析24小時(shí)，得紫杉醇磁性納米粒溶液；6).將步驟5)所得紫杉醇磁性納米粒溶液再加入凍干保護(hù)劑，凍干即得紫杉醇磁性納米粒凍干粉。其中所述的有機(jī)溶劑為四氫呋喃、二甲基亞砜、甲醇、乙醇、丙酮、氯仿中的一種或幾種。所述的表面活性劑為吐溫80、泊洛沙姆188、卵磷脂、賣澤51中的一種或幾種合用。油酸包裹的四氧化三鐵與有機(jī)溶劑的體積比為1:5到1:20。有機(jī)相溶液與水的體積比例為1:5到1:15。有機(jī)相溶液向水注入的過程中探頭超聲時(shí)間為3 10分鐘。所述的凍干保護(hù)劑為甘露醇、山梨醇、木糖醇、蔗糖、乳糖、葡萄糖、麥芽糖或海藻糖中的一種或幾種混用。該紫杉醇磁性納米粒聯(lián)合人轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCG2單克隆抗體McAb用于腫瘤的治療。有益效果本發(fā)明通過將紫杉醇制成磁性納米粒溶液再凍干溶解性好，不僅提高了紫杉醇的靶向性，且阻止藥物聚集析出，具有長(zhǎng)期穩(wěn)定、便于貯藏運(yùn)輸?shù)葍?yōu)點(diǎn)。本發(fā)明制備的紫杉醇磁性納米粒(NPs-PTX)聯(lián)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCG2的單克隆抗體作用于荷多發(fā)性骨髓瘤癌干細(xì)胞(麗CSCs)的N0D/SCID小鼠，用ABCG2單克隆抗體聯(lián)合NPs-PTX通過靶向MM CSCs表面ABCG2分子將NPs-PTX特異性輸送到MM CSCs，通過NPs-PTX緩釋和滯留效應(yīng)，將PTX靶向麗PTX對(duì)麗CSCs細(xì)胞的毒性。


圖I.紫杉醇磁性納米粒的形貌圖，圖2. NPs-PTX對(duì)荷瘤小鼠體內(nèi)殺傷效應(yīng)，圖3. McAb+NPs-PTX對(duì)JJN3CD138TD3C細(xì)胞致N0D/SCID荷瘤鼠腫瘤組織的影響(200X )，圖 3A 為對(duì)照組，圖 3B 為 McAb+NPs-PTX 組·圖4A. McAb+NPs-PTX對(duì)JJN3細(xì)胞凋亡的影響，圖4B. McAb+NPs-PTX對(duì)JJN3細(xì)胞周期的影響。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I、紫杉醇磁性納米粒的制備精密量取Iml保存在正己烷中的油酸包四氧化三鐵，乙醇洗3次；加IOml四氫呋喃，水浴超聲使其分散均勻；另取2g伯洛薩姆188、0. 8g吐溫80溶于15ml四氫呋喃，超聲至完全溶解后加入分散均勻的油酸包四氧化三鐵的四氫呋喃溶液中，然后加入25mg紫杉醇，渦旋使其溶解；另取150ml水于燒杯中，將上述溶液緩慢滴入水中，超聲IOmin ;透析24小時(shí)；加入2. 25g甘露醇，超聲使其溶解；溶液分裝至棕色小瓶(3ml每瓶)，凍干即得紫杉醇磁性納米粒。Brookhaven電位粒度儀測(cè)定粒徑為149nm,鄰二氮菲比色法測(cè)定鐵含量為I. 059mg 每瓶。實(shí)施例2、紫杉醇磁性納米粒的制備 精密量取O. 5ml保存在正己烷中的油酸包四氧化三鐵，乙醇洗2次；加51111四氫呋喃，水浴超聲使其分散均勻；另取I. 0480g泊洛沙姆188、0. 5g吐溫80，溶于IOml四氫呋喃，超聲至完全溶解后加入分散均勻的油酸包四氧化三鐵的四氫呋喃溶液中，然后加入12. 5mg紫杉醇，超聲使其溶解；另取IOOml水于燒杯中，將上述溶液緩慢滴入水中，超聲3min ;透析24小時(shí)；加入I. 15g蔗糖，超聲使其溶解；溶液分裝至棕色小瓶(3ml每瓶)，得紫杉醇磁性納米粒凍干粉。Brookhaven電位粒度儀測(cè)定粒徑為145nm。鄰二氮菲比色法測(cè)定鐵含量O. 7986mg
每瓶· O實(shí)施例3、紫杉醇磁性納米粒的制備精密量取O. Iml保存在正己烷中的油酸包四氧化三鐵，乙醇洗2次；加3ml丙酮，水浴超聲使其分散均勻；另取O. 4g泊洛沙姆188，溶于2ml丙酮，超聲至完全溶解后加入分散均勻的油酸包四氧化三鐵的丙酮溶液中，然后加入I. 5mg紫杉醇，超聲使其溶解；另取15ml水于燒杯中，將上述溶液緩慢滴入水中，超聲3min ;透析24小時(shí)；加入O. 25g麥芽糖，超聲使其溶解；溶液分裝至棕色小瓶(3ml每瓶)，得紫杉醇磁性納米粒凍干粉。Brookhaven電位粒度儀測(cè)定粒徑為74nm。鄰二氮菲比色法測(cè)定鐵含量O. 9986mg每瓶· O實(shí)施例4、藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)本發(fā)明方式制備的紫杉醇氧化鐵納米粒(NPs-PTX)聯(lián)合人轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCG2單克隆抗體McAb (McAb)進(jìn)行藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)。