專利名稱：一種從藠頭中提取總皂苷的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種提取總皂苷的方法，尤其是涉及ー種從Il頭中提取總皂苷的方法。
背景技術(shù)：
葛頭又稱為養(yǎng)頭(Alliumchinenes Zb/ .)、小根蒜(Allium MacrostemonBunge)等，為多年生草本百合科蔥屬植物的地下鱗莖。Il頭含有多種生物活性物質(zhì)，如多糖、蛋白質(zhì)、鈣、磷、鐵、胡蘿卜素、維生素C、黃酮類及皂苷類物質(zhì)等。干制！!頭入藥可健胃、 輕痰、治療慢性胃炎。據(jù)《本經(jīng)》記載蠤頭“治金瘡瘡敗，輕身者不饑耐老”、“治少陰病闕逆泄痢，及胸癉刺痛，下氣，散血，安胎?！笨梢?jiàn)Il頭的醫(yī)學(xué)應(yīng)用具有悠久的歷史，其中！!頭中總皂苷成分是其發(fā)揮作用的主要成分之一。皂苷是一類以三萜或留體為苷元，且具有較高分子量的糖苷類化合物。皂苷類化合物廣泛分布于多種蔬菜、水果、植物籽仁當(dāng)中，且是許多中藥植物的重要生物活性成分，如人參、遠(yuǎn)志、桔梗、甘草、知母和柴胡等，但是，許多植物中皂苷類物質(zhì)含量少，同時(shí)由于皂苷類物質(zhì)水溶性強(qiáng)、分子量大，既難以分離也難以結(jié)構(gòu)鑒定，這一直是植物皂苷提取的ー個(gè)難點(diǎn)。近30年來(lái)，皂苷類化合物的研究取得了很大的進(jìn)展，尤其是三萜類成分的研究進(jìn)展很快，特別是近10年來(lái)從大量植物中及海洋生物中得到了不少的新型皂苷。皂苷類物質(zhì)具有多種藥理作用，如降血糖血脂、防治心腦血管疾病、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗病毒、抗心肌缺血、抗微生物作用、抗腫瘤及細(xì)胞毒作用和免疫調(diào)節(jié)等。眾多研究表明，人參皂苷具有較高的抗腫瘤活性，對(duì)正常細(xì)胞無(wú)毒副作用，與其他化療藥物(如順鉬)聯(lián)合應(yīng)用有協(xié)同作用；人參皂苷通過(guò)調(diào)控腫瘤細(xì)胞增殖周期、誘導(dǎo)細(xì)胞分化和凋亡來(lái)發(fā)揮抗腫瘤作用；將腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)分化成正常細(xì)胞有利于控制腫瘤發(fā)展，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡使細(xì)胞解體后形成凋亡小體，不引起周圍組織炎癥反應(yīng)。Popovich等研究認(rèn)為，人參皂苷可以促進(jìn)人白血病細(xì)胞的凋亡，其途徑與地塞米松相似，均為受體依賴性。柴胡皂苷能抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)，有明顯的抗炎作用，并能減低血漿中膽固醇和甘油三酯的水平。七葉皂苷具有明顯的抗?jié)B出、抗炎、抗淤血作用，能恢復(fù)毛細(xì)血管的正常的滲透性，提高毛細(xì)血管張カ，控制炎癥，改善循環(huán)，對(duì)腦外傷及心血管病有較好的治療作用。目前我國(guó)對(duì)人參皂苷的提取分離方法、制劑エ藝、抗腫瘤作用機(jī)制以及臨床應(yīng)用等方面做了大量研究，而且已經(jīng)有人參皂苷的新產(chǎn)品推向市場(chǎng)。常見(jiàn)的皂苷類藥物有地奧心血康膠囊、心腦舒通、盾葉冠心寧等。皂苷具有廣泛的醫(yī)學(xué)應(yīng)用，因此皂苷的提取也就變得非常重要。