專利名稱：藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域，具體地涉及藥物組合物及其用途。更具體地，本發(fā)明提供了藥物組合物、藥物組合物在制備藥物中的用途以及制備藥物的方法。
背景技術(shù)：
宮頸病變是女性最常見的疾病之一，宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之
oHPV(人類乳頭瘤病毒)感染與濕撫、宮頸癌前病變、宮頸癌、皮膚癌的發(fā)病關(guān)系密切，幾乎99. 8%的宮頸癌都可以檢出HPV。目前人類還未發(fā)明出能夠有效治療HPV感染的藥物，因此所謂治療主要是針對由HPV引起的宮頸或外生殖器或肛周或皮膚的局部病變，包括由HPV感染引起的宮頸疾病如宮頸糜爛、宮頸癌前病變、宮頸癌；由HPV感染引起的女陰上皮內(nèi)瘤變；以及由HPV感染引起的疣病，如扁平疣、尋常疣、掌跖疣、尖銳濕疣和免疫功能低下引起的傳染性軟疣；以及由HPV感染引起的皮膚癌前病變?nèi)缃腔ち觥⑷展庑越腔?、溢脂性角化病。宮頸癌前病變即所謂宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)，包括宮頸非典型增生及宮頸癌，其反映了宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的連續(xù)過程。宮頸非典型增生是指宮頸上皮細(xì)胞部分或大部分發(fā)生異形和不典型的分化，可以發(fā)生于宮頸外口或移行帶或?qū)m頸內(nèi)膜表面。宮頸癌前病變由于病位特殊，目前臨床上以局部治療為主?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療主要采用物理治療和手術(shù)治療，物理療法包括激光、冷凍、紅外線、微波、電灼和聚焦超聲等，但治療后常出現(xiàn)陰道分泌物增多、水樣排液及陰道不規(guī)則出血，還可能引起宮頸管狹窄、黏連甚至不孕等副作用，而宮頸錐切術(shù)、宮頸廣泛切除和子宮全切除等手術(shù)治療對人體的創(chuàng)傷重，痛苦大，醫(yī)療費(fèi)用高。Merck公司生產(chǎn)的針對HPV6/11/16/18亞型的宮頸癌預(yù)防性疫苗Gardasil，目前已經(jīng)在國外上市并投入使用。GSK公司生產(chǎn)的針對HPV16/18亞型的宮頸癌預(yù)防性疫苗Cervarix，具有安全、能夠耐受，以及免疫源性好等特點。但這兩種疫苗都只是預(yù)防性疫苗，尚沒有資料證實其對現(xiàn)存的宮頸癌及癌前病變有治療作用，此外，疫苗不僅會導(dǎo)致受試者注射部位疼痛、腫脹發(fā)紅，而且價格昂貴。日光性角化病(AK)又名老年性角化病，就是由長期在日光下曝曬損傷皮膚引起的癌前期皮膚損害，通常會讓臉部皮膚和頭皮變粗糙、發(fā)紅、成片剝落，或者結(jié)痂，日光、紫外線、放射性熱能以及浙青或煤及其提煉物均可誘發(fā)此病。AK是一種皮膚癌前期病變，部分AK可自行消退，但若不經(jīng)治療，則約20 %的患者一個或多個皮損可發(fā)展為鱗狀細(xì)胞癌，研究顯示65%的鱗狀細(xì)胞癌是由AK導(dǎo)致的。因此積極的治療日光性角化病，可防止鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生。該病現(xiàn)有的療法包括液氮法、電灼法、激光療法和局部外用藥治療。在治療AK的藥物中，可局部應(yīng)用5% 5-氟尿嘧啶，連用數(shù)周，但該藥可引起暫時性皮膚紅腫、紅斑、水皰和潰瘍等；應(yīng)用2. 5%咪喹莫特乳膏治療的局部皮膚副作用較大，皮損處易引起紅斑、水腫及糜爛；雙氯芬酸雖然耐受性更好，但療效不高。大量實驗研究證實，在日光性角化病、皮膚癌前組織及皮膚癌組織中可檢測到人乳頭瘤病毒DNA。皮膚惡性腫瘤與人乳頭瘤病毒感染密切相關(guān)，臨床上HPV的感染率亦逐年增加，Kiviat等人認(rèn)為，HPV感染致皮膚癌的作用與紫外線的致癌作用是同等重要的因素。因此，目前對治療由HPV感染引起的宮頸癌前病變以及皮膚癌前病變的藥物，特別是治療由HPV感染引起的宮頸糜爛、輕度宮頸非典型增生(CIN I)、中度宮頸非典型增生(CIN II)，以及治療由HPV感染引起的日光性角化病的藥物的研究，仍有待加強(qiáng)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是基于發(fā)明人的 下列發(fā)現(xiàn)而完成的近年來，運(yùn)用中醫(yī)藥對宮頸癌前病變的研究日趨深入，但目前尚無治療宮頸癌前病變的中藥應(yīng)用于臨床?？鄥⒅懈缓飰A類化合物，而生物堿中以苦參堿、氧化苦參堿為主。中藥苦參具有清熱燥濕，祛風(fēng)殺蟲的作用，多用于瘡、疥、癬疾等疾病，主濕熱瀉痢、腸風(fēng)便血、黃疸、小便不利、水腫、帶下、陰癢、疥癬、麻風(fēng)、皮膚瘙癢、濕毒瘡瘍。綠茶是一種非發(fā)酵茶，也是一種人們常用的飲料，其主要活性成分是茶多酚。綠茶中茶多酚約占茶葉干重的20% 30%。