抗豬瘟病毒和豬圓環(huán)病毒感染的疫苗組合物及制備和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種抗豬瘟病毒和豬圓環(huán)病毒2型感染的二聯(lián)疫苗組合物及其制備和應(yīng)用。該方法將豬圓環(huán)病毒2型亞單位抗原與豬瘟病毒抗原混合凍干制成抗豬瘟病毒和豬圓環(huán)病毒2型感染二聯(lián)疫苗組合物，或以豬圓環(huán)病毒2型全病毒抗原滅活苗為稀釋液，稀釋豬瘟病毒疫苗獲得抗豬瘟病毒和豬圓環(huán)病毒2型感染二聯(lián)疫苗組合物的方式制成二聯(lián)疫苗組合物試劑盒。該二聯(lián)苗疫苗組合物不產(chǎn)生免疫干擾，免疫后豬瘟病毒抗原產(chǎn)生免疫反應(yīng)加快，其保護(hù)抗體比單苗免疫后抗體提前一周達(dá)到免疫保護(hù)劑量，二聯(lián)疫苗中豬圓環(huán)病毒疫苗產(chǎn)生的抗體與單苗免疫效果相當(dāng)。該方法制苗工藝簡(jiǎn)單，生產(chǎn)效率高。經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，疫苗組合物效果優(yōu)于單苗免疫效果，具有很大的應(yīng)用價(jià)值。
【專利說明】抗豬瘟病毒和豬圓環(huán)病毒感染的疫苗組合物及制備和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于畜類生物制藥【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種豬用疫苗組合物，具體說來，涉及一種抗豬瘟病毒和豬圓環(huán)病毒2型感染的二聯(lián)疫苗組合物及其制備和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]豬痕(classicalswine fever, CSF)是由豬痕病毒(classical swine fevervirus,CSFV)引起的一種嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)的毀滅性傳染病。該病死亡率高達(dá)80%~90%，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)將其列為OIE疾病名錄，我國也將其列為一類傳染病。豬瘟的防制歷來是全世界豬瘟存在國非常重視的課題，為此各國都投入了大量的人力、物力，并取得了很大的成績(jī)。目前疫苗接種仍是控制豬瘟的重要手段。我國生產(chǎn)的豬瘟兔化弱毒疫苗有脾淋苗、乳兔組織苗、牛睪丸原代細(xì)胞苗及最近兩年發(fā)展起來的豬睪丸傳代細(xì)胞苗，這些工藝生產(chǎn)的豬瘟疫苗普遍存在生產(chǎn)工藝復(fù)雜、易受外源病毒污染、產(chǎn)毒滴度不高、批間差異大等缺點(diǎn)，給疫苗產(chǎn)量及質(zhì)量的提高帶來困難。
[0003]豬圓環(huán)病毒(Porcine circovirus,PCV)屬于圓環(huán)病毒科(Circoviridae)圓環(huán)病毒屬(Circovirus),無囊膜,是目前發(fā)現(xiàn)的最小的動(dòng)物病毒。豬圓環(huán)病毒現(xiàn)己成為全球廣泛傳播的豬病病毒，其具有流行范圍廣、各生長(zhǎng)階段豬感染嚴(yán)重、混合感染突出等特點(diǎn)，PCV2在我國的流行始于2000年，在我國該病毒的陽性率也呈逐年上升的趨勢(shì)，目前在許多省份危害嚴(yán)重，給我國養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的損失，嚴(yán)重威脅了我國養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。目前世界上研發(fā)的圓環(huán)病毒疫苗主要種類有:PCV2全病毒滅活疫苗CIRCOVAC ;PCVI_PCV2嵌合病毒滅活疫苗SuvaxynPCV2 ;桿狀病毒表達(dá)多聯(lián)疫苗CircoFLEX和PorcilisPCV。