生物制品中皂苷的常用提取方法有回流提取法、索氏提取法、超聲波法、超臨界流體萃取、濕式超微粉碎法等。近年來(lái)，隨著提取及分離純化技術(shù)的發(fā)展，皂苷的提取方法有了很大的進(jìn)步，對(duì)于三七皂苷提取的主要流程為稱取適量三七皂苷粉末，加入一定倍量的溶剤，回流提取若干次，合并濾液，上大孔樹(shù)脂柱，先用水洗，再用不同濃度的こ醇進(jìn)行洗脫，收集こ醇洗脫液，回收こ醇、減壓干燥即得三七皂苷。但是由于植物活性物質(zhì)成分復(fù)雜，常會(huì)含有一定的揮發(fā)油、多糖、黃酮及生物堿等雜質(zhì)，物質(zhì)的性質(zhì)也存在很大差異，因此要獲得高純度的皂苷存在一定的困難，需經(jīng)多個(gè)步驟除去雜質(zhì)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是，克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供ー種從蠤頭中提取總皂苷的方法，運(yùn)用該方法從Il頭中提取總皂苷，收率高，所得皂苷成品純度高。本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是，一種從Il頭中提取總皂苷的方法，包括以下步驟
(I)原料預(yù)處理取新鮮的！!頭鱗莖，用自來(lái)水清洗干凈，然后用蒸餾水清洗2 — 3次，曬干或晾干；
(2)烘箱干燥將經(jīng)步驟(I)處理的！!頭置于30°C— 50°C烘箱內(nèi)繼續(xù)干燥10 — 12h, 烘干至含水率彡8% ；
(3)粉碎將經(jīng)步驟(2)干燥的！!頭鱗莖經(jīng)粉碎機(jī)粉碎后過(guò)100— 200目篩，除去未粉碎的！!頭鱗莖；
(4)粉料浸泡初步提取按粉料與こ醇溶液質(zhì)量比為1:6— 8向粉料中加入體積濃度為30% 一 60%的こ醇，先在室溫下浸泡2 — 3小時(shí)，然后于40°C — 60°C水浴中保溫浸泡24 —36小時(shí)，并不斷攪拌，以促進(jìn)皂苷物質(zhì)的浸出；然后過(guò)濾，得濾液，整個(gè)系統(tǒng)密封，并收集濾
渣,稱重；
(5)再次提取按濾渣與こ醇溶液質(zhì)量比為1:3— 8向步驟(4)所得濾渣中加入體積濃度為30% — 60%的こ醇，攪拌均勻，然后于40°C — 60°C水浴中保溫處理12 — 18小吋，過(guò)濾，得濾液，棄渣；
(6)蒸發(fā)回收こ醇，減壓濃縮將步驟(4)和步驟(5)所得濾液于40°C— 60°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中蒸發(fā)回收こ醇，并減壓濃縮至溶液中無(wú)こ醇；
(7)石油醚萃取將步驟(6)所得濃縮液與石油醚按體積比為1:2— 6進(jìn)行萃取，回收石油醚，收集水相，共萃取2 — 3次；
(8)正丁醇萃取將步驟(7)所得水相與水飽和正丁醇按體積比為1:2— 6進(jìn)行萃取，棄去水相，回收正丁醇溶液,共萃取3 — 4次；
(9)蒸發(fā)回收正丁醇，濃縮將步驟(8)收集得到的正丁醇溶液于40°C— 60°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中蒸發(fā)回收正丁醇，用濃縮儀濃縮，得干燥粉末；
(10)大孔吸附樹(shù)脂柱純化將步驟(9)所得干燥粉末與蒸餾水按質(zhì)量比1:6— 8混合，然后通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱，使液體中的皂苷被樹(shù)脂吸附，棄去流出液，采用蒸餾水清洗大孔吸附樹(shù)脂柱，當(dāng)流出液變澄清后，再用體積濃度為50% — 70%的こ醇清洗樹(shù)脂柱，使吸附于大孔吸附樹(shù)脂上的皂苷被洗脫，洗脫流速為4 一 5mL/min，共洗脫4_8h，收集洗脫液；