茶多酚是一類多羥基酚類化合物的總稱，其主要成分是兒茶素類化合物，約占綠茶中茶多酚總量的65% 80%。兒茶素類化合物主要含有4種單體表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)、表兒茶素沒食子酸酯(ECG)、表兒茶素(EC)及表沒食子兒茶素(EGC)。其中，EGCG含量最高，約占兒茶素類化合物的50%。綠茶具有清熱解毒，收斂除濕等功效，而且經(jīng)研究證明，綠茶還具有抗病毒、抗菌、抗氧化、抗增生作用。目前國內(nèi)外有關(guān)苦參綠茶組合物在制備治療由HPV感染引起的宮頸癌前病變以及皮膚癌前病變藥物中的應(yīng)用未見報道。本發(fā)明旨在至少解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問題之一。因此，針對現(xiàn)階段用于治療宮頸癌前病變以及皮膚癌前病變藥物不足的情況，本發(fā)明提供了一種藥物組合物及其用途。根據(jù)本發(fā)明的一個方面，本發(fā)明提供了一種藥物組合物。根據(jù)本發(fā)明的實施例，該藥物組合物包含苦參提取物和綠茶提取物作為活性成分。根據(jù)本發(fā)明的實施例，優(yōu)選苦參提取物和綠茶提取物的重量比率為I : I 2，更優(yōu)選I : 1.2。其中，苦參提取物是通過下列步驟制備的將苦參進(jìn)行加水提取，以便獲得苦參提取液；將苦參提取液進(jìn)行濃縮，以便獲得苦參濃縮液；將苦參濃縮液進(jìn)行pH調(diào)節(jié)；以及將經(jīng)過pH調(diào)節(jié)的苦參濃縮液進(jìn)行純化，以便獲得苦參提取物。綠茶提取物是通過下列步驟制備的將綠茶進(jìn)行加醇提取，以便獲得綠茶提取液；以及將綠茶提取液進(jìn)行純化，以便獲得綠茶提取物。根據(jù)本發(fā)明的實施例，在得到苦參提取物和綠茶提取物之后，可以根據(jù)需要，對所得到的提取物進(jìn)行干燥得到固體物質(zhì)。利用該藥物組合物，能夠有效地治療或者預(yù)防由HPV感染引起的宮頸癌前病變，能夠?qū)m頸癌前病變進(jìn)行有效地治療。另外，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，利用該藥物組合物可以有效地抑制HPVE7基因的表達(dá)，并且能夠用于治療由HPV感染引起的宮頸糜爛、輕度宮頸非典型增生及中度宮頸非典型增生。并且進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，該藥物組合物還能夠有效用于使宮頸癌前病變細(xì)胞向良性轉(zhuǎn)化。本發(fā)明進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，該藥物組合物可預(yù)防UVA輻射后的組織損傷，延長光老化進(jìn)程，在UVA輻射前外用該藥物組合物對皮膚有保護(hù)效應(yīng)，表明苦參綠茶組合物可能是防治光老化的有用成分。該藥物對HPV的抑制作用，也可將該藥物組合物用于由HPV感染引起的日光性角化病的治療以及由日光性角化病弓I起的皮膚癌前病變的治療根據(jù)本發(fā)明的實施例，將苦參進(jìn)行加水提取，可以進(jìn)一步包括將苦參用6-10倍重量的水進(jìn)行水煮2-3次，每次0. 5-2小時，并合并提取液，以便獲得苦參提取液。根據(jù)本發(fā)明的實施例，苦參濃縮液在50攝氏度時的相對密度為I. 06 I. 08。根據(jù)本發(fā)明的實施例，利用鹽酸將苦參濃縮液進(jìn)行PH調(diào)節(jié)，其中，經(jīng)過pH調(diào)節(jié)的苦參濃縮液的pH為3-4。根據(jù)本發(fā)明的實施例，可以利用陽離子交換樹脂對苦參濃縮液進(jìn)行純化。具體地，根據(jù)本發(fā)明實施例的苦參提取物的制備方法可以為如下取苦參藥材，用6-10倍量的水煮2-3次，每次0. 5-2小時，必要時，在水煮之前可以進(jìn)行粉碎。合并提取液，濃縮至相對密度為I. 06 I. 08 (500C )的濃縮液，加鹽酸調(diào)pH值至3-4，濾過，上清液過陽離子交換樹脂柱，用8-12倍樹脂體積水及5-8倍樹脂體積的30%乙醇洗去部分雜質(zhì)，再用0. 5-2倍樹脂體積濃氨水堿化樹脂，用5-8倍樹脂體積的30%乙醇洗脫。洗脫液經(jīng)減壓濃縮，干燥，粉碎，得苦參提取物細(xì)粉，其中細(xì)粉的粒度為50-100目。需要說明的是，在本文中所使用的單位“目”，指的是顆粒粒度能夠通過每平方英寸上具有所限定數(shù)目孔的篩子，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以方便地通過公式目數(shù)X孔徑(微米數(shù))=15000，確定篩的孔徑，從而可以確定以微米為單位的顆粒粒度。根據(jù)本發(fā)明的具體示例，優(yōu)選苦參提取物的制備方法如下苦參藥材3. 6kg，用8倍量的水煮3次，每次I小時，必要時，在水煮之前可以進(jìn)行粉碎。合并提取液，濃縮至相對密度為I. 06 I. 08 (500C )的濃縮液。