[0004]目前免疫接種仍是我國防治豬瘟和豬圓環(huán)病毒病的重要措施。但豬用疫苗品種很多，在實(shí)際操作中，多針次、多劑量、多種免疫程序難以合理安排，既繁瑣、費(fèi)時(shí)、費(fèi)力、增加成本，且容易造成漏種，直接影響免疫效果。
[0005]專利CN 101277717A公開了一種對(duì)抗豬圓環(huán)病毒2型(PCV-2)的疫苗，該疫苗由至少20微克/劑量的豬圓環(huán)病毒2型(PCV-2)與0RF-2蛋白或重組0RF-2蛋白構(gòu)成，其重組蛋白優(yōu)選通過由桿狀病毒表達(dá)載體在昆蟲細(xì)胞中表達(dá)的方式產(chǎn)生。該疫苗可用于保護(hù)仔豬免受PCV-2感染(并因此對(duì)抗PMWS)。該疫苗只能防治一種病，且其亞單位抗原經(jīng)乳化后保存時(shí)間短。
[0006]中國專利CN 101181637A公開了一種用細(xì)胞系生產(chǎn)豬瘟活疫苗的方法，該方法通過選擇細(xì)胞系作為制苗用細(xì)胞，并對(duì)制苗用細(xì)胞的傳代與培養(yǎng)，然后進(jìn)行細(xì)胞毒種的繁殖及制苗毒液的繁殖，最后進(jìn)行配苗、分裝及凍干來生產(chǎn)豬瘟活疫苗。該方法種毒制備過程繁瑣，可控性差，批間差異大，生產(chǎn)周期長(zhǎng)，只能防治一種疾病。
[0007]因此，目前存在的問題是需要研究開發(fā)一種生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單，疫苗質(zhì)量好，可以同時(shí)防治豬瘟、豬圓環(huán)病毒病兩種傳染病，并能避免多次接種造成免疫應(yīng)激反應(yīng)及免疫效果降低的疫苗及其制備方法。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種抗豬瘟病毒和豬圓環(huán)病毒2型感染的二聯(lián)疫苗組合物及其制備和應(yīng)用。該二聯(lián)疫苗組合物含有圓環(huán)病毒2型抗原和豬瘟病毒抗原，可以同時(shí)防治豬瘟、豬圓環(huán)病毒病兩種傳染病，與單苗相比，該二聯(lián)疫苗組合物并沒有產(chǎn)生免疫干擾現(xiàn)象，疫苗免疫效果沒有下降，采用該二聯(lián)疫苗組合物免疫后豬瘟病毒抗原產(chǎn)生的免疫反應(yīng)加快了，且二聯(lián)疫苗組合物中圓環(huán)病毒2型疫苗產(chǎn)生的抗體與單苗免疫效果相當(dāng)。該二聯(lián)疫苗組合物的制苗工藝簡(jiǎn)單，生產(chǎn)效率高。經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，該疫苗組合物的免疫效果優(yōu)于單苗免疫效果，具有很大的應(yīng)用價(jià)值。
[0009]為此，本發(fā)明提供了一種抗豬瘟病毒和豬圓環(huán)病毒2型感染的二聯(lián)疫苗組合物，其包含豬瘟病毒抗原和豬圓環(huán)病毒2型抗原。
[0010]在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，在所述二聯(lián)疫苗組合物中，豬瘟病毒抗原與豬圓環(huán)病毒2型抗原的體積比為1: 2。
[0011]根據(jù)本發(fā)明，所述豬瘟病毒抗原為滅活形式、改良的活的形式或減毒形式的豬瘟病毒抗原中的一種或幾種，并且，所述豬瘟抗原選自豬瘟全病毒、含有豬瘟病毒免疫原性氨基酸序列的嵌合病毒，任何至少含豬瘟病毒免疫原性氨基酸序列的多肽或亞單位成分中一種或幾種；優(yōu)選所述豬瘟病毒抗原為豬瘟病毒兔化弱毒株全病毒抗原。
[0012]本發(fā)明中，所述豬瘟病毒抗原接種豬可誘導(dǎo)、刺激或增強(qiáng)抵抗豬瘟病毒感染的免疫應(yīng)答。所述二聯(lián)疫苗組合物中每劑量或每頭份(2ml)含豬瘟病毒抗原為104_°TCID5Q。
[0013]同樣，所述豬圓環(huán)病毒2型抗原為滅活形式、改良的活的形式或減毒形式的豬圓環(huán)病毒2型抗原中的一種或幾種，并且，所述豬圓環(huán)病毒2型抗原選自豬圓環(huán)病毒2型全病毒抗原，含有豬圓環(huán)病毒2型免疫原性氨基酸序列的嵌合病毒，任何至少含有豬圓環(huán)病毒2型免疫原性氨基酸序列的多肽或亞單位成分中一種或幾種。優(yōu)選所述豬圓環(huán)病毒2型抗原為滅活的PCV2全病毒抗原和/或含有PCV2免疫原性氨基酸序列的多肽或亞單位成份。