(11)減壓濃縮除こ醇，干燥將步驟(10)收集得到的洗脫液置于40°C— 60°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓濃縮以除去こ醇，然后將剩余的溶液置濃縮儀內(nèi)干燥，即得！!頭總皂苷產(chǎn)品。本發(fā)明使用之原料蠤頭來(lái)源廣泛，含有多種生物活性物質(zhì)。不過(guò)，蠤頭原料中總皂苷的含量和提取率因植物品種和生長(zhǎng)環(huán)境的不同而不同，原料在高溫、潮濕的環(huán)境中長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存或經(jīng)長(zhǎng)途運(yùn)輸，將使總皂苷提取率大為降低，因此，在獲得！!頭原料后，應(yīng)盡可能及時(shí)就地或就近進(jìn)行非高溫干燥處理，然后再存放留待提取。
本發(fā)明的方法基于以下原理皂苷由皂苷元和糖、糖醛酸或其它有機(jī)物組成。研究表明，組成皂苷常見(jiàn)的糖有葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、木糖、阿拉伯糖和其他戊糖類。依據(jù)苷元分為兩類留體皂苷元(中性皂苷)和三萜皂苷元(酸性皂苷)。蔥屬植物中含有大量的甾體皂苷元，留體皂苷元有較好的晶體形態(tài)，能溶于親脂性溶劑；不溶于水。皂苷一般可溶于水、稀醇，易溶于熱水、稀醇，難溶于石油醚、苯、こ醚等親脂性溶剤。這些溶劑都是在食品和藥物的加工和制備中可以使用的溶剤；且Il頭總皂苷能夠被大孔吸附樹(shù)脂強(qiáng)有力的吸附，且能有效解析附。因此，利用甾體皂苷的以上性質(zhì)，可以將其與原料中的大量雜質(zhì)分離。本發(fā)明采用石油醚萃取的目的是脫脂，而采用水飽和正丁醇萃取的目的是充分溶解皂苷，用蒸餾水清洗大孔吸附樹(shù)脂柱的目的是除去其中的多糖類、生物堿類等水溶性物質(zhì)，獲得高得率、高純度的皂苷成品。大蒜與！!頭同為蔥屬植物，同樣存在高含量的皂苷類化合物，因此本發(fā)明之提取總阜苷的方法也適用于大蒜。
本發(fā)明原料容易獲得，價(jià)格低廉；所用試劑均為常用試劑，回收后可再利用以降低生產(chǎn)成本，減少污染；操作條件比較簡(jiǎn)單，易于實(shí)現(xiàn)；所得產(chǎn)品中！!頭總皂苷含量高達(dá)3. 8%，實(shí)際應(yīng)用價(jià)值高。提取總皂苷后的殘?jiān)€可用作優(yōu)質(zhì)飼料與肥料，具有商業(yè)優(yōu)勢(shì)。


圖I為本發(fā)明實(shí)施例所得蠤頭總皂苷的HPLC分離結(jié)果 圖2為薯蕷皂苷的紫外吸收?qǐng)D譜；
圖3為本發(fā)明實(shí)施例中所得蠤頭皂苷的紫外吸收?qǐng)D譜。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)ー步詳細(xì)說(shuō)明。本實(shí)施例包括以下步驟
(O原料預(yù)處理取新鮮的！!頭，用自來(lái)水清洗干凈，然后用蒸餾水清洗2次，晾干，去除！!頭中的水分；
(2)烘箱干燥將經(jīng)步驟(I)處理的！!頭置于50°C烘箱內(nèi)繼續(xù)干燥12h，烘干至含水率^ 8%;除去！!頭中多余水分的同時(shí)，除去Il頭中的含硫化合物，提高提取物的純度；
(3)將經(jīng)步驟(2)干燥的！!頭鱗莖經(jīng)粉碎機(jī)粉碎后過(guò)200目篩，除去未粉碎的！!頭鱗莖，收集！!頭粉末；