加鹽酸調(diào)pH值至3 4，濾過，上清液過732型陽離子交換樹脂柱，用10倍樹脂體積水及6倍樹脂體積的30%乙醇洗去部分雜質(zhì)，再用I倍樹脂體積濃氨水堿化樹脂，用6倍樹脂體積30%乙醇洗脫。洗脫液經(jīng)減壓濃縮，干燥，粉碎，得苦參提取物細(xì)粉100g，其中該細(xì)粉的粒度為80目。根據(jù)本發(fā)明的實施例，將綠茶進(jìn)行加醇提取可以進(jìn)一步包括將綠茶用8-12倍重量的50-70%乙醇進(jìn)行加熱回流提取1-3次，每次1-3小時，并合并提取液，以便獲得綠茶提取液。根據(jù)本發(fā)明的實施例，將綠茶提取液進(jìn)行純化可以進(jìn)一步包括將綠茶提取液進(jìn)行減壓處理，以便除去乙醇；將所得的綠茶提取液進(jìn)行大孔樹脂柱處理，以便獲得經(jīng)過純化的綠茶提取液。具體地，根據(jù)本發(fā)明實施例的綠茶提取物的制備方法可以為如下綠茶藥材加入8-12倍量的50% -70%乙醇加熱回流提取1_3次，每次1_3小時，合并提取液。提取液減壓回收除去乙醇，提取液離心，棄去殘渣，濾液上大孔樹脂柱，用水洗脫至無醇味,用5-8個柱體積的水洗脫，再用4-6個柱體積的10% -30%乙醇洗脫，最后用5個柱體積的60% -80%乙醇洗脫，將經(jīng)乙醇洗脫部分回收，干燥，粉碎，得綠茶提取物細(xì)粉，細(xì)粉的粒度為50-100目。根據(jù)本發(fā)明的具體示例，優(yōu)選綠茶提取物的制備方法如下綠茶藥材I. 0kg，加入10倍量的60%乙醇加熱回流提取兩次，每次I. 5小時，合并提取液。提取液減壓回收除去乙醇，提取液離心，棄去殘渣，濾液上大孔樹脂(D101型)柱，用水洗脫至無醇味，用6個柱體積的水洗脫，再用5個柱體積的15%乙醇洗脫，最后用5個柱體積的70%的乙醇洗脫，將經(jīng)乙醇洗脫部分回收，干燥，得干浸膏細(xì)粉(綠茶提取物)100g，細(xì)粉的粒度為80目。
此外，根據(jù)本發(fā)明的實施例，制備藥物組合物時，苦參與綠茶藥材，即用于制備苦參和綠茶提取物的原材料的重量比例為3. 6 I 2，根據(jù)本發(fā)明的具體示例，優(yōu)選苦參與綠茶藥材的重量比例為3. 6 1，更優(yōu)選地，苦參與綠茶藥材的重量比例為2. 25 1，最優(yōu)選地，苦參與綠茶藥材的重量比例為3 I。根據(jù)本發(fā)明的實施例，本發(fā)明的藥物組合物可以進(jìn)一步包括藥學(xué)上可接受的輔料，從而可以使得藥物組合物能夠呈現(xiàn)適于給藥的形式。優(yōu)選本發(fā)明的藥物組合物可以呈選自凝膠劑、洗劑、栓劑、泡騰片、泡騰膠囊、氣霧劑以及噴霧劑的至少一種的形式。由此，可以方便使得所述藥物組合物適于為對象進(jìn)行給藥。由此，根據(jù)本發(fā)明的實施例的藥物組合物，可以是以苦參和綠茶為原料，加入藥學(xué)上可接受的輔料制備而成的中藥制劑，并且這些中藥制劑可以制成凝膠劑、洗劑、栓劑、泡騰片、泡騰膠囊、氣霧劑或噴霧劑等。 根據(jù)本發(fā)明的實施例，本發(fā)明的藥物組合物可以用于治療或預(yù)防宮頸癌前病變。根據(jù)本發(fā)明的一些具體示例，該藥物組合物可以用于使宮頸癌前病變細(xì)胞向良性轉(zhuǎn)化。根據(jù)本發(fā)明的一些實施例，該藥物組合物可以用于抑制HPV E7基因的表達(dá)。根據(jù)本發(fā)明的實施例，本發(fā)明的藥物組合物能夠用于治療由HPV感染引起的宮頸糜爛、輕度宮頸非典型增生及中度宮頸非典型增生。進(jìn)一步，本發(fā)明的藥物組合物能夠有效地治療由HPV感染引起的宮頸癌前病變，使早期宮頸癌前病變的治療，特別是對宮頸糜爛、輕度宮頸非典型增生及中度宮頸非典型增生的治療及預(yù)防變成現(xiàn)實。根據(jù)本發(fā)明的實施例，本發(fā)明的藥物組合物可以用于治療或預(yù)防皮膚癌前病變。根據(jù)本發(fā)明的實施例，該藥物組合物可預(yù)防UVA輻射后的組織損傷，延長光老化進(jìn)程，在UVA輻射前外用該藥物組合物對小鼠皮膚有保護(hù)效應(yīng)，表明苦參綠茶組合物是防治光老化的有用成分，可將該藥物組合物用于由HPV感染引起的日光性角化病的治療。進(jìn)一步，本發(fā)明的組合物能夠有效地治療或者預(yù)防由HPV感染引起的日光性角化病導(dǎo)致的皮膚癌前病變。此外，發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)，利用本發(fā)明實施例的藥物組合物進(jìn)行宮頸癌前病變和宮頸癌治療時，前者的治療效果優(yōu)于后者。因而，優(yōu)選將根據(jù)本發(fā)明實施例的藥物組合物用于對宮頸癌前病變進(jìn)行治療，特別是對宮頸糜爛、輕度宮頸非典型增生及中度宮頸非典型增生的治療。進(jìn)一步，根據(jù)本發(fā)明的實施例，通過將苦參和綠茶這兩種中藥以不同的比例進(jìn)行組合，制備藥物組合物進(jìn)行藥效學(xué)試驗，發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的藥物組合物對治療宮頸癌前病變具有有益效果。