[0014]本發(fā)明中，所述抗原接種豬可誘導(dǎo)、刺激或增強(qiáng)抵抗PCV2感染的免疫應(yīng)答。所述二聯(lián)疫苗組合物中每劑量或每頭份(2ml)含PCV2全病毒抗原滅活前病毒含量至少為IO5-5TCID50 0優(yōu)選所述二聯(lián)疫苗組合物中每劑量或每頭份(2ml)含PCV2全病毒抗原滅活前病毒含量為4.5 X IO5 tlTCID5ci~106_°TCID5(i。進(jìn)一步優(yōu)選所述二聯(lián)疫苗組合物中每劑量或每頭份(2ml)含PCV2全病毒抗原滅活前病毒含量為9X 105_°TCID5Q。
[0015]在本發(fā)明的一個(gè)【具體實(shí)施方式】中，所述豬圓環(huán)病毒2型抗原為PCV2SH株、PCV2LG株、PCV2DBN-SX07-2的抗原或疫苗和/或PCV2亞單位抗原。優(yōu)選所述豬圓環(huán)病毒2型抗原為PCV2SH株(保藏編號(hào)為CGMCC N0.23890，公開于專利文獻(xiàn)CN 101240264A)和/或PCV20RF2 蛋白。
[0016]也就是說，由于PCV2基因組大小為1767bp或1768bp，不同毒株之間核苷酸序列同源性較高，均在90 %以上，因此PCV2SH株(GenBank登錄號(hào)為AY686763)、PCV2LG株(GenBank 登錄號(hào)為 HM038034)、PCV2DBN_SX07_2 (GenBank 登錄號(hào)為 HM641752)的抗原或疫苗均在本發(fā)明保護(hù)范圍之內(nèi)。
[0017]所述豬圓環(huán)病毒2型0RF2蛋白為序列表`SEQ N0.1的DNA序列編碼的蛋白或序列表SEQ N0.2的氨基酸序列的蛋白或與其同源性在75%以上的氨基酸序列的蛋白。優(yōu)選所述豬圓環(huán)病毒2型0RF2蛋白為與序列表SEQ N01.DNA序列編碼的蛋白或序列表SEQ N02.氨基酸序列的蛋白同源性在80%以上的氨基酸序列的蛋白。進(jìn)一步優(yōu)選所述豬圓環(huán)病毒2型ORF2蛋白為與序列表SEQ NOl.DNA序列編碼的蛋白或序列表SEQ N02.氨基酸序列的蛋白同源性在90%以上的氨基酸序列的蛋白。
[0018]本發(fā)明中，所述二聯(lián)疫苗組合物中豬圓環(huán)病毒2型0RF2蛋白的含量為0.5~20 μ g/頭份。優(yōu)選所述二聯(lián)疫苗組合物中豬圓環(huán)病毒2型0RF2蛋白的含量為5~10 μ g/頭份。
[0019]本發(fā)明中，所述豬圓環(huán)病毒2型抗原還包含至少一種豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗和基因工程亞單位疫苗。所述PCV2抗原還可以選自，例如，梅里亞公司(Merial)的Circovac-PCV2 ;輝瑞公司(Pfizer)的Suvaxyn_PCV2 ;哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司的豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗(LG株)；福州大北農(nóng)生物技術(shù)有限公司的豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗(DBN-SX07株)和基因工程亞單位疫苗，如勃林格殷格翰公司(Boehringer-1ngelheim)的豬圓環(huán)病毒疫苗
【權(quán)利要求】
1.一種抗豬瘟病毒和豬圓環(huán)病毒2型感染的二聯(lián)疫苗組合物，其包含豬瘟病毒抗原和豬圓環(huán)病毒2型抗原。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的二聯(lián)疫苗組合物，其特征在于: 所述豬瘟病毒抗原為滅活形式、改良的活的形式或減毒形式的豬瘟病毒抗原中的一種或幾種，并且，所述豬瘟抗原選自豬瘟全病毒、含有豬瘟病毒免疫原性氨基酸序列的嵌合病毒，任何至少含豬瘟病毒免疫原性氨基酸序列的多肽或亞單位成分中一種或幾種； 所述豬圓環(huán)病毒2型抗原為滅活形式、改良的活的形式或減毒形式的豬圓環(huán)病毒2型抗原中的一種或幾種，并且，所述豬圓環(huán)病毒2型抗原選自豬圓環(huán)病毒2型全病毒抗原,含有豬圓環(huán)病毒2型免疫原性氨基酸序列的嵌合病毒，任何至少含有豬圓環(huán)病毒2型免疫原性氨基酸序列的多肽或亞單位成分中一種或幾種。