(4)粉料浸泡初步提取稱取IOgII頭粉末置于玻璃容器中，然后向玻璃容器中加入80g體積濃度為產(chǎn)品40%的こ醇溶液,先在室溫下浸泡3小時(shí),然后置50°C水浴中保溫浸泡24h，并不斷攪拌以促進(jìn)皂苷類物質(zhì)浸出；最后將固液混合物靜置，待未溶解的固體沉降后，留上清液，濾渣取液，整個(gè)系統(tǒng)應(yīng)當(dāng)密封，以防止こ醇的揮發(fā)，收集濾渣；
(5)再次提取按濾渣與こ醇溶液質(zhì)量比為1:4向步驟(4)所得濾渣中加入體積濃度為40%的こ醇，攪拌均勻，然后于50°C水浴中保溫提取12小時(shí)，過(guò)濾取液棄渣；
(6)蒸發(fā)回收こ醇，減壓濃縮將步驟(4)和步驟(5)收集到的濾液于50°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中蒸發(fā)回收こ醇，減壓濃縮至溶液中無(wú)こ醇；(7)石油醚萃取將步驟(6)所得濃縮液與石油醚按體積比為1:4進(jìn)行萃取，回收石油醚，收集水相，共萃取3次；
(8)正丁醇萃取將步驟(7)所得水相與水飽和正丁醇按體積比1:4進(jìn)行萃取，棄去水相，回收正丁醇溶液，共萃取4次；
(9)蒸發(fā)回收正丁醇，濃縮將步驟(8)收集得到的正丁醇溶液于50°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中蒸發(fā)回收正丁醇，濃縮儀濃縮，得干燥粉末；
(10)大孔吸附樹(shù)脂柱純化將步驟(9)所得濃縮后的干燥粉末按質(zhì)量比為1:6加入蒸餾水進(jìn)行溶解，然后通過(guò)經(jīng)活化處理的大孔吸附樹(shù)脂柱，使液體中的皂苷被樹(shù)脂吸附，棄去流出液，采用蒸餾水清洗大孔吸附樹(shù)脂柱，當(dāng)流出液變澄清后，再用體積濃度為60%的こ醇清洗樹(shù)脂柱，使吸附于其上的皂苷被完全洗脫，洗脫流速為5mL/min，共洗脫5h，收集洗脫液；
(11)減壓濃縮除こ醇，干燥將步驟(10)收集得到的洗脫液置于50°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓濃縮除去こ醇，然后將剩余的溶液置濃縮儀內(nèi)干燥，即得！!頭總皂苷成品。(12)采用香草醛-濃硫酸-冰醋酸比色法對(duì)皂苷含量進(jìn)行測(cè)定，蠤頭總皂苷的含量高達(dá)3. 8% ;且平均加樣回收率為94. 8% ；
(13)分離、提純Il頭總皂苷的質(zhì)譜鑒定將純化好的！!頭總皂苷經(jīng)高效液相色譜分離(圖1)，共獲得8個(gè)蠤頭皂苷単一成分，然后將分離到的皂苷采用質(zhì)譜儀進(jìn)行鑒定，同時(shí)與薯蕷皂苷標(biāo)準(zhǔn)品的紫外吸收?qǐng)D譜進(jìn)行比較，兩者具有相似的紫外吸收?qǐng)D譜，因此結(jié)果表明所得成分均為皂苷類物質(zhì)，該方法真實(shí)可信，用上述方法提取、分離和純化能獲得純度高的Il頭總皂苷成品，且在室溫下穩(wěn)定，在干燥環(huán)境中，一 4°C 8°C下可以保存六個(gè)月。
權(quán)利要求