其中，部分藥效學(xué)試驗設(shè)計及其試驗結(jié)果如下發(fā)明人建立了 HPV(人類乳頭瘤病毒)體外篩選模型，選擇人宮頸癌細(xì)胞HeLa作為體外研究對象，利用苦參提取物和綠茶提取物比例不同的多種藥物組合物，作用于HeLa細(xì)胞，并通過實時熒光定量PCR法對作用前后細(xì)胞內(nèi)HPV E7基因(在本文中，有時也簡單稱為E7基因)的相對表達(dá)倍數(shù)的變化進(jìn)行檢測，考察苦參綠茶比例不同的藥物組合物對HeLa細(xì)胞E7基因表達(dá)的抑制作用。試驗結(jié)果顯示當(dāng)藥物組合物中苦參綠茶提取物的比例分別在I : I 2時，其對E7基因相對表達(dá)抑制作用顯著，產(chǎn)生了預(yù)料不到的技術(shù)效果。特別是當(dāng)藥物組合物中苦參綠茶提取物比例在I : 1.2時，在作用于HeLa細(xì)胞72h后，其對HeLa細(xì)胞的E7基因的抑制作用最顯著。具體地，當(dāng)各種苦參綠茶提取物配比的藥物組合物作用于HeLa細(xì)胞72h后，細(xì)胞內(nèi)E7基因相對表達(dá)倍數(shù)與正常對照組相比均有降低的趨勢，當(dāng)藥物組合物中的苦參綠茶提取物比例在I : I 2時，對E7基因相對表達(dá)抑制作用顯著，抑制率最高達(dá)到87.292%。同時當(dāng)苦參綠茶提取物比例分別為I : 1、1 1.2,1 I.6時，藥物組合物對E7基因的相對表達(dá)抑制接近。當(dāng)藥物組合物中綠茶提取物的比例繼續(xù)升高，使得苦參綠茶比例為I : 2時，其對E7基因的相對表達(dá)抑制率降低。當(dāng)藥物組合物中苦參綠茶提取物比例在I : I. 2時，作用于HeLa細(xì)胞72h后，其對HeLa細(xì)胞E7基因的抑制作用最顯著。根據(jù)本發(fā)明的實施例，通過進(jìn)行藥物組合物對宮頸癌HeLa細(xì)胞增殖抑制的實驗，發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)，藥物組合物能夠顯著抑制宮頸癌HeLa細(xì)胞的體外增殖，且其作用效應(yīng)隨著對HeLa細(xì)胞的培養(yǎng)時間的延長和藥物組合物濃度的增加而增加，表明本發(fā)明的藥物組合物對人宮頸癌HeLa細(xì)胞的增殖有抑制作用，并且具有明顯的時間和劑量依賴性。當(dāng)利用相同濃度梯度的藥物組合物、苦參、綠茶進(jìn)行宮頸癌HeLa細(xì)胞增殖抑制實驗時，藥物組合物對宮頸癌HeLa細(xì)胞增殖的抑制率明顯比單用苦參或單用綠茶對HeLa細(xì)胞增殖的抑制率高，并且發(fā)明人發(fā)現(xiàn)藥物組合物對HeLa細(xì)胞凋亡的影響，比僅用苦參提取物或僅用綠茶提取物對HeLa細(xì)胞凋亡的影響顯著，從而證明了苦參提取物與綠茶提取物進(jìn)行組合，具有協(xié)同效應(yīng)。根據(jù)本發(fā)明的實施例，通過進(jìn)行藥物組合物對宮頸癌HeLa細(xì)胞凋亡率影響的試驗，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，不同濃度的藥物組合物作用于HeLa細(xì)胞24小時、48小時、72小時后，細(xì)胞凋亡發(fā)生率明顯增高,隨著藥物組合物濃度加大和作用時間延長,凋亡率明顯增高。根據(jù)本發(fā)明的實施例，利用自制的藥物組合物凝膠，進(jìn)行藥物組合物凝膠對宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)小鼠宮頸組織PCNA、EGFR和bcl-2表達(dá)影響的試驗，由試驗結(jié)果，發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)，藥物組合物凝膠是通過抑制增殖因子、EGFR以及抗凋亡因子的表達(dá)，而發(fā)揮抑制宮頸上皮異型細(xì)胞增生的作用，進(jìn)而抑制宮頸上皮異型細(xì)胞的增殖，促進(jìn)宮頸上皮異型細(xì)胞凋亡，使宮頸癌前病變細(xì)胞向良性轉(zhuǎn)化，從而達(dá)到阻斷宮頸浸潤癌發(fā)生的目的，進(jìn)而達(dá)到有效治療宮頸癌前病變的目的。根據(jù)本發(fā)明的一些具體示例，通過利用自制的藥物組合物栓劑、洗劑、泡騰片、泡騰膠囊，進(jìn)行對宮頸上皮內(nèi)瘤變小鼠宮頸組織PCNA、EGFR和bcl-2表達(dá)影響的試驗，發(fā)明人也得到了與上述實驗相同的結(jié)論。根據(jù)本發(fā)明的實施例，利用自制的藥物組合物軟膏，進(jìn)行藥物組合物軟膏對接受紫外線輻射后小鼠的皮膚保護(hù)作用的實驗。研究結(jié)果顯示苦參綠茶軟膏可預(yù)防UVA輻射后的組織損傷，延長光老化進(jìn)程，在UVA輻射前外用苦參綠茶軟膏對小鼠皮膚有保護(hù)效應(yīng)，表明苦參綠茶是防治光老化的有效成分，可將苦參綠茶軟膏用于由HPV感染引起的日光性角化病等皮膚癌前病變疾病的治療。根據(jù)本發(fā)明的又一方面，本發(fā)明提供了根據(jù)本發(fā)明實施例的藥物組合物在制備 藥物中的用途，該藥物用于治療或預(yù)防由HPV感染引起的宮頸癌前病變。根據(jù)本發(fā)明實施例，該藥物可以用于使宮頸癌前病變細(xì)胞向良性轉(zhuǎn)化。根據(jù)本發(fā)明具體示例，該藥物可以用于抑制E7基因的表達(dá)。根據(jù)本發(fā)明的一些實施例，藥物組合物用于治療由HPV感染引起的宮頸糜爛、輕度宮頸非典型增生及中度宮頸非典型增生。根據(jù)本發(fā)明實施例，該藥物可以呈選自凝膠劑、洗劑、栓劑、泡騰片、泡騰膠囊、氣霧劑以及噴霧劑的至少一種的形式。