一、材料藥物本發(fā)明方式制備的紫杉醇磁性納米粒，紫杉醇注射液(購(gòu)自四川太極制藥有限公司)。細(xì)胞株與抗體JJN3細(xì)胞夠自中國(guó)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所細(xì)胞中心；CD138、⑶34單抗夠自德國(guó)MiltenyiBiotec公司，人ABCG2單抗夠自美國(guó)eBioscicence公司，動(dòng)物4 6周齡N0D/SCID鼠夠自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所二、方法及結(jié)果N0D/SCID 鼠，背部皮下注射 JJN3CD138XD34-細(xì)胞，I X 105/100 μ I/ 只，成功致瘤并進(jìn)行組織病理切片檢測(cè)。圖2為NPs-PTX對(duì)荷瘤小鼠體內(nèi)殺傷效應(yīng)。McAb聯(lián)合NPs-PTX作用于MM CSCs后促使荷瘤鼠腫瘤組織發(fā)生大片的凝固性壞死(見圖3A為對(duì)照組，圖3B為 McAb聯(lián)合NPs-PTX組)，并可誘導(dǎo)荷瘤鼠體內(nèi)JJN3MM⑶138TD34—細(xì)胞凋亡并促使其發(fā)生細(xì)胞周期阻滯(見圖4A-B)。
權(quán)利要求
1.一種紫杉醇磁性納米粒，其特征在于其形態(tài)為球形，粒徑在50到200nm，包括如下組分紫杉醇、四氧化三鐵、表面活性劑和凍干保護(hù)劑；按重量百分比計(jì)算如下網(wǎng)氧化三鐵納米粒O. 5-20%表面活性劑45-65%凍干保護(hù)劑25-45%紫杉醇O. 1~10% ο
2.如權(quán)利要求1所述紫杉醇磁性納米粒，其特征在于所述的表面活性劑為吐溫80、泊洛沙姆188、卵磷脂、賣澤51中的一種或幾種合用。
3.如權(quán)利要求1所述紫杉醇磁性納米粒，其特征在于所述的凍干保護(hù)劑為甘露醇、山梨醇、木糖醇、蔗糖、乳糖、葡萄糖、麥芽糖或海藻糖中的一種或幾種混用。
4.一種如權(quán)利要求1所述紫杉醇磁性納米粒的制備方法，其特征在于該制備方法包括以下步驟 1).取保存在正己烷中的油酸包裹的四氧化三鐵，磁吸附分離除去正己烷；加有機(jī)溶齊U，使其分散均勻得溶液A ; 2).另取表面活性劑溶于有機(jī)溶劑，至完全溶解得溶液B; 3).將溶液B加入溶液A中，然后加入紫杉醇，使其溶解； 4).將上述步驟3)得到的有機(jī)相溶液緩慢滴入水中，探頭超聲； 5).透析24小時(shí)，得紫杉醇磁性納米粒溶液； 6).將步驟5)所得紫杉醇磁性納米粒溶液再加入凍干保護(hù)劑，凍干即得紫杉醇磁性納米粒凍干粉。
5.如權(quán)利要求4所述紫杉醇磁性納米粒的制備方法，其特征在于所述的有機(jī)溶劑為四氫呋喃、二甲基亞砜、甲醇、乙醇、丙酮、氯仿中的一種或幾種。
6.如權(quán)利要求4所述紫杉醇磁性納米粒的制備方法，其特征在于油酸包裹的四氧化三鐵與有機(jī)溶劑的體積比為1:5到1:20。
7.如權(quán)利要求4所述紫杉醇磁性納米粒的制備方法，其特征在于有機(jī)相溶液與水的體積比例為1:5到1:15。
8.如權(quán)利要求4所述紫杉醇磁性納米粒的制備方法，其特征在于有機(jī)相溶液向水注入的過程中探頭超聲時(shí)間為3 10分鐘。
9.一種如權(quán)利要求1所述的紫杉醇磁性納米粒的應(yīng)用，其特征在于該紫杉醇磁性納米粒聯(lián)合人轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCG2單克隆抗體McAb用于腫瘤的治療。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種紫杉醇磁性納米粒及其制備方法和用途。紫杉醇磁性納米粒形態(tài)為球形，粒徑在50到200nm，包括如下組分紫杉醇、四氧化三鐵、表面活性劑和凍干保護(hù)劑；按重量百分比計(jì)算如下四氧化三鐵納米粒0.5-20%、表面活性劑45-65%、凍干保護(hù)劑25-45%、紫杉醇0.1-10%。本發(fā)明的特點(diǎn)是通過將紫杉醇制成磁性納米粒溶液再凍干，不僅提高了紫杉醇的靶向性,且阻止藥物聚集析出，具有長(zhǎng)期穩(wěn)定、便于貯藏運(yùn)輸?shù)葍?yōu)點(diǎn)。該制備工藝簡(jiǎn)單，適合工業(yè)化大生產(chǎn)。
文檔編號(hào)A61P35/00GK102871974SQ20121039782
公開日2013年1月16日 申請(qǐng)日期2012年10月18日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月18日
發(fā)明者熊非, 楊翠萍, 顧寧, 竇駿 申請(qǐng)人:東南大學(xué)