1.ー種從Il頭中提取總皂苷的方法，其特征在于，包括以下步驟(I)原料預(yù)處理取新鮮的！!頭鱗莖，用自來(lái)水清洗干凈，然后用蒸餾水清洗2 — 3次，曬干或晾干； (2)烘箱干燥將經(jīng)步驟(I)處理的！!頭置于30°C— 50°C烘箱內(nèi)繼續(xù)干燥10 — 12h,烘干至含水率≤8% ； (3)粉碎將經(jīng)步驟(2)干燥的！!頭鱗莖經(jīng)粉碎機(jī)粉碎后過(guò)100— 200目篩，除去未粉碎的！!頭鱗莖； (4)粉料浸泡初步提取按粉料與こ醇溶液質(zhì)量比為1:6— 8向粉料中加入體積濃度為30% 一 60%的こ醇，先在室溫下浸泡2 — 3小時(shí)，然后于40°C — 60°C水浴中保溫提取24 —36小吋，并不斷攪拌，以促進(jìn)皂苷物質(zhì)的浸出；然后過(guò)濾，得濾液，整個(gè)系統(tǒng)密封，并收集濾渣,稱重； (5)再次提取按濾渣與こ醇溶液質(zhì)量比為1:3— 8向步驟(4)所得濾渣中加入體積濃度為30% — 60%的こ醇，攪拌均勻，然后于40°C — 60°C水浴中保溫處理12 — 18小吋，過(guò)濾，得濾液，棄渣； (6)蒸發(fā)回收こ醇，減壓濃縮將步驟(4)和步驟(5)所得濾液于40°C— 60°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中蒸發(fā)回收こ醇，并減壓濃縮至溶液中無(wú)こ醇； (7)石油醚萃取將步驟(6)所得濃縮液與石油醚按體積比為1:2— 6進(jìn)行萃取，回收石油醚，收集水相，共萃取2 — 3次； (8)正丁醇萃取將步驟(7)所得水相與水飽和正丁醇按體積比為1:2— 6進(jìn)行萃取，棄去水相，回收正丁醇溶液,共萃取3 — 4次； (9)蒸發(fā)回收正丁醇，濃縮將步驟(8)收集得到的正丁醇溶液于40°C— 60°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中蒸發(fā)回收正丁醇，用濃縮儀濃縮，得干燥粉末； (10)大孔吸附樹(shù)脂柱純化將步驟(9)所得干燥粉末與蒸餾水按質(zhì)量比1:6— 8混合，然后通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱，使液體中的皂苷被樹(shù)脂吸附，棄去流出液，采用蒸餾水清洗大孔吸附樹(shù)脂柱，當(dāng)流出液變澄清后，再用體積濃度為50% — 70%的こ醇清洗樹(shù)脂柱，使吸附于大孔吸附樹(shù)脂上的皂苷被洗脫，洗脫流速為4 一 5mL/min，共洗脫4_8h，收集洗脫液； (11)減壓濃縮除こ醇，干燥將步驟(10)收集得到的洗脫液置于40°C— 60°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓濃縮以除去こ醇，然后將剩余的溶液置濃縮儀內(nèi)干燥，即得！!頭總皂苷產(chǎn)品。
全文摘要
一種從藠頭中提取總皂苷的方法，其包括以下步驟(1)原料預(yù)處理；(2)烘箱干燥；(3)粉碎；(4)粉料浸泡，初步提?。?5)再次提??；(6)蒸發(fā)回收乙醇，減壓濃縮；(7)石油醚萃??；(8)正丁醇萃??；(9)蒸發(fā)回收正丁醇，濃縮儀濃縮；(10)大孔吸附樹(shù)脂柱純化；(11)除乙醇，干燥，即成。本發(fā)明原料容易獲得，價(jià)格低廉；所用試劑均為常用試劑，回收后可再利用以降低生產(chǎn)成本，減少污染；操作條件簡(jiǎn)單，易于實(shí)現(xiàn)；所得產(chǎn)品中藠頭總皂苷含量較高，實(shí)際應(yīng)用價(jià)值高；提取總皂苷后的殘?jiān)€可用作優(yōu)質(zhì)飼料與肥料。
文檔編號(hào)A61K36/8962GK102670935SQ20121016135
公開(kāi)日2012年9月19日 申請(qǐng)日期2012年5月23日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月23日
發(fā)明者丁學(xué)知, 余子全, 夏立秋, 孫運(yùn)軍, 禹智輝, 肖秀情, 胡勝標(biāo) 申請(qǐng)人:湖南師范大學(xué)