根據(jù)本發(fā)明的又一方面，本發(fā)明提供了根據(jù)本發(fā)明實施例的藥物組合物在制備藥物中的用途，該藥物用于治療或預(yù)防由HPV感染引起的皮膚癌前病變。根據(jù)本發(fā)明實施例，該藥物可以預(yù)防UVA輻射后的組織損傷，延長光老化進(jìn)程，在UVA輻射前外用該藥物對皮膚有保護(hù)效應(yīng)。根據(jù)本發(fā)明的一些實施例，該藥物能夠用于治療由HPV感染引起的日光性角化病等皮膚癌前病變疾病。根據(jù)本發(fā)明實施例，該藥物可以呈選自凝膠劑、軟膏、乳膏、氣霧劑以及噴霧劑的至少一種的形式。根據(jù)本發(fā)明的再一方面，本發(fā)明提供了一種制備藥物的方法。根據(jù)本發(fā)明的實施例，該方法包括下列步驟制備苦參提取物；制備綠茶提取物；以及將苦參提取物與綠茶提取物按照預(yù)定的重量比率進(jìn)行混合，以便得到藥物，所述預(yù)定的重量比率優(yōu)選為I : I 2，更優(yōu)選為I : I. 2，其中，制備苦參提取物進(jìn)一步包括將苦參進(jìn)行加水提取，以便獲得苦參提取液；將所得的苦參提取液進(jìn)行濃縮，以便獲得苦參濃縮液；將苦參濃縮液進(jìn)行PH調(diào)節(jié)； 將經(jīng)過PH調(diào)節(jié)的苦參濃縮液進(jìn)行純化，以便獲得苦參提取物。制備綠茶提取物進(jìn)一步包括將綠茶進(jìn)行加醇提取，以便獲得綠茶提取液；以及將綠茶提取液進(jìn)行純化，以便獲得綠茶提取物。根據(jù)本發(fā)明的實施例，在得到苦參提取物和綠茶提取物之后，可以根據(jù)需要，對所得到的提取物進(jìn)行干燥得到固體物質(zhì)。利用上述制備藥物的方法所得到的藥物，能夠?qū)τ蒆PV感染引起的宮頸癌前病變進(jìn)行有效地治療。另外，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，利用該藥物還能夠有效用于使宮頸癌前病變細(xì)胞向良性轉(zhuǎn)化。并且進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，該藥物可以有效地抑制E7基因的表達(dá)，以及用于治療由HPV感染引起的宮頸糜爛、輕度宮頸非典型增生及中度宮頸非典型增生。利用上述制備藥物的方法所得到的藥物，能夠?qū)τ蒆PV感染引起的皮膚癌前病變進(jìn)行有效地治療。另外，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，利用該藥物還能夠預(yù)防UVA輻射后的組織損傷，延長光老化進(jìn)程，在UVA輻射前外用該藥物對皮膚有保護(hù)效應(yīng)，可以用于治療由HPV感染引起的日光性角化病。根據(jù)本發(fā)明的實施例，其中將苦參進(jìn)行加水提取，可以進(jìn)一步包括將苦參用6-10倍重量的水進(jìn)行水煮2-3次，每次0. 5-2小時，并合并提取液，以便獲得苦參提取液。根據(jù)本發(fā)明的實施例，苦參濃縮液在50攝氏度時的相對密度為I. 06 I. 08。根據(jù)本發(fā)明的實施例，利用鹽酸將苦參濃縮液進(jìn)行PH調(diào)節(jié)，其中，經(jīng)過pH調(diào)節(jié)的苦參濃縮液的pH為3-4。根據(jù)本發(fā)明的實施例，可以利用陽離子交換樹脂對苦參濃縮液進(jìn)行純化。具體地，根據(jù)本發(fā)明實施例的苦參提取物的制備方法可以為如下取苦參藥材，，用6-10倍量的水煮2-3次，每次0. 5-2小時，必要時可以在水煮之前進(jìn)行粉碎。合并提取液，濃縮至相對密度為I. 06 I. 08 (500C )的濃縮液，加鹽酸調(diào)pH值至3-4，濾過，上清液過陽離子交換樹脂柱，用8-12倍樹脂體積水及5-8倍樹脂體積的30%乙醇洗去部分雜質(zhì)，再用0. 5-2倍樹脂體積濃氨水堿化樹脂，用5-8倍樹脂體積的30%乙醇洗脫。洗脫液經(jīng)減壓濃縮，干燥，粉碎，得苦參提取物細(xì)粉，該細(xì)粉的粒度為50-100目。根據(jù)本發(fā)明的具體示例，優(yōu)選苦參提取物的制備方法如下苦參藥材3. 6kg，用8倍量的水煮3次，每次I小時，必要時可以在水煮之前進(jìn)行粉碎。合并提取液，濃縮至相對密度為I. 06 I. 08 (500C )的濃縮液。加鹽酸調(diào)pH值至3 4，濾過，上清液過732型陽離子交換樹脂柱，用10倍樹脂體積水及6倍樹脂體積的30%乙醇洗去部分雜質(zhì)，再用I倍樹脂體積濃氨水堿化樹脂，用6倍樹脂體積30%乙醇洗脫。