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的二聯(lián)疫苗組合物，其特征在于: 所述二聯(lián)疫苗組合物中每劑量或每頭份含豬瘟病毒抗原為IO4 tlTCID5ci ； 所述二聯(lián)疫苗組合物中每劑量或每頭份含PCV2全病毒抗原滅活前病毒含量至少為105.5TCID50 ； 所述豬痕病毒抗原為豬痕病毒兔化弱毒株全病毒抗原； 所述豬圓環(huán)病毒2型抗原為滅活的PCV2全病毒抗原和/或含有PCV2免疫原性氨基酸序列的多肽或亞單位成份。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的二聯(lián)疫苗組合物，其特征在于: 所述二聯(lián)疫苗組合物中每劑量或每頭份含PCV2全病毒抗原滅活前病毒含量為4.5 X 1O5.0TCID50 ~106.ciTCID50 ； 所述豬圓環(huán)病毒2型抗原為PCV2SH株、PCV2LG株、PCV2DBN-SX07-2的抗原或疫苗和/或PCV2亞單位抗原。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的二聯(lián)疫苗組合物，其特征在于: 所述二聯(lián)疫苗組合物中每劑量或每頭份含PCV2全病毒抗原滅活前病毒含量為9X 1O5 0TCID50 ； 所述豬圓環(huán)病毒2型抗原為PCV2SH株和/或PCV20RF2蛋白。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的二聯(lián)疫苗組合物，其特征在于: 所述豬圓環(huán)病毒2型ORF2蛋白為序列表SEQ N0.1的DNA序列編碼的蛋白或序列表SEQ N0.2的氨基酸序列的蛋白或與其同源性在75%以上的氨基酸序列的蛋白； 所述二聯(lián)疫苗組合物中豬圓環(huán)病毒2型ORF2蛋白的含量為0.5~20 μ g/頭份。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的二聯(lián)疫苗組合物，其特征在于: 所述豬圓環(huán)病毒2型ORF2蛋白為與序列表SEQ NOl.DNA序列編碼的蛋白或序列表SEQN02.氨基酸序列的蛋白同源性在80%以上的氨基酸序列的蛋白； 所述二聯(lián)疫苗組合物中豬圓環(huán)病毒2型0RF2蛋白的含量為5~10 μ g/頭份。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的二聯(lián)疫苗組合物，其特征在于:所述豬圓環(huán)病毒2型0RF2蛋白為與序列表SEQ N01.DNA序列編碼的蛋白或序列表SEQ N02.氨基酸序列的蛋白同源性在90%以上的氨基酸序列的蛋白。
9.一種根據(jù)權(quán)利要求1~8中任意一項(xiàng)所述二聯(lián)疫苗組合物的制備方法，包括配苗步驟:將豬瘟病毒抗原與豬圓環(huán)病毒2型抗原混合后進(jìn)行凍干制得二聯(lián)疫苗組合物。
10.一種根據(jù)權(quán)利要求1~8中任意一項(xiàng)所述二聯(lián)疫苗組合物在制備抗豬瘟病毒和豬圓環(huán)病毒2型感染的二聯(lián)疫苗組合物試劑盒中的應(yīng)用，其包括以豬圓環(huán)病毒2型全病毒抗原滅活苗為稀釋液，稀釋豬瘟病毒疫苗獲得抗豬瘟病毒和豬圓環(huán)病毒2型感染的二聯(lián)疫苗組合物的方式來制備抗 豬瘟病毒和豬圓環(huán)病毒2型感染的二聯(lián)疫苗組合物試劑盒。
【文檔編號(hào)】A61P31/14GK103623403SQ201210307562
【公開日】2014年3月12日 申請(qǐng)日期:2012年8月27日 優(yōu)先權(quán)日:2012年8月27日
【發(fā)明者】張?jiān)S科, 孫進(jìn)忠, 白朝勇 申請(qǐng)人:普萊柯生物工程股份有限公司