洗脫液經(jīng)減壓濃縮，干燥，粉碎，得苦參提取物細(xì)粉100g，該細(xì)粉的粒度為80目。根據(jù)本發(fā)明的實施例，將綠茶進(jìn)行加醇提取可以進(jìn)一步包括將綠茶用8-12倍重量的50-70%乙醇進(jìn)行加熱回流提取1-3次，每次1-3小時，并合并提取液，以便獲得綠茶提取液。根據(jù)本發(fā)明的實施例，將綠茶提取液進(jìn)行純化可以進(jìn)一步包括將綠茶提取液進(jìn)行減壓處理，以便除去乙醇；將所得的綠茶提取液進(jìn)行大孔樹脂柱處理，以便獲得經(jīng)過純化的綠茶提取液。具體地，根據(jù)本發(fā)明實施例的綠茶提取物的制備方法可以為如下綠茶藥材加入8-12倍量的50% -70%乙醇加熱回流提取1_3次，每次1_3小時，/合并提取液。提取液減壓回收除去乙醇，提取液離心，棄去殘渣，濾液上大孔樹脂柱，用水洗脫至無醇味,用5-8個柱體積的水洗脫，再用4-6個柱體積的10% -30%乙醇洗脫，最后用5個柱體積的60%-80%乙醇洗脫，將經(jīng)乙醇洗脫部分回收，干燥，粉碎，得綠茶提取物細(xì)粉。根據(jù)本發(fā)明的具體示例，優(yōu)選綠茶提取物的制備方法如下綠茶藥材I. 0kg，加入10倍量的60%乙醇加熱回流提取兩次，每次I. 5小時，合并提取液。提取液減壓回收除去乙醇，提取液離心，棄去殘渣，濾液上大孔樹脂(D101型)柱，用水洗脫至無醇味，用6個柱體積的水洗脫，再用5個柱體積的15%乙醇洗脫，最后用5個柱體積的70%的乙醇洗脫，將經(jīng)乙醇洗脫部分回收，干燥，得干浸膏細(xì)粉(綠茶提取物)IOOgo根據(jù)本發(fā)明的實施例，本發(fā)明的制備藥物的方法可以進(jìn)一步包括添加藥學(xué)上可接受的輔料制備而成的中藥制劑的步驟。根據(jù)本發(fā)明的實施例，本發(fā)明的制備藥物的方法可以進(jìn)一步包括下列步驟將藥物制成選自凝膠劑、洗劑、栓劑、泡騰片、泡騰膠囊、氣霧劑以及噴霧劑的至少一種的形式。根據(jù)本發(fā)明的實施例，利用本發(fā)明的制備藥物的方法制備的藥物，可以用于治療或預(yù)防宮頸癌前病變。根據(jù)本發(fā)明的一些具體示例，該藥物可以用于使宮頸癌前病變細(xì)胞向良性轉(zhuǎn)化。根據(jù)本發(fā)明的一些實施例，該藥物可以用于抑制E7基因的表達(dá)。根據(jù)本發(fā)明的實施例，利用本發(fā)明的制備藥物的方法制備的藥物，可以用于治療或預(yù)防皮膚癌前病變。根據(jù)本發(fā)明的一些具體示例，該藥物可以預(yù)防UVA輻射后的組織損傷，延長光老化進(jìn)程，在UVA輻射前外用該藥物對皮膚有保護(hù)效應(yīng)。根據(jù)本發(fā)明的又一方面，本發(fā)明還提出了一種藥物，其是通過上述制備藥物的方法制備的。如前所述，利用該藥物，能夠?qū)m頸癌前病變進(jìn)行有效地治療。另外，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，該藥物可以有效地抑制E7基因的表達(dá)。并且進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，利用該藥物還能夠有效用于使宮頸癌前病變細(xì)胞向良性轉(zhuǎn)化，以及根據(jù)本發(fā)明的一些實施例，藥物組合物用于治療由HPV感染引起的宮頸糜爛、輕度宮頸非典型增生及中度宮頸非典型增生。此外，根據(jù)本發(fā)明的實施例，利用該藥物，能夠?qū)ζつw癌前病變進(jìn)行有效地治療。另外，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，該藥物可以預(yù)防UVA輻射后的組織損傷，延長光老化進(jìn)程，在UVA輻射前外用該藥物對皮膚有保護(hù)效應(yīng)，以及，該藥物可以用于治療由HPV感染引起的日光性角化病。需要說明的是，本發(fā)明的藥物組合物及其用途是本申請的發(fā)明人經(jīng)過艱苦的創(chuàng)造性勞動和優(yōu)化工作才完成的。本發(fā)明的附加方面和優(yōu)點將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變得明顯，或通過本發(fā)明的實踐了解到。
具體實施例方式下面詳細(xì)描述本發(fā)明的實施例。下面描述的實施例是示例性的，僅用于解釋本發(fā)明，而不能理解為對本發(fā)明的限制。除非特殊說明，在實施例中所進(jìn)行的操作均為按照《中華人民共和國藥典》2010年版以及本領(lǐng)域中公知的方法進(jìn)行的。實施例I :苦參提取物的制備苦參藥材3. 6kg，加水煮三次，每次I小時，每次加8倍體積的水，合并提取液，減壓濃縮至相對密度為I. 06 I. 08 (500C )的濃縮液。加鹽酸調(diào)pH值至3 4，濾過，將上清液過處理合格的732型陽離子交換樹脂柱，用10倍樹脂體積水及6倍樹脂體積的30%乙醇洗去部分雜質(zhì)，再用I倍樹脂體積濃氨水堿化樹脂，用6倍樹脂體積30%乙醇洗脫。洗脫液經(jīng)減壓濃縮，噴霧干燥，得干浸膏細(xì)粉(苦參提取物)100g，其粒度為80目。
實施例2 :綠茶提取物的制備綠茶藥材I. 0kg，加入10倍量的60%乙醇加熱回流提取兩次，每次I. 5h，合并提取液。提取液減壓回收除去乙醇，提取液離心，棄去殘渣，將濾液上大孔樹脂(D101型)柱，用水洗脫至無醇味，用6個柱體積的水洗脫，再用5個柱體積的15%乙醇洗脫，最后用5個柱體積的70%乙醇洗脫，將經(jīng)乙醇洗脫部分回收，真空干燥，得干浸膏細(xì)粉(綠茶提取物)100g，其粒度為80目。實施例3 :不同配比的苦參綠茶藥物組合物體外對人宮頸癌HeLa細(xì)胞HPV E7基因相對表達(dá)量的影響一、實驗細(xì)胞株及試驗藥物試驗細(xì)胞株人宮頸癌細(xì)胞株HeLa細(xì)胞(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院惠贈)。受試物苦參提取物和綠茶提取物，其分別根據(jù)實施例I和2所制備，并且按照下列步驟配置苦參提取物和綠茶提取物的母液苦參提取物母液稱取15. 6367g苦參提取物(含水量為7. 5% )溶于37ml不完全DMEM中，超聲助溶，然后利用0. 45 ii m和0. 22 y m濾膜過濾除菌除雜，終濃度為351mg/ml，
于4°C下保存。綠茶提取物母液稱取80mg綠茶提取物溶于Iml不完全DMEM中，然后利用0.45 um和0. 22 ii m濾膜過濾除菌除雜，終濃度為80mg/ml，于4°C下保存。二、不同配比的藥物組合物對HeLa細(xì)胞HPVE7基因相對表達(dá)的影響取對數(shù)生長期的HeLa細(xì)胞，以I X IO6個 mr1的密度接種于六孔板中，每孔1ml，于37°C，5% CO2，飽和濕度條件下培養(yǎng)24h，然后分別添加細(xì)胞毒作用低于5%的不同配比的藥物組合物繼續(xù)培養(yǎng)72h，加藥濃度如表I所示，然后利用實時熒光定量PCR法對各組的E7基因的表達(dá)量進(jìn)行檢測。表I苦參綠茶提取物最佳配比實驗各藥物組合物的加藥濃度(U g/ml)
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，其特征在于，包含苦參提取物和綠茶提取物作為活性成分，優(yōu)選所述苦參提取物和綠茶提取物的重量比率為I : I 2，更優(yōu)選I : 1.2， 其中， 所述苦參提取物是水提取物； 所述綠茶提取物是醇提取物； 任選地，所述苦參提取物是通過下列步驟制備的 將苦參進(jìn)行加水提取，以便獲得苦參提取液； 將所述苦參提取液進(jìn)行濃縮，以便獲得苦參濃縮液； 將所述苦參濃縮液進(jìn)行PH調(diào)節(jié)；以及 將所述經(jīng)過PH調(diào)節(jié)的苦參濃縮液進(jìn)行純化，以便獲得所述苦參提取物， 任選地,所述將苦參進(jìn)行加水提取,進(jìn)一步包括 將所述苦參用6-10倍重量的水進(jìn)行水煮2-3次，每次0. 5-2小時，并合并提取液，以便獲得所述苦參提取液， 任選地，所述苦參濃縮液在50攝氏度時的相對密度為I. 06 I. 08， 任選地，利用鹽酸將所述苦參濃縮液進(jìn)行PH調(diào)節(jié)，其中，所述經(jīng)過pH調(diào)節(jié)的苦參濃縮液的pH為3-4, 任選地，利用陽離子交換樹脂對所述苦參濃縮液進(jìn)行純化， 任選地，所述綠茶提取物是通過下列步驟制備的 將綠茶進(jìn)行加醇提取，以便獲得綠茶提取液；以及 將所述綠茶提取液進(jìn)行純化，以便獲得所述綠茶提取物， 任選地，將綠茶進(jìn)行加醇提取進(jìn)一步包括 將所述綠茶用8-12倍重量的50-70%乙醇進(jìn)行加熱回流提取1-3次，每次1-3小時，并合并提取液，以便獲得所述綠茶提取液， 任選地，將所述綠茶提取液進(jìn)行純化進(jìn)一步包括 將所述綠茶提取液進(jìn)行減壓處理，以便除去乙醇； 將所述綠茶提取液進(jìn)行大孔樹脂柱處理，以便獲得經(jīng)過純化的綠茶提取液。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物進(jìn)一步包括藥學(xué)上可接受的輔料， 任選地，所述藥物組合物呈選自凝膠劑、洗劑、栓劑、泡騰片、泡騰膠囊、氣霧劑以及噴霧劑的至少一種的形式。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物用于治療或預(yù)防由HPV感染引起的宮頸癌前病變以及皮膚癌前病變， 任選地，所述藥物組合物用于使宮頸癌前病變細(xì)胞向良性轉(zhuǎn)化， 任選地，所述藥物組合物用于抑制E7基因的表達(dá)， 任選地，所述藥物組合物用于治療由HPV感染引起的宮頸糜爛、輕度宮頸非典型增生及中度宮頸非典型增生， 任選地，所述藥物組合物用于預(yù)防UVA輻射后的組織損傷，延長光老化進(jìn)程， 任選地，在UVA輻射前外用所述藥物組合物對皮膚有保護(hù)效應(yīng)， 任選地，所述藥物組合物用于治療由HPV感染引起的日光性角化病。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的藥物組合物在制備藥物中的用途，其特征在于，所述藥物用于治療或預(yù)防由HPV感染引起的宮頸癌前病變以及皮膚癌前病變。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用途，其特征在于，所述藥物用于使宮頸癌前病變細(xì)胞向良性轉(zhuǎn)化， 任選地，所述藥物用于抑制HPV E7基因的表達(dá)， 任選地，所述藥物用于治療由HPV感染引起的宮頸糜爛、輕度宮頸非典型增生及中度宮頸非典型增生， 任選地，所述藥物用于預(yù)防UVA輻射后的組織損傷，延長光老化進(jìn)程， 任選地，在UVA輻射前外用所述藥物對皮膚有保護(hù)效應(yīng)， 任選地，所述藥物用于治療由HPV感染引起的日光性角化病， 任選地，所述藥物呈選自凝膠劑、洗劑、栓劑、泡騰片、泡騰膠囊、氣霧劑以及噴霧劑的至少一種的形式。
6.一種制備藥物的方法，其特征在于，包括下列步驟 制備苦參提取物； 制備綠茶提取物；以及 將所述苦參提取物與所述綠茶提取物按照預(yù)定的重量比率進(jìn)行混合，以便得到所述藥物，所述預(yù)定的重量比率優(yōu)選為I : I 2，更優(yōu)選為I : 1.2， 其中， 所述苦參提取物是水提取物； 所述綠茶提取物是醇提取物； 任選地，所述制備苦參提取物進(jìn)一步包括下列步驟 將苦參進(jìn)行加水提取，以便獲得苦參提取液； 將所述苦參提取液進(jìn)行濃縮，以便獲得苦參濃縮液； 將所述苦參濃縮液進(jìn)行PH調(diào)節(jié)；以及 將所述經(jīng)過PH調(diào)節(jié)的苦參濃縮液進(jìn)行純化，以便獲得所述苦參提取物， 任選地,所述將苦參進(jìn)行加水提取,進(jìn)一步包括 將所述苦參用6-10倍重量的水進(jìn)行水煮2-3次，每次0. 5-2小時，并合并提取液，以便獲得所述苦參提取液， 任選地，所述苦參濃縮液在50攝氏度時的相對密度為I. 06 I. 08， 任選地，利用鹽酸將所述苦參濃縮液進(jìn)行PH調(diào)節(jié)，其中，所述經(jīng)過pH調(diào)節(jié)的苦參濃縮液的pH為3-4, 任選地，利用陽離子交換樹脂對所述苦參濃縮液進(jìn)行純化， 任選地，所述制備綠茶提取物進(jìn)一步包括下列步驟 將綠茶進(jìn)行加醇提取，以便獲得綠茶提取液；以及 將所述綠茶提取液進(jìn)行純化，以便獲得所述綠茶提取物， 任選地，將綠茶進(jìn)行加醇提取進(jìn)一步包括 將所述綠茶用8-12倍重量的50-70%乙醇進(jìn)行加熱回流提取1-3次，每次1-3小時，并合并提取液，以便獲得所述綠茶提取液， 任選地，將所述綠茶提取液進(jìn)行純化進(jìn)一步包括將所述綠茶提取液進(jìn)行減壓處理，以便除去乙醇； 將所述綠茶提取液進(jìn)行大孔樹脂柱處理，以便獲得經(jīng)過純化的綠茶提取液。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，進(jìn)一步包括下列步驟 將所述藥物制成選自凝膠劑、洗劑、栓劑、泡騰片、泡騰膠囊、氣霧劑以及噴霧劑的至少一種的形式。
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的方法，其特征在于，所述藥物用于治療或預(yù)防HPV感染引起的宮頸癌前病變以及皮膚癌前病變， 任選地,所述藥物用于使宮頸癌前病變細(xì)胞向良性轉(zhuǎn)化， 任選地，所述藥物用于抑制HPV E7基因的表達(dá)， 任選地，所述藥物用于治療由HPV感染引起的宮頸糜爛、輕度宮頸非典型增生及中度宮頸非典型增生， 任選地，所述藥物用于預(yù)防UVA輻射后的組織損傷，延長光老化進(jìn)程， 任選地，在UVA輻射前外用所述藥物對皮膚有保護(hù)效應(yīng)， 任選地，所述藥物用于治療由HPV感染引起的日光性角化病。
9.一種藥物，其是根據(jù)權(quán)利要求6-8任一項所述的方法制備的。
全文摘要
本發(fā)明涉及藥物組合物及其用途。其中，該藥物組合物包含苦參提取物和綠茶提取物作為活性成分，其中，該苦參提取物是通過下列步驟制備的將苦參進(jìn)行加水提取，以便獲得苦參提取液；將苦參提取液進(jìn)行濃縮，以便獲得苦參濃縮液；將苦參濃縮液進(jìn)行pH調(diào)節(jié)；以及將經(jīng)過pH調(diào)節(jié)的苦參濃縮液進(jìn)行純化，以便獲得苦參提取物，該綠茶提取物是通過下列步驟制備的將綠茶進(jìn)行加醇提取，以便獲得綠茶提取液；以及將綠茶提取液進(jìn)行純化，以便獲得綠茶提取物。本發(fā)明的藥物組合物，能夠用于治療或預(yù)防由HPV感染引起的宮頸癌前病變以及皮膚癌前病變，以及制備治療或預(yù)防宮頸癌前病變以及皮膚癌前病變的藥物。
文檔編號A61K36/82GK102652778SQ20121008822
公開日2012年9月5日 申請日期2012年3月29日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月29日
發(fā)明者張思佳, 楊煥明, 牟峰, 陳順欽, 黃璐 申請人:武漢華大基因科技有限公司, 武漢華大藥業(yè)有限公司, 深圳華大基因科技有限公司